Salgının Laboratuvar Boyutu - Klimik
Salgının Laboratuvar Boyutu - Klimik
Salgının Laboratuvar Boyutu - Klimik
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
<strong>Salgının</strong><br />
<strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> y<br />
Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
GATA Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı
Salgın?<br />
Bir enfeksiyonun, ..................beklenenden daha fazla görülmesi<br />
Nadir görülen bir enfeksiyonun olgu sayısının artması<br />
Beklenen Olgu Sayısı<br />
Nasıl s belirlenebilir?<br />
Sürveyans Verileri<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
2
Mik Mikrobiyoloji bi l ji <strong>Laboratuvar</strong>ı<br />
L b t<br />
Sürveyanstaki Rolü<br />
Epidemiler belirlemek ve doğrulamak<br />
Endemik hastalıklar sürveyans<br />
Enfeksiyon eliminasyon ve eradikasyon<br />
Antimik Antimikrobiyal obi al direnç di enç sü sürveyans e ans<br />
Spesifik etkenler sürveyans<br />
Yeni enfeksiyon etkenleri saptamak<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
3
SSalgın l şüphesi ü h i<br />
Sağlık ğ sisteminin önemli ve öncelikli konulardan birisidir<br />
Salgın ile etkin mücadele için etkenin tanınması gerekir<br />
Mikrobiyoloji <strong>Laboratuvar</strong>ı sorumlu<br />
Salgın araştırma ekibinin vazgeçilmez üyesidir<br />
Salgın etken(ler)inin doğru tanımlanmasını sağlamalıdır<br />
SSalgın l etken(ler)inin tk (l )i i antimikrobiyal ti ik bi l duyarlılıklarını d l l kl belirlemelidir<br />
b li l lidi<br />
Salgın ile ilgili laboratuvar verilerini zamanında bildirmelidir<br />
İzolatları ve verileri arşivlemeli<br />
İİzolatlar l tl arasındaki d ki ilişkiyi ili ki i belirlemeli b li l li (tiplendirme)<br />
(ti l di )<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
4
Benzer klinik tablo gösteren olguların ihbarı<br />
Epidemiyolojik saha araştırması<br />
İl Sağlık Md., Md.,TemelSağ. Temel Sağ. Hiz,Gn.Md.,Refik Hiz, Gn. Md., Refik Sayd. Hıfzıssıhha Mrk. Bşk.lığı<br />
<strong>Laboratuvar</strong>ların uyarılması***<br />
Pozitif sonuçların ç alınması, , Verilerin Toplanması p<br />
Olası olgu tanımı<br />
Salgına hazırlık<br />
İdari kurumlar, görevli bütün birimlerin işbirliği<br />
<strong>Laboratuvar</strong> kapasitesi, kaynakların gözden geçirilmesi<br />
Personel desteği sağlanması<br />
<strong>Salgının</strong> araştırılması<br />
Kesin Olgu tanımı (laboratuvar bulguları) ***<br />
OOrganizmaların i l ti tiplendirilmesi,<br />
l di il i<br />
Türlerin tanımlanması<br />
Biyotiplendirme<br />
Direnç durumları<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
5
Olguların saptanması ***<br />
<strong>Salgının</strong> doğrulanması<br />
Dosya ve verilerin incelenmesi, Epidemiyolojik özelliklerin tanımlanması<br />
Moleküler çalışmalar ***<br />
Hipotez oluşturma<br />
Hipotezin p test edilmesi<br />
<strong>Laboratuvar</strong> bulguları desteklemeli ***<br />
Verilerin analizi<br />
Sonuçların paylaşılması<br />
Sonuçların yorumlanması<br />
İlişki var mı? ***<br />
Kontrol önlemlerinin alınması ***<br />
Kontrol önlemleri uygun / yeterli mi? Spesifik etken, kaynak / rezervuara yönelik<br />
Kontrol önlemleri salgını durdurdu mu? Bulaşma yolu ortadan kaldırılmalı<br />
