EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA, SUSPENSÕES CELULARES E ...
EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA, SUSPENSÕES CELULARES E ...
EMBRIOGÊNESE SOMÁTICA, SUSPENSÕES CELULARES E ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
a b Figura 2. Efeito dos diferentes<br />
tratamentos de maturação nas<br />
culturas embriogênicas de A.<br />
angustifolia. a) cultura<br />
c d<br />
embriogênica em meio de cultura<br />
com sacarose (9%) e ABA (150µM)<br />
com aspecto granular e embriões<br />
somáticos com a superfície rugosa;<br />
b) cultura embriogênica em meio de<br />
cultura com maltose (9%) e ABA<br />
(150µM); c,d) embriões somáticos<br />
e f globulares na superfície da cultura<br />
embriogênica; e,f) embriões<br />
somáticos globulares, torpedo e<br />
cotiledonares na superfície da<br />
g<br />
h<br />
cultura embriogênica; g) embrião<br />
somático cotiledonar; h) embrião<br />
somático cotilédones clorofilados<br />
em meio de cultura BM (Gupta &<br />
Pullman, 1991) suplementado com<br />
carvão ativado 1,5 g.L-1. (Bars<br />
=1mm).<br />
Curva de crescimento celular<br />
<strong>SUSPENSÕES</strong> <strong>CELULARES</strong><br />
SISTEMAS DE CULTIVO<br />
A) Cultivo fechado: Até fase estacionária, frações para subcultivo.<br />
- Micropropagação<br />
B) Cultivo contíuo fechado: Meio de cultura fresco é adicionado,<br />
células permanecem.<br />
- Metabólitos secundários extracelulares<br />
C) Cultivo contínuo aberto: Adição de meio, saída de meio e células.<br />
- Metabólitos intracelulares<br />
MÉTODOS PARA MEDIR O CRESCIMENTO<br />
1. Número de células<br />
-Dispersão dos agregados, contagem em microscópio<br />
2. Volume celular<br />
-Centrífuga por 3 min a 200g (PCV)<br />
-Sedimentação celular<br />
3. Peso Fresco<br />
4. Peso Seco<br />
-60 o C por 12 h<br />
5. Índice Mitótico (IM)<br />
-Fixação em FAA (2ml fixador/5 ml suspensão), 30 min a 3<br />
horas;<br />
-Coloração: Carbolfucsina, carmim acético, feuelgen;<br />
-Leitura em microscópio: 1.000 células<br />
IM = células em mitose x 100<br />
total de células<br />
15