DISTRIBUCION DE DIFERENTES GENOTIPOS DE Bartonella ...

DISTRIBUCION DE DIFERENTES
GENOTIPOS DE Bartonella bacilliformis
EN EL PERU.
Instituto de Medicina Tropical
Alexander von Humboldt
Universidad Peruana Cayetano Heredia
Palmira Ventosilla

INTRODUCTION
www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm

www.pitt.edu/~super1/lecture/lec8711/index.htm

TAXONOMIA
CLASE Alfa Proteobacteria
SUBCLASE
-2 Proteobacteria
FAMILIA
Bartonellaceae
GENERO
Bartonella
ESPECIES
B. alsatica, B. bacilliformis, B. birtlesii, B. clarridgeiae, B. doshiae,
B. elizabethae, B. grahamii, B. henselae, B. koehlerae, B. peromysci,
B. schoenbuchensis, B. schoenbuchii* , B. talpae, B. taylorii,
B. tribocorum, B. vinsonii, B. quintana.
* Bergey, 2 Enero del 2002.
http://dx.doi.org/10.1007/bergeysoutline

FACTORES DE VIRULENCIA
1. DEFORMINA
Proteína extracelular de 67kDa

2. MOVILIDAD
La flagelina es una proteína de 42 kDa.
Se expreso la flagelina de B.
bacilliformis en E. Coli: Se amplificó por
PCR el gen fla A e insertó en el plásmido
pGEM-T, obteniéndose la construcción
pAEfla. Esta se transfirió a E. coli
BL21(DE3) dando una buena expresión de
flagelina (PAGE-SDS).
Se evaluará su capacidad antigénica
de la flagelina, proteinas de invacióm
IaIA en IaIB en ratones BalB/c.
Clonamiento y expresión del gen de flagelina de Bartonella
bacilliformis EN Escherichia coli. García-de-la-Guarda, R., Alvarado,
D., Lozano, O., Flores, L, Guerrero, A. M., Ventosilla, P., Guerra, H.,
Coha, J. M., Ramírez, P. y Romero C. IC, 2002-2003.

INVASION
En resumen, las proteínas como la flagelina, ialAB,
deformina, RhoA, y el antígeno de 43 kDa han empezado a
ayudar a entender los mecanismos moleculares para la
invasión de B. bacilliformis a los eritrocitos. Las funciones
de estas proteínas todavía no se conocen totalmente,
Yanji Xu and Yan Chai Bartonella bacilliformis: Molecular Mechanisms of Invasion. Einstein
Quart. J. Biol. Med. (2002) 19:56-58.

Modelo de ingreso de Bartonella bacilliformis al glóbulo rojo
Rolain JM, Novelli S, Ventosilla P, Maguina C, Guerra H, Raoult D. Immunofluorescence detection of B. bacilliformis
flagella in vitro and in vivo in human red blood cells as viewed by laser confocal microscopy. Ann N Y Acad Sci. 2003
Jun;990:581-4

Mayo-1998: Brote de
Cusco en “El Sagrado
Valle de los Incas”,
Urubamba.
•Llego al Laboratorio del IMT-UPCH 4+1 muestras de sangre.
•Los cultivos se hicieron positivos a 7 días, a las colonias se les
hicieron PCR e IFI, y se confirmo el diagnóstico de B. bacilliformis.
Ventosilla P, López M, Antúnez de Mayolo A, Guerra H, Merello J, Pérez E, Maguiña C,
Montoya M. Bartonella bacilliformis en el Valle Sagrado Cusco, Perú 1998: Aislamiento e
identificación por PCR e IFI. X Jornadas Científicas Homero Silva Díaz, 1998: 47
Ventosilla P. http://euwog.free.fr/archive/meeting_juin99/proceeding.doc,
Henriquez C, Infante B, Merello J. Gallino M, Santivañez L, Maguiña C, Guerra H, Birtles R,
Ventosilla P. Identificación de Bartonella bacilliformis por métodos moleculares. Rev Med
Hered 2002; 13:58-63.

