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EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA, SUSPENSÕES CELULARES E ...

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a b Figura 2. Efeito dos diferentes<br />

tratamentos de maturação nas<br />

culturas embriogênicas de A.<br />

angustifolia. a) cultura<br />

c d<br />

embriogênica em meio de cultura<br />

com sacarose (9%) e ABA (150µM)<br />

com aspecto granular e embriões<br />

somáticos com a superfície rugosa;<br />

b) cultura embriogênica em meio de<br />

cultura com maltose (9%) e ABA<br />

(150µM); c,d) embriões somáticos<br />

e f globulares na superfície da cultura<br />

embriogênica; e,f) embriões<br />

somáticos globulares, torpedo e<br />

cotiledonares na superfície da<br />

g<br />

h<br />

cultura embriogênica; g) embrião<br />

somático cotiledonar; h) embrião<br />

somático cotilédones clorofilados<br />

em meio de cultura BM (Gupta &<br />

Pullman, 1991) suplementado com<br />

carvão ativado 1,5 g.L-1. (Bars<br />

=1mm).<br />

Curva de crescimento celular<br />

<strong>SUSPENSÕES</strong> <strong>CELULARES</strong><br />

SISTEMAS DE CULTIVO<br />

A) Cultivo fechado: Até fase estacionária, frações para subcultivo.<br />

- Micropropagação<br />

B) Cultivo contíuo fechado: Meio de cultura fresco é adicionado,<br />

células permanecem.<br />

- Metabólitos secundários extracelulares<br />

C) Cultivo contínuo aberto: Adição de meio, saída de meio e células.<br />

- Metabólitos intracelulares<br />

MÉTODOS PARA MEDIR O CRESCIMENTO<br />

1. Número de células<br />

-Dispersão dos agregados, contagem em microscópio<br />

2. Volume celular<br />

-Centrífuga por 3 min a 200g (PCV)<br />

-Sedimentação celular<br />

3. Peso Fresco<br />

4. Peso Seco<br />

-60 o C por 12 h<br />

5. Índice Mitótico (IM)<br />

-Fixação em FAA (2ml fixador/5 ml suspensão), 30 min a 3<br />

horas;<br />

-Coloração: Carbolfucsina, carmim acético, feuelgen;<br />

-Leitura em microscópio: 1.000 células<br />

IM = células em mitose x 100<br />

total de células<br />

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