Son Sonuçların çla n rapor apo edilmesi<br />
İlgili meslek gruplarının bilgilendirilmesi<br />
Toplantılar ile açık olarak gelişmeler anlatılmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
6
Mikrobiyoloji <strong>Laboratuvar</strong>ının<br />
Primer Görevleri<br />
A. Enfeksiyon etkenlerinin doğru tanımlanması<br />
1. ÖÖrneğin<br />
kalitesi,<br />
2. Tanımlama için yeterli ve uygun tekniklerin kullanılması<br />
a) Selektif kültür yöntemlerinin kullanılması<br />
b) b) Özel Özel mikrobiyolojik mikrobiyolojik tekniklerin tekniklerin kullanılması<br />
kullanılması<br />
B. Mikroorganizmaların tür düzeyinde tanımlanması<br />
C. Antimikrobiyal duyarlılık testlerinin yapılması<br />
D. Sonuçların ç zamanında ve uygun yg raporlanması, p , verilerin saklanması<br />
F. Kalite kontrol çalışmaları yapılması<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
7
Örneğin kalitesi<br />
<br />
laboratuvar işlemleri<br />
örneğin kalitesi<br />
<br />
Etken Araştırma<br />
izolasyon & doğru tanımlama<br />
<br />
yeterince, t i doğru d ğ yerden, d uygun tteknikle k ikl örnekleme<br />
ö kl<br />
uygunsuz örnekleme<br />
zaman kkaybı b<br />
ekonomik kayıplar<br />
hatalı sonuç<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
8
Güncel kılavuzlar ışığında;<br />
Mikrobiyoloji Uzmanı<br />
Uygun örnek alınması ve gönderilmesini sağlamalı<br />
<strong>Laboratuvar</strong>a gelen g örneğin ğ kalitesini denetlemeli<br />
Örnek kabul kriterleri koymalı ve tavizsiz uyulmasını sağlamalı<br />
UUgunsuz örneği ö ği reddederek dd d k uygun alınmasını l sağlamalı ğl l<br />
“yeterli/kaliteli/uygun örnek alımı” konusunda eğitim vermeli<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
9
<strong>Laboratuvar</strong> klinisyenden;<br />
Klinisyen;<br />
en anlamlı testi talep etmesini<br />
en doğru örnek türünü seçmesini<br />
örneği en uygun şekilde almasını<br />
örneği en enuygunşartlarda uygun şartlarda ulaştırmasını bekler<br />
Yüksek riskli (F.tularensis)<br />
çoklu ilaca dirençli (M.tuberculosis)<br />
benzeri etken şüphesinde mutlaka laboratuvarı uyarmalı<br />
(inkübasyon süresi<br />
duyarlılık test panelindeki farklılık<br />
öncelikle uygulanması gereken test belirlenir)<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
10
! ÖÖrneğin ği Kalitesini K lit i i Arttırmak A tt k<br />
AAntibiyoterapiden tibi t id önce ö alınmalı l l<br />
Kontaminasyonu engellenmeli (flora ve çevre)<br />
Yeterli hacim / miktarda olmalı (yalancı negatif sonuçlar )<br />
Direkt test / kültüre edilen vücut sıvıları (BOS, plevra sıvısı) sıklıkla yetersiz<br />
Enfeksiyon odağından alınmalı<br />
pnömoni tanısında balgam yerine tükürük, sinüzit tanısında nazal sekresyon<br />
gönderilmez<br />
Alınacağı vücut bölgesi ve enfeksiyon evresi bilinmeli<br />
enterik ateşte 1. hafta kan, 2. hafta idrar, 3. hafta dışkı alınması anlamlı<br />
Gerekirse örnekleme mikrobiyolog tarafından yapılmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
11
Örneğin Alınması &Taşınması & Taşınması ?<br />
BBoğaz, ğ dderi, i mukoz k membran b > > > > Ekü Eküvyon il ile sürüntü ü ü tü<br />
İdrar, balgam, dışkı > > > > Steril, sızıntı yapmayan burgu kapaklı kap<br />
