Skrypt - Blok3 - Instytut Genetyki i Biotechnologii UW

poliakrylamidowym.
2. Kapilarny lub elektryczny transfer DNA z żelu na filtr
nylonowy.
3. Hybrydyzacja przeniesionego na filtr DNA z
wyznakowanym (zazwyczaj radioaktywnie) fragmentem
kwasu nukleinowego, komplementarnym do poszukiwanej
cząsteczki DNA.
Northern Detekcja RNA 1. Rozdział RNA w denaturującym żelu agarozowym lub
poliakrylamidowym.
2. Kapilarny lub elektryczny transfer RNA na filtr
nylonowy.
3. Hybrydyzacja przeniesionego na filtr RNA z
wyznakowanym (zazwyczaj radioaktywnie) fragmentem
kwasu nukleinowego, komplementarnym do poszukiwanej
cząsteczki RNA.
Western Detekcja białek 1. Rozdział białek w żelu poliakryloamidowym.
5. DYSRUPCJA GENÓW
2. Elektryczny transfer białek na filtr nitrocelulozowy.
3. Wykrywanie danych białek za pomocą specyficznych
przeciwciał i skierowanych przeciwko nim przeciwciał
drugorzędowych, których obecność można wykryć przy
użyciu odpowiednich systemów detekcji (np. poprzez
aktywność enzymu dołączonego do przeciwciała).
Ostatecznym celem analizy genu jest poznanie funkcji jego produktu w organizmie.
Dowodem na udział białka czy składnika rybonukleinowego w danym szlaku metabolicznym
jest zaburzenie tego procesu spowodowane brakiem funkcji badanego czynnika.
U drożdży S. cerevisiae stosuje się wiele metod służących do „wyłączania” ekspresji
genu. Dla genów, których produkty są niezbędne do życia komórki można uzyskać mutanty
warunkowe, na przykład temperaturowrażliwe (ts – temperature sensitive i cs – cold sensitive)
lub geny te umieszcza się pod kontrolą promotorów reprymowalnych lub indukowalnych (na
przykład promotorów galaktozowych i tetracyklinowych). Natomiast funkcja większości
pozostałych genów jest badana w mutantach, w których dany gen został zinaktywowany przez
delecję lub insercję.