IDENTIFICAZIONE DEI MICOBATTERI L'approccio ... - Myco09

L’analisi dei lipidi
• La parete dei micobatteri è caratterizzata da un
contenuto lipidico elevatissimo
• Acidi micolici
• Acidi grassi saturi ed insaturi
• Alcol
La parete dei micobatteri
altri lipidi complessi
acidi micolici
arabino-galattano
peptidoglicano
membrana cellulare
Cromatografia su strato
sottile
Gli acidi micolici
• Acidi grassi, ramificati in posizione β
• Presenti nella parete batterica dei generi:
• Corynebacterium: 22-38 atomi di C
• Rhodococcus: 34-52 atomi di C
• Nocardia: 44-60 atomi di C
• Gordonia: 48-66 atomi di C
• Tsukamurella: 64-78 atomi di C
• Mycobacterium: 60-90 atomi di C
• Presenza di numerosi gruppi funzionali che
differenziano 7 tipi di acidi micolici micobatterici
• alfa-, alfa'-, metoxi-, keto-, epoxi-, wax ester-,
omega' metoxi-mycolati
Cromatografia su strato
sottile
• Separazione, mediante opportuni solventi, dei
vari acidi micolici presenti nell’estratto
depositato su una piastra di gel di silice
• Evidenziamento degli stessi dopo idonea
colorazione
• Identificazione delle “macchie” in base alla loro
posizione rispetto al fronte di avanzamento del
solvente (fase mobile)
• Identificazione del microorganismo in base al
pattern di acidi micolici
Gas-cromatografia
• Pirolisi degli acidi micolici in esteri
metilici saturi di 22, 24 e 26 atomi di C
• Separazione gas-cromatografica dei
prodotti di clivaggio nonché degli acidi
grassi saturi ed insaturi (fra i quali l’acido
tuberculostearico) e degli alcol
• Identificazione delle catene di C
preferibilmente usando la spettrometria
di massa
• Identificazione del microorganismo in
base al pattern di acidi grassi
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