POSTĘPY CHROMATOGRAFII - Zakład Chemii Analitycznej

czułość, test kwasu tiobarbiturowego, TBA [7]. Niestety test TBA jest wysoceniespecyficzny i trudny do zastosowania w próbkach biologicznych. Dodatniwynik otrzymuje się także z cukrami, niektórymi aminokwasami, kwasamiżółciowymi, alkenami, alkadienami, itp. Pewne udoskonalenie uzyskano stosującchromatografię w układzie faz odwróconych z detekcją fluorometryczną[10, 11] lub fotometryczną przy długości fali 535 nm [13-16]. W tym przypadkuderywatyzacja (kwasem tiobarbiturowym) wpływa zarówno narozdział, jak i na detekcję. Ciągle jednak etap derywatyzacji związany z opisanąniejednoznacznością, jest wymagany. Metodę tę próbowano zmodyfikowaćstosując derywatyzację 2,4-dinitrofenylohydrazyną [17-19] lub diaminonaftalenem[20] z detekcją fotometryczną przy 310 nm. Etapderywatyzacji usunięto stosując tzw. chromatografię par jonowych [21, 22](dialdehyd jest kwasem i dlatego jest on słabo zatrzymywany na fazieRP-18). Detekcja fotometryczna przy 267 nm pozwala na jednoczesną analizęMDA z dwoma powszechnie występującymi w surowicy krwi antyoksydantami,tzn. kwasem askorbinowym i moczowym. Na rysunku 5 przedstawionoanalogiczny chromatogram uzyskany metodą chromatografiiwykluczania jonowego (jest to technika predysponowana do rozdziału słabychkwasów), takich jak MDA (pK a ~4.5) [23]. Porównany on zostałz chromatogramem uzyskanym po derywatyzacji MDA.AAAUA267nmMDAB535nm20 minRys. 5. Chromatogram jonowo-wykluczający 100 μM kwasu (AA) – askorbinowego,(UA) – moczowego, (MDA) – dialdehydumalonylowego i - 25 μM MDA . TBA (dolny wykres).Warunki: kolumna – 300x7.8 mm I.D. TSK-GEL SCH(H + ) (TosoHaas); faza ruchoma:(A) - 3 mM H 2 SO 4 , 3 mM TBABr, 5% ACN, temp. – 40°C; (B) – 1 mM H 2 SO 4 , 15% ACN,temp. – 20°C; detektor UV-267/535 nm55