Actes du colloque BioMed 2008 - BioMed UQAM

Invitation de la directrice 3
Membres de BioMed 3
Horaire du Colloque 4
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Table des matières
Nos commanditaires 5-6
Dr. François Auger, Conférencier invité 7
Présentations orales 8
Présentations par affiches 19
Liste des présentateurs/trices par affiches 59
Liste des présentateurs/trices oraux 59
Liste des participant(e)s 60
Adresse de BioMed 64

Centre de Recherches Biomédicales
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Invitation de la directrice
Bonjour,
C’est un plaisir renouvelé de vous inviter au 4e Colloque annuel du centre
de recherche BioMed. Le thème principal de BioMed étant La recherche
en amont de la maladie, nos travaux s’inscrivent dans l’optique
de prévention de la maladie afin d’améliorer la qualité de vie de nos
concitoyens. Au cours de ce colloque, un tour d’horizon des divers thèmes
de recherche de nos membres s’effectuera à travers 10 présentations
orales par des étudiants de deuxième et troisième cycles, 1 présentation
orale par une nouvelle membre ainsi que 40 présentations par
affiches par des étudiants gradués et stagiaires post-doctoraux.
De plus, nos précieux partenaires vous attendront à leur kiosque pour
vous offrir leur expertise, leurs produits et nouveautés.
Nous avons également le très grand bonheur de recevoir le Dr. François
Auger pour une conférence plénière. De renommée mondiale, le Dr.
Auger est un médecin-chercheur dont les travaux visent l’amélioration
de la qualité du traitement des grands brûlés. Enfin, la tradition se poursuit
de clôturer le colloque annuel avec une dégustation de vins et fromages,
suite à la remise des prix pour les meilleures présentations orales
et par affiche.
Très belle journée de colloque ! Julie Lafond Ph.D., Directrice
Membres réguliers
Membre de BioMed
Dr. Borhane Annabi, Dépt. Chimie Dr. Julie Lafond, Dépt. Sc. Biol.
Dr. Denis Archambault, Dépt. Sc. Biol. Dr. M-A. Mateescu, Dépt. Chimie
Dr. Benoit Barbeau , Dépt. Sc. Biol. Dr. Robert Moreau, Dépt. Sc. Biol.
Dr. Richard Béliveau, Dépt. Chimie Dr. Catherine Mounier, Dépt. Sci. Biol.
Dr. Louise Brissette, Dépt. Sc. Biol. Dr. Joanne Paquin, Dépt. Chimie
Dr. Richard Desrosiers, Dépt. Chimie Dr. Laurent Poliquin, Dépt. Sc. Biol.
Dr. François Dragon, Dépt. Sc. Biol. Dr. Éric Rassart, Dépt. Sc. Biol.
Dr. Elsy Édouard, Dépt.Sc.Biol. Dr. Tatiana Scorza, Dépt. Sc. Biol.
Dr. Sarah Jenna, Dépt Chimie
Membres associées
Dr. Diana Averill, Dépt. Sc. Biol. Dr. Cathy Vaillancourt, INRS

8:00 à 8:30 Accueil
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Horaire du Colloque
8:30 à 10:05 Ouverture du Colloque
Présentations orales
(15 min. de présentation et 5 min. de questions)
8:35 - 9:05 Sarah JENNA, Nouvelle membre BioMed
9:05 - 9:25 Irvens FANÉLUS (R. Desrosiers)
9:25 - 9:45 Corine MARTINEAU (R. Moreau)
9:45 - 10:05 Fannie AMIOT (R. Desrosiers)
10:05 à 11:30 Pause - santé
1 er session d’affiches
11:30 - 12:30 Présentations orales
(15 min. de présentation et 5 min. de questions)
11:30 - 11:50 Frédéric BOUCHARD (J. Paquin)
11:50 - 12:10 Louis-Charles LEVROS (É. Rassart)
12:10 - 12:30 Anne RADENNE (C. Mounier)
12:30 - 14:30 Dîner
2 e session d’affiches
14:30 - 15:50 Présentations orales
(15 min. de présentation et 5 min. de questions)
15:50 à 16:15 Pause - santé
14:30 - 14:50 Marilène HALIN (B. Barbeau)
14:50 - 15:10 Yannève ROLLAND (R. Béliveau)
15:10 - 15:30 Christian TRAHAN (F.Dragon)
15:30 - 15:50 Mathieu PROVENÇAL (R. Béliveau)
16:15 à 17:15 Conférence plénière : Dr François AUGER
17:15 à 17:30 Remise des prix pour les présentations du Colloque
17:30 à 19:00 Vins et fromages

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Boulangerie Première Moisson
2479, Chemin Chambly
Longueuil, Québec , J4L 1M2
Tél. : (450) 468-4406
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Nos partenaires
André F Gallant
Alphabourse
Cette année encore, la contribution financière de nos
partenaires permet la tenue du Colloque Annuel de
Biomed. Chers commanditaires, par ces simples mots
considérez-vous personnellement remerciés pour votre
générosité.
Merci !

Centre de Recherches Biomédicales
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Conférence plénière
"La médecine régénératrice…
nos attentes seront-elles toutes comblées?"
Dr. François Auger
La médecine régénératrice est un domaine des
plus novateurs englobant des approches variées,
telles l’implantation de biomatériaux ainsi que la
thérapie cellulaire et le génie tissulaire. Les buts
de la médecine régénératrice sont primordiaux
pour l’arsenal thérapeutique du XXIème siècle
soit : réparer, remplacer et éventuellement régénérer
les tissus et les organes rendus défaillants
suite à un trauma, une pathologie acquise ou un
défaut héréditaire.
Depuis quelques années, plusieurs nouvelles ont fait les manchettes
des journaux dans le monde entier. Qu'il soit question de cellules
souches embryonnaires et post-natales, de clonage thérapeutique,
de vessie reconstruite ou de cellules adultes reprogrammées
en cellules souches, ces nouvelles font toujours allusion
à la possibilité d'applications cliniques extraordinaires. Tandis
qu'il pourra être légitime de mentionner les percées de la science
et les possibilités qu'elles peuvent ouvrir, il arrive malheureusement
que la médiatisation de ces percées leur fasse revêtir un
aspect sensationnaliste qui offre des promesses trop prématurées.
Il est vrai que le monde de la médecine régénératrice est en
pleine effervescence et que des percées extraordinaires se sont
produites. Il faut admirer les possibilités qui sont rendues possibles.
Mais il faut également rester réaliste quant aux efforts de recherche
et de développement qui devront être investis avant de voir
les applications cliniques tangibles se manifester. Concrètement,
à quel niveau la recherche est-elle rendue et quelles sont les applications
qui risquent de voir le jour dans les prochaines années?

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Présentations orales
1 - Régulation des GTPases Ras : De la génomique intégrative à
l’identification de cibles thérapeutiques
Dr Sarah Jenna
Les petites protéines G de la superfamille
des Ras contrôlent et coordonnent les différentes
voies de signalisations nécessaires
au développement (embryonnaire, larvaire)
et à la vie des organismes multicellulaires.
Ces fonctions requièrent une régulation
précise de leur niveau d’expression dans le
temps et dans l’espace. Cette régulation
est assurée par une machinerie complexe
de protéines nommées « régulateurs ». Des
mutations dans le nombre de ces régulateurs
ont été associées à différentes formes
de maladies développementales, de
cancers et différentes formes de retard
Sarah Jenna, titulaire de la
Chaire de recherche du
Canada en génomique
intégrative et signalisation
cellulaire
(photo : Nathalie St-Pierre)
mental. Nous utilisons des approches de génomique intégrative :
1) Pour établir une cartographie fonctionnelle de la machinerie
de régulation des GTPases Ras lors du développement embryonnaire
du nématode Caenorhabditis elegans. 2) Pour identifier des
cibles thérapeutiques contre des formes de retard mental liées à
l’altération de cette machinerie. Le séminaire présenté résumera
nos activités de recherche sur ces deux thématiques.

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2 - L’expression de la protéine L-isoaspartate méthyltransférase
est stimulée par les espèces oxygénées réactives induites par le
phénylarsine oxyde
Irvens Fanélus et Richard R. Desrosiers
Université du Québec à Montréal
La protéine L-isoaspartate méthyltransférase (PIMT) est une enzyme
qui répare les protéines endommagées par l’accumulation
de résidus L-isoaspartates anormaux. L’intérêt pour la PIMT vient
entre autre de l’observation que son expression est altérée dans
différentes maladies neurologiques. Cependant, on ne connaît
pas les mécanismes qui régulent son expression lors de dommages
résultant de l’oxydation des protéines dans le cerveau. Le
phénylarsine oxyde (PAO) est un dérivé de l’arsenic qui a la propriété
d’oxyder les protéines en modifiant spécifiquement les
groupements thiols des cystéines voisines. Afin d’étudier le rôle de
l’oxydation des protéines sur l’expression de la PIMT, nous avons
traité les cellules cérébrales tumorales U-87 avec le PAO. Premièrement,
nous avons observé que le PAO induit une forte et rapide
stimulation de la synthèse de la PIMT. Nous avons montré par la
suite que l’augmentation de l’expression de la PIMT par le PAO
était dépendante de protéines possédant des cystéines voisines.
De plus, nous avons observé que l’augmentation de l’expression
de la PIMT corrélait avec la formation d’espèces oxygénées réactives
(ROS) induites par le PAO. De façon convaincante, nous
avons pu démontrer que la formation des ROS et la stimulation
de l’expression de la PIMT par la PAO étaient bloquées par l’agent
antioxydant N-acétyl-L-cystéine ainsi que par l’inhibition de
la NADPH oxydase avec le DPI. Dans le but de comprendre le
rôle que joue la PIMT dans la génération des ROS par le PAO,
nous avons montré que l’inhibition de l’expression de la PIMT par
siRNA accentuait significativement la formation des ROS induites
par le PAO. Ces résultats démontrent que la PIMT est régulée par
les ROS. De plus, cette étude montre que la PIMT bloque la formation
des ROS, ce qui laisse suggérer que la PIMT a une fonction
antioxydante.

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3 - L’analyse par reconstruction virtuelle de la microarchitecture osseuse
de souris présentant des troubles locomoteurs.
Martineau C, Brissette L*, Moreau R.
Laboratoire du métabolisme osseux, *Laboratoire du métabolisme
des lipoprotéines, BioMed, Dépt. Sc. Biol., UQAM.
Le maintien d’une masse osseuse adéquate résulte d’un équilibre
entre les processus de résorption, soit la dégradation par les ostéoclastes
de la matrice osseuse minéralisée, et de formation, c’est-àdire
la régénération du tissu osseux par les ostéoblastes. Cet équilibre
est influencé par des facteurs génétiques, physiologiques ainsi
qu’environnementaux et tout désordre engendre des symptômes
allant de l’ostéopénie à l’ostéopétrose. Ces désordres osseux se traduisent
respectivement par un déficit ou un excès de masse osseuse,
aisément identifiables par l’étude de la microarchitecture osseuse.
Une méthode récente afin d’analyser l’os est la microtomographie à
rayons X; cette technique consiste en une radiographie 3D d’un
échantillon osseux et de l’analyse de sa reconstruction virtuelle par
ordinateur. Cette méthode a été employée afin de caractériser le
phénotype osseux de souris C57BL/6 affichant des troubles locomoteurs;
nos analyses de la microarchitecture osseuse ont démontré
que les troubles locomoteurs de ces souris sont liés à une aberration
au niveau des articulations. Effectivement, des analyses qualitatives
et quantitatives révèlent une minéralisation excessive des articulations
des genoux, des tarses et des vertèbres, ainsi qu’une propension
généralisée à l’ostéoporose. La cause de cette condition étant
inconnue, les symptômes observés ont été comparés à ceux de pathologies
similaires répertoriées dans la littérature. L’ostéoarthrite
(OA) est une affection caractérisée par la réduction des espaces
articulaires et la présence d’ostéophytes, soit des excroissances minéralisées
apposées à l’os. L’OA affecte le plus souvent les articulations
des genoux, des mains, des pieds et des hanches; cependant,
ce syndrome n’affiche généralement pas de diminution de masse
osseuse. En contrepartie, la spondylose ankylosante (SA) est un syndrome
similaire affectant particulièrement les vertèbres et dont les
stades avancés affichent de l’ostéoporose. En perspective, une
identification formelle des causes de cette anomalie osseuse nécessite
une étude approfondie des marqueurs sériques du métabolisme
osseux ainsi qu’une caractérisation des fonctions des cellules osseuses
afin de cerner le génotype de ces souris.

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4 - Stratégies protéomiques pour Élucider des voies de signalisation
sous le contrôle de l’expression de la protéine L-isoaspartyl
méthyltransferase chez les Glioblastomes humains.
Fannie Amiot* et Richard Desrosiers
Département de Chimie, UQÀM, Montréal, Canada.
Une chute d’expression de l’enzyme L-isoaspartyl methyltransferase
(PIMT), connue pour réparer les protéines endommagées qui
ont accumulés des résidus aspartates anormaux, a été démontrée
chez des sujets souffrants d’épilepsie et atteints de tumeurs
cérébrales astrocytaires. Un profil protéomique correspondant au
phénomène de l’inhibition de la PIMT a été dressé, suite à la
combinaison de la technologie de l’ARN interférent (siRNA) et de
la technologie de micro-puces d’anticorps (microarray). Un
changement du niveau d’expression de plusieurs protéines, sous
leur forme totale et phosphorylée, dont Erk et P-Erk ainsi que AKT
et P-AKT a été observé. Ces résultats ont été confirmés par immunodétection,
conjointement à la validation d’une méthode d’enrichissement
des phosphoprotéines par chromatographie d’affinité
dont la matrice est composée de trioxyde d’aluminium. L’identification
de ces protéines, impliquées dans certaines voies de
signalisation, permettront de trouver des cibles pharmacologiques
qui aideront à contrer le développement des neuropathologies
telles que l’épilepsie et les tumeurs cérébrales.

