manual (36 KB) - PHYWE

R
Modo de empleo
Respirómetro
Fig. 1 Fig. 2
1 FINALIDAD Y DESCRIPCION
Con un respirómetro pueden estudiarse o medirse volumétricamente
procesos del metabolismo en los cuales se
forma o consume un gas. En contraposición a la manometría,
en la cual se miden variaciones de la presión a volumen
constante (técnica Warburg), en la volumetría se
miden variaciones del volumen a presión constante. Por
este motivo, un respirómetro debe estar formado por dos
recipientes idénticos (recipiente de medida y recipiente de
compensación) para compensación de las oscilaciones de
la presión del aire, estando dichos recipientes comunicados
entre sí a través de un manómetro.
En el respirómetro 65998.00 (Fig. 1), el recipiente de medida,
el recipiente de compensación y el manómetro están
alojados juntos en un bloque de plexiglás. Esta compacta
construcción simplifica el manejo, aumenta la precisión de
la medición e impide los perjuicios, ya que el aparato ya no
se ha de fabricar a partir de un gran número de piezas de
cristal distintas.
2 MANEJO
El manómetro en forma de U del respirómetro se llena con
líquido de color con ayuda de una jeringuilla de aproximadamente
3 cm de altura. La cánula debe introducirse en el
tubo en U a mayor profundidad que el agujero de comunicación
hacia la cámara para que al efectuar el llenado no
pueda penetrar en la cámara el líquido del manómetro (en
su caso, previamente retirar la manguera de silicona de la
tubuladura). Si se quedan atrapadas burbujas de aire, éstas
pueden eliminarse golpeando con cuidado sobre el respirómetro.
Las dos cubetas se sacan de los recipientes y cada una se
llena con 10 ml de solución de potasa cáustica al 47%. Precaución:
la solución de potasa cáustica es fuertemente corrosiva;
¡utilizar globo de pipetado! Para mejora de la absorción
del dióxido de carbono se colocan tiras de papel de
65998.00
filtración en las cubetas con solución de potasa cáustica. Al
volver a bajar las cubetas hacia el interior de los recipientes
o al manipular a continuación el respirómetro hay que
asegurarse de que las tapas protectoras agujereadas no se
humedecen con solución de potasa cáustica: de lo contrario,
los animales utilizados en los experimentos resultarían
causticados.
A través de uno de los tapones de goma se impulsa una cánula
gruesa a la cual se acopla una jeringuilla de plástico
con graduaciones de 1 ml. La jeringuilla se carga hasta la
marca de 1 ml. Los dos tapones de goma se engrasan ligeramente
en los laterales con grasa para grifos. Las dos
piezas tubulares de silicona introducidas sobre la tubuladura
se dotan de una espita grande (Fig. 1), pero todavía
no se separan.
En uno de los dos recipientes - la cámara de medición - se
entregan los objetos que se desea estudiar (por ejemplo, 5
gusanos de harina pesados) y en la otra - el recipiente de
compensación - aproximadamente idéntico volumen en
perlas de vidrio. La cámara de medición se cierra de manera
que quede estanca al gas con ayuda del tapón de
goma con la jeringuilla enchufada en el mismo, el recipiente
de compensación con el otro tapón de goma. A continuación,
se coloca el respirómetro con precaución en un baño
de goma (a temperatura ambiente) y se protege contra el
vuelco con ayuda de un trípode (Fig. 2). Hasta que no ha
transcurrido un tiempo de adaptación de 10 minutos,
ambos tubos de silicona se mantienen cerrados de forma
común y simultánea con ayuda de una espita.
El respirómetro está ahora listo para la medición. En la cámara
de medición, el consumo de oxígeno, conjuntamente
con la absorción de dióxido de carbono, conduce a un creciente
vacío. El aire en el recipiente de compensación
PHYWE SYSTEME GMBH · Robert-Bosch-Breite 10 · D-37079 · Göttingen · Telefon (05 51) 6 04-0 ·Telefax (05 51) 60 41 07

puede dilatarse e impulsa la columna del manómetro paulatinamente
hacia el recipiente de medición. Cada 5 minutos
se introduce el mango de la jeringuilla hasta que los
meniscos del manómetro están de nuevo a idéntica altura.
El oxígeno consumido respectivamente en 5 minutos
puede leerse en milímetros de la graduación de la jeringuilla.
Al cabo de una hora se interrumpen las mediciones
y se ventilan los recipientes abriendo con cuidado la espita.
Hasta que no se ha hecho esto no pueden quitarse los tapones
de goma y sacarse los animales del instrumento de
medida.
Después de un descanso de como mínimo una hora puede
repetirse el experimento a una temperatura del baño 10°C
superior con idénticos objetos a estudiar (para determinar
el valor de Q 10 ).
3 BIBLIOGRAFIA DE EXPERIMENTACION
Laboratory Experiments Physiology 16500.02
4 LISTA DE APARATOS
Respirómetro, aparato compacto 65998.00
Baño para termostato 08487.02
Termostato de recirculación hasta 100°C 46994.93
Esfera de cristal d = 6 mm, 250 g 36756.25
Grasa para grifo, 50 g 38864.00
2 65998.00