Taxonomia, distribuição geográfica e filogenia do gênero Codium

Oliveira-Carvalho, M. F. Taxonomia, distribuição geográfica e filogenia ... 63
2003, Yoneshigue-Valentin et al. 2006, Pereira et al. 2007). Poucos trabalhos tratam
exclusivamente da taxonomia do grupo (Silva 1960 e Alves & Moura 2005).
Até o presente momento, nenhum estudo filogenético abordando o gênero foi
realizado no Brasil e, diante disto, o presente trabalho tem por finalidade de detectar
relações filogenéticas entre as espécies de Codium ocorrentes no litoral brasileiro a
partir das seqüências do éxon 1 do gene rbcL.
MATERIAL E MÉTODOS
Amostras de Codium. Em diversas localidades do litoral brasileiro, foram
coletadas amostras de Codium para as análises moleculares (Tabela 1). Em campo,
foram selecionadas as porções jovens do talo, e no intuito de remover possíveis epífitas,
as porções foram limpas com auxílio de escova dental de cerdas flexíveis. Após a
limpeza, as porções foram secas em papel toalha e cortadas em pequenos pedaços, com
auxílio de tesouras ou estiletes, sendo imediatamente acondicionadas em recipientes
plásticos devidamente etiquetados, contendo sílica gel e/ou etanol a 70%.
Extração de DNA. A extração de DNA foi processada na Universidade de São
Paulo (USP) no Laboratório de Algas Marinhas Edson José de Paula (LAM). As
amostras de Codium foram submetidas ao protocolo manual de extração de DNA
usando CTAB (brometo de cetiltrimetilamônio). O tampão de extração CTAB é
constituído pelos seguintes reagentes (água deionizada miliq, CTAB a 2%, NaCl a 5%,
0,5 M de EDTA, PVP a 1% e 1 M Tris-Hcl com pH 8). As amostras de Codium foram
maceradas em nitrogênio líquido com auxílio de almofariz e pistilo, previamente
resfriadas a -20 0 C, até a obtenção de um pó fino. O macerado foi adicionado a 700 μL
do tampão CTAB, juntamente com 7 μL de proteinase K (20 mg/mL) previamente