09.11.2014 Views

Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk

Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk

Biochemická a molekulovo-genetická diagnostika ... - datasolution.sk

SHOW MORE
SHOW LESS

Create successful ePaper yourself

Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.

Univerzita Komen<strong>sk</strong>ého v Bratislave<br />

Prírodovedecká fakulta<br />

Katedra genetiky<br />

<strong>Biochemická</strong> a <strong>molekulovo</strong>-<strong>genetická</strong><br />

<strong>diagnostika</strong> Gaucherovej choroby<br />

Slavomíra Mattošová<br />

Školiteľ: doc. MUDr. Ján Chandoga CSc.


Gaucherova choroba<br />

• Autozómovo recesívne dedičné metabolické<br />

ochorenie<br />

• Najčastejšie sa vy<strong>sk</strong>ytujúce lyzozómové<br />

ochorenie<br />

• Incidencia: 1:50 000 - 100 000


<strong>Biochemická</strong> príčina<br />

• Deficiencia enzýmu β-glukozidázy


GBA<br />

• 1q21<br />

• 11 exónov, 10 intrónov<br />

• opísaných približne 300 mutácii<br />

Liečba<br />

• Podávanie chýbajúceho enzýmu - enzýmová<br />

substitučná terapia (ERT)


Ciele práce<br />

Zabezpečiť komplexnú diagnostiku pacientov s<br />

Gaucherovou chorobou<br />

• U<strong>sk</strong>utočniť biochemickú diagnostiku pomocou vyšetrenia<br />

aktivít β-glukozidázy v leukocytoch<br />

• Na kontrolných vzorkách stanoviť referenčné hodnoty<br />

enzýmu chitotriozidázy a zistiť či sú zmeny v závislosti<br />

od veku a pohlavia jedincov<br />

• Určiť aktivitu chitotriozidázy u pacientov a sledovať<br />

aktivity u pacientov s ERT<br />

• Zaviesť molekulárno-genetické metódy na identifikáciu<br />

mutácií v GBA géne


Výsledky – biochemická<br />

<strong>diagnostika</strong><br />

Namerané aktivity u pacientov s Gaucherovou chorobou<br />

(referenčné hodnoty: 4 – 12 nmol.hod.mg -1 )<br />

Pacient č.<br />

β-glukozidáza<br />

(nmol.hod.mg -1 )<br />

β-galaktozidáza<br />

(nmol.hod.mg -1 )<br />

1. 0,01 139<br />

2. 1,7 132<br />

3. 0,37 69<br />

4. 0,3 149<br />

5. 0,5 48<br />

6. 1,0 73,2<br />

7. 0,77 110<br />

8. 0,45 136


Namerané aktivity u príbuzných pacientov s Gaucherovou chorobou<br />

Príbuzný<br />

pacientov<br />

β-glukozidáza<br />

(nmol.hod.mg -1 )<br />

β-galaktozidáza<br />

(nmol.hod.mg -1 )<br />

1. 4,6 117<br />

2. 3,0 88<br />

3. 3,6 112<br />

4. 4,0 * 116<br />

5. 6,2 95<br />

6. 8,1 100<br />

7. 5,4 136<br />

8. 4,5 * 89<br />

9. 6,4 65<br />

10. 7,7 186


Meranie aktivity chitotriozidázy v jednotlivých vekových<br />

<strong>sk</strong>upinách<br />

Vek<br />

AP±SD<br />

(nmol.hod.ml -1 )<br />

Horná hranica<br />

intervalu<br />

1-5 rokov 30,2± 24,4 79<br />

5-10 rokov 41,8± 9,6 61<br />

10-15 rokov 35,1± 8,8 53<br />

15-20 rokov 36,9± 10,7 59<br />

Nad 20 rokov 43,8± 24 92<br />

spolu 36,1± 22,8 82


Porovnanie aktivít chitotriozidázy medzi mužmi a ženami<br />

AP± SD<br />

(nmol.hod.ml -1 )<br />

Horná<br />

hranica<br />

intervalu<br />

Muži 34,6± 21,1 78<br />

Ženy 38,2± 26,1 91


Namerané aktivity chitotriozidázy u pacientov s<br />

Gaucherovou chorobou<br />

Pacient č.<br />

Aktivita chitotriozidázy<br />

(nmol.hod.ml -1 )<br />

1. 2497<br />

2. 1120<br />

3. 19 475<br />

5. 6490<br />

6. 17 120<br />

7. 1120<br />

8. 15 040


Monitorovanie efektívnosti ERT prostredníctvom zmien<br />

sérových aktivít chitotriozidázy<br />

Pacient č.<br />

Aktivita<br />

chitotriozidázy<br />

pred ERT<br />

(nmol.hod.ml -1 )<br />

Aktivita počas<br />

ERT<br />

(nmol.hod.ml -1 )<br />

3. 19 475 8625<br />

6. 17 120 3680


Molekulovo-<strong>genetická</strong> <strong>diagnostika</strong><br />

Identifikovali sme 5 rôznych mutácií v GBA géne<br />

Mutácia Exón Nukleotidová<br />

zámena<br />

AK<br />

substitúcia<br />

N370S 9 c.1226A>G Asn409Ser<br />

L444P 10 c.1448T>C Leu483Pro<br />

R131C 5 c.508C>T Arg170Cys<br />

G377S 9 c.1246G>A Gly416Ser<br />

D409H 9 c.1342G>C Asp448His


Pacient 1: N370S/L444P


Pacient 2: D409H/L444P


Pacient 3: N370S/G377S


Pacient 4: N370S/R131C


Závery<br />

• Zavedením <strong>molekulovo</strong>-genetickej diagnostiky sme zabezpečili<br />

komplexnú diagnostiku u pacientov s Gaucherovou chorobou<br />

• Určenie aktivity chitotriozidázy je vhodná, finančne nenáročná<br />

<strong>sk</strong>ríningová diagnostická metóda<br />

• Prostredníctvom zmien sérových aktivít chitotriozidázy sme<br />

monitorovali efektívnosť enzýmovej substitučnej terapie u pacientov

Hooray! Your file is uploaded and ready to be published.

Saved successfully!

Ooh no, something went wrong!