Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk
Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk
Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
Univerzita Komen<strong>sk</strong>ého v Bratislave<br />
Prírodovedecká fakulta<br />
Katedra genetiky<br />
<strong>Biochemická</strong> a <strong>molekulovo</strong>-<strong>genetická</strong><br />
<strong>diagnostika</strong> Gaucherovej choroby<br />
Slavomíra Mattošová<br />
Školiteľ: doc. MUDr. Ján Chandoga CSc.
Gaucherova choroba<br />
• Autozómovo recesívne dedičné metabolické<br />
ochorenie<br />
• Najčastejšie sa vy<strong>sk</strong>ytujúce lyzozómové<br />
ochorenie<br />
• Incidencia: 1:50 000 - 100 000
<strong>Biochemická</strong> príčina<br />
• Deficiencia enzýmu β-glukozidázy
GBA<br />
• 1q21<br />
• 11 exónov, 10 intrónov<br />
• opísaných približne 300 mutácii<br />
Liečba<br />
• Podávanie chýbajúceho enzýmu - enzýmová<br />
substitučná terapia (ERT)
Ciele práce<br />
Zabezpečiť komplexnú diagnostiku pacientov s<br />
Gaucherovou chorobou<br />
• U<strong>sk</strong>utočniť biochemickú diagnostiku pomocou vyšetrenia<br />
aktivít β-glukozidázy v leukocytoch<br />
• Na kontrolných vzorkách stanoviť referenčné hodnoty<br />
enzýmu chitotriozidázy a zistiť či sú zmeny v závislosti<br />
od veku a pohlavia jedincov<br />
• Určiť aktivitu chitotriozidázy u pacientov a sledovať<br />
aktivity u pacientov s ERT<br />
• Zaviesť molekulárno-genetické metódy na identifikáciu<br />
mutácií v GBA géne
Výsledky – biochemická<br />
<strong>diagnostika</strong><br />
Namerané aktivity u pacientov s Gaucherovou chorobou<br />
(referenčné hodnoty: 4 – 12 nmol.hod.mg -1 )<br />
Pacient č.<br />
β-glukozidáza<br />
(nmol.hod.mg -1 )<br />
β-galaktozidáza<br />
(nmol.hod.mg -1 )<br />
1. 0,01 139<br />
2. 1,7 132<br />
3. 0,37 69<br />
4. 0,3 149<br />
5. 0,5 48<br />
6. 1,0 73,2<br />
7. 0,77 110<br />
8. 0,45 136
Namerané aktivity u príbuzných pacientov s Gaucherovou chorobou<br />
Príbuzný<br />
pacientov<br />
β-glukozidáza<br />
(nmol.hod.mg -1 )<br />
β-galaktozidáza<br />
(nmol.hod.mg -1 )<br />
1. 4,6 117<br />
2. 3,0 88<br />
3. 3,6 112<br />
4. 4,0 * 116<br />
5. 6,2 95<br />
6. 8,1 100<br />
7. 5,4 136<br />
8. 4,5 * 89<br />
9. 6,4 65<br />
10. 7,7 186
Meranie aktivity chitotriozidázy v jednotlivých vekových<br />
<strong>sk</strong>upinách<br />
Vek<br />
AP±SD<br />
(nmol.hod.ml -1 )<br />
Horná hranica<br />
intervalu<br />
1-5 rokov 30,2± 24,4 79<br />
5-10 rokov 41,8± 9,6 61<br />
10-15 rokov 35,1± 8,8 53<br />
15-20 rokov 36,9± 10,7 59<br />
Nad 20 rokov 43,8± 24 92<br />
spolu 36,1± 22,8 82
Porovnanie aktivít chitotriozidázy medzi mužmi a ženami<br />
AP± SD<br />
(nmol.hod.ml -1 )<br />
Horná<br />
hranica<br />
intervalu<br />
Muži 34,6± 21,1 78<br />
Ženy 38,2± 26,1 91
Namerané aktivity chitotriozidázy u pacientov s<br />
Gaucherovou chorobou<br />
Pacient č.<br />
Aktivita chitotriozidázy<br />
(nmol.hod.ml -1 )<br />
1. 2497<br />
2. 1120<br />
3. 19 475<br />
5. 6490<br />
6. 17 120<br />
7. 1120<br />
8. 15 040
Monitorovanie efektívnosti ERT prostredníctvom zmien<br />
sérových aktivít chitotriozidázy<br />
Pacient č.<br />
Aktivita<br />
chitotriozidázy<br />
pred ERT<br />
(nmol.hod.ml -1 )<br />
Aktivita počas<br />
ERT<br />
(nmol.hod.ml -1 )<br />
3. 19 475 8625<br />
6. 17 120 3680
Molekulovo-<strong>genetická</strong> <strong>diagnostika</strong><br />
Identifikovali sme 5 rôznych mutácií v GBA géne<br />
Mutácia Exón Nukleotidová<br />
zámena<br />
AK<br />
substitúcia<br />
N370S 9 c.1226A>G Asn409Ser<br />
L444P 10 c.1448T>C Leu483Pro<br />
R131C 5 c.508C>T Arg170Cys<br />
G377S 9 c.1246G>A Gly416Ser<br />
D409H 9 c.1342G>C Asp448His
Pacient 1: N370S/L444P
Pacient 2: D409H/L444P
Pacient 3: N370S/G377S
Pacient 4: N370S/R131C
Závery<br />
• Zavedením <strong>molekulovo</strong>-genetickej diagnostiky sme zabezpečili<br />
komplexnú diagnostiku u pacientov s Gaucherovou chorobou<br />
• Určenie aktivity chitotriozidázy je vhodná, finančne nenáročná<br />
<strong>sk</strong>ríningová diagnostická metóda<br />
• Prostredníctvom zmien sérových aktivít chitotriozidázy sme<br />
monitorovali efektívnosť enzýmovej substitučnej terapie u pacientov