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5 - Génération de myocytes cardiaques et squelettiques dans la différenciation
adipogénique de cellules souches embryonnaires P19.
Frédéric Bouchard et Joanne Paquin,
Département de chimie et biochimie, UQAM
Objectif: Les cellules P19 de souris sont pluripotentes et ressemblent
aux cellules souches embryonnaires normales. Elles peuvent se différencier
en neurones, fibroblastes et cellules musculaires de type cardiaque
et squelettique lors d’une exposition précoce à l’acide rétinoïque
(un puissant morphogène dérivé de la vitamine A), au diméthylsulfoxyde
ou à des hormones peptidiques. Nous avons récemment
montré que les cellules P19 peuvent aussi se convertir en adipocytes
lorsqu’une exposition plus tardive à l’acide rétinoïque est
suivie par un traitement avec de l’insuline. L’apparition d’adipocytes
était accompagnée de cellules se contractant de façon spontanée
mais nous ne savions pas si ces dernières étaient de nature cardiomyocytaire
ou squelettomyocytaire. Nous avons donc entrepris de
déterminer le phénotype des cellules contractiles à l’aide d’analyses
morphologiques, immunologiques, et de PCR. Résultats: Les cultures
différenciées par le traitement adipogénique contenaient deux populations
de cellules contractiles. Une première population consistait
en cellules regroupées sous forme de fibres. Ces cellules ont pu être
identifiées comme squelettomyocytes parce qu’elles se sont révélées
immunopositives pour l’actinine sarcomérique mais immunonégatives
pour la troponine-I cardiaque (TpnI-C). Une deuxième population
comptait des cardiomyocytes, cellules rondes immunopositives
pour les deux marqueurs mentionnés. Les analyses PCR ont
confirmé l’expression de marqueurs musculosquelettique (MyoD),
cardiaques (GATA4 et TpnI-C) et adipocytaire (PPARgamma). Des
études préliminaires ont été réalisées en remplaçant l’insuline (agent
adipogénique) par du dexaméthasone et de la vitamine C (agents
ostéogéniques). Une augmentation de l’activité phosphatase alcaline
et la révélation de dépôts minéraux par coloration von Kossa
indiquent que les cellules P19 peuvent générer des ostéocytes. Des
cellules contractiles étaient aussi présentes dans ces cultures.
Conclusion: Le protocole adipogénique à base d’acide rétinoïque
génère des myocytes de nature cardiaque et squelettique. D’autre
part, les résultats suggèrent que, en plus d’agents de différenciation
particulier, la fenêtre temporelle d’exposition à l’acide rétinoïque
pourrait influencer le nombre de phénotypes mésodermiques générés
lors de la différenciation de cellules souches in vitro. Cette hypothèse
sera vérifiée dans le futur.

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6 - Caractérisation de facteurs nucléaires modulant l’activité promotrice
du gène de l’apolipoprotéine D lors de l’arrêt de croissance
cellulaire.
Louis-Charles Jr Levros , Sonia Do Carmo et Éric Rassart.
Centre de recherche Biomed, Dépt. Sc. Biol., UQAM,
CP8888, Succursales Centre-ville, Montréal, Canada, H3C 3P8.
L’Apolipoproteine D (apoD) est une glycoprotéine exprimée dans
plusieurs tissus et régulée à la hausse dans des situations pathologiques
telles que les maladies neurodégénératives et les cancers. In
vitro, l’expression de l’apoD est inversement corrélée avec la prolifération
cellulaire. Effectivement, nous avons montré que l’expression
de l’apoD est induite dans les cellules quiescentes par confluence et
dans les cultures privées de sérum. Nos études antérieures sur le promoteur
du gène de l’apoD ont montré que les éléments cis, appelés
éléments de réponse au sérum (SRE) et contenant une boîte CArG,
de même que l’élément APP (une région riche en purine et pyrimidine)
sont spécifiquement impliqués dans la surexpression de l’apoD
dans des cellules en arrêt de croissance. Nous avons aussi identifié
les éléments « Ets-Binding Site » (EBS) et « Glucocorticoid-Responsive
Element » (GRE) entre les deux sites SRE. Une étude plus poussée
nous a permis de purifier des protéines nucléaires capables de se lier
spécifiquement à ces éléments, en condition normale et en arrêt de
croissance, menant à une activité transcriptionnelle. En utilisant des
billes de streptavidine couplées aux séquences promotrices biotinylées
et correspondant à la région –514 à –475 du promoteur, nous
avons identifié plusieurs protéines nucléaires candidates par spectrométrie
de masse (MS/MS). Nous montrons que parmi ces protéines
Parp-1, HnRNP-U, CArG-Box-binding factor A (CBF-A), BUB-3, Kif4, Ifi-
204 et Apex-1 lient effectivement le promoteur de l’apoD. Des tests
de retard sur gel à l’aide d’anticorps confirment la liaison spécifique
de HnRNP-U et de Parp-1 sur le promoteur. De plus, ces deux protéines
transactivent le promoteur dans des conditions d’arrêt de croissance
tandis que BUB-3 le réprime. Nous montrons aussi qu’une régulation
de Parp-1 à la hausse précède celle de l’apoD et coïncide
avec le jour 2 de déprivation de sérum. Des tests d’interférence à
l’ARN montrent que la suppression des protéines HnRNP-U et Parp-1
inhibe l’expression génique de l’apoD indiquant que ces protéines
seraient directement impliquées dans l’activation du promoteur de
l’apoD.

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7 - Régulation de la synthétase des acides gras par l’insuline et la T3
dans le foie : Mise en évidence de l’action génomique et non génomique
de la T3
Radenne A, Martel C, Akpa M, Sawadogo S et Mounier C
Biomed, Département des sciences biologiqes, UQAM, Montreal,
Québec, Canada
La synthétase des acides gras (FAS) est une enzyme clef de la lipogenèse
hépatique responsable de la synthèse des acides gras saturés
à longue chaîne tel que le stéarate et le palmitate. Cette enzyme
est essentiellement régulée au niveau transcriptionel par les
nutriments et les hormones. L’insuline, la T3 et le glucose augmentent
l’activité et l’expression de la FAS alors que le glucagon, les acides
gras poly-insaturés (PUFAs) et les acides gras à moyenne chaîne
(MCFAs) la diminuent. La compréhension des mécanismes de régulation
de la FAS est importante car l’identification d’inhibiteurs spécifiques
pourrait être une cible thérapeutique intéressante pour lutter
contre l’obésité. Dans des cellules hépatiques, nous avons mis en
évidence que la T3 et l’insuline étaient capables d’agir de façon
synergique en augmentant l’activité enzymatique ainsi que le niveau
d’expression des ARNm de la FAS (14 fois). L’élément de réponse
à la T3 (TRE) a par la suite été isolé grâce à des délétions successives
en 5’ puis cloné en amont du promoteur minimal de la thymidine
kinase et du gène rapporteur CAT. En utilisant ces constructions,
nous avons montré que l’insuline et la T3 étaient capables de
réguler la FAS au niveau transcriptionel via ce TRE. En réalisant des
analyses de retard sur gel, nous avons démontré la fixation de l’hétérodimère
TR/RXR au niveau de ce TRE et que cette fixation est augmentée
en présence d’insuline et/ou de T3. L’utilisation de H7, un
inhibiteur général des serines/thréonines kinases, nous a permis de
mettre en évidence que des mécanismes de phosphorylation sont
impliqués dans la régulation transcriptionelle de la FAS par ces hormones.
Par la suite, l’utilisation de LY294002, un inhibiteur spécifique
de PI3K et de PD98059, un inhibiteur spécifique de MEK, nous ont permis
de démontrer que la voie de signalisation cellulaire PI3K/MAPK
est impliquée dans la régulation de la FAS par la T3 et l’insuline via le
TRE. En conclusion, nos résultats suggèrent que la T3 régule la transcription
par un mécanisme d’action génomique et non génomique
et que comme l’insuline, elle active la voie de signalisation PI3K/
MAPK régulant ainsi la FAS via le TRE.

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8 - Caractérisation de la transcription antisens chez les rétrovirus humains
HTLV-2, HTLV-3 et HTLV-4.
Marilène Halin 1, Sébastien Landry 1, William Switzer 2, Renaud Mahieux 3,
Jean-Michel Mesnard 4 et Benoît Barbeau 1.
1Département des sciences biologiques, BioMed, UQAM; 2Centers for
Disease Control and Prevention, Atlanta GA; 3Institut Pasteur, Paris,
France; 4Institut de Biologie, Montpellier France.
Chez les rétrovirus, la production des protéines virales dépend de l’expression
d’un transcrit pleine longueur, initié dans le LTR 5’ et épissé de
façon alternative. Des études ont récemment mis en évidence l’existence
d’un nouveau type de transcrit initié dans le LTR 3’ de certains
rétrovirus humains (VIH-1, HTLV-1). Chez le virus HTLV-1, plusieurs études
ont permis l’identification de 2 formes d’épissage du transcrit antisens
ainsi que la caractérisation d’une nouvelle protéine virale, nommée HBZ
(HTLV-1 bZIP factor). Cette protéine se localise au noyau et régule négativement
la transcription virale en interagissant avec des facteurs de
transcription contenant un motif leucine zipper. Cette étude a pour objectif
de caractériser la transcription antisens des rétrovirus humains HTLV-
2, HTLV-3 et HTLV-4. Des études de RT-PCR ont permis de détecter un
transcrit antisens chez des cellules 293T transfectées par l’ADN proviral
des rétrovirus HTLV-2, -3 et -4. Le séquençage des signaux obtenus a
confirmé la présence d’épissage dans chacun des transcrits étudiés. Des
sites d’initiations de la transcription ainsi qu’un site fonctionnel de polyadénylation
ont également pu être identifiés par des analyses de 5’ et 3’
RACE sur un clone des virus HTLV-2 et -3. La comparaison des séquences
de la protéine HBZ et des ORF antisens des rétrovirus HTLV-2, -3 et -4 démontre
que le motif leucine zipper ne semble pas présent chez ces derniers.
Dans le but de permettre l’expression et la détection des protéines
antisens, les parties codantes des transcrits antisens des rétrovirus HTLV-3
et -4 ont été clonées dans un vecteur d’expression contenant une étiquette
myc. L’analyse des cellules transfectées par microscopie confocale
a permis de détecter la protéine antisens de HTLV-3 (ASP-3) principalement
dans le cytoplasme ainsi que la protéine antisens de HTLV-4
(ASP-4) majoritairement dans le noyau. Ces recherches portant sur la
transcription antisens des rétrovirus humains ont permis de mettre en évidence
que les transcrits antisens des rétrovirus HTLV-3 et -4 ont la capacité
de coder pour des nouvelles protéines virales. Les analyses de séquences
effectuées ainsi que les observations en microscopie confocale
laissent croire que ces protéines pourraient jouer des rôles différents de
ceux précédemment attribués à la protéine HBZ. De plus amples études
seront nécessaires afin d’identifier les rôles de ces protéines nouvellement
découvertes dans le cycle de réplication viral.

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9 - Isolation et caractérisation de cellules souches cancéreuses
au sein d'une lignée cellulaire de mélanomes humains
Yannève Rolland, Michel Demeule et Richard Béliveau
Laboratoire de Médecine Moléculaire, Centre de Recherches
Biomédicales de l'Université du Québec à Montréal.
Plusieurs études rapportent l’existence d’une population de cellules
souches au sein de divers types de cancers. En effet, une infime
fraction des cellules tumorales constituant une tumeur possèderait
des caractéristiques propres aux cellules non différenciées
et serait responsable de la résurgence des cancers. Or, les
mélanomes expriment à leur surface des niveaux considérables
de divers marqueurs propres aux cellules souches, dont la prominine-1
ou CD133. Cette étude vise à évaluer l’impact de l’expression
de CD133 sur le comportement invasif des cellules de mélanomes
humains (SK-Mel-28). Afin de réaliser ce projet, une souspopulation
de cellules SK-Mel-28 exprimant CD133 (CD133 +) a été
sélectionné par MACS, puis caractérisée. Suite à des isolations
successives des cellules SK-Mel-28, la population CD133 + affiche
97% d’expression de CD133 à la surface cellulaire tandis que les
niveaux n’atteignent que 37% pour la fraction négative (CD133 -).
Les résultats montrent une augmentation significative de l’expression
de CD133 tant au niveau protéique que génique dans la
population CD133 + par rapport aux populations cellulaires parentale
et CD133 -. Par ailleurs, la migration basale des cellules SK-
Mel-28 est réduite de 60% lorsque la population est enrichie en
CD133 +. La prolifération cellulaire dans une matrice de collagène
a aussi été évaluée pour les trois types de populations cellulaires
de SK-Mel-28. La prolifération des SK-Mel-28 dites parentales a été
déterminée comme étant le niveau prolifératif de base. À cet
égard, la population CD133 - montre une prolifération accrue de
40% tandis que la prolifération des cellules CD133 + est diminuée
de 15%. De plus, le nombre absolu de cellules en phase G0/G1
du cycle cellulaire augmente de 10% dans la population CD133 +.
Ces résultats suggèrent un certain état de latence cellulaire dans
les cellules CD33 +. Cette étude démontre que la sous-population
CD133 + des mélanomes humains possède des caractéristiques
similaires aux cellules souches cancéreuses et propose de nouveaux
marqueurs quant à l’identification des cellules tumorales
résistantes.

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10 - Dyskératose congénitale et défauts d’assemblage de la télomérase
Christian Trahan et François Dragon, Centre de recherche BioMed, Département
des sciences biologiques, Université du Québec à Montréal.
La dyskératose congénitale (DC) est une pathologie héréditaire qui
affecte les tissus à haut renouvellement. Elle est caractérisée par une
pigmentation anormale de la peau, la dystrophie des ongles, une
aplasie de la moelle osseuse et des leucoplasies mucosales. L’aplasie
de la moelle osseuse est la principale cause de fatalité chez les individus
atteints et l’on dénote une incidence accrue au développement
de cancers. Des mutations dans le RNA de la télomérase (hTR) sont
observées dans la forme autosomique dominante de la maladie. La
télomérase est une ribonucléoprotéine qui catalyse l’élongation des
extrémités chromosomiques nommées télomères. Les DNA télomériques
consistent en des séquences TTAGGG répétées en tandem qui
sont rétrotranscrites à partir du RNA de la télomérase. Cette enzyme
est active dans les cellules germinales, les cellules souches et les cellules
ayant à subir de multiples divisions cellulaires. Par contre, elle est
généralement inactive dans les cellules somatiques et l’érosion des
télomères à chaque division cellulaire agît comme horloge
biologique : la cellule entre en sénescence lorsqu’une longueur critique
est atteinte. Il est important de souligner que la télomérase est
active dans plus de 90% des cancers. Le RNA hTR (451 nt) est constitué
d’un domaine pseudo-nœud contenant la séquence matricielle nécessaire
à l’élongation des télomères et d’un domaine H/ACA à son
extrémité 3’. Le pseudo-nœud et les régions conservées CR4/5 de hTR
sont critiques pour l’activité de la transcriptase inverse, alors que le domaine
H/ACA est essentiel à la stabilité et à l’accumulation de hTR in
vivo. Certaines études indiquent que le domaine H/ACA est probablement
assemblé de façon co-transcriptionelle avec le tétramère protéique
NAF1-dyskérine-NHP2-NOP10. Différentes mutations de hTR
menant à la DC sont localisées dans le domaine H/ACA. Afin d’analyser
les défauts d’assemblage causés par des mutations dans ce domaine,
nous avons élaboré un système in vitro permettant de tester la
liaison du tétramère NAF1-dyskérine-NOP10-NHP2 au domaine H/ACA
de hTR. L’une de ces mutations est la transversion C408G qui altère la
structure d’une hélice de la région CR7. Nous savons que le mutant
C408G n’accumule pas efficacement dans des cellules en culture,
mais lorsque les quantités de RNA sont standardisées, une activité normale
est observée. Nous démontrons que la mutation C408G empêche
l’assemblage du tétramère avec le domaine H/ACA de hTR.
Par conséquent, il est fort probable qu’un défaut d’assemblage de ce
domaine entraîne la dégradation de hTR in vivo, conduisant tout droit
à la DC.