Vücut sıvıları, apse vb. > > > > Steril enjektör/ponksiyon iğnesi<br />
Anaerop kültür örnekleri > > > > Anaerop taşıma besiyerleri<br />
Serolojik tanı için kan > > > > Temiz tüplere (hemolizsiz 5-10 ml)<br />
Örnek alındığı bölgedeki olası patojene uygun taşıma by.ne by ne aktarılmalı<br />
Örnek en kısa zamanda laboratuvara ulaştırılmalı (+4C’de saklanmalı)<br />
Geç aktarım, inkübasyon süresinin kısaltır/uzun zaman alan testlerin ertelenmesine neden olur<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
12
Eğitim zorunluluktur ?!<br />
Örnek alımı nasıl yapılmalı?<br />
Kjfytfrııoğpıuyğpo<br />
uyre*yrere0*646<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
13
Örneklerle İlgili <strong>Laboratuvar</strong>a Verilecek<br />
Önemli Bilgiler<br />
Detaylı -doğru olarak hasta ve gönderen kişi / klinik bilgileri<br />
Örnek çeşidi ve ayrıntılı bilgileri<br />
Örneğe uygulanmış testler ve sonuçları<br />
Örnekleme yönteminin uygulanmasındaki hata sonucunda;<br />
İd İdrar kültü kültüründe ü d 3f 3 farklı kl mo üremesi ü i<br />
Kan kültüründe deri florasının üremesi<br />
Balgamın Gram boyalı yaymasında,<br />
x100 büyütmede >10 epitel hücresi,
Doğru Tanımlama<br />
Yeterli ve Uygun Teknikler Kullanılmalıdır<br />
<br />
Etken çeşitliliği<br />
<br />
tanı selektif kültür ve teknikler<br />
<br />
E.coli 0157:H7 sorbitollü Mac Conkey besiyeri<br />
VRE vankomisinli Brain-Heart infüzyon agar<br />
Hızlı tanımlama / duyarlılığı belirleme özel teknikler<br />
199 199..... Tbc olguları <br />
yeni izolasyon - duyarlılık test tekniklerine geçilmiştir<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
15
Tür Düzeyinde Tanımlama<br />
Aynı cins mikroorganizmalar,<br />
epidemiyolojik farklılık gösterebildiklerinden<br />
tü tür dü düzeyinde i d ttanımlanmaları l l bü büyük ük öönem ttaşır<br />
Etken mikroorganizma;<br />
tür düzeyinde<br />
hızlı & güvenilir standartlarda<br />
otomatik ik / yarıotomatik ik cihaz ih - ki kit ile il tanımlanabilir l bili<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
16
Antimikrobiyal Duyarlılıkların<br />
Belirlenmesi ve Bildirilmesi<br />
Salgında etkenin tanımı kadar duyarlılık paneli de önemli<br />
Salg <strong>Salgının</strong> n n kont kontrolü olü için antimik antimikrobiyal obi al test sonuçları son çla bilinmeli<br />
Uluslararası standartlarda (CLSI) test antibiyotikleri seçilmeli<br />
Güncel direnç durumuna göre paneldeki antibiyotikler düzenlenmeli<br />
Antimikrobiyal duyarlılık test sonuçları kısıtlı bildirilmeli<br />
Rapordaki ilk grup antibiyotiklere direnç varsa ikinci grup bildirilmeli<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
17
Sonuçların Zamanında Uygun Şekilde<br />
Bildirilmesi<br />
Kültür / duyarlılık sonuçları sürveyansa önemli bir veri kaynağıdır<br />
Veriler günlük g olarak toparlanıp p p düzenlenmeli<br />
<strong>Laboratuvar</strong>, test sonuçları ilgili birimlere hemen bildirmeli<br />
Patojen şüphesinde kesin sonuç beklenmeden ön bildirim yapılmalı<br />
Veriler düzeltilebilir ve analiz edilebilir olmalı<br />
Salgın ekibi - mikrobiyolog arası süreklibilgialışverişi sürekli bilgi alışverişi olmalı<br />
Hasta / çevre örnekleri referans laboratuvarlarda refere edilmeli<br />
