Embriogênese Somática e Sementes Sintéticas - Laboratório de ...
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e translúcido <strong>de</strong>nominado <strong>de</strong> tecido embriogenético, constituído por células alongadas e vacuoladas<br />
do tipo suspensor e por células pequenas com citoplasma <strong>de</strong>nso na região do ápice embrionário.<br />
Conhece-se muito pouco acerca da iniciação e <strong>de</strong>senvolvimento da poliembriogênese somática<br />
em coníferas e tres diferentes hipóteses foram sugeridas por Hakman et al. (1987) para explicar a<br />
origem <strong>de</strong>ste processo: 1) embriões somáticos po<strong>de</strong>m se originar <strong>de</strong> células simples ou pequenos<br />
agregados celulares por uma divisão inicial assimétrica que <strong>de</strong>limita a região apical embrionária da<br />
região do suspensor. No caso <strong>de</strong> Picea abies e P. glauca, as divisões celulares <strong>de</strong>siguais nas<br />
camadas epidérmicas e sub-epidérmicas da região do hipocótilo resultam na formação <strong>de</strong> próembriões<br />
(Nagmani et al., 1987); 2) embriões somáticos po<strong>de</strong>m se <strong>de</strong>senvolver a partir <strong>de</strong> células<br />
meristemáticas da região do suspensor, sendo que as iniciais po<strong>de</strong>m se originar por divisão<br />
assimétrica (Hakman et al.,1987; Schuller et al., 1989); 3) embriões somáticos po<strong>de</strong>m se originar por<br />
um mecanismo similar à poliembriogênese por clivagem, com a separação inicial, ocorrendo na<br />
região do ápice embrionário. Este processo foi <strong>de</strong>scrito em culturas <strong>de</strong> embriões somáticos <strong>de</strong> Abies<br />
alba (Schuller et al., 1989), espécies <strong>de</strong> Pinus e Picea (von Arnold & Woodward, 1988).<br />
Fatores que afetam a poliembriogênese somática<br />
A seleção criteriosa do explante é fator crítico para a indução da embriogênese somática em<br />
coniferas. Diferentes tecidos da mesma planta ou tecidos em diferentes estádios <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento<br />
po<strong>de</strong>m originar diferentes respostas in vitro. Em Picea glauca, por exemplo, apenas uma entre várias<br />
épocas <strong>de</strong> coleta <strong>de</strong> cones revelou respostas morfogenéticas (Lu & Thorpe, 1987). Efeitos similares<br />
do estágio <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento foram observados em Pinus lambertiana (Gupta & Durzan, 1986) e<br />
Pinus taeda (Becwar et al., 1990). De maneira geral, em espécies <strong>de</strong> Pinus, embriões zigóticos em<br />
estágio pré-cotiledonar são os melhores explantes para a indução <strong>de</strong> tecidos embriogenéticos,<br />
enquanto que nas espécies <strong>de</strong> Picea, este resultado é obtido com embriões em estágio cotiledonar.<br />
Estes aspectos mostram a importância da época <strong>de</strong> coleta dos explantes e sugerem a existência <strong>de</strong><br />
um estádio <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento em que o explante é altamente responsivo à indução embriogênica.<br />
Em Larix <strong>de</strong>cidua verificou-se o <strong>de</strong>senvolvimento <strong>de</strong> tecidos embriogênicos a partir das regiões<br />
da chalaza e da micrópila do megagametófito em cultura (von A<strong>de</strong>rkas et al., 1987). A indução <strong>de</strong><br />
tecido embriogênico haplói<strong>de</strong> somente é possível durante um curto período <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento do<br />
cone feminino. Este tecido <strong>de</strong>monstrou autotrofia para reguladores <strong>de</strong> crescimento, já que a indução<br />
embriogenética ocorreu em meio <strong>de</strong> cultura <strong>de</strong>sprovido <strong>de</strong> auxinas e citocininas, sugerindo que o<br />
megagametófito po<strong>de</strong>ria suprir os hormônios necessários para a iniciação da embriogênese (von<br />
A<strong>de</strong>rkas et al., 1990).<br />
Em explantes <strong>de</strong> sementes imaturas <strong>de</strong> Pinus lambertiana, a presença do gametófito feminino<br />
po<strong>de</strong> auxiliar no estabelecimento <strong>de</strong> culturas embriogênicas e esta indução é mais intensa quando o<br />
embrião dominante é removido (Gupta & Durzan, 1986). Não se conhece, contudo, se esta<br />
dominância está relacionada com a presença <strong>de</strong> inibidores ou <strong>de</strong> outros fatores.<br />
Em Araucaria angustifolia e em Pinus elliottii a indução <strong>de</strong> linhagens celulares poliembriogênicas<br />
é <strong>de</strong>pen<strong>de</strong>nte do estádio <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento do pró-embrião zigótico, sendo que os complexos<br />
celulares suspensor-embrionários surgem a partir das células do ápice embrionário. Esta indução<br />
ocorre em meios contendo 2,4-D, BAP e KIN e ciclos repetitivos <strong>de</strong> divisão celular foram<br />
estabelecidos, permitindo a cultura massal <strong>de</strong>stas células (Guerra et al., 1993). Na figura 3 são<br />
apresentados os principais estádios <strong>de</strong> <strong>de</strong>senvolvimento <strong>de</strong> um mo<strong>de</strong>lo poliembriogenético em A.<br />
angustifolia e Picea abies.<br />
O emprego <strong>de</strong> embriões zigóticos maduros <strong>de</strong> sementes armazenadas po<strong>de</strong> proporcionar<br />
explantes durante todo o ano. Culturas embriogenéticas <strong>de</strong> Picea glauca (Tremblay, 1990) e <strong>de</strong><br />
Picea mariana (Tautorus et al., 1991) foram iniciadas a partir <strong>de</strong> embriões zigóticos maduros<br />
armazenados por 11 e 13 anos respectivamente. Depois <strong>de</strong> quatro semanas em cultura, os explantes<br />
produziram um exsudato marron na região do hipocótilo e da radícula, bem como apresentavam um<br />
intumescimento dos cotilédones. Tecidos embriogênicos foram observados surgindo na região citada<br />
seis a oito semanas após a inoculação.<br />
Meios <strong>de</strong> cultura e reguladores <strong>de</strong> crescimento