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11- Le facteur de croissance hépatocytaire induit la surexpression du
facteur tissulaire dans les médulloblastomes
Mathieu Provençal 1,2, David Labbé 1, Denis Gingras 1 et Richard Béliveau
1,3
1 Laboratoire de médecine moléculaire, Hôpital Sainte-Justine, Centre
de cancérologie Charles-Bruneau. 2 Faculté de médecine, Département
de physiologie, Université de Montréal. 3 Faculté de médecine, Département
de chirurgie, Université de Montréal.
Introduction : Les médulloblastomes (MB) représentent la forme la plus
commune de tumeurs cérébrales chez l’enfant. Ces tumeurs constituent
près de 20% de toutes les tumeurs pédiatriques intracraniales. Les traitements
préconisés reposent principalement sur la résection chirurgicale,
la radiothérapie et la chimiothérapie. Toutefois, le taux de survie après 5
ans dépasse à peine 50%. L’élucidation des voies de signalisation impliquées
dans la pathogenèse des MB pourrait grandement contribuer au
développement des nouvelles cibles thérapeutiques. À titre d’exemple,
la voie HGF/c-MET semble importante dans la croissance de divers types
de tumeurs et l’expression de c-MET est associée à un mauvais pronostic.
Cependant, dans les MB, le rôle de c-MET et de la signalisation qui en
découle est encore mal compris. Récemment, il fut démontré que c-MET
est également impliqué dans la régulation de certaines protéines associées
au système hémostatique, notamment PAI-1 et COX-2. Sachant
que les coagulopathies sont responsables de 50% des décès chez les
patients ayant une tumeur primaire et 90% des décès chez les patients
présentant des métastases, il est primordial de connaître la contribution
de c-MET dans le phénotype pro-coagulant. Nos travaux consiste à démontrer
s’il existe un lien entre l’activation de c-MET, le caractère agressif
de la tumeur et l’expression de TF dans les MB. Méthodes : Pour démontrer
l’effet pro-coagulant des cellules cancéreuses nous utilisons un
essai chromogénique in vitro. L’expression de TF à la suite de la stimulation
au HGF est analysée par et immunobuvardage de type Western. La
migration des cellules est réalisée in vitro en utilisant des chambres de
Boyden. Résultats : Nos travaux démontrent que la stimulation des cellules
de MB (DAOY) avec le HGF induit la surexpression de TF. Cet effet du
HGF semble uniquement affecté les cellules des MB, puisque HGF n’induit
pas l’expression de TF dans les glioblastomes. Cette expression de TF
augmente le caractère pro-coagulant des DAOY. De plus, l’expression
de TF à la surface des DAOY facilite la migration de ces dernières en
réponse au facteur VIIa (FVIIa), le ligand naturel de TF. Conclusion : En
conclusion, l’activation de c-MET par HGF induit l’expression de TF dans
les MB, conférant un état pro-coagulant et accentuant la capacité migratoire
des cellules cancéreuses. Nos travaux, permettront de mieux
comprendre la biologie des MB et ouvriront également la porte à des
thérapies plus ciblées.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 19
Présentations par affiches
1 - Effet du magnésium et implication des canaux ‘‘melastatinrelated
transient receptor potential 7’’ (TRPM7) dans la prolifération et
la migration des ostéoblastes induites par le « platelet-derived
growth factor » (PDGF).
Abed, Élie, Moreau R.
Laboratoire du métabolisme osseux, BioMed, Département des
Sciences Biologiques, Université du Québec à Montréal.
Le tissu osseux est en perpétuel renouvellement (désigné remodelage
osseux) qui se caractérise par un équilibre entre la résorption de
la matrice minéralisée par les ostéoclastes et la réformation d’un
nouveau tissu par les ostéoblastes. Dans bien des cas où l’équilibre
est perdu, il y a apparition d’ostéoporose (littéralement: la maladie
des os poreux) qui est caractérisée par une masse osseuse réduite
due à une dégradation osseuse supérieure à la formation osseuse,
une fragilité osseuse et une susceptibilité accrue aux fractures. Parmi
les facteurs de risque, une diète déficiente en magnésium (Mg) a
été identifiée comme une condition prédisposant à une diminution
du nombre d’ostéoblastes, une réduction graduelle de la masse osseuse
et au développement de l’ostéoporose chez l’humain. Nos
récents travaux indiquent que les canaux cationiques ‘‘melastatin
related transient receptor potentiel’’ (TRPM7) assurent l’homéostasie
du Mg intracellulaire, un ion important pour de nombreuses fonctions
cellulaires. La présente étude visait à déterminer l’importance des
canaux TRPM7 dans la prolifération et la migration des ostéoblastes
induites par le « platelet-derived growth factor » (PDGF), un facteur
reconnu pour stimuler la prolifération et la migration des ostéoblastes
lors du remodelage osseux. Des mesures de prolifération et de migration
cellulaires ont indiqué qu’une réduction de Mg du milieu de
culture diminue la prolifération et la migration des ostéoblastes stimulées
par le PDGF. Ce dernier augmente l’expression du gène TRPM7
des ostéoblastes. De plus, une stratégie d’interférence à l’ARN ciblant
TRPM7 réduit la prolifération et la migration des ostéoblastes
induites par le PDGF. En conclusion, nos résultats indiquent que la
stimulation de la prolifération et de la migration des ostéoblastes par
le PDGF est favorisée par la présence de Mg extracellulaire et des
canaux TRPM7. Ainsi une déficience en Mg est à même de diminuer
la formation osseuse et contribuer au développement de l’ostéoporose.

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2 - Régulation de la synthétase des acides gras (FAS) par l’insuline,
la triiodothyronine (T3) et les acides gras à chaine moyenne
(MCFA) : Une étude de l’activité enzymatique
Akpa M.M., Sawadogo S. et Mounier C.
BioMed, Département des Sciences Biologiques, UQAM, Montréal,
Canada
La FAS, une enzyme clef de la lipogenèse hépatique, est responsable
de la synthèse du palmitate (C16:0) et du stearate (C18:0).
Elle est essentiellement régulée au niveau transcriptionnel par
l’alimentation et les hormones. L’insuline et la triiodothyronine (T3)
l’activent tandis que les acides gras l’inhibent. Comprendre quels
acides gras et comment ceux-ci régulent la FAS est nécessaire
pour comprendre les mécanismes impliqués dans le développement
de l’obésité. Nous avons montré que l’insuline et T3 avait
chacune un effet inducteur sur l’activité enzymatique, le niveau
d’ARN-messager et la transcription de la FAS. Lorsque les deux
hormones sont présentes simultanément, nous observons un important
effet synergique. Les acides gras à chaines moyennes,
l’octanoate (C8) et l’hexanoate (C6), mais pas le C4 et C10, inhibent
de façon spécifique l’activité enzymatique de la FAS, et ceci
uniquement lorsqu’elle est activée par l’insuline et la T3. Dans
nos études, nous avons aussi observé que C6 inhibait l’activité de
la FAS induite par les deux hormones d’environ 50%, alors que C8
était moins efficace (~35%). En utilisant du bromo-hexanoate (un
dérivé non-métabolisable de C6), nous avons démontré que C6
devait être modifié par la cellule afin de moduler l’activité de
FAS. Un profil lipidique de cellules traitées avec de l’insuline, de la
T3 et du C6 montre que 60% du C6 est rapidement incorporé en
triglycérides (TG). Le carnitine-hexanoate ainsi que l’Etomoxir (un
inhibiteur de CPT1) ne modifient en rien l’activité FAS induite par
les deux hormones. Par contre, l’acide bétulinique (un inhibiteur
de DGAT) réverse l’effet du C6 sur l’activité enzymatique. Ces résultats
suggèrent donc que le C6 est rapidement estérifié en TG
afin d’inhiber l’activité FAS induite par l’insuline et la T3.

Centre de Recherches Biomédicales
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3 - Étude de l’apo D dans un modèle neurodégénératif induit par l’acide
kaïnique
Azadeh Alikashani, Ouafa Najyb, Sonia Do Carmo, Eric Rassart
Centre de recherche BioMed, Dépt. Sc. Biol., UQAM, CP8888, Succursale
Centre-ville, Montréal, Canada, H3C 3P8
L'apolipoprotéine D (apoD) est une glycoprotéine de 28 Kda, présente
chez l'humain, dans le sérum associée aux lipoprotéines de
haute densité (HDL), et dont la fonction n'est pas encore claire. Sa
structure tridimensionnelle et son appartenance à la famille des lipoca-lines
montrent que l'apoD est un transporteur de petites molécules
hydrophobes. Sa synthèse est largement augmentée au cours de
la régénération des nerfs périphériques. La concentration de l’ApoD
est fortement augmentée dans le système nerveux central (SNC) de
patients atteints de maladies neurodégénératives telles que la maladie
d’Alzheimer, méningoencéphalite, motor neuron disease, sclérose
en plaques, Parkinson, schizophrénie, etc …. Les travaux de notre
équipe ont démontré que l’apoD augmentait dans le SCN de rat
suite à une lésion et ce, durant toute la phase de réinervation. Bien
que quelques études suggèrent que l'apoD soit un marqueur de
mort neuronale, nous croyons plutôt que la surexpression de l’apoD
est une tentative de protection ou réparation. Afin de mieux étudier
le rôle de l’apoD, plusieurs lignées de souris transgéniques qui surexpriment
cette protéine dans le système nerveux ont été produites.
Mes travaux dans le cadre de cette maîtrise tenteront principalement
de valider l’effet bénéfique de cette surexpression d’apoD
chez ces souris dans les situations neuropathologies induites par l’acide
kaïnique (analogue de glutamate), un acide aminé excitateur
dont l’activation des récepteurs dans le cerveau cause la dépolarisation
des neurones et finalement la mort neurinale par apoptose.
Suite à l’injection intra-péritonéale de l’acide kaïnique, nous étudierons
le changement de comportement, l’expression de l’apoD endogène
et du transgène, les facteurs d’apoptose (caspase-3), les
facteurs d’inflammation (interleukine-6) chez les souris transgéniques
et les contrôles non-transgéniques. Les résultats obtenus au cours de
ces différentes étapes nous amèneront à comprendre si les souris
transgéniques qui surexpriment l’apoD auront mieux survécu aux effets
induits par l’acide kaïnique ou si l’apoD peut avoir un effet neuroprotecteur.

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4 - Stress oxydatif et malaria: Est-ce que l’Hémozoïne et les oxydants
partagent des effets régulateurs communs sur la production
d’IL-12p70?
Stéfany Bazinet 1, Martin Olivier 2 et Tatiana Scorza 1.
1Dépt. Sc. Biol., UQAM, QC; 2Département de Microbiologie et
d’Immunologie, Université McGill, Montréal, QC, Canada.
L’inhibition systémique de la production d’IL-12 est un facteur important
contribuant à la dysérythropoïèse observée lors de la malaria.
Chez l’homme, il a été démontré que l’Hémozoïne (HZ) induit
la sécrétion d’IL-10 par les monocytes, ce qui conduit à l’inhibition
de l’expression génique de l’IL-12p40. Des effets comparables
sont exercés par des oxydants chimiques via une diminution
du glutathion (GSH) intracellulaire et l’induction d’IL-10. Pendant
l’infection par Plasmodium chabaudi adami, nous avons mesuré
des niveaux élevés d’espèces réactives de l’oxygène (ERO) dans
les macrophages, ceux-ci étant les principales cellules accumulant
l’HZ. Dans la présente étude, l’effet de l’HZ et du diéthylmaléate
(DEM) (agent dépléteur du GSH) sur la production d’IL-
12p40 et d’IL-12p70 a été étudié dans les macrophages de la
moelle osseuse (BMMOs) traités ou non avec de l’interféron-γ
(IFN-γ) précédant une stimulation par le lipopolysaccharide (LPS).
Les niveaux des ERO augmentent dans les BMMOs traités par HZ
et DEM, de même que la sécrétion d’IL-12p70 et IL-10 en réponse
à LPS ; l’effet mesuré sur IL-10 a été plus faible et variable dans les
BMMOs traités par HZ. De plus, les deux composés diminuaient
significativement la sécrétion d’IL-12p70 et IL-12p40 par les
BMMOs traités par IFN-γ puis stimulés par LPS. Il est intéressant de
noter que l’inhibition de la p38 MAPK, qui diminue significativement
la production d’IL-10 et augmente significativement celle
d’IL-12p70 dans les cellules témoins, ne réussissait pas à stimuler
davantage la production d’IL-12p70 dans les BMMOs traités avec
de l’HZ et stimulés par LPS ou à rétablir la réponse déficiente d’IL-
12p70 en réponse à IFN-γ et LPS. L’effet inhibiteur de l’HZ sur la
production d’IL-12p70 semble réfractaire au traitement par GSH
ou N-acétyl cystéine (NAC). Nos résultats suggèrent que l’HZ inhibe
la production d’IL-12p70 par les BMMOs murins via un mécanisme
indépendant des voies de l’IL-10 et de la p38 MAPK.

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Page 23
5 - Rôle du facteur d’inhibition de migration des macrophages,
dans le contrôle de la réponse pro-inflammatoire durant une infection
par Plasmodium chabaudi adami.
Benoît Bélanger 1, Mathieu Cambos 1, Stéfany Bazinet 1, Lin Leng 2,
Richard Bucala 2, Tatiana Scorza 1.
1Departement des Sciences Biologiques, Université du Québec à
Montréal, QC, Canada et 2Department of Internal Medicine, Yale
University School of Medicine, New Haven, CT, USA.
L’anémie induite durant l’infection par le parasite protozoaire
Plasmodium résulte en partie de l’inhibition de la production des
précurseurs érythropoïétiques dans la moelle osseuse par l’action
de cytokines pro-inflammatoire. Le facteur d’inhibition de migration
des macrophages (MIF) est sécrété durant l’infection par
Plasmodium, et entre en synergie avec l’IFN-γ et le TNF-α afin
d’inhiber l’érythropoïèse et la production d’hémoglobine. Dans
notre laboratoire, une neutralisation in vivo de MIF pendant une
infection par Plasmodium c. adami amène à une réduction significative
du pourcentage de réticulocyte circulant avant le pic
d’infection, cependant une production similaire d’hémoglobine
est observée chez les souris neutralisées ou témoins. L’anti-MIF
entraîne une augmentation de la production IL-10 par les cellules
spléniques, tout comme une production accrue de TNF-α et augmentation
de la production IFN-γ par les cellules non-T (CD90 -).
L’élimination des cellules NK CD49 + diminue significativement le
niveau d’IFN-γ dans la population de cellules spléniques CD90 -
traitées avec l’anti-MIF et infectées avec Plasmodium. Ces observations
suggèrent que le MIF a un rôle comparable à celui dans
la régulation des cellules NK dans le placenta. Pris ensemble, nos
résultats tendent à démontrer un rôle important du MIF dans la
modulation de la réponse immunitaire de l’hôte durant une infection
par Plasmodium. Des expériences en cours vont permettre
l’analyse de l’effet du MIF sur précurseurs érythropoïétiques,
dans la moelle osseuse et dans la rate, durant une infection par
Plasmodium c. adami.

