Dade® Actin® Activated Cephaloplastin Reagent [ACTIN]

Referencia (Hojas de Aplicación) reemplaza la información de las presentes Instrucciones de utilización.
Le recomendamos que consulte también el manual de instrucciones del fabricante del analizador.
Extracción y preparación de la muestra
Mezclar nueve partes de una muestra de sangre del paciente recién extraída con una parte de citrato
sódico (0,11 o 0,13 mol/l o bien al 3,2 o al 3,8 %). En el mercado pueden adquirirse tubos con vacío
que contienen el anticoagulante deseado y pueden usarse con precaución en los estudios de coagulación.
Para estudios especiales se recomienda la extracción con jeringuilla.
Centrifugar las muestra de sangre lo antes posible una vez realizada la extracción durante un mínimo de 15
minutos a 1500 x g y a temperatura ambiente. Almacenar en un tubo cerrado a temperatura ambiente.
Si el análisis se efectúa inmediatamente, el plasma se puede dejar con el sedimento de eritrocitos.
De no ser así, se deberá separar el plasma. Separar el plasma con una pipeta de plástico y pasarlo
a un tubo de plástico. No conservar en hielo. El plasma no heparinizado debe analizarse en un plazo
de cuatro (4) horas a partir de la extracción.
El plasma que contiene heparina no fraccionada debe centrifugarse en un plazo de una hora a partir de
la extracción, conservarse a temperatura ambiente y analizarse en un plazo máximo de (4) horas.
El plasma pobre en plaquetas puede congelarse a ≤ -20 °C durante un máximo de (2) semanas
en un congelador que no cree escarcha. El plasma congelado debe descongelarse rápidamente a
+37 °C, mezclarse con cuidado y analizarse de forma inmediata. Las muestras no deben permanecer
a +37 °C más de 5 minutos. Consulte los documentos H21-A5 del CLSI 8 para obtener
información detallada sobre la preparación y el almacenamiento de las muestras.
Procedimiento
Prueba manual:
Precalentar la solución de cloruro de calcio a +37 °C
Precalentar a +37 °C 0,1 ml de Dade ® Actin ® Reactivo durante un minuto (mezclar antes usar).
Pipetear en tubos de coagulación de la siguiente manera:
Dade ® Actin ® Activated Cephaloplastin
Reagent
B4218 G1 E0501 (794) 6
Muestra Muestra de control
0,1 ml 0,1 ml
Plasma 0,1 ml -
Plasma control - 0,1 ml
Mezclar bien. Incubar a +37 °C durante 3 minutos.
Solución de cloruro de calcio precalentada 0,1 ml 0,1 ml
A la vez que se agrega el CaCl2, accionar cronómetro,
mezclar bien. Comprobar la coagulación a partir de los
20 segundos.
Nota: No se recomienda un tiempo de incubación de más de 5 minutos, pues se puede producir una
pérdida de los factores V y VIII.
El tiempo óptimo de precalentamiento para la activación debe ser fijado por cada laboratorio dependiendo
del sistema de ensayo utilizado.
Monitorización de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del aPTT
Para el control de la terapia con heparina por medio de la determinación del aPTT se deben tener en
cuenta los factores que pueden influir en el resultado de la prueba. A continuación, están resumidas
algunas advertencias generales importantes.
A) El tiempo de la extracción es importante, puesto que el tiempo in-vivo media de la heparina no
fraccionada es de aproximadamente 1,5 horas5 . La heparina aplicada posee una acción inhibidora
inmediata de la coagulación, la cual disminuye también rápidamente. Este efecto se observa
claramente en cuanto se aplican inyecciones intravenosas aisladas.
B) El anticoagulante utilizado para la extracción de la sangre puede alterar los resultados de la
prueba.
C) Por agregación o por daño de las plaquetas puede ser liberado el factor 4 de los gránulos alfa
plaquetarios, que neutraliza la heparina. Para evitar este tipo de procesos in-vitro, las muestras
deben ser extraídas cuidadosamente. Dado que se conoce que la baja temperatura desencadena
la agregación de las plaquetas y la liberación del factor 4, las muestras para el estudio con
heparina deben ser centrifugadas a temperatura ambiente.