Yerel-ulusal-uluslar arası iyi bir haberleşme ağı ğ kurulmuş olmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
18
Bölge Hastane Lab.<br />
Merkez Hastane Lab.<br />
Ulusal Referans Lab.<br />
Uluslararası Referans Lab.<br />
<strong>Laboratuvar</strong> Zinciri<br />
Örnek alımı<br />
Hızlı - basit testler<br />
Ön işlem + transport<br />
Örnek alımı<br />
Ön işlem+transport<br />
Sonuç raporu<br />
Araştırma çalışmaları<br />
SSpesifik ifik test t t yöntemleri ö t l i<br />
Uluslararası referans lab. gönderim<br />
Sonuç raporu<br />
AAraştırma t çalışmaları l l<br />
Eğitim<br />
İleri testler<br />
Sonuç raporu<br />
Araştırma çalışmaları<br />
Eğitim<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
19
Ulusal Referans <strong>Laboratuvar</strong>ı<br />
REFİK SAYDAM HIFZISSIHHA MERKEZ BAŞKANLIĞI<br />
Salgın Hastalıklar Araştırma Müdürlüğü<br />
Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji<br />
Epidemiyoloji Ünitesi (2000)<br />
1 Mik. ve Kl. Mik. Uzmanı<br />
2 Halk Sağlığı Uzmanı<br />
1 Bilgisayar operatörü<br />
Görevleri<br />
<strong>Laboratuvar</strong> hizmetlerinin planlanması<br />
Merkez ve il düzeyinde laboratuvar kapasitelerinin geliştirilmesi<br />
Uluslararası referans laboratuvarlarla iletişimin sağlanması<br />
<strong>Laboratuvar</strong> rehberlerinin hazırlanması<br />
Bili Bilimsel l araştırmalara t l destek d t k sağlanması ğl<br />
TEMEL SAĞ. HİZ. GN. MD. düzenlediği saha çalışmalarına katkı sağlanması<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
20
İzolatların ve Verilerin Saklanması<br />
Salgın ekibinin alacağı kararlar doğrultusunda izolatlar saklanmalı<br />
<strong>Laboratuvar</strong>lar;<br />
mo saklayabilecek uygun koşullara sahip olmalı<br />
gerektiğinde izolatları canlandırabilmeli<br />
salgın etkeni izolatların bilgilerini arşivlemeli<br />
salgın hakkındaki bütün verileri tekrar ulaşılabilir şekilde saklamalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
21
KKalite lit Kontrol K t l<br />
Mikrobiyoloji laboratuvarının doğru & güvenilir sonuç vermesi için<br />
uluslar l l arası kkabul b l görmüş ö ü standartlarda d l d çalışıyor l<br />
sonuçlarının ç ggüvenilirliği ğ test ediliyor y<br />
iç ve dış kalite kontrol çalışmaları yapılıyor olmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
22
Mikrobiyoloji Uzmanının<br />
Salgın Ekibindeki Görevi<br />
Salgın Ekibinin Diğer Üyelerini, laboratuvar çalışma ve uygulamaları<br />
(örnek alma, kültür yöntemleri, duyarlılık testleri, serolojik ve<br />
moleküler testler vb.) vb ) konusunda bilgilendirmeli<br />
bilgilendirmeli,<br />
Temel epidemiyolojik kavramlar konusunda bilgi alışverişinde bulunmalı,<br />
Bütün sürveyans incelemelerinde;<br />
benzer enfeksiyonlu hasta<br />
llaboratuvarda b t d herhangi h h i /nadir / di görülen ö ül bir bi mikroorganizma<br />
ik i<br />
sayısında artış görülmesi halinde<br />
Klinisyenlerin ve ilgili bütün birim ve kuruluşların dikkatini çekerek<br />
ŞÜPHELİ patojenin KAYNAĞINI & GEÇİŞ YOLUNU araştırmak üzere<br />
HIZLA HAREKETE GEÇMELİDİR<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
23
Mikroorganizma(lar)ın<br />
Epidemiyolojik Özelliklerinin Araştırılması<br />
(Tiplendirme)<br />