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6 - Développement d’un vaccin comestible à base de plantes
exprimant la protéine VP8::VP5Δc-term du rotavirus humain
Bergeron-Sandoval 1,2, L.-P., G. Major 1, A. Girard 1,2, M.-C. St-Louis 1,2,
F. Sarhan 1 et D. Archambault 1,2
1Département de sciences biologiques et 2Centre Biomed,
UQAM, C.P. 8888, Succursale Centre-ville, Montréal, Québec, Canada,
H3C 3P8
Le rotavirus humain (RVH) constitue l’agent principal des diarrhées
infantiles et des gastroentérites aiguës causant près d’un
million de morts par année au niveau mondial. L’exploitation de
la technologie des vaccins comestibles à base de plantes a le
potentiel d’induire une protection contre des pathogènes qui
affectent les muqueuses comme le RVH. Dans cette optique,
nous avons sélectionné les protéines de surfaces virales VP8 et
VP5 de la souche modèle Wa pour développer un vaccin sous
unitaire spécifique au RVH. Ces immunogènes ont la capacité
d’induire des anticorps neutralisants et protecteurs qui bloquent
les virions du RVH dans l’intestin avant l’infection des cellules épithéliales.
La séquence codante de vp8::vp5Δc-term a été clonée
dans un vecteur d’expression bactérien pour produire une protéine
recombinante. Ensuite, la séquence chimérique fut optimisée
puis exprimée dans un système d’expression végétal transitoire.
Les analyses par immunobuvardage avec un anticorps
anti-His et un anticorps spécifique anti-VP8 ont démontré l’expression
de la protéine recombinante VP8::VP5Δc-term dans les
deux systèmes. De plus, l’absence de dommages sur les plants
de tabac indique que l’expression du transgène n’est pas toxique.
Ces résultats constituent le premier rapport sur l’expression
de ces protéines chez les plantes. Les travaux en cours ciblent le
développement de plantes transgéniques stables et leur utilisation
afin d’induire une immunité mucosale protectrice dans un
modèle murin d’infection. Ce projet forme donc une base pour
le développement futur d’un vaccin comestible spécifique au
RVH.
Ce projet a été financé par le programme en Santé du CRSNG
et des IRSC.

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7 - Fonction des RhoGAPs pendant le développement embryonnaire
du nématode Caenorhabditis elegans
Elodie L. Boulier, Sarah Jenna
Département de Chimie/Biochimie, Université du Québec à
Montréal
Les GTPases Rho sont des protéines à l’intersection des voies de
signalisation. Elles intègrent l’information reçue par la cellule et
permettent à la cellule d’adopter un comportement approprié
à son environnement. Les petites GTPases de la famille des Rho
jouent un rôle important dans ces mécanismes d’intégration et
régulent de ce fait divers évènements développementaux et
cellulaires. La fonction d’intégration de ces GTPases dépend
d’une régulation très fine de leur niveau d’activation qui est
elle-même contrôlée par 3 familles de protéines : les RhoGAPs,
les RhoGEFs et les RhoGDIs. Le génome de C. elegans code
pour 6 GTPases Rho, 20 RhoGAPs, 20 RhoGEFs et 1 Rho GDI.
Nous cherchons ici à mieux comprendre les mécanismes de
régulation des GTPases Rho par les RhoGAPs au cours du développement
embryonnaire du nématode C. elegans. La redondance
des RhoGAPs constitue un problème majeur pour étudier
la fonction de ces protéines chez les mammifères. Nous
utilisons donc le nématode pour identifier les règles gérant les
mécanismes de redondance chez les organismes multicellulaires.
Nous cherchons de plus à mieux comprendre les autres types
d’interactions fonctionnelles (synergisme et antagonisme)
permettant aux RhoGAPs, RhoGEFs et RhoGDIs de contrôler la
fonction des GTPases Rho au cours du développement embryonnaire.
Pour ce faire, nous établissons une cartographie
de la spécificité catalytique des RhoGAPs envers les GTPases
Rho (in vitro). Nous établissons aussi des cartes d’interactions
génétiques entre les RhoGAPs aux différents stades du développement
embryonnaire.

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8 – La phagocytose de globules rouges parasités provoque l’apoptose
des macrophages pendant les infections par Plasmodium
chabuadi adami
1Mathieu Cambos, 2Martin Olivier, 2Armando Jardim and 1Tatiana
Scorza
1Université du Québec à Montréal, 2McGill University
La phagocytose de pathogènes opsonisés par le complément
et/ou les anticorps a une importance capitale lors des réponses
immunitaires innée et adaptative. Contrairement aux neutrophiles,
les macrophages (Mθ) sont capables de répéter plusieurs cycles
de phagocytose et de flambée oxydative sans entrer en
apoptose. De manière intéressante, les infections par Plasmodium
sont caractérisées par une augmentation significative du
pourcentage de Mθ apoptotiques. Pendant l’infection, les Mθ
ingèrent une grande quantité de globules rouges parasités (GRP)
et accumulent ainsi dans leur cytoplasme le pigment malarique
nommé hémozoine (HZ). Ce phénomène pourrait être entre relation
directe avec l’induction de l’apoptose chez les Mθ. Pour tester
cette hypothèse, le caractère pro-apoptotique de globules
rouges sains (GRS), de GRP ainsi que celui de l’HZ synthétique a
été évalué in vitro sur des Mθ dérivés de la moelle osseuse
(MθDM) et sur la lignée de Mθ J774. Nos résultats indiquent que
la phagocytose de GRP, mais pas de l’HZ ou de GRS, déclenche
l’apoptose des MθDM et des cellules J774. Cet effet est dose dépendant
et devient observable à partir d’un ratio aussi bas que
25 GRP par Mθ. En plus de leur capacité pro-apoptotique, les
GRP induisent chez les Mθ la sécrétion de facteurs immunosuppressifs
solubles inhibant la prolifération des cellules T CD4 + et
CD8 + stimulées avec la Concanavaline A. Nos travaux futurs porteront
sur l’identification des voies de signalisation impliquées
dans l’induction de l’apoptose ainsi que la possible relation entre
cette dernière et la sécrétion de facteurs immunosuppressifs.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 27
9 – Caractérisation de nouveaux oncogènes au niveau des leucémies
lymphoides chez la souris et l’humain
Cyndia Charfi, Véronique Voisin, Elsy Edouard et Eric Rassart
Centre de recherche BioMed, Département des sciences biologiques,
Université du Québec à Montréal, CP8888, Succursale Centreville,
Montréal, Canada, H3C 3P8.
Deux variants du rétrovirus murin Graffi, GV-1.2 et GV1.4, sont capables
d’induire différents types de leucémies chez la souris. Ces derniers
résultent de la dérégulation du processus de l’hématopoïèse.
Les leucémies induites incluent des leucémies lymphoïdes de type T
et de type B et des leucémies non lymphoïdes de type érythrocytaire,
mégakaryocytaire et myéloïde. Puisque le rétrovirus Graffi induit
ce très large spectre de leucémies, nous l’avons utilisé pour déterminer
les gènes qui seraient potentiellement impliqués spécifiquement
dans les leucémies lymphoïdes et donc dont l’expression reste
inchangée dans les autres leucémies. L’expression génique de ces
cellules leucémiques a été étudiée grâce à la puissante technique
des micropuces à ADN. Les gènes choisis étaient soit déjà connus
dans d’autres types de cancers mais pas dans des leucémies, soit
jamais associés au cancer, ou soit de fonction inconnue. A partir de
la liste de gènes obtenus par cette technique, l’expression de 13
d’entre eux a été validée par RT-PCR semi-quantitative. Afin de
poursuivre le présent projet, nous avons choisi de mener une étude
fonctionnelle pour les trois gènes qui nous sont apparus comme les
plus intéressants c’est-à dire qu’ils avaient une très forte expression
dans un type de leucémie ou encore que leur fonction était inconnue.Le
premier gène retenu, nommé formine-2 (Fmn2) semble spécifique
aux leucémies de type B (selon nos résultats), n’a jamais été
associé au cancer jusqu’ici. Cependant, il appartient à la famille des
formines connues pour leur implication dans l’invasion et la métastase
des cellules cancéreuses à travers le remodelage de l’actine.
Les deux autres gènes retenus sont complètement inconnus (RIKEN).
L’un est spécifique des leucémies de type T et l’autre est spécifique
des leucémies B. La caractérisation de la fonction des deux gènes
RIKEN et la détermination du mode de régulation de l’ensemble des
trois gènes en tant que nouveaux oncogènes dans les leucémies
lymphoïdes chez la souris ainsi que chez l’humain devrait nous permettre
de mieux comprendre le mécanisme d’induction de ces leucémies.

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10 - L’acide valproïque régule positivement l’expression de la
protéine L-isoaspartyl méthyltransférase via la cascade de signalisation
p42/44MAPK/p90rsk1/gsk-3β. Philippe Cournoyer* et Richard Desrosiers
Département de Chimie, UQÀM, Montréal, Canada
Les mécanismes moléculaires impliqués dans les neuropathologies
comme l’épilepsie et les désordres bipolaires sont essentiellement
méconnus. L’acide valproïque (VPA) et le lithium sont des
agents pharmacologiques fréquemment employés pour traiter
les gens souffrant de désordres bipolaires. VPA est aussi un des
anticonvulsivants les plus prescrits pour traiter l’épilepsie. Toutefois,
les mécanismes d’actions de VPA demeurent mal compris.
D’une part, des études ont établis que VPA et le lithium activent
la voie de ERK et induisent l’expression de la protéine Lisoaspartate
méthyltransférase (PIMT) qui catalyse la réparation
des résidus L-isoaspartates anormaux. Cette induction de la PIMT
par le lithium est dépendante de GSK-3 et de la beta-caténine,
tandis que les voies de signalisations impliquées dans l’induction
de la PIMT par VPA restent inconnues. Ici, nous démontrons que
l’expression de la PIMT augmente selon la concentration et la
cinétique de traitement des cellules de glioblastomes U-87 et de
neuroblastomes SH-SY5Y par VPA. De plus, VPA augmente le niveau
d’activation de phospho-ERK44/42 et de phospho-RSK1,
inactive GSK-3 et augmente la stabilisation de la beta-caténine.
L’augmentation de l’expression de la PIMT par VPA est atténuée
avec des inhibiteurs pharmacologiques de la voie de ERK et par
l’inhibition de RSK1 par ARN interférent. Ensembles, ces résultats
démontrent que VPA active la voie de ERK et augmente l’expression
de la PIMT par l’inactivation de GSK-3 suggérant l’implication
de la PIMT dans des maladies neurodégénératives comme l’épilepsie
et les désordres bipolaires.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 29
11 - Formulation de protéines végétales avec matrices à base d’amidon
à des fins vaccinales par voie orale.
Patrick De Koninck 1,3, Denis Archambault 2,3, Fathey Sarhan 2 et Mircea
Alexandru Mateescu 1,3 Université du Québec à Montréal (1) Département
de Chimie; (2) Département des Sciences Biologiques; (3) Centre
de Recherche Biomédicales (BioMed)
Plusieurs organismes pathogènes pénètrent dans l’organisme par les muqueuses
de sorte qu’il est plausible de prévenir les infections qui y sont
associées par l’induction de l’immunité mucosale avec des immunogènes
d’intérêt. Une possibilité pour l’induction d’une immunité locale intestinale,
est de faire appel à des vaccins oraux formulés à base de plantes
transgéniques. Une limite inhérente à cette approche est la barrière stomacale,
en égard du pH acide et de l’activité protéolytique locale qui
peut détruire les immunogènes. Il s’avère ainsi important de protéger les
protéines immunogènes en incorporant les extraits végétaux dans une
matrice polymérique. Dans cette étude, l’excipient sélectionné a été le
carboxyméthyl amidon (CMA) qui offre, en plus de la protection gastrique,
la libération contrôlée du principe actif au niveau intestinal
(Calinescu et al. Eur. J. Pharm. Biopharm., 2005). Des comprimés monolithiques
de 300 mg et de 9 mm de diamètre, contenant 25% d’extrait
végétal préalablement lyophilisé, ont été obtenus par compression directe
pendant 30 sec à une pression de 2,5 T/cm2. L’analyse des protéines
formulées avec le CMA soumis à des conditions gastriques in vitro, a
montré un profil électrophorétique des protéines récupérées comparable
à celui obtenu avant la formulation. Par après, les protéines végétales
formulées avec le CMA furent libérées dans un milieu simulant les
conditions intestinales; la dissolution complète fut observée dans les 6
premières heures, accompagnée toutefois d’une dégradation des protéines
végétales. Cette dégradation protéinique fut contrée par l’addition
d’inhibiteurs de protéases dans le milieu de dissolution. L’étude de la
libération de différentes charges en extrait végétal additionné de 0,5 %
d’albumine bovine, a démontré une libération optimale avec une
charge des comprimés de 30 % en extrait végétal. L’ensemble des résultats
a montré le potentiel d’utilisation des comprimés CMA pour véhiculer
du matériel immunogénique contenu dans des extraits de plantes.
Des expériences sont actuellement en cours pour analyser l’effet de divers
types d’inhibiteurs de protéases sur la préservation des protéines
d’intérêt et pour vérifier l’activité fonctionnelle des immunogènes libérés
à partir des comprimés CMA. Des expériences sont aussi planifiées afin
d’utiliser des comprimés CMA à des fins de vaccination orale avec des
extraits de plantes dans le but de prévenir différents types d’infections.
Travaux financés par le CRSNG.

Page 30
12 - Influence de l’antagoniste du PTH1R (PTH/PTHRP receptor) au niveau
de l’expression des ARNm des protéines impliquées dans le
transport transplacentaire du calcium.
Maude Ethier Chiasson, Mathilde Riols et Julie Lafond
Laboratoire de Physiologie Materno-Fœtale, Centre de recherche
BioMed, UQAM
Le placenta assure les échanges continus entre la mère et le fœtus,
qui s’effectuent via une unité fonctionnelle multinucléée, bipolaire,
constituée d’une membrane en bordure en brosse du côté maternel
(BBM) et d’une membrane basale plasmique du côté fœtal (BPM).
Cette structure nommée syncytiotrophoblaste forme une barrière
sélective entre le sang maternel et le sang fœtal. Le calcium (Ca 2+)
est un ion essentiel pour le développement fœtal. Durant la grossesse,
30g de Ca 2+ sont transportés de la mère au fœtus via le placenta,
à un taux de 140mg/kg/jour durant le dernier tiers. Cet ion
diffuse passivement à travers la BBM des syncytiotrophoblastes via
des canaux (TRPV5 et TRPV6) puis capté par des protéines de liaisons
calciques (CaBP-28K, TCTP, etc) afin d’être acheminé à la BPM. Pour
passer dans la circulation fœtale, le Ca 2+ nécessite un transport actif
via des pompes calciques ATPases telles que les PMCA1 et PMCA4. Il
est aussi possible que les échangeurs Na +/Ca 2+ (NCX) soient impliqués.
La PTHrP, hormone connue pour être hypercalcémiante, aurait
un rôle à jouer dans le transport du calcium. L’action paracrine de
cette hormone est possible via le PTH1R. Dans la présente étude, les
cellules de lignées JEG-3 ont été utilisées afin d’observer l’influence
d’un antagoniste au PTH1R, le PTH (7-34), au niveau de la régulation
de l’expression des ARNm des protéines impliquées dans le transport
du Ca 2+, ainsi qu’un niveau du transport de Ca 2+ par ces cellules.
Nos résultats démontrent qu’une inhibition du PTH1R durant 4 jours
mène à une diminution de l’expression des ARNm des NCX, à une
augmentation de l’expression des ARNm de TRPV6, tandis que l’internalisation
du Ca 2+ est augmentée. Après 2 jours de traitement, une
légère diminution de l’expression des ARNm de ces transporteurs est
observée. De plus, le transport du Ca 2+ semble être affecté seulement
à la vélocité initiale, traduisant une altération de la capacité
des cellules à transférer le Ca 2+, et ce principalement lors de l’entrée.
Par ailleurs, nous n’observons aucune différence au niveau des valeurs
des plateaux. En conclusion, nos résultats suggèrent que l’action
de la PTH/PTHrP via le PTH1R ne joue pas un rôle clé dans la régulation
des niveaux d’expression des principales protéines impliquées
dans le transport du Ca 2+.

