(Microsoft PowerPoint - Krev - 2012-2013 - cvi\350en\355.ppt)

• plasma• formované elementy– červené krvinky (bezjaderné)(méně než 1 % jsouretikulocyty)– bílé krvinky• agranulocyty(lymfocyty a monocyty)• granulocytyKREV(eosinofilní, basofilní a neutrofilní)– krevní destičky (nebuněčnéelementy)

Periferní krevní obrazParametry krevního obrazu - analyzátor jednotka ženy mužiLeukocyty - počet (WBC) 10 9 /l 4,0 - 10,0 4,0 - 10,0Erytrocyty - počet (RBC) 10 12 /l 3,80 - 5,20 4,00 - 5,80Hemoglobin - koncentrace (HGB) g/l 120 - 160 135-175Hematokrit (HCT) l/l 0,350 - 0,470 0,400 - 0,500Střední objem erytrocytů (MCV) fl 82,0 - 98,0 82,0 - 98,0Střední množství hemoglobinu v erytrocytu (MCH) pg 28 - 34 28 – 34Střední koncentrace hemoglobinu v erytrocytech (MCHC) g/l 320 - 360 320 – 360Šíře distribuce erytrocytů - směrodatná odchylka (RDW-SD) fl 37,0 - 54,0 37,0 - 54,0Šíře distribuce erytrocytů - variační koeficient (RDW-CV) % 10,0 - 15,2 10,0 - 15,2Trombocyty - počet (PLT) 10 9 /l 150 - 400 150 – 400Střední objem trombocytů (MPV) fl 7,8 - 11,0 7,8 - 11,0Šíře distribuce trombocytů - směrodatná odchylka (PDW-SD) fl 9,0 - 17,0 9,0 - 17,0Šíře distribuce trombocytů - variační koeficient (PDW-CV) % 12,0-18,0 12,0-18,0Šíře distribuce trombocytů - variační koeficient - ADVIA (PDW-CV) % 25,0 - 65,0 25,0 - 65,0Destičkový hematokrit (PCT) ml/l 1,2 - 3,5 1,2 - 3,5Retikulocyty - relativní počet (RET) % 0,5 - 2,5 0,5 - 2,5Retikulocyty - absolutní počet (RET#) 10 9 /l 25 - 100 25 - 100

Krevní nátěrOdběr a manipulace s biologickým materiálem:• periferní krev odebraná do K 3 EDTA• stabilita vzorku do zhotovení nátěru: max. 5 hodin (při laboratorníteplotě)• uchování nátěru na skle do doby vyšetření:– fixovaný nenabarvený nátěr lze skladovat až několik týdnů před vlastnímbarvením (při laboratorní teplotě)– fixovaný a nabarvený nátěr vydrží až několik let (při laboratorní teplotě)– nefixovaný nátěr nelze dlouhodobě skladovatFixace nátěrů– je nezbytná v případě uchovávání nenabarvených skel, pro rutinní barvenínátěrů se nevyžaduje– rovnoměrné nátěry krve na skle je nutné nechat minimálně 10 minut zaschnoutpři laboratorní teplotě– v kyvetě fixovat nátěry 5 minut metanolem, nátěry nechat zaschnout

Barvení dle Pappenheima• panoptické barvení• roztoky:May – GrünwaldGiemsa – Romanovski• klasický postup:– neředěné May-Grünwaldovo barvivo (3 minuty)– následně se barvivo na preparátu zředí stejným dílemdestilované vody a nechá se působit 1 minutu– barvivo se slije a bez oplachu se převrství Giemsovýmroztokem /1 díl barviva na 10 dílů redestilované vody/(15 minut)

periferní krev

Laboratorní postup barvení nátěru1. Pracovní roztoky• fixační roztok 1: pracovní čistý roztok May-Grünwald• promývací roztok 2: fosfátový pufr pH 6,7 – 6,8• barvicí roztok 3: ředit 1 díl roztoku Giemsa-Romanowski (před použitímpřefiltrovat) s 9 díly fosfátového pufru pH 6,7 – 6,8• promývací roztok 4: čistý fosfátový pufr pH 6,7 – 6,8• promývací roztok 5: čistý fosfátový pufr pH 6,7 – 6,82. Fixace a barvení nátěrů• rovnoměrné nátěry krve na skle je nutné nechat minimálně 10 minut zaschnout přilaboratorní teplotě.• v první kyvetě nátěry fixovat 10 minut fixačním roztokem 1 (fixační roztok nesmípřijít do kontaktu s vodou)• ve druhé kyvetě nátěry oplachovat roztokem 2• ve třetí kyvetě nátěry barvit 10 minut barvicím roztokem 3• ve čtvrté kyvetě nátěry opláchnout roztokem 4• v páté kyvetě nátěry opláchnout roztokem 5• nátěry řádně opláchnout pod tekoucí vodou a nechat zaschnout

Erytrocyty• bezjaderné, tvar bikonkávního disku• v izotonickém prostředí průměr 7,5 µm• v zaschlém krevním nátěru průměr 7,2 µm• makrocyty (nad 9 µm) a mikrocyty (pod 6 µm)• retikulocyty – mladá forma, obsahují rRNA

Trombocyty• krevní destičky• bezjaderné diskoidní buněčné fragmenty• vznikají fragmentací magakaryocytů• denzní tělíska (δ granula), α granula, λ granula• úloha krevních destiček ve srážení

