Histologia Básica, Texto e Atlas - 12ª Edição - Junqueira & Carneiro

Histologia B~sica
para observar e diferenciar colágeno é o uso do corante
picrosirius associado a luz polarizada. Embora a maioria
dos corantes seja útil para visualizar os vários componentes
dos tecidos, eles normalmente oferecem pouquíssima
informação sobre a natureza química dos componentes
dos tecidos.
Em muitos procedimentos (ver lmunocitoqufmica) os
resultados de uma reação são evidenciados por um precipitado
ou por um corante fluorescente, mas as células e os
seus limites não são visíveis. Nesse caso é usado um contracorante
- trata-se de um corante aplicado a um corte
apenas para tornar possível a visualização das células ou
dos núcleos. Outra maneira de evidenciar componentes de
células e tecidos é a sua impregnação por metais, como
prata e ouro, método muito usado para estudar tecido nervoso.
O procedimento inteiro, desde a fixação até a observação
de um tecido em um microscópio de luz, pode demorar de
12 h a 2 dias, dependendo do tamanho do tecido, do fixador
e do meio de inclusão utilizados.
.,. Microscopia de luz
Ao microscópio de luz (também chamado microscópio
óptico), as preparações coradas são examinadas por iluminação
que atravessa o espécime (transiluminação). O
microscópio de luz é composto de partes mecânicas e ópticas
(Figura 1.2). O componente óptico consiste em três sistemas
de lentes: condensador, objetivas e oculares. O condensador
concentra a luz de uma lâmpada e projeta um feixe luminoso
sobre o espécime. A objetiva recebe a luz que atravessou o
espécime e projeta uma imagem aumentada do espécime em
direção à ocular, que novamente amplia a imagem e a projeta
na retina, em uma tela, em uma câmera fotográfica ou
em um detector eletrônico. No caso das imagens projetadas
na retina, a ampliação total é calculada multiplicando-se o
aumento da objetiva pelo aumento da ocular.
• Resolução
O que se deseja em um microscópio é uma imagem
aumentada e com muitos detalhes. O fator mais crítico para
a obtenção de uma imagem aumentada e com muitos detalhes
é o parâmetro chamado poder de resolução. Este pode
ser definido como a menor distância entre duas partículas
ou entre duas linhas, distância essa que possibilita que elas
sejam vistas como dois objetos separados. O poder de resolução
máximo do microscópio de luz (também chamado de
resolução ou limite de resolução) é de aproximadamente
0,2 µm; esta resolução toma possível a obtenção de boas
imagens aumentadas até 1.000 a 1.500 vezes. Objetos menores
ou mais delgados que 0,2 µm (como, por exemplo, a
membrana da célula ou um filamento de actina) não podem
ser distinguidos com esse instrumento. Da mesma maneira,
dois objetos, como, por exemplo, duas mitocôndrias ou dois
lisossomos, serão vistos como um só objeto se eles estiverem
separados por menos de 0,2 µm. Portanto, o que determina a
riqueza de detalhes da imagem é o limite de resolução de um
Lente ocular
Prisma
Lente objetiva
W--J-+--- Controles de
Filtro de luz
movimento da platina
L~l-t-1---- Controles de
~~~~~IP?T~
Espelho
ajuste de foco
Figura 1.2 Desenho esqueimtico de um microscópio de luz, que mostra seus componentes
prindpais e o trajeto da luz desde a fonte luminosa até o olho do observador.
(Cortesia de Carl Zeíss Co.)
sistema óptico, e não seu poder de aumento. O aumento só
tem valor prático se for acompanhado de resolução. A resolução
depende essencialmente da objetiva, pois a lente ocular
apenas aumenta a imagem nela projetada pela objetiva.
A área de atuação da microscopia tem sido ampliada
pelo uso de videocâmeras de alta sensibilidade e resolução
que tomam possível a digitalização de imagens que podem
ser usadas em computadores para análise quantitativa por
meio de aplicativos de análise de imagem. Objetos que não
são visíveis diretamente pela ocular podem ser visualizados
por uma videocâmera. Esses sistemas também são úteis para
estudar células vivas por períodos longos, porque usam luz
de baixa intensidade e evitam o dano celular que pode resultar
de uma iluminação intensa.
""' Microscopia de contraste de fase e de
contraste diferencial de interferência
Alguns sistemas ópticos possibilitam a observação de células
e cortes não corados. Espécimes biológicos não corados
são geralmente transparentes e dificeis de serem observados
com detalhes, pois todas as partes do espécime têm quase a
mesma densidade óptica. Em contrapartida, o microscópio
de contraste de fase usa um sistema de lentes que produz