cellen - Learnify

Introduktion
till cellodling
•cellen
•cellodling
•desinfektion

Milstolpar i
cellodlingshistorik
Hooke studerade
kork och gav
namnet ”cell” till
de små kammare
som han såg
1665
1838
Schleiden och
Schwann, Cellteorin:
Allt levande består
av celler som bildas
genom delning av
andra celler.
Arnolds
arbetade med
grodlymfocyter
Harrison
arbetade med
levande
nervfiber
Earle odlade
cellkultur från
en enda cell
1887 1913
1906 1910- 1950
utveckling av
cellmedium:
jästextrakt, plasma,
serum, mm.
Eagle
utvecklade
basalmedium
1955
1975
Köhler och Milstein
utvecklade
hybridomteknik

Cellstorlek
liten molekyl T4-fagvirus bakterie djurcell växtcell ½ tiokronorsmynt
0,1 Å 1 nm 10nm 100 nm 1 µm 10 µm 100 µm 1 mm 1 cm
Elektronmikroskop
Ljusmikroskop
Bakterier, virus och molekyler är mycket mindre än djurceller som man använder i
cellodling. Bakterier och virus till exempel finns överallt och det är därför viktigt
att hålla allting rent och sterilt när du arbetar med cellodling så att bakterierna
och virusen inte kommer in i dina odlingsflaskor.

Varför odla celler in vitro?
(utanför den levande
organismen)
Diagnostik: för att identifiera virus eller genetiska
sjukdomar
Vaccintillverkning: producera monoklonala
antikroppar
Forskning: för att förstå cellfunktion, skillnad
mellan celler, skillnad mellan friska och sjuka
celler, infektionsprocesser
Minska användandet av försöksdjur

Cellodling i 12-steg
1. Tvätta händerna noggrant.
2. Ta på dig skoskydd och laboratorierock med öppning på baksidan.
3. Gå in i cellodlingslabbet och stäng dörren direkt.
4. Slå på cellodlingsbänken (LAF-bänk) - luftströmmen ska vara på full hastighet;
se till att glasfönstret är neddragen till rätt höjd.
5. Desinficera LAF-bänken med 70 % etanol. Det är viktigt att du arbetar med
sterila material när du odlar dina celler.
6. Ta fram dina cellodlingsflaskor från inkubatorn. Arbeta med en cellinje åt
gången. Desinficera och vänta 15 minuter innan du arbetar med en annan
celllinje.
7. Kolla dina celler i mikroskop innan du arbetar.
8. Desinficera allting som du ställer in i LAF-bänken.
9. Öppna cellodlingsflaskor, medium och reagens bara inne i LAF-bänken där det
är sterilt.
10. Ställ tillbaka dina cellodlingsflaskor i inkubatorn efter att du är klar med dem.
11. Desinficera LAF-bänken.
12. Ta av dig allt skyddsmaterial utanför cellodlingslabbet.

Desinfektion med olika medel
Etanol 70%
- För rengöring av material, LAF-bänkar och mindre ytor
Oxidationsmedel (klorin, virkon)
- För avdödning av större ytor
- Används för avdödning av celler (”slask”)
Glasbägare med bomull
- bomull suger upp slask
- bägare placeras i metallbox och autoklaveras

Rengöring och desinficering
Daglig rengöring
• Desinficering av LAF-bänken innan och efter arbete
• Görs också sist på dagen; under natten tas damm upp av
LAF-bänkar eller luftreningssystem
• Typen av arbete som görs påverkar hur mycket rengöring
som behövs
• Arbetsytor och apparatur torkas av
Kvartalsvis rengöring
• Total rengöring av hela rummet (tak, väggar, golv) och alla
apparatur
• Rengöring görs innan desinficering för att ta bort damm som
kan hindra desinfektionsmedlets verkan

Ordlista
• in vitro: i en artificiell miljö utanför den levande organismen
• monoklonala antikroppar: antikroppar specifika för endast en epitop
• epitop: den del hos ett främmande ämne som en antikropp kan reagera med
• LAF-bänk: Laminar Flow Hood eller cellodlingsbänk
• cellodlingsmedium: vätskan där celler odlas, innehåller glukos, växtfaktorer och
andra näringsämnen från blod eller kalvserum
• L-glutamin: aminosyra, tillsättning i cellodlingsmedium
• trypsin: ett viktigt matsmältningenzym
• centrifug: en apparat som använder centrifugalkraft för att separera partiklar från
en suspension
• hemocytometer: användes från början för att beräkna blodceller men används nu
även inom andra områden, till exempel vid beräkning av celler vid cellodling.
Vätskan hälls på en tjock glasplatta med noga inristade linjer. Ett täckglas läggs på
och man räknar cellerna inom utvalda linjer. Eftersom man vet arean och höjden av
området inom linjerna kan man också beräkna volymen och därmed få ett mått på
antalet celler med milliliter.
• slask: vätskeavfall från cellodling, består av gammalt medium och även celler
• autoklavering: är processen där utrustning och tillbehör steriliseras genom att
utsätta dem för högt tryck med mättad ånga vid 121 grader eller mer, vanligen i 15-
20 minuter beroende på storleken av lasten och innehållet

För fördjupning, se material på Sigma-Aldrich (obs! på engelska)
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/cell-culture/learning-center/ecacchandbook/cell-culture-tech-glossary.html#Glossary
Bildinformation:
Blue-grey cells: Cho_cells_adherend2_public domain, Wikimedia
Disinfection of Hood: Javier Quevedo, Attribution Sharealike 2.0, Flickr Creative Commons
Biocontainment laminar flow hood with blue chair: Public domain, Wikimedia
Sucrose molecule 3D model: GNU, Wikimedia
800px Swedish coin 10 kr: GNU, Creative Commons, Wikimedia
Washing hands: Arlington County, Attribution Sharealike 2.0, Flickr Creative Commons
Microscope: Tuchodi, Attribution 2.0 Generic, Flickr Creative Commons
Cell culture, hand in hood: GNU public documentation licence, Wikimedia