DIPLOMADO DE CROMATOGRAFIA Objetivos 1. - Universidad ...

DIPLOMADO DE CROMATOGRAFIAObjetivos1.-Brindar elementos teórico-prácticos de la cromatografía partiendo desde los principiosfundamentales hasta la aplicación de las técnicas cualitativas y cuantitativas.2.- Este diplomado permitirá a los participantes conocer, actualizar y fortalecer susconocimientos en la cromatografía haciendo énfasis en la cromatografía HPLC.3.- El contenido del programa permitirá a los participantes realizar prácticas decromatografía, Cromatografía HPLC con aplicaciones en el análisis cualitativo, cuantitativoy purificación de analitos. Equipos de ultima generación.AlcanceEl Diplomado está dirigido a profesores, profesionales, estudiantes de pregrado y postgradode Farmacia, Química, Biología, Medicina y carreras afines, técnicos químicos y personaloperativo de la industria que utilizan la técnica de HPLC con aplicaciones en quimicaanalítica, control de calidad e investigación y desarrollo.Descripción generalEl diplomado trata los aspectos teórico -prácticos de la cromatografía haciendo énfasis encromatografía HPLC, Cromatografía de Gases y espectrometría de masas con uncomponente práctico enfocado a la cromatografía HPLC.Temario1 Sesión (8h)Introducción: Separaciones cromatográficas, Equilibrios heterogéneos: Extracción liquidolíquido.Historia de la cromatografía. Descripción general, clasificación de los métodoscromatográficos. Aspectos instrumentales de la cromatografía: el cromatograma, relaciónentre tiempo de retención y coeficiente de reparto. Eficacia de la separación: resolución,difusión, factores que influyen en la resolución, ensanchamiento de bandas y eficiencia dela columna. Ecuación de Van Deemter. Desarrollos cromatográficos. Cromatografía en

columna abierta. Introducción. Columnas y empaquetamiento. Aplicación de la muestra yElución. Cromatografía Flash. Cromatografía plana. Cromatografía en capa delgada.Consideraciones teóricas. Fases estacionarias. Fase móvil. Aplicación de la muestra.Sistemas mixtos. Desarrollos en CCD. Detección. CCD preparativa. CCD de altaresolución. Cromatografía en papel. Consideraciones teóricas. Preparación de la muestra.Fase estacionaria. Fase móvil. Equilibrio. Aplicación de la muestra. Detección.Identificación. Cuantificación. Aplicaciones. Electroforesis. Consideraciones teóricas.Técnicas de electroforesis. Electroforesis plana. Electroforesis capilar. Instrumentación.Teoría y principios.Segunda sesión 8hPrimera Sesión Práctica.- Cuantificación del contenido de un analítico en una muestraproblema utilizando los métodos estándar interno. Adición de estándar.Tercera sesión 8hAnálisis y discusión de resultados de la primera práctica.Cromatografía de Gases. Consideraciones teóricas. Cromatografía Gas-Sólido.Cromatografía Gas-Líquido. Parámetros cromatográficos. Resolución. Factor deselectividad. Eficiencia. Número de separación. Asimetría de pico. Ancho de picoInstrumentación. Fase móvil. Clasificación y propiedades de los Gases. Sistemas deInyección. Preparación de muestras para análisis por CG: análisis estáticos (SHE) análisisdinámico (MHE). Derivatización. Inyectores automáticos. Fase estacionaria. Columnasempacadas. Columnas capilares. Temperatura de columna. Detección. Consideracionesteóricas. Factores de respuesta. Detector de ionización de llama. Detector de captura deelectrones. Detector de conductividad térmica. Detector de Fósforo y Nitrógeno.

Cromatografía de gases de alta velocidad, sistemas miniaturizados. Aplicaciones de lacromatografía de gases.Cuarta sesión 8hCuantificación. Exactitud. Precisión. Linealidad. Limite de detección. Limite decuantificación. Media de de la señal. Ruido. Altura del pico. Área del pico. Altura Vs áreadel pico. Métodos de cuantificación. Normalización del área del pico. Estándar Externo.Estándar interno. Adición de estándar. Taller teórico de métodos cuantitativos. Errores en lacuantificación. Análisis de trazas. Cromatografía Liquida. Qué es HPLC? Introducción,reseña histórica. Métodos de separación cromatográficos: fase reversa (RP), fase Normal(NP), fase reversa no acuosa (NARP), Interacción hidrofílica (HILIC), Intercambio iónico(IEC), Par iónico (IPC), Exclusión por tamaño (SEC), afinidad, cromatografía Quiral.Parámetros Cromatográficos. Retención. Eficiencia de columna. Ancho de pico. Efectosde la temperatura y difusión.Quinta sesión 8hInstrumentación HPLC. Equipos modulares. Equipos compactos. Reservorios. Tuberías.Desgasificadores. Formadores de gradiente. Bombas, test de mantenimiento: test delgradiente lineal y por pasos, test de proporcionalidad de las válvulas. Sistemas deinyección. Horno de la columna. Detectores. Propiedades de los detectores. Detección UV.Arreglo de diodos. Detectores universales. Detectores de fluorescencia. Detecciónelectroquímica. Inducción manejo de cromatógrafos HPLC de última generación.Sexta sesión 8h.