Salgın etkeni etkenimo.nın mo.nın köken benzerliği / /kaynağı kaynağı araştırılmalıdır<br />
Epidemik, endemik, sporadik izolatların ayrımında gereklidir<br />
Temel olarak iki grupta incelenir Fenotipik (geleneksel) Tiplendirme<br />
Genotipik (moleküler) Tiplendirme<br />
İzolat ilişkilerinin araştırılacağı “tiplendirme” yönteminin seçimi çok önemli<br />
<strong>Laboratuvar</strong> ve personelin yeterlilik derecesi de göz önüne alınarak<br />
HIZLI, , GÜVENİLİR, , PRATİK, , UCUZ bir yöntem y seçilmelidir ç<br />
Yapılan çalışmalarda henüz altın standart bir yöntem tanımlanmamıştır<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
24
Fenotipik (Geleneksel / Konvansiyonel)<br />
Tiplendirme Yöntemleri<br />
Mo Mo.ların; ların;<br />
metabolik aktivitelerini ortaya koyan biyotipik profilleri<br />
antibiyotik duyarlılıkları<br />
Dezavantajı;<br />
duyarlı oldukları faj tipleri<br />
protein içerikleri<br />
gibi özelliklerine dayalı fenotipik yöntemler vardır<br />
mo. fenotipleri değişebilir (tahmin edilemez / çevre koşulları etken)<br />
S Sero / ffaj j ti tiplendirmede l di d öözgül ül reaktifler ktifl gerekir ki<br />
Çok işlem gerektirir, salgın araştırmalarında yavaş kalır<br />
Tek nükleotiddeki nokta mutasyonu;<br />
fenotipten sorumlu gen fonksiyonunu / regülasyonunu bozabilir<br />
fenotipi p farklı, ,g genotipi p ayırt y edilemez /aynı / y izolatlar görülebilir<br />
g<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
25
Bi Biyokimyasal ki l özellikler ö llikl<br />
Koloni morfolojisi<br />
Biyotiplendirme<br />
Çevre Ç koşullarına ş tolerans (bazı ( by, y, ekstrem pH p ve ısıda üreme vb.) )<br />
gibi özgül metabolik aktivite paterni ortaya konur<br />
Klasik Sınıflandırma (taksonomi) & Rutin Tür İdentifikasyonu<br />
Güvenilir, otomatize / modüler paneller (ticari)<br />
Bazı mo.ların ayrımında biyokimyasal özellikler yetersiz kalır<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
26
Antimikrobiyal Duyarlılık Testleri<br />
YYeni i / alışılmadık l l d k atb. tb direnç di paterni t i salgının l ilk göstergesi ö t i olabilir l bili<br />
Birçok bakteri izolatına rutin olarak;<br />
konvansiyonel / otomatize antibiyogram uygulanır<br />
Bu testler kalite kontrolü zor, uygulaması kolay, göreceli daha ucuzdur<br />
Di Direnç ffenotip ti değişkenliği d ği k liği antibiyotiplendirmenin tibi ti l di i epidem. id değerini d ğ i i sınırlar l<br />
Farklı izolatlar aynı, bir izolat (plazmid / transpozon) çoklu direnç gösterebilir<br />
Kalitatif Atb. (duyarlı/dirençli) ile sınıflama ilişkisiz izolatlar ayırt edilemez<br />
Kantitatif sonuçlar (zon çapı) ile sınıflama Atb.ın tiplendirme gücünü arttırır<br />
AAntibiyotipleme tibi ti l tek t k başına b kkullanılamaz ll l<br />
Endemik / epidemik bir klonun tanımında yararlı bir tarama yöntemidir<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
27
FFaj j Tiplendirme<br />
Ti l di<br />
BBakteriyofajlar, kt i f jl bakteri b kt i hücresini hü i i enfekte f kt edip di eriten it virüslerdir i ü l di<br />
Epidemiyolojik p y j çalışmalarda ç ş bakteriler; ;<br />
değişik bakteriyofajlara duyarlılık/dirençliliklerine göre tiplendirilir<br />
Yöntemin dezavantajları;<br />
stok fajlar, kontrol suşlarının ancak referans lab. bulunur<br />
