blanco y negro

Malassezia :
un género emergente en micología cl ínica
Bioq. Silvana Ramadán
CEREMIC
Fac. Cs. Bioq. y Farmacéuticas
UNR
Malassezia
Pared celular
multilaminada
Brotes enteroblásticos
Reino: FUNGY
División: BASIDIOMYCOTA
Clase: USTILAGINOMYCETES
Orden: MALASSEZIALES
Género: MALASSEZIA
M.furfur (1889)
M.sympodialis (1990)
M.obtusa ( 1996)
M.globosa (1996)
M.sloffiae (1996)
M.restricta (1996)
M.pachydermatis (1935)
M. dermatis (2002)
M. equi (2002)
M. japónica (2003)
M.nana (2004)
M.yamatoensis (2004)
M. cuniculi sp nov. (2010)
LIPOFÍLICAS
NO LIPOFÍLICA
LIPOFÍLICAS
Malassezia COMENSAL vtronco
v miembros superiores
Factores
predisponentes
v espalda
v frente
v lóbulo retroauricular
v nuca
Pitiriasis versicolor
Infección superficial crónica, benigna
con hipo o hiperpigmentación de la
piel
Patologías cutáneas
v Pitiriasis versicolor
v Foliculitis
v Dermatitis seborreica
v Dermatitis atópica
v Psoriasis
v Pustulosisneonatal
v Onicomicosis
v Otitis
v Papilomatosisconfluente
o reticulada
Patología sistémica
Factores predisponentes: ? susceptibilidad genética
? enf. de base debilitantes
? desnutrición
? aumento del cortisol plasmático
? altas temperaturas y humedad
Edad: pubertad, jóvenes y adultos
Pitiriasis versicolor
Pitiriasis versicolor
Patogenicidad de Malassezia:
Actividad queratolítica: ruptura mecánica o
química de la queratina de las células
Producción de enzimas : lipooxigenasas,
producción de lipoperóxidos que dañan
las membranas celulares
1

Pitiriasis versicolor
Foliculitis
Probables mecanismos de la despigmentación de la piel:
Bloqueo en la transferencia del melanosoma
al queratinocito
Producción de productos indólicos que
bloquean la luz UVA, UVB
Inhibición de la producción de melanina por la
presencia de ác. azelaico, inhibidor por
competición de la Tirosinquinasa
Características clínicas: pápulas pruriginosas y
pústulas que se localizan en tronco, brazo, cuello y
cara.
Factores predisponentes: embarazo, leucemias, SIDA, diabetes, pacientes
transplantados, corticoterapia, antibi óticoterapia, estrés.
Patogenia: crecimiento exacerbado de las levaduras en el folículo y
liberación de metabolitos que producen inflamación e irritación
Características
clínicas
Dermatitis seborreica/ Caspa
Descamación e inflamación de regiones del cuerpo rica en glándulas seb
DS: descamación e inflamación en áreas del
cuerpo ricas en glándulas sebáceas.
Caspa: forma menos severa, descamante pero
no inflamatoria
Patogenia: * aumento del crecimiento de Malassezia
en la zona afectada
* respuesta inmunológica del hospedero
Dermatitis atópica
(Eczema
Atópico/ Sme. Dermatitis)
Enfermedad multifactorial con inflamación crónica
disparada por varios alergenos con ciclos de
exacerbación y remisión
Factores predisponentes: factores genéticos, defectos en el SI, daño en la integridad
de la piel como barrera defensora, estr és emocional.
Las levaduras de Malassezia estarían actuando como alergenos.
Especies más frecuentemente asociada:
M. sympodialis (Canadá, Suecia
M. restricta, M. globosa (Japón)
M. sympodialis, M. globosa, M. furfur (Arg.)
Enfermedad sistémica
Neonatos prematuros o no
Adultos inmunosuprimidos
alimentación parenteral
Extracci ón de la muestra
Piel: Con cinta scotch
Raspado con bisturí estéril y recuperación en portas flameados
Sangre: Extracción para hemocultivo
Procesamiento de la muestra
Especies más frecuentemente relacionadas: M. furfur
M. pachydermatis
Escamas, secreciones
1º Examen microscópico con Azul de Lactofenol e
Hidróxido de potasio al 20% + calor
Hemocultivos
1º Examen microscópico con May Grünwald-Giemsa
2