D) El control de la terapia con heparina no fraccionada mediante la determinación del aPTT depende
del tiempo de análisis. Los retrasos en el procesamiento de la muestra pueden ocasionar prolongaciones
en la determinación del aPTT, razón por la cual las muestras deben ser procesadas lo
antes posible.
E) En plasmas que contienen heparina puede producirse una prolongación del aPTT debido a un
alargamiento del tiempo de la activación de contacto, razón por la cual es necesario establecer
una normalización estricta en cuanto al tiempo óptimo de activación del calentamiento dado para
la mezcla de Dade ® Actin ® Reactivo y plasma9 .
F) Ya que las diferentes metodologías (p. ej., manual, foto-óptica, etc.) poseen una sensibilidad a la
heparina diferente, se debe evitar el cambio del método utilizado.
G) Para encontrar los valores del aPTT específicos del paciente, se debe determinar en la medida
de lo posible el valor básico del paciente antes de empezar el tratamiento y compararse con el
intervalo normal propio del laboratorio.
H) Diversos estudios han demostrado que la calidad de la heparina no fraccionada obtenida de
diversos orígenes o fabricantes se desvía de las especificaciones estimadas inicialmente. La
reactividad in-vivo varía en función de la heparina aplicada, del metabolismo del paciente y de
otros medicamentos utilizados al mismo tiempo5,6 .
I) Ya que el aPTT puede variar dependiendo de las técnicas de trabajo, métodos, instrumentos,
lotes de reactivo y de la heparina utilizados, cada laboratorio debe determinar su propio intervalo
terapéutico o verificarlo cada vez que se modifique alguno de los parámetros mencionados anteriormente.
Esto se puede llevar a cabo mediante la determinación simultánea de aPTT y de la
concentración de heparina en muestras de pacientes sometidos a un tratamiento con heparina.
Por medio de un análisis de regresión de los datos se puede establecer una curva de dosis-respuesta
y el intervalo de aPTT correspondiente a una concentración de heparina de 0,3 a 0,7 U/ml
(determinada por una prueba de inhibición del factor Xa) 4-6 .
Control de calidad interno
Rango normal: Dade ® Ci-Trol ® nivel 1 o Plasma control N
Rango patológico: Dade ® Ci-Trol ® nivel 2 o Dade ® Ci-Trol ® nivel 3 o Plasma control P
Monitorización de heparina: Dade ® Ci-Trol ® Heparina, control bajo y alto
Se deben medir dos controles (uno en el intervalo normal y otro en el intervalo patológico/terapéutico)
al comienzo de cada serie de pruebas, con cada cambio del frasco de reactivo y por lo menos una vez
durante una jornada de trabajo de 8 horas. El material de control debe prepararse y procesarse del
mismo modo que las muestras de pacientes. Cada laboratorio debe establecer sus propios intervalos
de confianza para los controles. Este intervalo se basa normalmente en ± 2 a ± 2,5 desviaciones
estándar (DE) del valor medio del control. Si los valores de los controles se encuentran fuera del intervalo
de confianza, se deben comprobar los controles, los reactivos y el analizador. Antes de informar
de los resultados de los pacientes, se recomienda documentar todos los pasos seguidos con el fin de
identificar y eliminar el problema. Para cada nuevo lote de reactivos o de controles se deben definir
nuevos intervalos de control.
Resultados
Los resultados de las pruebas del tiempo de tromboplastina parcial activada deben darse como
aPTT en segundos y se deben comparar con el intervalo normal propio del laboratorio para la determinación
del aPTT. Se recomienda informar de los resultados del paciente junto con el intervalo de
normalidad del laboratorio. Los valores de los controles del sistema de pruebas no se deben utilizar
en lugar de un intervalo de normalidad. Además de esto, cuando solamente se informan valores
elevados del aPTT, son posibles interpretaciones erróneas, ya que un valor bajo del aPTT también
puede estar indicando anomalías en el sistema de coagulación del paciente.