-Segunda Sesión Práctica: Purificación de muestras por extracción en fase sólida-Fasereserva utilizando gradientes de concentración y caracterización de los productospurificados por HPLC-PRSéptima sesión 8hDiscusión y análisis de resultados de la Segunda practica.Columnas para HPLC. Materiales de soporte, partículas y monolitos: soportes de sílice,soportes poliméricos, soportes inorgánicos. Fases estacionarias: enlazadas,funcionalización. Selectividad de la columna. Modelo de la sustracción hidrofóbica.Selección de columnas equivalentes u ortogonales. Monitoreo de la reproducibilidad de lascolumnas. Cuidados con las columnas. Moléculas neutras. Cromatografía en fasereversa (RP). Mecanismo de retención en Cromatografía en fase reversa, polaridad ytemperatura. Separación y selectividad como función de la fuerza del solvente (fase móvil).Optimización de variables. Cromatografía en fase reversa no acuosa (NARP).Octava sesión. 8hAnálisis de moléculas iónicas. Cromatografía en fase reversa (retención como función delpH), Cromatografía de par iónico (aditivo de par iónico, concentración y naturaleza);Cromatografía de intercambio iónico. Cromatografía en fase Normal. Mecanismo deretención de la fase unida en Cromatografía en fase normal. Consideraciones teóricas.Localización de la muestra y del solvente. Fase móvil. Fuerza del solvente. Selectividad.Tipos de columna. Efectos de la temperatura. Fase móvil acuosa. Separación decompuestos no iónicos. Elección de la columna. Elección de la fase móvil. Ajustando laretención. Optimizando selectividad. CromatografÍa de interacción hidrofílica (HILIC).Novena Sesión 8hAnálisis de biomoléculas (péptidos y proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos) porHPLC en fase reversa, cromatográfia de intercambio iónico, interacción hidrofóbica.

Cromatografía líquida multidimensional en proteómica. Cromatografía HPLC acoplada aespectrometría de masas. Espectrometría de masas. Consideraciones teóricas. Sistemasde ionización. Ionización EC, EI, API, Electro espray, MALDI, LDI, Bombardeo atómicoe iónico, etc. Analizadores. Magnéticos, Cuádruplo, octapolo, Trampa de iones, Ciclotrón,Tiempo de vuelo. Detectores. Detectores de punto y de área. Teoría del Análisis deespectros de masas. Aplicaciones de la espectrometría de masas.Decima sesión 8hSeparación de enantiómeros. Métodos indirectos y directos. Preparación de la muestra.Tipos de muestras. Tratamiento preliminar de muestras solidas y semisólidas. Reducción detamaño de partícula. Secado. Filtración. Tratamiento de muestras sólidas. Métodos deextracción. Tratamiento preliminar de muestras liquidas. Extracción liquida-liquida(LLE). Aspectos teóricos y prácticos. Extracción en Fase sólida (SPE). SPE Vs LLE. SPEVs HPLC. Aplicaciones. Instrumentación. Consideraciones prácticas. Desarrollos demétodos para SPE. Separaciones por membranas. Cromatografía multidimensional.DerivatizaciónOnceava sesión 8hElución Isocrática. Elución de gradiente. Aplicaciones. Análisis rutinario. Rango deretención. Elución isocrática Vs Gradiente. Selección de las mejores condicionesisocráticas. Selección de las mejores condiciones de gradiente. Rango del gradiente. Formadel gradiente. Desarrollo de un gradiente de elución. Consideraciones experimentales.Solución de problemas. Calificación de Equipos HPLC.Doceava Sesión 8h-Tercera Sesión Práctica. El objetivo de esta practica es la resolución enantiomerica de unamezcla racémica y evaluación de un medicamento en cuanto a pureza enantiomerica. Los

participantes trabajaran dos muestras una mezcla racémica y un medicamento comercial ala cual se le determinara la pureza enenatiomerica por cromatografía HPLC.Treceava sesión 4hAnálisis de resultados de la practica 3 y clausura del diplomado.Profesores Responsables del DiplomadoJavier Eduardo García C., Doctor en ciencias Químicas de la Universidad nacional de Colombia.Profesor Asociado de dedicación exclusiva del Departamento de Farmacia.Zuly Jenny Rivera Monroy, Doctora en Ciencias químicas, Universidad Nacional de Colombia,Profesor Asistente de dedicación exclusiva del Departamento de Química.Jaiver Eduardo Rosas P., Doctor en Ciencias Farmacéuticas de la Doctorado Universidad Del PaisVasco/Euskal Herriko Unibertsitatea. Profesor Asociado de dedicación exclusiva del Departamentode Farmacia.