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Tabela 1. Resultados dos testes bioquímicos das cepas padrão ATCC usadas como controle de qualidade Testes E. faecalis ATCC++ 29212 E. faecium ATCC 27270 E. casseliflavus ATCC 25788 E. durans ATCC 49135 E. avium ATCC 49464 E. gallinarum ATCC 49573 E. hirae ATCC 10541 S. bovis ATCC 33317 S. bovis ATCC 49133 Provas convencionais Ágar bileesculina + + + + + + + + + (24 h) Caldo nutriente + + + + + + + + - - NaCl 6,5% (24 h) Kit proposto Triagem: ESC*-NaCl + + + + + + + - - 6,5% 1-2 h PYR** 1-2 h + + + + + + + - - Confirmativo: Arginina + + + + - + + Manitol + + + - + + - Arabinose - + + - + + - Sorbitol + - + - + - - Rafinose - + + - - + + Sacarose + + + - + + + Lactose + + + + + + + Adicional Pigmento - - + - - - - +: reação positiva (> 90%); -: reação negativa (< 10%); v: variável (+ ou -); *: ágar esculina-sal-azida; **: hidrólise do ácido piroglutâmico ß-naftilamida; ++: cepa padrão (American Type Culture Collection) Tabela 2. Diferenciação das espécies de Enterococcus clinicamente relevantes em grupos # Provas bioquímicas (% positivos) a Espécies N o de isolados clínicos testados Grupo Manitol Sorbitol Arginina E. avium 12 1 + (100) + (97) - (0) E. raffinosus E. malodoratus E. faecalis 111 2 + (99) v (63) + (94) E. solitariusb E. gallinarum E. faecium E. casseliflavus E. mundtii E. durans 5 3 - (7) - (0) + (100) E. hirae # adaptado da referência (8) ; a +: reação positiva; -: reação negativa; v: reação variável (algumas cepas + e outras -); b nova denominação: Tetragenococcus halophilus NewsLab - edição 89 - 2008 215
Todas as cepas de E. mundtii e E. casselifalvus (incluindo as cepas padrão ATCC) apresentaram reação positiva no meio de Moeller somente após 48 horas de incubação, ao passo que todas foram positivas após 18-24 horas de incubação no kit miniaturizado proposto, evidenciando que a modificação da formulação foi extremamente benéfica e influenciou positivamente a performance do teste. Classicamente, os laboratórios clínicos que utilizam somente os testes de bile-esculina e caldo nutriente com 6,5% de NaCl tendem a classificar a bactéria em estudo como “estreptococo do grupo D – enterococo” quando ocorrem reações positivas em ambos os testes e como “estreptococo do grupo D – não enterococo” quando somente a reação de bileesculina é positiva. Entretanto, esta classificação mínima pode ser perigosamente falha, uma vez que diversos estudos já relataram cepas de E. faecalis, E. faecium e E. avium incapazes de crescer em caldo nutriente contendo 6,5% de NaCl após 24 horas de incubação (11, 13, 14). Com o uso do teste de PYR aliado ao meio esculina-azida-sal conforme proposto neste estudo, 100% das cepas puderam ser presuntivamente classificadas como pertencentes aos gênero Enterococcus. Todas as cepas de S. bovis (incluindo as de controle de qualidade) geraram resultados negativos em ambos os testes de triagem e, portanto, foram excluídas da inoculação na bateria de provas posterior. Facklam et al. (8) também propuseram a utilização de um esquema simplificado para a identificação de espécies de Enterococcus, utilizando um número maior de testes bioquímicos. Com o kit miniaturizado proposto neste estudo, pôde-se dividir as espécies mais importantes clinicamente para o homem em três grupos, utilizando um número me- Tabela 3. Diferenciação das espécies de Enterococcus clinicamente relevantes pertencentes ao grupo 1 # Espécies N o de isolados clínicos testados Provas bioquímicas (% positivos) a Manitol Sorbitol Arginina Arabinose Rafinose E. avium 8 + (100) + (100) - (0) + (99) - (0) E. raffinosus 2 + (100) + (100) - (0) + (100) + (100) E. malodoratus 2 + (100) + (100) - (0) + (100) + (100) # adaptado da referência (8); a +: reação positiva; -: reação negativa Tabela 4. Diferenciação das espécies de Enterococcus clinicamente relevantes pertencentes ao grupo 2 # Espécies N o de isolados clínicos testados Provas bioquímicas (% positivos) a Manitol Arginina Arabinose Sorbitol Lactose Pigmento E. faecalis 48 + (100) + (96) - (0) + (98) + (100) - (0) E. solitariusb 2 + (98) + (94) - (0) + (98) - (30) - (0) E. gallinarum 18 + (100) + (94) + (100) - (0) + (100) - (0) E. faecium 27 + (100) + (92) + (100) v (30)c + (100) - (0) E. casseliflavus 12 + (98) + (94) + (100) v (48) + (100) + (100) E. mundtii 4 + (100) + (96) + (100) v (51) - (0) + (100) # adaptado da referência (8) ; a +: reação positiva; -: reação negativa; v: reação variável (algumas cepas + e outras -) ; b nova denominação: Tetragenococcus halophilus c nos casos de reação negativa, a diferenciação de E. gallinarum se dá pelo uso da prova de motilidade (E. faecium é imóvel e E. gallinarum é móvel) Tabela 5. Diferenciação das espécies de Enterococcus clinicamente relevantes pertencentes ao grupo 3 # Espécies N o de isolados clínicos testados Provas bioquímicas (% positivos) a Manitol Sorbitol Arginina Sacarose Rafinose E. durans 2 - (8) - (0) + (100) - (0) - (0) E. hirae 3 - (6) - (0) + (100) + (88) v (75) # adaptado da referência (8); a +: reação positiva; -: reação negativa; v: reação variável (algumas cepas + e outras -) 216 NewsLab - edição 89 - 2008
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