Limitaciones del Procedimiento
La determinación del aPTT comprende el proceso completo de la coagulación, desde la activación por
contacto hasta la formación de fibrina y es, por tanto, más susceptible a las variaciones que otras pruebas
individuales específicas. Por esta razón, el control y el uso del aPTT están sometidos a limitaciones
especiales. El control de las condiciones de las muestras de plasma es de gran importancia. Hay
experimentos que demuestran que las muestras sin congelar sufren una descomposición más rápida.
Se deben evitar volúmenes de plasma muy pequeños (antes de realizar la determinación) ya que se
pueden presentar cambios fisiológicos dependientes del valor del pH y dichos cambios pueden provocar
la descomposición de los componentes plasmáticos del sistema de coagulación de la sangre.
Es importante observar que los resultados del aPTT pueden estar influenciados por una serie de medicamentos
de prescripción frecuente. De acuerdo con estudios realizados, un tratamiento con estrógenos
conjugados en hombres y la toma de anticonceptivos orales en mujeres llevan a un descenso del
APTT10,11 . Se ha observado que la aplicación de difenilhidantoina, heparina, warfarina, naloxona y medio
de contraste de radiografías puede producir una prolongación del aPTT12,13 . Las dosis terapéuticas de
hirudina y de otros inhibidores directos de la trombina pueden producir tiempos prolongados de coagu-
lación14 . Además, la elección del anticoagulante (p. ej. oxalato en lugar de citrato) y la condición de la
muestra (p. ej. hemolítica, lipémica, alimentación parenteral, etc.) pueden afectar a los resultados6,15,16 .
El último caso se da especialmente en las mediciones del aPTT con equipos ópticos. Una deficiencia
en los factores de la coagulación, que ocasionaría una prolongación del tiempo de coagulación, puede
quedar enmascarada debido a la existencia de un nivel elevado de algunos de los factores de la coagulación.
Igualmente, debido a la existencia de intermediarios activos que tienen la tendencia a acortar
el tiempo de coagulación, se pueden enmascarar estados que en otro caso podrían ocasionar una prolongación
del aPTT. Una deficiencia de grado ligero o moderado de diferentes factores puede sumarse
y ocasionar una prolongación del aPTT. Si se obtienen resultados anormales imprevistos, deberán
realizarse otros estudios de coagulación adicionales para determinar el origen de la anormalidad.
La acción de la heparina como anticoagulante está relacionada con su habilidad de actuar en unión
con cofactores del plasma sobre distintos aspectos del sistema de la coagulación, lo que finalmente
conduce a un retraso de la formación de fibrina (ver "Monitorización de la terapia con heparina no
fraccionada mediante la determinación del aPTT").
Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del
producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el usuario no
están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados
del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones
o el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de
Siemens o en estas instrucciones de uso.
Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del
paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.
Valores esperados
Los intervalos de referencia varían de un laboratorio a otro, dependiendo de la población atendida
y de la técnica, el método, el equipo y el lote de reactivos utilizados. Por ello, cada laboratorio debe
establecer sus propios intervalos de referencia o verificarlos cada vez que alguna de las variables
mencionadas cambie. En un estudio de sujetos aparentemente sanos utilizando un lote específico de
Dade ® Actin ® Reactivo se obtuvieron los siguientes datos:
Mediana
90 % intervalo de referencia (segundos)
(segundos)
Percentil 5 Percentil 95
111 sujetos
Sysmex ® 26,6 22,7 31,8
CA-1500
111 sujetos
Sistema BCS ®
26,1 22,8 31,0
Para otros colectivos, como por ej., pacientes pediátricos, se debe determinar, en cada caso,
su propio intervalo de referencia.
Nota: Según los documentos C28-A2 del CLSI (citado en H47-A) 17,18 se puede aplicar una
estimación paramétrica (media ± 2 DE). La aceptación de esta estimación (Distribución normal
de Gauss) debe, sin embargo, comprobarse.