WHO/TDR
Pérez E., Ogusuku E., Ventosilla P., Birtles R., Guerra H., Merello J., Infante B.
and Montoya M., Lutzomyia peruensis, probable vector of Bartonella bacilliformis
in the Sacred Valley of the Incas, Cusco, Peru, 1998. 65th Annual Meeting of the
AMCA the American Mosquito Control Association. February 21-24. St. Louis,
Missouri. Pg. 42.
Villaseca P, Padilla C, Ventura G, Samalvides F, Yañez H, Chevarría L, Ellis B,
Rotz L, Leake J, Beati L.Rev Med Exp 1999, XV (1-2). Importancia de la
Lutzomyia peruensis en la transmisión de la enfermedad de Carrión en el Valle
Sagrado de los Incas. Urubamba-Cusco, Perú.

Identification of Bartonella
bacilliformis genotypes and their
relevance to epidemiological
investigations of human bartonellosis.
Birtles R, Fry N, Ventosilla P,
Cáceres A, SánchezS
E, Vizcarra H,
Raoult D.
J. Clin Microbiol 2002; 40:3606-12

FLOWCHART
Colony
Estraction
(QIAamp)
Amplification
Citrate Syntetase gene
(gltA-443f-1137r)
Amplification
ISR (16s-23s rRNA)-
16S1386f-23S115r
AFLP
Purify (Qiagen)
Purify (Qiagen)
Sequencing
Sequencing

AFLP analysis
• Standard Europena Working Group on Legionella
Infection protocol (Fry, N. K., J. M. Bangsborg, S. Bernander, J.
Etienne, B. Forsblom, V. Gaia, P. Hasenberger, D. Lindsay, A. Papoutsi,
C. Pelaz, M. Struelens, S. A.Uldum, P. Visca, and T. G. Harrison. 2000.
Assessment of intercentre reproducibility and epidemiological
concordance of Legionella pneumophila serogroup 1 genotyping by
amplified fragment length polymorphism analysis. Eur. J. Clin.
Microbiol. Infect. Dis. 19:773–780).
- Be used selective primer PstI-C
- Adapter-oligonucleotide (AFLP-LG1, 5-
CTCGTAGACTGCGTACATGCA-3;
AFLP-LG2, 5-TGTACGCAGTCTAC-3).

gltA A Analysis
gltA analysis. Partial gltA sequences of about 700 bp were
obtained for all isolates. Comparison of these sequences revealed
that the isolates possessed one of two different sequences.
The two isolates obtained from the Huayllacayan
valley in 1990 and the Luc-Uba isolate possessed an identical
sequence that was 97% similar to that of the remaining 23
isolates, including the type strain, KC583. These two sequences
had been deposited in GenBank prior to this study.

TABLE 2. ISR sequence Variation among the six B. bacilliformis
genotypes identified.

DISTRIBUCION DE LOS SEIS GENOTIPOS
DE B. bacilliformis EN EL PERU, 19941-1999.

Conclusiones y Discusión
• Los tres métodos empleados en este estudio permitieron
diferenciaciones de los aislados de B. bacilliformis.
•La sensibilidad del análisis de secuencia de gltA fue mucho
menor que la de AFLP y ISR.
• Con parcial secuencia gltA se obtuvo solo 2 genotipos.
•Con ISR se encuentra 6 genotipos mientras que para AFLP 5
genotipos
• Una combinación de análisis permite detectar la arquitectura
genómincas de las bacterias. Pero debe ser tomado con cuidado el
querer hacer una análisis a nivel epidemiológico.

Conclusión n y Discusión
• Los tres últimos brotes cada uno tiene un mismo genotipo, la
pregunta es si esta podría corresponder a un significado
epidemiológico, ya que también se encontró diferentes genotipos
en Ancash, zona endémica.
•Por otro lado tenemos cepas de mas de 40 años, que pareciera
tener un buen grado de estabilidad genética.
•Sin embargo los recientes brotes y la expansión de las áreas en
riesgo aun continua en la duda.
•El fenómeno del niño también pude modulara estos cambios
epidemiológicos de la Bartonellosis.
• Este es el primer estudio donde se demuestra que la cepa asilada
de una persona asintomática es del mismo genotipo que las cepas
de pacientes sintomáticos.

Estudios futuros
Proyecto genoma de Bartonella bacilliformi
Librería genomica
Secuenciamiento y edición
Camino a la vacuna