Lowenstein Jensen Medio - Laboratorios Britania

Lowenstein Jensen Medio
que para el esputo.
Líquido pleural, líquido ascítico y líquido cefalorraquídeo: centrifugar
la muestra y descartar el sobrenadante. observar microscópicamente
el sedimento, el cual si no presenta gérmenes no agregar
naoH 4% y sembrar en forma directa.
Biopsias: agregar 5 ml de agua destilada estéril y centrifugar 1500
r.p.m. durante 10 minutos. decantar y centrifugar el sobrenadante
a 3500 r.p.m. durante 30 minutos. sembrar el sedimento en forma
directa previa homogeinización
Hisopado laríngeo: En la etapa de la decontaminación y concentración,
introducir el hisopo conteniendo la muestra en el tubo estéril
que contiene partes iguales de naoH 4% y agua destilada estéril,
presionando contra las paredes del tubo para desprender el material
adherido al hisopo.
toda muestra decontaminada debe ser neutralizada previo a
su siembra.
se recomienda utilizar H 2 so 4 5% en presencia del indicador rojo
de fenol a pH neutro que da color salmón. no es aconsejado el uso
de HCl por la formación de cloruro de sodio que puede ser nocivo
o tóxico para el bacilo de Koch.
siembra
inocular aproximadamente 0,5 ml por tubo sobre la superficie del
medio de cultivo. rotar los tubos para lograr una distribución homogénea
de la muestra.
Generalmente se siembran dos tubos de Lowenstein Jensen y un
tubo de stonebrink Medio. Este último contiene piruvato de sodio y
favorece el desarrollo de cepas disgónicas como bacilos isoniazida
resistentes y sobre todo de Mycobacterium bovis que es causal de
algunos casos de enfermedades humanas.
incubación
En aerobiosis, a 35-37°C.
observar los cultivos dos veces por semana y registrar el tiempo de
aparición de las colonias.
si no se observa desarrollo, incubar hasta 8 semanas.
importante: incubar los tubos con las tapas flojas, inclinados 5º
aproximadamente. Esta posición evita que el inóculo contacte con
la parte superior del tubo.
Controlar a las 72 horas los tubos sembrados. si el inóculo ha sido
absorbido, ajustar las tapas y agrupar los tubos con igual identificación.
si aún están húmedos, incubar hasta que se sequen y luego
ajustar las tapas.
interpretaCión de los resUltados
observar las características morfológicas y la presencia o ausencia
de pigmento en las colonias. tener en cuenta el tiempo que
ha transcurrido desde la inoculación hasta la observación de crecimiento.
Los cultivos positivos generalmente se observan entre los 13 y 28
días de incubación, dependiendo del contenido de bacilos en las
muestras sembradas, mientras que el 3% de las micobacterias suele
crecer a los 40 días de incubación.
La aparición de colonias color crema, rugosas o cremosas, amarillentas,
es indicio de cultivo positivo, el cual será confirmado realizando
la coloración de Ziehl-neelsen a un extendido del mismo,
para determinar la presencia de bacilos ácido-alcohol resistentes
(Baar).
de la misma manera se procederá para los cultivos contaminados y
cultivos negativos (cuando no se observen colonias).
la intensidad de positividad se informará según las normas
latinoamericanas:
Colonias confluentes: positivo (xxx)
Colonias separadas: positivo (xx)
de 20 a 100 colonias: positivo (x)
Menos de 20 colonias: positivo. informar el recuento obtenido
no se observan colonias: negativo.
Cultivo contaminado: desarrollo en la primera semana de incubación.
Enviar los cultivos positivos a laboratorios de referencia para realizar
la tipificación y las pruebas de sensibilidad a los quimioterápicos
antibacilares.
Control de Calidad
MiCroorGanisMos
Mycobacterium tuberculosis H37ra
atCC 25177
ControL dE EstEriLidad rEsuLtado
Medio sin inocular sin cambios
CrECiMiEnto
satisfactorio
limitaCiones
- El crecimiento de Mycobacterium bovis puede estar disminuído en
este medio debido a la presencia de glicerina.
- Considerar y reportar los resultados negativos luego de 8 semanas
de incubación en aerobiosis, a 35-37 ºC.
- El medio preparado es color verde pálido y puede tener áreas de
partículas amarillas debido a los lípidos de la yema de huevo. no
confundir esto con el crecimiento de microorganismos.
- previo a la inoculación de la muestra, mantener los tubos bien
HoJa 2 dE 3