tekrarlanabilirliği zayıf<br />
ayrım gücü ü ü zayıff<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
28
Genotipik (Moleküler)<br />
Tiplendirme Yöntemleri<br />
Fenotipik y. dezavantajları nedeniyle kullanıma girmiş<br />
Epidemiyolojik ilişkisiz izolatların genetik farklılıklarını gösterir<br />
KKromozomal l / ekstrakromozomal k t k l genetik tik element l t faklılığını f kl l ğ temel t l alır l<br />
DNA restriksiyon endonükleaz ile kesilir / nükleik asit amplifikasyonu (çoğaltma)<br />
Bakteri, fungus, virus ve protozoonların tiplendirilmesinde kullanılabilir<br />
Uygulama kolaylığı, çoğu fenotipik yöntemden daha yaygın kullanımını sağlamış<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
29
DNA’ya DNA ya Bağlı Yöntemler<br />
Plazmid profil analizi (PPA) DNA hibridizasyonu<br />
Restriksiyon endonükleaz analizi (REA)<br />
Southern hibridizasyon analizi (SHA)<br />
Pulsed field gel elektroforez (PFGE)<br />
En iyi sonuç, DNA’ya bağlı yöntemlerle alınır<br />
rRNA (Ribotyping)<br />
Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR)<br />
Arbitrarily primed PCR (AP PCR)<br />
Aynı suşların aynı, farklı olanların farklı DNA profili gösterilebilir<br />
Yapılması basit ve hızlı,<br />
Yüksek tekrarlanabilirlik oranına sahip,<br />
Zamana bağlı ğ olarak sabit kalabilen,<br />
Çok çeşitli patojenlerin identifikasyonunu sağlayabilen,<br />
Çok sayıda polimorfizmi tanıma yeteneğine sahip olan, olan<br />
İzolatlar arasındaki farkı tespit edebilen<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
30
DNA’ya DNA ya Bağlı Testlerin Avantajları<br />
Kolonizasyon / enfeksiyon farkını çok iyi ortaya koyabilir<br />
EEnfeksiyöz f k i ö / kkontaminasyon t i suşlarını l birbirinden bi bi i d ayırabilir bili<br />
Çapraz enfeksiyonu ortaya koyabilir<br />
TTedavi d i alan l hhastalarda t l d enfeksiyon f k i relapsını l ortaya t çıkarabilir k bili<br />
DNA’ya Bağlı Testlerin Dezavantajları<br />
Jel elektroforez şartları şartları, DNA ekstraksiyon sorunları sonuçları değişken yapar<br />
Kompleks DNA paternlerinin analizlerinde sorunlarla karşılaşılabilir<br />
Referans suşlara oranla standardizasyon eksikliği söz konusudur<br />
Bu tür sınırlamalar yorumlarda zorluklara yol açabilmektedir<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
31
Tüm Hücre Protein Elektroforezi<br />
DDeğişik ği ik yöntemlerle ö t l l serbestleştirilmiş b tl ti il i bbakteri kt i proteinleri t i l i<br />
poliakrilamid jel elektroforezi (PAGE) ile ayrıştırılır<br />
Çok sayıda band oluşmasına rağmen ilişkisiz izolatların patern farkı azdır<br />
(ayrım gücü zayıf)<br />
Elektroforez koşullarındaki ufak değişikliklerden etkilenir<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
32
İİmmunoblot bl t Yöntemi Yö t i (Immunoblotting)<br />
(I bl tti )<br />
Elektroforez sonrası bakteriyel proteinlerin nitrosellüloz membrana aktarımı<br />
MMembranın b spesifik ifik Ab.lar Ab l içeren i tavşan t /i / insan serumuyla l karşılaştırılması<br />
k l t l<br />
Membrandaki proteine bağlanmış spesifik Ab.lar enzimle işaretli anti-Ig ‘ler ile saptanır<br />
Elektroforez koşullarından daha az etkilenir, band sayısı daha az, yorumu kolay<br />