Centre de Recherches Biomédicales
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13 - Un axe de signalisation MT1-MMP / glucose-6-phosphate
transporteur fonctionnel est nécessaire à la mobilisation du calcium
intracellulaire induit par la sphingosine-1-phosphate chez
les glioblastomes
Simon Fortier, Dominique Labelle, Robert Moreau et Borhane Annabi
Laboratoire d’Oncologie Moléculaire, Département de Chimie,
Centre BioMed, UQAM.
Problématique : Nous avons récemment démontré qu’un axe
moléculaire liant les fonctions de signalisation cellulaire de MT1-
MMP à celles du transporteur du glucose-6-phosphate influençait
la survie et le chemotaxisme des cellules U87 de glioblastomes.
Hypothèse : Puisque la sphingosine-1-phosphate (S1P), un facteur
plaquettaire, agit justement sur la survie et la migration cellulaire
via une mobilisation du flux calcique, nous avons évalué la contribution
de MT1-MMP et de G6PT dans la réponse cellulaire des U-
87 au S1P. Résultats : Nous démontrons que l’acide chlorogénique
et la (-)-epigallocatechine-3-gallate, respectivement des
inhibiteurs de G6PT et de MT1-MMP, diminuaient la mobilisation
intracellulaire du Ca2+ induite par le S1P. De la même façon, l’ajout
de PD98059 (inhibiteur de MEK), de U73122 (antagoniste de
la phospholipase C), ou encore l’addition de Y27632 (inhibiteur
de la kinase RhoA) inhibait aussi la mobilisation du Ca2+. L’inhibition
génique de MT1-MMP ou de G6PT à l’aide d’ARN interférant
(siRNA) diminuait la mobilisation Ca2+ par le S1P, tandis que seule
la surexpression de MT1-MMP induisait une plus grande mobilisation
de Ca2+. Alors que la phosphorylation de la kinase ERK était
induite par le S1P dans les conditions contrôles, cette réponse
était abolie lorsque l’expression génique de MT1-MMP et de G6PT
était diminuée. Conclusion : Nos résultats confirment qu’un axe
de signalisation MT1-MMP/G6PT fonctionnel doit être présent afin
d’évoquer une mobilisation calcique adéquate en réponse à
des lipides bioactifs circulants tels le S1P. Le ciblage thérapeutique
des fonctions de MT1-MMP ou de G6PT pourrait réduire le
potentiel invasif des cellules tumorales cérébrales.

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14 - Développement d’un modèle nématode pour l’étude des mécanismes
pathologiques responsable du retard mental chez l’homme
Sharon Harel 1 , Affaf Megherbi 1 , Steen B. Schougaard 1, Ricardo Izquierdo
2 et Sarah Jenna 1
1Département de Chimie-Biochimie, Université du Québec à Montréal
(UQAM), Montréal, QC
2 Département d’Informatique, Université du Québec à Montréal
(UQAM), Montréal, QC
Le retard mental est une déficience globale des capacités cognitives
d’un individu associée à une altération de la structure et de la densité
des épines dendritiques. Cette altération résulte d'un déséquilibre des
voies de signalisation contrôlant la formation des synapses et la modulation
de l'efficacité de la transmission synaptique au niveau des neurones
de l’hippocampe. Ces mécanismes dépendent de l’activation des récepteurs
du glutamate (mGluR, NMDAR, AMPAR) localisés aux membranes
post-synaptique de ces neurones. La transduction et l’intégration
des voies de signalisation activées en aval de ces récepteurs nécessitent
la régulation du niveau d’activation des GTPases de la superfamille des
Ras. Ainsi, de nombreuses mutations entrainant un retard mental ont été
identifiées dans des gènes codant pour des régulateurs de ces GTPases.
Ces gènes incluent α-PIX, un régulateur des GTPase Rho. Cette protéine
forme un complexe avec PAK1 et PAK3, deux effecteurs des GTPases
Rho, associées aussi à la plasticité synaptique et au retard mental, et
avec GIT1, un régulateur des GTPases ARF. Ce complexe GIT/PIX/PAK est
impliqué dans la régulation de l’adressage d’AMPAR à la membrane
post-synaptique et la synaptogénèse chez les mammifères. Actuellement
nous tentons de définir la fonction neurologique d’ α-PIX, PAK1/3 et
GIT-1 chez le nématode Caenorhabditis elegans afin de fournir à la
communauté scientifique un outil pour la mise au point de stratégies
thérapeutiques contre certaines formes de retard mental. La caractérisation
fonctionnelle des homologues de ces gènes chez C. elegans, pix-
1, pak-1 et git-1 a démontré leur implication dans la morphogenèse et
ou l’innervation du pharynx ainsi que dans le contrôle d’un comportement
associé à la recherche de nourriture. Ces mécanismes développementaux
et comportementaux dépendent de mécanismes biochimiques
nécessaires au contrôle de la synaptogénèse et de la plasticité
synaptique chez les mammifères. Nos résultats suggèrent donc une
grande conservation fonctionnelles de GIT PIX et PAK entre le nématode
et les mammifères et supporte donc la validité de notre modèle pour
étudier les mécanismes biologiques impliqués dans le développement
du retard mental

Centre de Recherches Biomédicales
Page 33
15 - Effet in vitro de souches mutantes du virus de la stomatite vésiculeuse
sur le métabolisme cellulaire en relation avec l’expression des effets
cytopathiques rattachés à l’infection.
Janelle, Valérie 1,2; Brassard, Frédéric 2; Roy, Alain 2; Lamarre, Alain 1 et Poliquin,
Laurent 2.
1INRS-Institut Armand Frappier, Laval, Québec, 2Biomed UQAM, Département
des Sciences biologiques, UQAM, Montréal, Québec
Le virus de la Stomatite Vésiculeuse (VSV) est de plus en plus exploré
dans le monde scientifique en vue d’applications en virothérapie oncolytique.
En effet, ses propriétés d’induction d’effets cytopathiques rapides
et la sensibilité particulière de certains types de cellules tumorales
ayant perdu un élément de la réponse à l’interféron en ont fait un outil
de choix. Deux mutants thermosensibles, TP5 et TP6, ainsi que leurs révertants
résistants à la chaleur, TP5R1 et TP6R1, retiennent l’attention pour
plusieurs de leurs caractéristiques : induction plus rapide d’effets cytopathiques,
forte induction de la réponse interféron et incapacité à persister
dans les cellules infectées. Cette combinaison permet de cibler efficacement
les cellules tumorales déficientes dans la réponse à l’interféron
tout en gardant les cellules normales environnantes à l’abri. C’est donc
dans le but de mieux comprendre les mécanismes de l’élaboration des
différents effets cytopathiques et des liens existants entre eux que la
transcription cellulaire, de même que l’induction d’interféron et d’apoptose,
ont été étudiés suite à l’infection par ces virus. Il en est ressorti une
efficacité marquée dans l’inhibition de la transcription cellulaire par tous
les mutants testés par rapport à la souche parentale HR. Des résultats
préliminaires nous permettent de penser que ces variants, induisant rapidement
l’interféron, induisent également l’apoptose plus rapidement
que la souche parentale dans certains types cellulaires. Ceci apporte
du même coup un important paradoxe sur la transcription d’ARNm d’interféron.
En effet, une protéine de la matrice mutée a été associée à la
perte d’effet sur la transcription ainsi que sur le transport nucléocytoplasmique
dans la cellule infectée, permettant alors la sécrétion d’interféron.
Par contre, TP5, TP6 et leur révertant sont composés d’une protéine M
sauvage et inhibent la transcription, mais gardent la capacité d’induire
l’interféron. Des analyses de séquence montrent par ailleurs que TP5, TP6
ainsi que TP5R1 et TP6R1 ont tous une mutation dans la glycoprotéine de
l’enveloppe, G. L’analyse de leurs propriétés pourrait donc apporter de
nouveaux éléments de compréhension des événements menant à la
séquestration de la machinerie cellulaire et, en particulier, permettre
d’identifier un nouveau facteur viral impliqué, la protéine G.

Page 34
16 - Les flavonols d’origine alimentaire, de nouveaux inhibiteurs du
récepteur au facteur de croissance hépatocytaire
David Labbé 1,2*, Mathieu Provençal 1, Sylvie Lamy 1, Denis Gingras
1,Richard Béliveau 1,2,
1Laboratoire de médecine moléculaire, Centre de cancérologie
Charles-Bruneau, Hôpital Sainte-Justine, Montréal, Canada, 2Département
de Chimie, BioMed, UQÀM, Montréal, Canada
Introduction : Des recherches récentes ont démontré que Met, le
récepteur du facteur de croissance hépatocytaire (HGF), est une
voie de signalisation importante impliquée dans le développement
des médulloblastomes, un cancer du système nerveux central pédiatrique.
Lorsqu’activée, la signalisation par Met déclenche des
mécanismes de survie et de prolifération cellulaire, en plus de participer
au potentiel invasif des cellules tumorales. Les études épidémiologiques
ont confirmé qu’une alimentation riche en fruits et légumes
aurait un effet bénéfique sur la prévention de certaines maladies tel
le cancer par l’action de divers mécanismes encore peu compris.
Dans cette étude, nous avons exploré l’effet inhibiteur d’une famille
de polyphénols d’origine alimentaire, les flavonols, sur le récepteur
du HGF (Met). Méthodes : Nous avons étudié la capacité des flavonols
à inhiber la migration de cellules de médulloblastome (DAOY)
stimulées au HGF, dans des chambres de type Boyden. Les effets des
flavonols sur la phosphorylation de Met, de ERK-1/2 (voie des MAP
kinase) et de Akt ont été déterminés par immunobuvardage de type
Western. Résultats : Les résultats des expériences indiquent que certains
flavonols entravent la migration des DAOY stimulées au HGF.
Cet effet est probablement lié à la capacité de ces molécules nutraceutiques
à inhiber la phosphorylation du récepteur Met, de ERK-
1/2 et de Akt. En outre, nous avons montré que l’effet inhibiteur de
certains flavonols sur le potentiel invasif des DAOY était comparable
à un inhibiteur synthétique spécifique à Met, le SU11274. Conclusion :
Ensemble, ces résultats représentent un point de départ très intéressant
dans la compréhension des effets anticancéreux de certains
flavonols in vitro. De plus, ces résultats mettent au jour un réel potentiel
de molécules issues de l’alimentation à inhiber la voie de signalisation
par Met à un niveau comparable à celui d’un inhibiteur pharmacologique.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 35
17 - L’acquisition du phénotype invasif des cellules souches cancéreuses
CD133(+) dérivées de tumeurs cérébrales requiert MT1-MMP
et MMP-9
aCarl Laflamme, bShanti Rojas-Sutterlin, aBorhane Annabi, bRichard
Béliveau.
aLaboratoire d’Oncologie Moléculaire, Département de Chimie,
Centre de Recherche BioMED, UQAM, Montréal, Québec; bCentre
de Cancérologie Charles-Bruneau, Hôpital Sainte-Justine-UQAM,
Montréal, Québec.
Le marqueur de surface neuronal CD133 est enrichi dans les cellules
cancéreuses souches, soit une petite population de cellule capable
d’initier un développement tumoral. Les cellules cancéreuses souches
CD133(+) cérébrales sont chimiorésistances et radiorésistantes
faisant impliquer des mécanismes moléculaires encore mal connus.
Les neurosphères, un modèle d’étude de cellules cancéreuses souches
CD133(+) formant des agrégats in vitro, ont été exploitées dans
cette étude. Sachant que les métalloprotéinases MT1-MMP et MMP-
9 sont impliquées dans l’acquisition du phénotype invasif et radiorésistant
des tumeurs cérébrales, nous avons caractérisé leur expression
et contribution lors de la formation des neurosphères CD133(+)
dans les cellules DAOY de médulloblastomes. Ces cellules sont cultivées
en monocouches CD133(-) ou en neurosphères CD133(+). L’expression
de CD133, VEGF et bFGF a été mesurée en qRT-PCR, par
cytométrie de flux, et par immunobuvardage. Des techniques d’ARN
interférant (siRNA) ont été employées pour inhiber l’expression de
MT1-MMP et de MMP-9. La migration cellulaire s’est faite dans des
chambres de Boyden. Nos résultats indiquent que l’expression génique
de CD133, VEGF et bFGF augmente in vivo pendant le développement
tumoral cérébral chez des souris et in vitro lorsque les DAOY
forment des neurosphères CD133(+) corrélant ainsi avec une augmentation
du caractère invasif/migratoire des cellules CD133(+). La
transfection des DAOY avec siMT1-MMP et siMMP-9 réduit spécifiquement
leur capacité à générer des neurosphères et d’acquérir un
potentiel invasif. En résumé, nous montrons que la MT1-MMP et la
MMP-9 contribuent au phénotype invasif durant la formation de neurosphère
CD133(+) dans les cellules de médulloblastomes. Une augmentation
de la MMP-9 peut contribuer à l’ouverture de la barrière
hémato-encéphalique alors qu’une augmentation de la MT1-MMP
mène à une infiltration des tumeurs cérébrales. En conclusion, nous
démontrons que cibler la MT1-MMP et la MMP-9 contribuerait à réduire
la formation de cellules cancéreuses souches et à diminuer leur
phénotype invasif.