Características del test
Los estudios de precisión realizados con los métodos enumerados dieron en el intervalo normal una
desviación estándar (DE), que corresponde a un coeficiente de variación (CV) menor del 5 %. Se han
realizado estudios adicionales que demuestran que la reproducibilidad de determinaciones de aPTT
por duplicado de una misma debe ser como máximo igual al 4 % en el intervalo de normalidad si todo el
proceso se ha realizado correctamente.
Bibliografía
Ver instrucciones de utilización en inglés.
BCS es una marca comercial de Siemens Healthcare Diagnostics. (Los valores referidos al sistema
BCS ® no incluyen los factores de corrección aplicados en los USA.)
Actin, Ci-Trol y Dade son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.
Sysmex es una marca registrada de SYSMEX CORPORATION.
Edición Junio de 2008
Dade ® Actin ® Reagente de
Cefaloplastina Activada
[ACTIN]
Secções sombreadas - Informações actualizadas versus a edição de junho de 2006
Campo de aplicação
Suspensão de cefalina do cérebro de coelho com activador de plasma para a determinação do tempo
parcial de Tromboplastina activado (APTT) e outros procedimentos de coagulação que requeiram um
reagente de tromboplastina parcial activado.
Significado diagnóstico
O tempo parcial de Tromboplastina activado (APTT), um procedimento de triagem global1,2 , usado prioritariamente
para avaliar anomalias do sistema de coagulação endógeno no percurso intrínseco detecta,
igualmente, deficiências funcionais graves de factores II, V, X ou de fibrinogénio. Além disso, a determinação
do APTT consiste num teste3-6 reconhecido universalmente para a monitorização da terapia da
heparina não fraccionada, sendo que o prolongamento do tempo de coagulação é proporcional ao nível
de heparina. Nos pacientes sujeitos a uma anticoagulação oral é de esperar, igualmente, um prolongamento
do APTT, uma vez que, nestes pacientes, os factores circulantes II, VII, IX e X estão diminuídos.
Efectivamente, a existência de substâncias supressoras não específicas tais como as substâncias semelhantes
de anticoagulação do Lúpus1,7 pode provocar um prolongamento do APTT, mas esse efeito
é variável e é, geralmente, atribuído antes à composição do reagente de APTT utilizado. Resumindo,
pode afirmar-se que a determinação do APTT constitui um valioso teste clínico de triagem com largas
possibilidades de utilização no diagnóstico das perturbações de coagulação e na monitorização da
terapia de pacientes com propensão para hemorragias ou tromboses.
Princípio do método
A incubação de plasma com a quantidade optimizada de fosfolípidos e um activador superficial provoca
a activação dos factores do sistema de coagulação endógeno. O processo de coagulação é desencadeado
com a adição de iões de cálcio e é medido o tempo que decorre até à formação do coágulo de
fibrina.
Reagentes
Conteúdo da embalagem
[ACTIN], [REF] B4218-1
10 x 2 ml, [ACTIN], Dade ® Actin ® Reagente
[ACTIN], [REF] B4218-2
10 x 10 ml, [ACTIN], Dade ® Actin ® Reagente
Composição
Dade ® Actin ® Reagente de Cefaloplastina Activada: Cefalina (extracto de cérebro de coelho desidratado)
em ácido elágico 1,0 x 10-4 M, tamponado, estabilizado e conservado. Os valores standard da
actividade de cefalina do cérebro do coelho não estão disponíveis.
Advertências e medidas de precaução
Apenas para utilização em diagnóstico in-vitro.
Preparação dos reagentes
Dade ® Actin ® Reagente deve ser misturado cuidadosamente por inversão (5 a 8 vezes) antes de utilizar.
Estabilidade e condições de armazenagem
Depois de utilizar, conservar fechado entre +2 e +8 °C. Não aberto e conservado entre +2 e +8 °C, o
Dade ® Actin ® Reagente pode ser utilizado até à data indicada no rótulo. Depois de aberto, o reagente