C.difficile, S.aureus, A.fumigatus suşlarının tanımında başarılı<br />
Yaygın kullanılmaz. Çünkü;<br />
Teknik e olarak o a a yoğun yoğu çaba gerektirir ge e t<br />
Ekstraksiyon yöntemi ve spesifik Ab kaynağının etkileri tanımlanmamıştır<br />
Üreme koşullarından (translasyon, ısı, besiyeri bileşimi, pH) etkilenebilir<br />
Band paternleri kompleks, küçük farklılıkları belirlemek / yorumlamak zor<br />
DNA’ya y bağlı ğ yöntemler y daha üstün ayrım y sağlar, ğ daha fazla standardizedir<br />
Poliakrilamid Jel Elektroforezi (PAGE)<br />
Protein profillerinin ortaya çıkarılması esasına dayanır<br />
S.aureus,S.epidermidis,C.difficile,C.albicans,A.fumigatus vb suşlar için kullanılabilir<br />
Bant patern görünümleri suşları ortaya koymada yetersiz kaldığı için önerilmez<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
33
Multilokus Enzim Elektroforezi (MEE)<br />
Epidemiyolojik tiplendirmelerde başarı ile uygulanmaktadır<br />
İzolatların ayrımında yüksek performans, epidemiyolojik ilişkilileri doğru sınıflayabilir<br />
Her mo. mo genetik kontrollü hücresel enzimlerinin (izoenzim) elektroforetik olarak<br />
ortaya konması esastır. Enzimlerin “elektromorf” denilen elektroforetik<br />
hareketlilik değişiklikleri, enzimleri kodlayan kromozomal genlerdeki allelik<br />
değişikliklerden kaynaklanır ve yöntem bu farklılığın analizine dayanır<br />
Böylece farklı elektromorfların oluşturduğu “elektroforetik tipler” ortaya çıkar<br />
L.pneumophila, S.marcescens, Candida türlerinin tanımlanmasında mükemmel<br />
Uygulaması kolay, ayıraçları bulunabilir, enzim profilleri stabildir<br />
Paterni göreceli olarak kolay elde edilse de<br />
okunması / yorumlanması / kıyaslanması zor<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
34
MEE’ MEE’nin i varyasyonudur d<br />
Zimotiplendirme (Zymotyping)<br />
Bakteriyel elastaz enziminin elektroforetik özelliklerinin farklılığına dayanır<br />
Enzimlerin elektroforezdeki hareketliliklerinde oluşan farklılıklara bakılarak<br />
izolatların ayrımı yapılır<br />
Bütü Bütün izolatlar i l tl tiplendirilebilir, ti l di il bili paternler t l stabil t bil ve tekrarlanabilirdir<br />
t k l bili di<br />
Ayrım gücü;<br />
kapsüler apsü e tiplendirmeden t p e d ede iyi y<br />
faj tiplendirme / pulsed field gel electrophoresis (PFGE)’den kötü<br />
Aynı zimotip içinde birkaç genotip olabileceği saptanmıştır<br />
SSonuçlarıyla l l antibiyotik tibi tik duyarlılık d l l k paternleri t l i arasında d uyum yoktur kt<br />
Ayrım gücü mo.ların tiplendirilmesi için yetersizdir<br />
Prosedürü tarama testi olarak kullanılamayacak y<br />
kadar uzundur<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
35
Moleküler Yöntemler;<br />
Spesifik suşların tanımlanabilmesi<br />
salgının önlenmesi / kontrolünde önemli gelişmedir<br />
Dezavantajları olmasına rağmen<br />
fenotipik p yyöntemlere ggöre<br />
daha ileri ve hızlıdırlar<br />
Sınırlı sayıda rutin laboratuvarda kullanılabilir olmaları sorundur<br />
Diğer yöntemlerin ise araştırma laboratuvarlarında kullanılması<br />
önerilmektedir<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
36
Bulaşıcı Hastalıklarla Mücadele Genelgesi (17.02.2006 / 23)<br />
Hastalık çıkmadan önce<br />
İl Merkez İzleme ve Denetim Ekibi<br />