Page 36
18 - Caractérisation biochimique de l’ARN hélicase putative
Dbp4 de Saccharomyces cerevisiae.
Martin Lapensée et François Dragon.
Centre BioMed, Département des sciences biologiques, UQÀM
Les mécanismes qui entrent en jeu dans la maturation de l’ARN
ribosomique (ARNr) restent toujours obscurs. Dbp4 est une ARN
hélicase putative qui fait partie du groupe des hélicases ‘’DEADbox’’.
Chez la levure Saccharomyces cerevisiae, Dbp4 aurait un
rôle à jouer dans la maturation du pré-ARNr 35S. Les ARN hélicases
ont généralement une activité ATPasique dépendante de la
présence d’ARN. De plus, la plupart des hélicases possèdent des
domaines supplémentaires en N- et en C-terminal. Ces domaines
pourraient être nécessaires pour l’activité et/ou pour conférer la
spécificité à un substrat. Nous désirons déterminer les caractéristiques
biochimiques de Dbp4. Cette enzyme est pourvue d’un très
long domaine C-terminal qui contient un motif de liaison protéique
« coiled-coil ». La présence de ce motif laisse penser que
Dbp4 pourrait nécessiter l’assistance de protéine(s) cofacteur(s)
pour avoir une activité ATPasique et/ou hélicasique. Nous avons
fait des tests d’interaction dans le système double hybride de levure
et nous avons trouvé que Dbp4 a une interaction avec une
série de protéines. Des tests in vitro seront nécessaires pour confirmer
que les interactions protéine-protéine sont directes. Un test
colorimétrique qui permet d’analyser l’activité ATPasique de
Dbp4 recombinante a été utilisé. Le pH (7.5) et la température
(37°C) nécessaires pour avoir une activité ATPasique optimale
ont été trouvés grâce à ce test. Nous avons démontré que l’activité
ATPasique de Dbp4 augmente de quatre fois en présence
d’ARN. Finalement, la protéine Dbp4 recombinante sans la section
C-terminale a été produite et des tests d’activité ATPasique
ont été effectués. Selon nos observations, la section C-terminale
de Dbp4 joue un rôle déterminant pour l’activité ATPasique.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 37
19 - Effet de la formulation pharmaceutique sur la perméabilité
membranaire du Fluvastatin
Germain Larocque 1,2, Ferroudja Iachourene 2, Alexandre A. Arnold
1, Yves Mouget 2 and Isabelle Marcotte 1
1Département de Chimie, UQAM, C.P. 8888, Succursale Centre-
Ville, Montréal (Québec), Canada H3C 3P8. 2Corealis Pharma
Inc., 141 Avenue Président-Kennedy Suite SB-6520, Montréal
(Québec), Canada H2X 3Y7
Le but de ce travail est d’identifier le mécanisme par lequel la
formulation pharmaceutique altère la perméabilité membranaire
du Fluvastatin-Na (FS-Na), un médicament anticholestérolémique.
La perméabilité de l’ingrédient actif à travers la paroi gastro-intestinale
est un des facteurs important régissant l’absorption,
et donc la biodisponibilité du médicament. Une étude de perméabilité
a été effectuée en utilisant des membranes artificielles
lipophiles constituées d’isopropylmyristate, d’alcool isopropylique
et d’eau. Les formulations de FS-Na ont été préparées avec des
proportions croissantes de CaCO3 et NaHCO3, et la perméabilité
à travers la membrane a été mesurée par chromatographie en
phase liquide. Les résultats montrent que l’ajout de NaHCO3 et
de CaCO3 diminue la perméabilité du FS-Na. Des résultats préliminaires
de spectroscopie infrarouge sur des membranes d’entérocytes
modèles composées de dimyristoyl-phosphatidylcholine
(DMPC) neutre et de dimyristoyl-phosphatidylsérine (DMPS) anionique
ont montré une interaction préférentielle du FS-Na avec la
DMPS, et ont suggéré une réduction de la pénétration du médicament
dans les membranes en présence du NaHCO3. Afin de
vérifier ces résultats, nous avons effectué des expériences de
RMN permettant de sonder les effets du FS-Na et de l’excipient
sur les chaînes lipidiques (RMN 2H) et la tête polaire (RMN 31P) des
phospholipides. Les résultats montrent que le FS-Na affecte la fluidité
membranaire. De plus, ils confirment que l’excipient altère
l’interaction du médicament avec la membrane, ce qui serait
attribuable à une diminution de la solubilité du FS-Na induite par
une augmentation de pH.

Page 38
20 - Src régule la différenciation des trophoblastes humains via ERK1/2,
p38 et FAK.
Frédérique Le Bellego, Georges Daoud et Julie Lafond
Laboratoire de Physiologie Materno-Fœtale, Centre de recherche Bio-
Med, UQAM, Montréal, Québec
Le développement et la croissance du fœtus dépendent entre autre du
transfert optimal des nutriments de la circulation maternelle au fœtus
par les syncytiotrophoblastes (STB) du placenta. Les STB se forment par
fusion et différenciation des cytotrophoblastes (CTB) indifférenciés et
mitogènes. Ces processus sont caractérisés par une différenciation morphologique,
définie par la fusion des CTB mononucléés avec le syncytium
adjacent et par une différenciation biochimique, caractérisée par
la sécrétion d’hormones placentaires comme l’hormone gonadotrophine
chorionique (hCG). Il est donc crucial, pour un développement
fœtal normal et sain, de comprendre les mécanismes contrôlant la formation
des STB. In vitro, nous avons précédemment montré que la différenciation
des CTB est régulée par des kinases de la famille des Src (SFK)
et par les Mitogen-Activated Protein Kinases (MAPK) ERK1/2 et p38. Le
mécanisme d’activation des MAPK par les membres de la famille des
SFK est encore méconnu dans les CTB en cours de différenciation. Les
SFK peuvent phosphoryler et activer la focal adhesion kinase (FAK), qui à
son tour activera des cascades de phosphorylation et notamment celle
des MAPK. Nous avons donc étudié l’implication de ces différentes kinases
(SFK et FAK) dans l’activation des MAPK lors de la différenciation des
CTB en STB. Pour cela, nous avons réalisé des cultures primaires de CTB,
isolés de placentas humains à terme, en présence de différents inhibiteurs
de SFK, PP2 et Herbimycine A, qui agissent sur différents membres
de la famille des SFK. L’activation des différentes kinases (FAK, ERK1/2,
p38) est étudiée par immunwestern blot. La présence de FAK est évaluée
par real time PCR. Les taux d’hCG sont mesurés par ELISA. Nos résultats
montrent l’expression de différentes isoformes de FAK par les CTB
humains. Nous démontrons que PP2, inhibiteur spécifique de Src, lck, fyn
et Hck, stimule l’activation de ERK1/2 et p38 après 24 h de traitement et
ce jusqu’à 3 jours de traitement. Par contre, PP2 inhibe la phosphorylation
de la kinase FAK sur plusieurs sites incluant Tyr 397, 407 et 576. L’herbimycine
A, inhibiteur spécifique de Src, quant à lui, inhibe l’activation de
ERK1/2, p38 et FAK. En conclusion, Src régule la différenciation biochimique
des CTB en STB en modulant l’activation de FAK, de ERK1/2 et p38.
Cependant, l’effet de l’inhibiteur PP2 sur l’activation des MAPK suggèrent
l’existence d’autres voies de signalisation impliquées dans le
contrôle de la différenciation des CTB humains in vitro. (Subventionnée
par le STIRRHS)

Centre de Recherches Biomédicales
Page 39
21 - Identification de nouvelles protéines associées au petit ARN nucléolaire
snR30
Vincent Lemay et François Dragon
Centre de recherche BIOMED, Département des sciences biologiques,
UQAM
Le nucléole est un compartiment spécialisé où les ARN ribosomiques
(ARNr) sont transcrits sous forme de précurseurs (pré-ARNr), modifiés,
puis assemblés pour former les sous-unités du ribosome. Chez la levure
Saccharomyces cerevisiae, l’ADN ribosomique est transcrit en
un précurseur de 35S qui code pour l’ARN 18S de la petite sous-unité
ribosomique ainsi que les ARN 5.8S et 25S de la grande sous-unité du
ribosome. Le nucléole contient une centaine de petites ribonucléoprotéines
nucléolaires (snoRNP), qui sont constituées d’une molécule
d’ARN (snoRNA) et de quelques protéines. Les snoRNA forment deux
grandes familles, la famille à boîtes C/D et à boîtes H/ACA. Ces
snoRNA servent de guides pour des modifications posttranscriptionnelles
des ARNr, i.e. méthylation des riboses en 2’-OH (C/
D) et pseudouridylation, soit l’isomérisation d’uridines en pseudouridines
(H/ACA). Certains de ces snoRNA sont requis pour des réactions
de clivage des précurseurs des ARNr; ces clivages servent à éliminer
des régions espaceur dans le pré-ARNr. Les snoRNP de la famille H/
ACA contiennent quatre protéines essentielles : Cbf5, Gar1, Nhp2, et
Nop10. Contrairement aux autres snoRNA H/ACA, snR30 n’a pas de
cible de pseudouridylation. Par contre, la snoRNP snR30 est essentielle
aux clivages menant à la production de l’ARNr 18S, ce qui n’est
pas le cas des autres snoRNA H/ACA. Notre hypothèse est que snR30
contient des protéines spécifiques nécessaires à sa fonction. Nous
avons produit une version modifiée de snR30 qui peut être purifiée
par chromatographie d’affinité. Des analyses d’ARN par hybridation
Northern et marquage au pCp indiquent qu’il est possible de purifier
spécifiquement snR30 par chromatographie d’affinité. De plus, après
étude des échantillons purifiés par immunobuvardage, coloration de
gels au nitrate d’argent et spectrométrie de masse, nous remarquons
que snR30 purifiée est associée aux quatre protéines H/ACA
(Cbf5, Gar1, Nhp2, et Nop10), mais aussi à cinq autres protéines,
dont trois sont codées par des gènes dupliqués. Sur ces huit possibilités,
nous avons confirmé par immunoprécipitation que six de ces
protéines interagissent avec snR30 in vivo.

Page 40
22 - Influence of drying method of carboxymethyl high amylose starch
(CM-HAS) derivatives on physical properties and drug release profiles.
M. Lemieux 1, P. Gosselin 2, M-A. Mateescu 1
1Departement of Chemistry and Centre BioMed, Université du Québec
à Montréal, C.P. 8888, Succ. A, Montréal., Qué., Canada, H3C 3P8;
2Corealis Pharma Inc, 141 President-Kennedy, suite SB-6520, Montreal,
Qué., Canada, H2X 3Y7
Purpose. Investigate the influence on physical and drug release properties
of carboxymethyl high amylose starch (CM-HAS) derivatives produced
in powder forms using with three different drying methods. The
CM-HAS is a cationic polymer to be used as excipient for solid oral dosage
forms for gastric protection and controlled delivery. Methods. The
CM-HAS derivatives were synthesized from high amylose starch by varying
the amounts of monochloroacetic acid used to substitute hydroxylic
group by carboxymethyl group. The obtained CM-HAS gels
with 0.03, 0.14 and 0.25 of degrees of substitution (DS) were dried by
three different methods i.e. solvent (acetone) precipitation (SP), spray
drying (SD) and lyophilisation (LY). As control, non-derivatized high
amylose starch (HAS-0) was also prepared, by treatment with sodium
hydroxide only, and dried by the same methods as the other CM-HAS
derivatives. The physical properties of the different CM-HAS derivatives
(including HAS-0) powders were characterized by scanning electron
microscopy, bulk and tapped densities, x-ray powder crystallography,
differential scanning calorimetry and thermo-gravimetric analysis. Tablets
(500 mg) of CM-HAS derivatives were formulated by dry compression
with acetaminophen (20% of drug loading) as drug tracer. The
physical properties of the tablets were characterized by disintegration,
friability, hardness and swelling ratio. The drug delivery properties of
the CM-HAS derivatives and of HAS-0 were evaluated by in vitro dissolution
test in simulated gastric fluid (pH 1.2) for two hours followed by
simulated intestinal fluid (pH 6.8) for 24 hours. Results. The drying process
had a significant impact on the morphology, surface properties,
particle sizes and water content of the different CM-HAS powders,
leading thus to different physical properties of compressed powder
(tablets). Also, it was found that CM-HAS derivatives dried by LY did
not present gastric protection. The drug release of the CM-HAS derivatives
dried by SP and SD were comparable and varies from 6 to 16
hours increasing with DS. Conclusion. The SP and the SD processes are
relevant drying methods to produce CM-HAS derivatives as modified
release agents. Furthermore, physical properties of powders prepared
by SP method were more suitable for industrial pharmaceutical processes.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 41
23 - Régulation du transporteur du glucose-6-phosphate par HIF-
1α: Impact sur la survie et la mobilisation des cellules souches
mésenchymateuses en hypoxie
Simon Lord-Dufour et Borhane Annabi
Laboratoire d’Oncologie Moléculaire, Département de Chimie,
Centre BioMed, UQAM.
L’une des principales caractéristiques des cellules souches mésenchymateuses
(MSC) est leur capacité à survivre en conditions
hypoxiques. Le transporteur du glucose-6-phosphate (G6PT) permet,
par ailleurs, un contrôle métabolique contribuant à la mobilisation
et à la survie des MSC. But : Les effets d’un environnement
faible en oxygène (1,2% O2) sur l’expression de G6PT sont inconnus
et pourraient expliquer en partie la contribution et le recrutement
des MSC au centre d’un foyer tumoral. Résultats : Nous
avons découvert par qRT-PCR que G6PT ainsi que la sous-unité
catalytique G6PC-3 du système glucose-6-phosphatase sont significativement
exprimés, tandis que l’expression des isoformes
G6PC-1 et G6PC-2 était indétectable. L’environnement hypoxique
ainsi que l’hypoxie artificielle recréé suite à un traitement au
chlorure de cobalt (CoCl2), induisent à la fois l’expression de
G6PT, du facteur de croissance de l’endothélium vasculaire
(VEGF), et du facteur inductible hypoxique-1α (HIF-1α), mais pas
de G6PC-3. L’analyse de la séquence promotrice du gène de
G6PT révèle la présence de sites potentiels de liaison pour HIF-1α.
La diminution à l’aide d’ARN interférant (siRNA) du gène encodant
HIF-1α antagonise l’induction de G6PT ainsi que de VEGF
dans les MSC en conditions de cultures hypoxiques. Finalement,
nous avons généré un modèle de MSC exprimant constitutivement
HIF-1α, et avons observé une augmentation significative
des niveaux endogènes de l’expression de G6PT, de la mobilité
cellulaire ainsi que de la résistance à l’apoptose. Conclusion :
Nos résultats démontrent un axe de régulation métabolique de
G6PT dépendant de HIF-1α. Cet axe contribuerait à la flexibilité
métabolique caractérisant les MSC et leur permettant de survivre
dans des conditions telles l’ischémie ou le développement tumoral
caractérisé par l’hypoxie et la privation en nutriments.

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24 - Rôle de ERK1/2 dans la régulation de l’expression de la stéaroyl
CoA désaturase-1 par la leptine.
Mauvoisin D, Ducheix S et Mounier C.
Centre de recherche BioMed, Département des Sciences Biologiques,
Université du Québec à Montréal, Montréal, Québec, Canada.
La Stéaroyl-CoA Désaturase 1 (SCD1) est une enzyme hépatique
impliquée dans la synthèse des acides gras monoinsaturés. Une
forte activité de l’enzyme SCD1 ainsi qu’une altération du ratio
acides gras saturés / insaturés est retrouvée dans diverses pathologies
telles que l’obésité, le diabète de type II et le cancer. Principalement
transcriptionnelle, la régulation de SCD1 est sous le
contrôle de divers facteurs nutritionnels (ex: glucose) et hormonaux
: elle est activée par l’insuline et inhibée par la leptine. Notre
objectif était de caractériser les voies de signalisation impliquées
dans l’action de la leptine sur la régulation de l’expression
du gène SCD1. Nous avons déterminé le niveau d’expression de
SCD1 par RT-PCR et par immuno-buvardage, ainsi que le niveau
de phosphorylation de ERK1/2 sur des cellules HepG2 traitées
avec de la leptine en présence ou non d’inhibiteurs spécifiques
de ERK1/2 (PD98059) et Jak2 (AG490). Nous avons réalisé les mêmes
traitements sur des cellules transfectées avec différentes délétions
du promoteur du gène aviaire SCD1 clonées en amont du
gène rapporteur de la luciférase. L’inhibition de la voie ERK1/2
par PD98059 provoque une augmentation du niveau d’expression
de SCD1 (ARNm, protéine et activité promotrice). Lorsque la
leptine est administrée aux cellules, l’expression de SCD1 est diminuée
tandis que la phosphorylation de ERK1/2 est augmentée.
Lorsque les cellules sont prétraitées avec le PD98059, l’effet de la
leptine sur SCD1 est aboli en parallèle avec la phosphorylation
de ERK1/2. Le même constat est réalisé lors d’un prétraitement
avec AG490. Ces résultats montrent, tout d’abord l’implication
de la voie ERK1/2 dans l’inhibition de l’expression de SCD1. De
plus nous démontrons clairement que la leptine inhibe l’expression
de SCD1 par l’intermédiaire de l’activation de la voie ERK1/2
et ceci dépendamment de la kinase Jak2.

