Técnicas de análise de DNA e RNA

Hibridação Southern e hibridação Northern (2)
Estas técnicas envolvem as seguintes etapas:
(A) Misturas de moléculas de RNA de cadeia simples (Hibridação Northern) ou de moléculas
de DNA de cadeia dupla obtidas por digestão com enzimas de restrição (Hibridação Southern)
são separadas por electroforese com base na dimensão.
(B) As moléculas de RNA ou os fragmentos de DNA desnaturados por exposição do DNA a
condições alcalinas desnaturantes, são transferidos para membranas de nitrocelulose ou de
nylon.
(C) A membrana, contendo os ácidos nucleicos ligados, é cuidadosamente removida do gel.
(D) A membrana é depois colocada num saco de plástico selado ou numa garrafa de hibridação,
juntamente com a solução de hibridação (uma solução salina tamponada) e a sonda de DNA ou
de RNA, radioactivamente marcada e na forma de cadeia simples, por um período de tempo
prolongado em condições que favorecem a hibridação.
(E) A membrana é em seguida removida do saco ou da garrafa de hibridação e lavada
vigorosamente, de modo que apenas as moléculas de sonda que hibridaram com o RNA ou o
DNA imobilizado na membrana permanecem ligadas. Após auto-radiografia, o DNA ou o
RNA que hibridou com a sonda marcada é visualizado como uma banda.