Rudolf Bichele - Archimedes
Rudolf Bichele - Archimedes
Rudolf Bichele - Archimedes
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
AIRE roll kemokiinide<br />
ekspressioonis.<br />
<strong>Rudolf</strong> <strong>Bichele</strong><br />
H. Treffneri gümnaasium<br />
12. Klass<br />
Juhendajad: Martti Laan & Pärt Peterson<br />
Molekulaarpatoloogia grupp, ÜMPI, Tartu Ülikool.
Tüümus ehk<br />
harkelund.<br />
• On kohaks, kus<br />
valmivad T-rakud.<br />
• Koosneb koorest<br />
(Cortex) ja säsist<br />
(Medulla)<br />
• Reguleerib<br />
immuunsüsteemi<br />
arengut.
T-lümfotsüütide valmimine.<br />
• Tüümusesse saabuvad<br />
lümfotsüütide<br />
eellasrakud.<br />
• Järgneb nende<br />
positiivne ja<br />
negatiivne selektsioon<br />
(toimumiskoht<br />
vastavalt cortex ja<br />
medulla).<br />
• Valmis T-rakud<br />
lähevad vere-ja<br />
lümfiringesse.
AIRE<br />
• Autoimmuunne<br />
regulaator<br />
• Geen 21.<br />
kromosoomil, mille<br />
pealt sünteesitakse<br />
samanimelist valku.<br />
• Vastutab paljude<br />
organspetsiifiliste<br />
geenide<br />
transkriptsiooni eest<br />
tüümuses.
Mis on kemokiinid<br />
• Peptiidid massiga<br />
ca 8-10kDa.<br />
• Jaotatakse<br />
struktuuri põhjal<br />
nelja gruppi.<br />
• Eesmärgiks<br />
juhtida/suunata<br />
rakke.<br />
• chemotactic<br />
cytokine
Meie töö eesmärk.<br />
• Kindlaks teha,<br />
kas AIRE<br />
mõjutab kahe<br />
kemokiini, CCL5<br />
ja CXCL9<br />
ekspressiooni.
Töö ülevaade.<br />
• Kasutasime HEK (Human Embryonic<br />
Kidney cells).<br />
• Transfekteeritud AIRE/YFP<br />
plasmiididega.<br />
• Eesmärk: vaadata, kas AIRE<br />
üleekspressioon mõjutab uuritavates<br />
rakkudes kahe uuritava kemokiini<br />
ekspressiooni.
RNA eraldamine.<br />
• Trizol® meetodi<br />
kasutamine.<br />
• Hävitab<br />
rakustruktuurid, ei<br />
denatureeri RNAd.<br />
• Tsentrifuugiga<br />
segu kihistamine.<br />
• RNA eraldamine<br />
segust.
cDNA süntees.<br />
• Komplementaarse<br />
DNA lõigu<br />
süntees mRNA<br />
pealt.<br />
• Promootoriks<br />
AAAn järjestus<br />
mRNA molekuli<br />
alguses.<br />
• Praimeriks<br />
vastavalt TTTn.
PCR<br />
• Polymerase<br />
Chain<br />
Reaction.<br />
• Ühe DNA<br />
fragmendi<br />
massiline<br />
reprodutseerimine.
qPCR<br />
• Lisaks tavalisele<br />
PCRile kasutasime<br />
qPCR (quantitative e.<br />
real time PCR)<br />
• Erinevalt tavalisest<br />
PCRist, kus<br />
fluorestseeruv signaal,<br />
mida annab SYBR®<br />
green, detekteeritakse<br />
pärast igat PCR-i<br />
tsüklit (erinevalt<br />
tavalisest PCRist ja<br />
foreesist, kus signaal<br />
saadakse ainult PCR-i<br />
lõpus).
Geeli<br />
elektroforees.<br />
• DNA fragmendid<br />
(negatiivne laeng)<br />
liiguvad anoodi<br />
suunas.<br />
• Väiksemad<br />
fragmendid liiguvad<br />
geelis kaugemale.<br />
• Etiidiumbromiidiga<br />
mood. kompleks<br />
fluorestseerub UV<br />
valguses.
Fold change.<br />
Fold change<br />
Tulemused.<br />
12<br />
10<br />
8<br />
6<br />
4<br />
2<br />
0<br />
9<br />
8<br />
7<br />
6<br />
5<br />
4<br />
3<br />
2<br />
1<br />
0<br />
CCL5/HPRT<br />
YFP 1:3 AIRE 1:3 YFP 1:6 AIRE 1:6<br />
CXCL9/HPRT<br />
YFP 1:3 AIRE 1:3 YFP 1:6 AIRE 1:6<br />
• AIREt<br />
üleekspresseeriva-tes<br />
rakkudes oli kemokiinide<br />
CCL5 ja CXCL9 tase<br />
oluliselt kõrgem kui<br />
normaalse<br />
ekspressiooni-tasemega<br />
rakkudes.<br />
• Seega võib Aire<br />
mõjutada tsentraalse<br />
tolerantsuse kujunemist<br />
(tümotsüütide<br />
küpsemist),<br />
indutseerides<br />
kemokiinide sünteesi<br />
tüümuse epiteelis.
Tänan tähelepanu eest!
Change language