Salgında erken uyarı sistemi kurulmalı<br />
Muhtemel salgınlar için hareket planları hazırlanmalı<br />
Mevcut kaynak (personel, malzeme, araç) kayıtların tutulmalı<br />
Salgın konusunda personelin eğitimi sağlanmalı<br />
Salgın durumunda koordinasyon sağlanmalı<br />
Hastalık çıktıktan sonra veya salgın sırasında<br />
Salgın tanımlanmalı ve özellikleri belirlenmeli<br />
Risk altındaki nüfus belirlenmeli<br />
Hastalık kaynağı, bulaşma yolu belirlenmeli<br />
Koruma ve kontrol önlemleri belirlenmeli<br />
Halka ve personele sağlık eğitimi verilmeli<br />
Rapor hazırlanmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
37
Mikrobiyoloji <strong>Laboratuvar</strong>ı Salgında Kilit Rol Oynar<br />
Salgın g / enfeksiyon y sayısı y arttığında ğ etken hızla tanımlanmalı<br />
<strong>Laboratuvar</strong>-Salgın Ekibi koordinesi ile personel, malzeme ihtiyacı karşılanmalı<br />
Olası salgın maliyeti, önceden belirlenerek, harcamaların laboratuvar / salgınla<br />
ilgili bölümdeki diğer hastalara yüklenmesi önlenmeli<br />
Salgında kaynak ve geçiş yolu dikkate alınarak hasta, hasta ile teması olanlar ve<br />
gerekiyorsa çevreden çok sayıda örnek alınmalı<br />
Örnekler, şüpheli patojeni izole, diğerlerini inhibe eden selektif besiyerine ekilmeli<br />
Koloni yapısına göre izolasyon sağlayan ayırt edici besiyerine de kültüre edilmeli<br />
Farklı hastalarda aynı patojen belirlenmesi kaynağın aynı olduğunu gösterir<br />
Köken belirlemek için, uygun koşullarda saklanan izolatlara çalışma planlanmalı<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
38
Sonuç olarak;<br />
Mikrobiyoloji laboratuvarı salgın kontrolünde çok önemli role sahip<br />
Artan patojen çeşitliliği, hızla yeni teknolojilere yönelme laboratuvar ile<br />
salgın araştırma ekibinin mutlak sıkı işbirliğini gerektirir<br />
İzolasyon, identifikasyon, tiplendirmenin yeni yöntemlerle yapılması<br />
salgın g kontrolü çabalarının ç etkinliğini ğ sağlayacaktır<br />
ğ y<br />
Mikrobiyoloji laboratuvarı hızlı tanı & duyarlılık testleri yapabilmeli<br />
EEpidemiyolojik id i l jik tiplendirme ti l di veriler il ışığında ğ d ddeğerlendirilmesi ğ l di il i gereken k<br />
yardımcı araçlardır<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
39
<strong>Salgının</strong> önlenmesi ve kontrolünde;<br />
Epidemiyolog<br />
Enfeksiyon Hastalıkları Uzmanı<br />
Mikrobiyoloji Uzmanı<br />
arasında işbirlikçi bir ekip çalışmasına ihtiyaç vardır<br />
Ayrıca;<br />
Ulusal Referans <strong>Laboratuvar</strong>ı<br />
Diğer laboratuvarlar (bölge, üniversite, özel.....)<br />
Ulusal kurumların işbirliği ve bilgi paylaşımı<br />
Ulusal /uluslararası Kurumların işbirliği ve bilgi paylaşımı<br />
Epidemiyolojik analiz çalışmaları ve bildirimi yapılmalı<br />
Salgın ekibinin başarısında laboratuvar her aşamada aktif rol oynamalı<br />
İşbirliği ile laboratuvar düzenli, düzenli yararlı olacak ve böylece enfeksiyon<br />
kontrol ve önleme aktivitelerinin sistematik olarak yürütülmesi<br />
sağlanarak sorunlar daha kolay aşılacaktır<br />
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
40
24 Ocak 2007 <strong>Salgının</strong> <strong>Laboratuvar</strong> <strong>Boyutu</strong> Yrd. Doç. Dr. Zeynep ŞENSES<br />
41