Centre de Recherches Biomédicales
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25 - Effet neuroprotecteur de l’apolipoprotéine D contre la toxicité
induite par H2O2 au niveau de neuroblastomes humains SHSY-5Y
Ouafa Najyb et Éric Rassart.
Centre de recherche Biomed, Dépt. Sc. Biol., UQAM, CP8888, Succursale
Centre-ville, Montréal, Canada, H3C 3P8.
L’apolipoprotéine D (ApoD) est une lipocaline dont le rôle principal
est le transport de petites molécules hydrophobes. De par sa large
distribution tissulaire et son association avec une grande variété de
ligands, l’apoD semble être une protéine multifonctionnelle dont la
fonction varie d’un organe à un autre. L’apoD est largement synthétisée
dans le système nerveux central (SNC) des mammifères. Cette
expression s’y trouve augmentée suite à des lésions et dégénérescences.
En effet, un taux élevé de l’apoD est noté dans certaines
neuropathologies telles que les maladies d’Alzheimer, Parkinson et
Niemann-Pick. Cette importante modulation de l’expression de l’apoD
s’établit spécifiquement au niveau des sites de lésions dans le
SNC, suggérant ainsi un possible rôle de l’apoD dans la protection
des neurones en situation de stress. La question se pose donc de déterminer
quelle relation fonctionnelle existe entre cette expression de
l’apoD dans le SNC et le processus de neuroprotection dans un
contexte lésionnel. Le stress oxydatif est étroitement lié aux mécanismes
de mort neuronale induits dans de nombreuses pathologies
neurodégénératives (telles que les maladies d’Alzheimer, Parkinson
et Huntington). Ces mécanismes se traduisent par d’importantes altérations
intracellulaires, déjà bien établies par plusieurs études antérieures,
conduisant à la mort neuronale. De ce fait, l’objectif de notre
investigation est de déterminer par quels mécanismes l’apoD
pourrait protéger les neurones dans des conditions de stress oxydatif.
Ainsi, l’éventuel effet neuroprotecteur de l’apoD sera évalué à partir
d’un modèle de lignée de neuroblastome humain SHSY-5Y, système
cellulaire très largement utilisé. Ainsi au cours de cette étude, les
tests de viabilité cellulaire indiquent que la survie des SHSY-5Y préincubés
avec de l’apoD purifiée (200ng/ml) augmente significativement
après traitement avec un agent oxydatif, H2O2 (100uM). Nous
procéderons ainsi à l’analyse, par western blot et par immunohistochimie,
de l’expression des différents médiateurs de mort cellulaire
induits par H2O2 (caspase-3, peroxidation lipidique, taux de ROS et
de calcium intracellulaire,…) au niveau de ces neurones préalablement
traités à l’apoD purifiée (200ng/ml).

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26 - L’inhibition de la phosphorylation de MT1-MMP bloque la croissance
tumorale in vivo
Carine Nyalendo 1,2, Edith Beaulieu 2, Denis Gingras 2 et Richard Béliveau 1,2
1Département de Chimie, BioMed, UQÀM. 2Laboratoire de Médecine
Moléculaire, Centre de Cancérologie Charles Bruneau, Service d’Hématologie-Oncologie,
Hôpital Sainte Justine.
Introduction: La dégradation de la matrice extracellulaire par la métalloprotéase
matricielle de type membranaire 1 (MT1-MMP) confère aux
cellules tumorales la capacité de proliférer dans des matrices tridimensionnelles
(3D) et promeut la croissance et l’invasion tumorales.
Outre le domaine catalytique responsable de son activité protéolytique,
MT1-MMP contient un domaine cytoplasmique dont la fonction demeure
très peu élucidée. Nous avons récemment démontré que cette
enzyme est phosphorylée sur son unique résidu tyrosine cytoplasmique
(Y573), processus important pour la migration des cellules tumorales in
vitro. L’objectif de cette étude est de déterminer le rôle de la phosphorylation
de MT1-MMP sur la croissance et l’invasion tumorales in vivo. Méthodes
: Des cellules de fibrosarcome humain (HT1080) ont été transfectées
stablement avec les formes wild type (WT) ou non phosphorylable
(Y573F mutant) de MT1-MMP, puis cultivées sur un film (en deux dimension,
2D) ou dans un gel (3D) de collagène afin d’en évaluer la prolifération
et la progression du cycle cellulaire par cytométrie de flux. Pour étudier
la croissance tumorale, ces cellules ont été injectées en sous-cutané
chez des souris athymiques nues. Résultats: Bien que les cellules HT1080
exprimant la forme WT de MT1-MMP ou son mutant Y573F (non phosphorylable)
montraient un taux de prolifération similaire en 2D, nous avons
observé que le mutant Y573F de MT1-MMP réduisait fortement la prolifération
des cellules cultivées en 3D, cet effet antiprolifératif étant corrélé
avec un arrêt des cellules en phase G0/G1 du cycle cellulaire. L’expression
du mutant non phosphorylable de MT1-MMP inhibait également la
formation de colonies par les cellules HT1080 sur soft-agar, de même que
leur invasion de matrices de collagène, deux caractéristiques importantes
des cellules tumorales, suggérant un effet primordial de la phosphorylation
de MT1-MMP sur la tumorigénicité. En effet, alors que les cellules
HT1080 formaient des xénogreffes très vascularisées chez la souris athymique
nue, la croissance tumorale était complètement bloquée par l’expression
du mutant non phosphorylable de MT1-MMP. Conclusion: Ces
données suggèrent fortement que la phosphorylation de MT1-MMP est
un processus clé pour la croissance et l’invasion tumorales. Bloquer les
voies menant à la phosphorylation de MT1-MMP pourrait représenter une
alternative intéressante afin d’inhiber la croissance tumorale induite par
cette enzyme.

Centre de Recherches Biomédicales
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27 - Le récepteur 5-HT2A-Sérotonine active les voies de signalisations
MEK/ERK½ et JAK2/STAT3 dans les cellules de choriocarcinomes placentaires
humaines
Talal Oufkir 1,2 et Cathy Vaillancourt 1,2.
1INRS-Institut Armand-Frappier, Université du Québec, Laval et 2BioMed,
UQÀM, Montréal.
La sérotonine (5-hydroxytryptamine, 5-HT) est à la fois un neurotransmetteur,
une hormone et un facteur de croissance via l’activation de plusieurs
types de récepteurs dont le récepteur 5-HT2A. Nous avons récemment
démontré l’expression du récepteur 5-HT2A dans les lignées cellulaires
de choriocarcinome placentaire humain, BeWo et JEG-3, un modèle
in vitro du trophoblaste placentaire. L’activation de ce récepteur
placentaire par un agoniste sélectif, le DOI, stimule la prolifération des
cellules JEG-3 et BeWo. Plusieurs travaux ont montré que la sérotonine
via l’activation du récepteur 5HT2A, stimule la croissance de plusieurs
types cellulaires via les voies Gq-PLC-β/PKC (phospholipase C-β/protéine
kinase C), MAPK (mitogen-activated protein kinase) et JAK/STAT (Janusactivated
kinase/signal transducers and activators of transcription). Hypothèse
: Nous proposons que le récepteur 5-HT2A stimule la prolifération
des cellules BeWo et JEG-3 via l’activation des voies Gq-PLC-β-MAPK et
JAK2/STAT3. Pour vérifier cette hypothèse l’objectif de la présente étude
est de déterminer si les voies de signalisation MER/ERK½ et JAK2/STAT3
sont activées par le récepteur 5-HT2A placentaire. Méthodologie et résultats
: Les cellules JEG-3 et BeWo ont été incubés pendant 0, 5, 15, 30,
60 min en présence de DOI, agoniste sélectif du récepteur 5-HT2A, dans
un milieu de culture faible en sérum (0,5% FBS). Les protéines totales ont
été extraites et des immunoprécipitations suivie d’immunobuvardages
de type Western ont été réalisées. La stimulation des cellules JEG-3 (25
μM) et BeWo (20 μM) par le DOI induit dans les deux types cellulaires : (i)
une augmentation de l’association protéine Gq\11 - récepteur 5-HT2A ;
(ii) une phosphorylation de MEK½ et ERK½ dans les deux types cellulaires
et (iii) une augmentation de l’association entre la protéine JAK2 et la
protéine STAT3 phosphorylée (p-STAT3). Conclusion : Ces résultats suggèrent
que le récepteur 5-HT2A placentaire stimule la prolifération des cellules
BeWo et JEG-3 via l’activation des voies de signalisation Gq/11α-
PLC-β-MEK½-ERK½ et JAK2/STAT3. La poursuite de ces travaux est primordiale
et permettra de mieux comprendre le rôle et le mécanisme d’action
de la sérotonine et du récepteur 5-HT2A dans les processus mitogénique
et le fonctionnement du trophoblaste placentaire, un tissu indispensable
au bon déroulement de la grossesse et du développement
fœtal. (Supportée par une subvention du CRSNG et l’INRS-IAF)

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28 - Mild Thermotolerance Protects Cells against Activation of the
Mitochondrial Pathway of Apoptosis Induced by Oxidative Stress
Pragathi Pallepati and Diana Averill-Bates
Département des sciences biologiques, UQÀM, Montréal, Canada.
Many toxic compounds such as heavy metals, pollutants, pesticides
and chemotherapeutic drugs generate reactive oxygen
species (ROS), leading to oxidative stress. ROS can cause damage
to cell components (DNA, proteins and lipids), leading to cell
death process which can be either by apoptosis or necrosis. Exposure
of cells to transient, nonlethal elevations in temperature
results in the accumulation of heat shock proteins (HSPs), which
induce thermotolerance and render cells resistant to subsequent
lethal insults. The ability of thermotolerance induced at mild temperatures
to protect cells against apoptosis has received little attention.
Mild temperatures are physiological and occur during
fevers. The aim of our study is to investigate the protective role of
mild thermotolerance against apoptosis induced by oxidative
stress. Exposure of HeLa cells to H2O2 caused activation of the mitochondrial
pathway of apoptosis. This is evident by a decrease
in mitochondrial membrane potential, translocation of Bax from
cytosol to mitochondria, and liberation of cytochrome C from
mitochondria into the cytosol. These events were decreased in
thermotolerant cells. H2O2 caused activation of caspase-9 and
caspase-3, which was diminished in thermotolerant cells. Thermotolerance
also protected cells against H2O2-induced nuclear
chromatin condensation as well as necrosis. These results show
that thermotolerance induced at mild physiological temperatures
protects cells against apoptosis caused by oxidative stress.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 47
29 - Suivi des battements de cellules cardiaques par microscopie
de fluorescence : effet de la céruloplasmine
Mylène Paradis, Mircea-Alexandru Mateescu, Joanne Paquin
Département de chimie et Centre BioMed, UQÀM
La céruloplasmine (CP) est une protéine à cuivre multifonctionnelle
retrouvée dans la circulation. Elle a entre autres des activités
ferroxydasique, amine-oxydasique et antioxydante. Des travaux
antérieurs ont montré que la CP a une action protectrice sur
le cœur isolé soumis à l’ischémie-reperfusion en empêchant l’installation
de fibrillations irréversibles, ce qui pourrait révéler un pouvoir
d’anti-arythmique cardiaque. D’autre part, la CP peut induire
une dépolarisation membranaire chez des cellules de neuroblastome.
Notre hypothèse est que la protéine a aussi la capacité
d’agir sur le potentiel membranaire de cardiomyocytes, ce
qui pourrait être en partie responsable de son rôle dans la cardioprotection.
La microscopie confocale de fluorescence avec la
sonde di-8-ANEPPS, sensible au potentiel membranaire, et avec
la sonde fluo-3, sensible à la concentration de calcium cytoplasmique,
a été utilisée comme approche pour tester cette hypothèse,
de concert avec des dosages enzymatiques. Pour le moment,
le fluo-3 semble représenter avec plus de fidélité que le di-
8-ANEPPS les cycles de dépolarisation-repolarisation membranaires
associés aux battements des cardiomyocytes. Les tracés indiqueraient
que la CP, mais non son tampon phosphate de potassium
(KPi), permet aux cardiomyocytes de recouvrer leurs battements,
interrompus par une augmentation de 4 à 6,5 mM de la
concentration extracellulaire de potassium. L’activité amineoxydasique
de la CP a été dosée à différentes concentrations de
KPi et de NaPi. Les résultats révèlent que ces tampons inhibent
l’activité amine-oxydasique de la CP in vitro, avec une capacité
inhibitrice plus grande du NaPi que du KPi. Des études de cristallographie,
publiées récemment, ont rapporté l’existence de deux
sites de liaison du sodium près du site catalytique de la CP. La
combinaison de ces études et de nos résultats amène à penser
que les concentrations relatives des cations de sodium et de potassium
dans le milieu pourraient influencer les activités enzymatiques
et cardiophysiologiques de la CP. Nos futurs travaux documenteront
plus avant cette proposition.