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA (continuación)
Examen microscópico directo
2º Siembra en los medios de cultivo :
* Sabouraud-Glucosa + Ac. de oliva estéril
* Agar Dixon modificado
* Leeming y Notman
Filamentos
32ºC- 5-7 días
CULTIVO POSITIVO
Examen macroscópico
Examen microscópico
con A. de Lactofenol
Preservación y
almacenamiento
de la cepa
Identificaci ón
Fenotípica
Genotípica
Levaduras
CULTIVO POSITIVO
EXAMEN DIRECTO DE LA COLONIA
Azul de Lactofenol-400 X
Azul de Lactofenol-1000 X
Caracterización fenotípica de las cepas de Malassezia
80
20
Malassezia spp.
Sub-cultivo en Sb-Glucosa
1) Reacción de la catalasa
2) Utilización de compuestos Tween
60
40
(+)
M.pachydermatis (-)
80 20
Utilización de Tweens 60 40
3) Desdoblamiento de la esculina
4) Test de termotolerancia
5) Asimilación de Aceite de Ricino
M.furfur
+ -
+ +
M.sympodialis
M.sympodialis
(+)
(+)
+ +
+ +
M.furfur
Aceite de ricino
(-)
Pba. de la esculina
(-)
M.slooffiae
- +
- -
+ +
- -
M.slooffiiae
M.restricta
M.globosa
Catalasa (-)
(+)
Pba. de la esculina
(-) (+)
M.obtusa
3

CHROMagar Candida- modificado
CHROMagar Malassezia- Tween 40
M.japonica
M. pachydermatis
•BILIS DE BUEY
•GLICEROL
•MONOESTEARATO DE GLICEROL
•TWEEN 60
M.dermatis
M.restricta
M.sympodialis
M.globosa
M.obtusa
M.slooffiae
M.furfur
Kaneko et al., Med Mycol, 2005
Kaneko et al., Med Mycol, 2006
ESQUEMA DE IDENTIFICACIÓN
•CHROM-MALASSEZIA MODIFICADO
•AGAR ESCULINA-TWEEN 60
•AGAR SABOURAUD – GLUCOSA
•REACCIÓN DE LA CATALASA
•Presencia de pp.
•Morfología
PRODUCCIÓN PP.
Sub-cultivo en SBG
+
M.pachydermatis
D +
E+
M.sympodialis
ALGORITMO DE TRABAJO
Cultivo en CHROMagar-Malassezia mod.
_
Esculina-tween 60
D+
E-
Catalasa
-
M.restricta
D-
E-
M.globosa
AUSENCIA DE PP.
Grande
Rosa p.
rugosa
M.furfur
D+
E+
M.japonica
Esculinatween
60
M.slooffiae
D-
E+
D+
E-
M.obtusa
M.dermatis
Kaneko et al., Med Mycol, 2007
Kaneko et al., Med Mycol, 2007
Caracterizaci ón genotípica de las cepas de Malassezia
Nested-PCR (Sugita et al., 2001) PCR anidada. Se trabaja desde la
MUESTRA CLÍNICA
PCR-REA (Guillot et al., 2000// Giusiano et al., 2003) Análisis de
restricción enzimática
vPCR-RFLP (Gupta et al., 2000// Guillot et al., 2000//Mirhendi et al., 2005)
v Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de restricción.
PCR-FINGERPRINTING
Modificación del método RAPD
Cebador único : M 13
(5’ -GAGGGTGGCGGTTCT -3’)
Amplifica regiones minisatélites
Estable y reproducible
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 bp
9
10000
3000
1500
1000
750
500
250/500
Calle 1: 1kb ladder, calle 2: M. sympodialis, Calle 3: M. pachydermatis
Calle 4: M,furfur, Calle 5: M. slooffiiae, Calle 6: 1 Kb ladder, Calle 7: M. restricta
Calle 8: M.obtusa, Calle 9: M.globosa, Calle 10: M.globosa, Calle 11: 1 kbladder
4

INFORME ESCRITO
Examen directo: Se observan elementos levaduriformes y/o
filamentos compatibles con Malassezia spp.
Cultivos: Se obtuvo desarrollo de Malassezia spp.
5