Diferenciální rozpočet - analyzátorParametry diferenciálu - analyzátor jednotka ženy mužiNeutrofily % 45,0 - 70,0 45,0 - 70,0Lymfocyty % 20,0 - 45,0 20,0 - 45,0Monocyty % 2,0 - 12,0 2,0 - 12,0Eozinofily % 0,0 - 5,0 0,0 - 5,0Bazofily % 0,0 - 2,0 0,0 - 2,0Neutrofily 10 9 /l 2,00 - 7,00 2,00 - 7,00Lymfocyty 10 9 /l 0,80 - 4,00 0,80 - 4,00Monocyty 10 9 /l 0,08 - 1,20 0,08 - 1,20Eozinofily 10 9 /l 0,00 - 0,50 0,00 - 0,50Bazofily 10 9 /l 0,00 - 0,20 0,00 - 0,20

Diferenciální rozpočet bílých krvinek -manuálníParametry diferenciálu - mikroskop jednotky ženy mužiNeutrofilní segmenty % 47 - 70 47 - 70Neutrofilní tyče % 0 - 4 0 - 4Lymfocyty % 20 - 45 20 - 45Monocyty % 2 - 10 2 - 10Eozinofily % 0 - 5 0 - 5Bazofily % 0 - 1 0 - 1

Neutrofilní granulocyty• neutrofilní tyčka a neutrofilní segment• granula specifická a azurofilní• v cytoplasmě obsahují glykogen• „mikrofágy“ – aktivně pohlcují malé částice• terminální stadium diferenciace• poločas v krvi 6-7 hodin• přežití ve vazivové tkáni 1-4 dny

Elektronogram lidskéhoneutrofilního granulocytu.Cytoplasma obsahuje dvatypy granul: malá(peroxidáza-negativní)specifická granula a větší(peroxidáza-pozitivní)azurofilní granula.Jádro je laločnaté, Golgihokomplex je malý. Drsnéendoplasmatické retikulumje nepočetné, obdobněmitochondrie.x27,000.

Eosinofilní granulocyty• charakteristická dvojlaločná jádra• hojné částice glykogenu• velké množství světlolomných specifických granulbarvících se eosinem

Elektronogrameosinofilníhogranulocytu.EG, eozinofilní granulaN, jádroM, mitochondriex20,000.

Basofilní granulocyty• jádro rozděleno na nepravidelné laloky – zpravidlaale zastřeno specifickými granuly• méně specifických granul než v jinýchgranulocytech, variabilnější co do tvaru a velikosti• specifická granula obsahují heparin a histamin• specifická granula se barví metachromatickybazofilními složkami Romanovského směsí

Elektronogram králičího bazofilního granulocytu.Laločnaté jádro (N), bazofilní granula (B),mitochondrie (M), Golgiho komplex (G).x16,000.

Lymfocyty• malé, střední a velké lymfocyty• buňky efektorové a paměťové• T-lymfocyty• supresorové, pomocné, cytotoxické• B-lymfocyty• terminálně plasmatické buňky• NK buňky

Elektronogramlidskéh lymfocytujádro (N)jadérko (Nu)mitochondrie (M)x22,000.

Plasmatická buňka (EM ×10000)

Monocyty• oválné, podkovovité nebo ledvinovité jádro• jádro uloženo obvykle excentricky• cytoplasma obsahuje jemná azurofilní granula• azurofilní granula monocytů jsou lyzosomy• poločas monocytů v krvi je 12 – 100 hodin

Elektronogram lidskéhomonocytu.Golgiho komplex (G)mitochondrie (M)azurofilní granula (A)volné ribosomy (R)x22,000

Sedimentace• rychlost poklesu erytrocytů je dána rychlostí tvorbyagregátů erytrocytů, které sedimentují mnohemrychleji, než samostatné erytrocyty• rychlost tvorby agregátů závisí na koncentracifibrinogenu, imunoglobulinů, proteinů akutní fáze• sedimentaci zrychluje anémie, naopak vysokýhematokrit (polycytémie) sedimentaci zvyšujestejně jako vysoký albumin• defibrinovaná krev téměř nesedimentuje

• sedimentacestoupá mírně svěkem• rychlostsedimentacezávisí na pohlavímužiženy17 – 50 let do 10 mm/hod do 12 mm/hod51 – 60 let do 12 mm/hod do 19 mm/hodnad 60 let do 24 mm/hod do 20 mm/hod

Punkce kostní dřeně (aspirací)• odběr materiálu pro morfologické (cytologické),cytochemické, imuno(cyto)logické a cytogenetickévyšetření• aspirace ze spina iliaca superior posterior nebo zesterna• v žádném případě není možné provést histologickévyšetření kostní dřeně z aspiraca sternální punkcí

Trepanobiopsie kostní dřeně• vzorek se odebírá trepanobioptickou jehlou (např.Jamshidiho)• lze získat materiál pro histologické vyšetření asoučasně i materiál pro cytologii a cytogenetiku

Úvod do terminologie• pancytopenie– anémie– leukopenie, neutropenie, lymfopenie– trombocytopenie• polycytémie– polycytémie (erytrocytóza, polyglobulie)– luekocytóza, neutrofilie, eosinofilie, basofilie,lymfocytóza, monocytóza– trombocytémie (trombocytóza)• leukemoidní reakce, leukémie