You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
Inom metabolismen förekommer heterotrop alloster effekt ofta vid reglering av<br />
nyckelenzymer, t.ex. regleras det glykolytiska enzymet fosfofruktokinas på detta vis<br />
av bl.a. AMP, ADP, citrat <strong>och</strong> fruktos-2,6-bisfosfat. (1p)<br />
d) I cytokrom c finns ingen plats ledig för syrebinding efter som heme-järnet har en<br />
extra ligand (metionin) (1p)<br />
5. Proteinrening <strong>och</strong> analys.<br />
a) Beskriv principen för jonbyteskromatografi. (1p)<br />
b) Ange två principiellt olika metoder för att uppskatta storleken på ett protein (metoder<br />
som inte kräver stora <strong>och</strong> dyra apparater)<strong>och</strong> hur de fungerar. (4p)<br />
(5 p)<br />
Svarsmall:<br />
a) Jonbyteskromatografi innebär att laddade molekyler (eller laddade grupper på en stor<br />
molekyl) binds till substituenter med motsatt laddning på en stationär fas (t.ex. porösa<br />
gelkulor) <strong>och</strong> följer då inte med flödet genom kolonnen. För att få dem att lossna ökar<br />
man jonstyrkan, t.ex. genom att tillsätta ökande mängd salt. Ett protein med hög<br />
nettoladdning binds starkare <strong>och</strong> kräver mera salt för att trängas ut (1p).<br />
b) Gelfiltrering (1p). Proteinlösningen får flöda genom en kolonn packad med ett poröst<br />
material (t.ex. porösa gelkulor). Proteiner utanför gelkulorna följer med vätskeflödet,<br />
men beroende på storlek kan de diffundera in i porerna <strong>och</strong> inne i porerna följer de<br />
inte med flödet. Små molekyler kan tränga längre in <strong>och</strong> ockupera större volym i<br />
gelkulorna. Därför stannar de längre tid i den sk. stationära fasen, dvs de följer inte<br />
med flödet lika stor del av tiden. Sålunda kommer små molekyler att färdas<br />
långsammare än stora. (1p)<br />
Gelelektrofores (1p). Proteiner appliceras i en gel med lösning av lämpligt pH <strong>och</strong><br />
när man applicerar ett elektriskt fält kommer laddade proteiner att röra sig mot<br />
elektroden med motsatt laddning. Proteinerna bromsas av gelpolymerens nätverk.<br />
Små proteiner tar sig lättare igenom maskorna i nätverket <strong>och</strong> vandrar sålunda fortare<br />
än stora proteiner. (1p)<br />
6. Kinetik. Tänk dig tre hypotetiska -galaktosidas-enzymer A, B, C, som förutom laktos<br />
(mjölksocker, Gal-1->4-Glu) också kan hydrolysera cellobios (Glu-1->4-Glu).<br />
Enzymerna följer Michaelis-Menten-ekvationen <strong>och</strong> har följande kinetiska parametrar för<br />
dessa substrat:<br />
Enzym<br />
K m , laktos<br />
(mM)<br />
k cat , laktos<br />
(s -1 )<br />
K m , cellobios<br />
(mM)<br />
k cat , cellobios<br />
(s -1 )<br />
A 100 100 500 10<br />
B 10 10 50 10<br />
C 0.1 1 1 2<br />
a) Vilket enzym skulle du välja för att få snabbast hydrolys av laktos i vassle (1p)<br />
Varför (1p) Anta att laktoskoncentrationen är minst 100 mM
Change language