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30 - Caractérisation fonctionnelle de gdi-1 chez le nématode Caenorhabditis
elegans : Études des mécanismes moléculaires à la base de
l’apprentissage
A.Y. Lee 2, R. Perrault 1, S. Harel 1, E. Boulier 1, M. Suderman 2, M.T. Hallett 2§, et
S. Jenna 1§
1 Dépt. de chimie/biochimie, UQAM, Montréal, QC, 2 Centre de Bioinformatique
de McGill, Université McGill, Montréal, QC, § Auteurs Correspondants
Le retard mental résulterait d’une mauvaise régulation de protéines
contrôlant la transduction du signal et le trafic membranaire au niveau
des membranes post-synaptiques. GDIα est un régulateur des RabGTPases
et est associé au retard mental. Ce gène jouerait un rôle dans l’exocytose
au niveau des synapses ainsi que dans l’endocytose du récepteur
AMPA dans les neurones de l’hippocampe. Cependant, les mécanismes
pathogéniques résultant de la mutation de GDI1 et menant au
retard mental ne sont pas encore connus. gdi-1 est un très proche homologue
de GDIα chez le Caenorhabditis elegans. La réduction de son
expression par traitement des nématodes à l’ARN interférent (ARNi) nous
a permis d’observer 3 phénotypes : la stérilité (Ste); une altération de la
morphologie de la gonade (Gon); et une accumulation d’oocytes endomitotiques
(Emo). Le phénotype Emo est associé à des problèmes de
maturation, d’ovulation et/ou de fertilisation Nous avons remarqué une
diminution de la pénétrance des phénotypes associés à gdi-1 lors de
l’utilisation souche résistante à l’ARNi dans les cellules somatiques. Ceci
suggère que ces phénotypes sont causés en partie par des défectuosités
dans les cellules somatiques. Nous avons en effet observé une diminution
de la contraction des cellules de la gaine de la gonade, dans les
animaux traités au ARNi pour gdi-1. Ceci supporte une implication de
gdi-1 dans les mécanismes relatifs à l’ovulation. Nous avons aussi observé
une altération des mécanismes d’endocytoses et de sécrétion dans
les oocytes de ces animaux suggérant un potentiel rôle de gdi-1 dans les
mécanismes de maturation des oocytes et/ou de fertilisation. De plus la
morphologie des gonades des animaux traitées par l’ARNi pour gdi-1
démontre l’implication de ce gène dans le contrôle de l’élongation des
gonades au cours du développement larvaire. Nous avons développé
un model bioinformatique permettant de prédire des interactions génétiques
chez le nématode. La validation expérimentale de ces prédictions
nous a permis d’identifier des partenaires fonctionnels de gdi-1. Un
bon nombre de ces partenaires sont connus pour leur rôle dans le développement
du cerveau ou sont reliés au retard mental chez l’homme.
Nos résultats démontrent la validité de notre approche pour identifier
des partenaires fonctionnels de gdi-1 chez le C. elegans et suggère des
avenues intéressantes pour le développement de thérapies contre le
retard mental associé à l’altération génétique de GDI1.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 49
31 - Identification des principaux partenaires d’interaction de la cycline
D2 tronquée
Sébastien Petibois-Paillé, Philippe Legault, Éric Rassart
Centre de recherche Biomed, Dépt. Sc. Biol., UQAM, CP8888, Succursales
Centre-ville, Montréal, Canada, H3C 3P8.
La succession des différentes phases du cycle cellulaire est régulée
par l’ensemble des cyclines. Les cyclines de type D régissent la progression
de la phase G1 à la phase S permettant la réplication du
matériel génétique. En 2003, un nouveau site commun d’intégration
du rétrovirus murin Graffi a révélé l’existence d’un nouvel isoforme
de la cycline D2 baptisé D2 tronquée (D2trc) localisé dans le cerveau,
les ovaires ainsi que dans des leucémies. La forme tronquée se
distingue par l’utilisation d’un site donneur d’épissage alternatif localisé
dans le second intron. Il en résulte un exon 2 allongé ainsi que
l’apparition d’un codon stop prématuré au 156e acide aminé. Par
rapport à la cycline D2 normale (D2), 133 acides aminés sont manquants
dont les 21 derniers de la cyclin box, le site de liaison aux
CDK. Les 20 acides aminés terminaux de la D2trc diffèrent du transcrit
normal par les résidus L143, L146, P155 et H156. L’altération de la
séquence en acides aminés génère une protéine cytosolique tandis
que la forme normale est nucléaire. Cette différence de localisation
serait possiblement attribuable à la présence d’un résidu tyrosine en
position 154 chez la cycline normale. Les interactions entre les
CDK4/6 et la D2trc semblent toujours possibles mais le taux de prosphorylation
de pRb reste faible. Des tests de transformation ont démontré
que la D2trc est plus transformante que la D2 normale. En
effet, on obtient beaucoup plus de foyers de transformation sur des
fibroblastes embryonnaires de souris avec le tandem D2trc et Ha-RAS
qu’avec la D2 et Ha-RAS. Cette étude est divisée en deux volets. Le
volet principal consiste à identifier les principaux partenaires d’interaction
de la cycline D2 tronquée. Les partenaires potentiels seront
isolés par co-immunoprécipitation avec la D2trc et la D2 puis séparés
par électrophorèse SDS-PAGE. Les bandes uniques à la D2trc représentent
les partenaires potentiels et leur identité sera déterminée par
spectrométrie de masse. Les partenaires seront authentifiés par coimmunoprécipitation
et colocalisation de la D2trc avec la protéine.
Le second volet consiste à cloner la D2trc dans un vecteur d’expression
eucaryote (PCMV5) détenant un signal de localisation nucléaire
(NLS) en N-terminal pour en déterminer le pouvoir transformant dans
des cellules primaires de souris.

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32 - Rôle de mTOR dans la régulation de la stéaroyl CoA désaturase
1.
Prévost M., Arfa O., Mauvoisin D., Mounier C.
Département des Sciences Biologiques, Centre de recherche
BioMed, Université du Québec à Montréal
La stéaroyl-CoA désaturase 1 (SCD1), dont l’expression est fortement
corrélée avec le développement de l’obésité, est l’enzyme
limitante de la biosynthèse des acides gras monoinsaturés, principalement
l’oléate (18 :1) et le palmitoléate (16 :1). Avec l’apparition
de l’épidémie d’obésité, il devient de plus en plus important
d’étudier les mécanismes moléculaires qui régissent l’expression
de SCD1. Des études antérieures ont démontré que la transcription
de cette protéine hépatique est sous la dépendance d’hormones
qui sont fortement modulées par la diète. En fait, nous
avons préalablement mis en évidence que l’insuline active une
cascade de signalisation impliquant les kinases PI3-kinase et
mTOR. Cette voie cible particulièrement un élément de réponse
à l’insuline sur le promoteur SCD1 qui fixe les facteurs de transcription
(TF) SREBP-1 et NF-Y. Objectif : Par contre, le mécanisme
d’action de mTOR régulant l’activité transcriptionelle de ces TFs
sur le promoteur SCD1 reste encore à établir au niveau hépatique.
Méthode et Résultats : Grâce à la rapamycine, un inhibiteur
spécifique de mTOR, nous avons démontré par analyses de retard
sur gel que l’insuline modulait la fixation de NF-Y et SREBP-1
sur l’ADN modulant ainsi l’activité transcriptionelle du promoteur.
De plus, le rôle de l’insuline et donc de mTOR a aussi été évalué
sur le niveau d’expression de ces TFs et cela par PCR en temps
réel. Conclusion : Nos résultats démontre clairement qu’au niveau
hépatique, mTOR est une kinase clef ciblant des TFs spécifiques
(NF-Y et SREBP-1c) sur le promoteur SCD1 activant ainsi l’expression
de ce gène en réponse à l’insuline.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 51
33 - Les propriétés anti-angiogéniques du sulforaphane ciblent la
migration et la tubulogénèse des cellules endothéliales cérébrales
humaines.
aShanti Rojas-Sutterlin, bBorhane Annabi, aRichard Béliveau.
aCentre de Cancérologie Charles-Bruneau, Hôpital Sainte-
Justine-UQAM, Montréal, Québec, bLaboratoire d’Oncologie Moléculaire,
Département de Chimie, Centre de Recherche Bio-
MED, Université du Québec à Montréal, Montréal, Québec.
L’autopsie d’individus n’ayant pas été diagnostiqués pour un
cancer révèle souvent la présence de plusieurs tumeurs microscopiques.
En effet, une tumeur peut exister dans un état de dormance,
une phase dite prévasculaire, où son expansion est restreinte
à 1-2 mm 3. Ainsi, pour qu’une tumeur puisse se développer
au-delà de la taille minimale, elle doit induire la formation de
nouveaux vaisseaux sanguins à partir de ceux préexistants. Les
cellules endothéliales cérébrales (HBMEC) sont des composantes
structurelles et fonctionnelles essentielles de l’appareil vasculaire
et de la barrière hémato-encéphalique (BHE). Bien que la métalloprotéinase-9
(MMP-9) soit reconnue pour altérer l’intégrité de la
BHE, ces rôles dans les HBMEC, en réponse à des carcinogènes
ou facteurs de croissance tumoraux, demeurent incompris. Nous
proposons de tester l’effet anti-cancérigène du sulphorafane
(SFN), un isothiocyanate du brocoli, sur la sécrétion de MMP-9 et
sur la migration des HBMEC induites par un carcinogène, le phorbole
12-myristate 13-acétate (PMA). L’activité de MMP-9 a été
mesurée par zymographie. HuR a été mesurée par immunobuvardage.
Des techniques d’ARN interférant (siRNA) ont permis
d’inhiber l’expression de MMP-9. La migration cellulaire s’est faite
dans des chambres de Boyden. Nous observons une inhibition
spécifique et dose-dépendante (0-10 M) de la sécrétion de
MMP-9, ainsi que de la migration des HBMEC (>90%) induites par
le PMA, suite au traitement avec le SFN. Le SFN inhibe l'expression
du facteur transcriptionnel HuR, reconnu pour stabiliser l'ARNm de
la MMP-9. De plus, la diminution de l'expression de MMP-9 par un
siRNA, inhibe les fonctions de MMP-9 dans la migration et la tubulogénèse
des HBMEC. Les propriétés anti-tumorales du SFN pourraient
donc contrer le développement tumoral cérébral en ciblant
les fonctions de la MMP-9 dans la migration et la tubulogénèse
des HBMEC.

Page 52
34 - Le rôle de l’ARN hélicase Dbp4 dans la maturation de l’ARNr
18S.
Sahar Soltanieh et François Dragon
Centre BioMed, Département des sciences biologiques, UQÀM
La protéine nucléolaire Dbp4 est une ARN hélicase de la famille
« DEAD-box ». Ces enzymes sont généralement impliquées dans
le remodelage des interactions ARN-ARN ou ARN-protéine de
manière ATP-dépendante. Dbp4 est phylogénétiquement
conservée et elle est essentielle à la survie de la levure Saccharomyces
cerevisiae, ce qui souligne son importance fonctionnelle
dans la vie cellulaire. Il existe un lien génétique entre Dbp4 et
U14, un petit ARN nucléolaire (snoRNA) essentiel à la production
d’ARN ribosomique (ARNr) 18S. De plus, il a été démontré que
Dbp4 est nécessaire pour les clivages aux sites A0, A1 et A2 qui
mènent à la production de l’ARNr 18S. Notre objectif est de
mieux comprendre le rôle de Dbp4 dans les mécanismes et les
interactions moléculaires qui conduisent à la production de
l’ARNr 18S. Nous avons trouvé que Dbp4 n’est pas associée à U14
mais plutôt au snoRNA U3, ainsi qu’à la protéine Mpp10 une protéine
« spécifique à U3 » et composante essentielle du SSU processome.
Ce complexe d’environ 80S représente la forme fonctionnelle
de U3. Nous avons fait des expériences de sédimentation
sur gradient de saccharose avec des extraits de souches de
déplétion de Dbp4, U14, U3 et Mpp10 afin d’analyser les interactions
moléculaires nécessaires à la maturation des ARNr. Nos résultats
indiquent qu’en éliminant l’un ou l’autre des facteurs mentionnés,
nous obtenons des changements de profil de sédimentation
de U14 et U3 qui ne se trouvent plus sous la forme libre mais
dans de très grands complexes (150-200S). À l’inverse, le snoRNA
guide snR47 accumule dans des complexes d’environ 80S. Nous
n’observons aucun changement dans le profil d’autres snoRNA
comme snR10 et snR30, qui sont aussi impliqués dans les processus
de clivage. De même, le profil des snoRNA guides snR35 et
snR46 demeure inchangé. Curieusement, lors de la déplétion de
Dbp4, les snoRNA guides snR41 et snR77 se retrouvent dans de
très grands complexes (150-200S) tel qu’observé pour U3 et U14.
Nos résultats suggèrent que Dbp4 joue un rôle important dans la
dynamique moléculaire de la biogenèse des ribosomes.

Centre de Recherches Biomédicales
Page 53
35 - Mise au point de vecteurs d’expression rétroviraux du cluster Mir
106a - 363 et étude fonctionnelle.
Ouliana Souchkova et Éric Rassart
Centre de recherche Biomed, Dépt. Sc. Biol., UQAM, CP8888, Succursale
Centre-ville, Montréal, Canada, H3C 3P8.
Un nombre croissant de données indique que les miARNs jouent un
rôle majeur dans des cascades de régulation génétique contrôlant
le développement, la prolifération cellulaire, l'apoptose ainsi que
l'oncogenèse. Les miARN sont impliqués dans plusieurs types de cancer
(cancer du poumon, du sein, du cerveau, du foie, du côlon et
les leucémies). Une étude réalisée par Séverine Landais dans notre
laboratoire a révélé l'implication des miARN dans la leucémie de
type T. Le cluster Mir 106a-363 (un groupe de six miARN :106a, 18, 20,
19, 92, et 363) est surexprimé dans les lymphomes T induits par le rétrovirus
leucémogène RadLV. Le potentiel oncogénique de miR-
106a-363 n'a jamais été étudié et sa fonction biologique demeure
peu connue. Les nouvelles données publiées en 2007 par S. Landais,
révèlent que le groupe miR-106a-363 cible au moins trois gènes: Mylip
(Myosin regulatory Light chain Interacting Protein), Hipk3
(Homeodomain Interacting Protein Kinase 3) et Rbp1-like
(Retinoblastoma-Binding Protein 1-like) qui ont tous les trois un rôle
potentiel comme gène suppresseur de tumeur. Pour l’étude de la
fonction des miR 106a-363, notre équipe a tenté sans succès d’exprimer,
par transfection classique, le cluster dans des lignées lymphocytaires.
Ainsi, pour exprimer de façon stable le groupe miR-106a-363,
plusieurs constructions contenant miR106a-363 dans des vecteurs
rétroviraux ont été générées. Ensuite, ces constructions ont été transfectées
dans la lignée d’encapsidation Phoénix eco pour produir des
particules rétrovirales recombinantes. Celles-ci ont été récoltées et
utilisées pour infecter d’abord des cellules NIH 3T3 et ensuite sur des
lignées lymphocytaires. Les clones sélectionnés par résistance au G-
418 ont été analysés pour mesurer le niveau d’expression des miARN
par Northern blot et RT-PCR. Les clones ayant la plus forte expression
du groupe miR106a-363 serviront comme modèle pour étudier les
différents aspects de la transformation cellulaire, telles que la prolifération
(test MTS), l’indépendance d’ancrage (essai en agar mou) ou
la migration cellulaire. Ceci devrait nous permettre de mieux caractériser
le rôle oncogénique des miARNs du groupe miR106a-363 dans
les leucémies de type T.

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36- Études transcriptionelles et fonctionnelles de la Syncytine-A et la
Syncytine-B dans les cellules trophoblastiques murine.
Toufaily Chirine, Rassart Eric et Barbeau Benoit
Département des sciences biologiques, Université de Québec à
Montréal, Montréal, Canada.
Récemment, deux rétrovirus endogènes humains codant pour des
enveloppes rétrovirales fusogéniques ont été identifiés. Il s’agit de la
Syncytine-1 et de la Syncytine-2, possiblement impliquées dans la
formation du syncytiotrophoblaste placentaire, résultant de la fusion
entre les cellules cytotrophoblastiques de l’interface maternofœtale.
Une recherche systématique in silico à travers le génome de
la souris a permis d’identifier la présence de deux ORFs à copie unique,
codant pour deux nouvelles glycoprotéines d’enveloppe d’origine
rétrovirale : la Syncytine-A et la Syncytine-B. Ces dernières semblent
jouer un rôle dans la formation du placenta ex vivo. De plus, la
Syncytine-B pourrait être impliquée dans l’état immunosuppressif caractérisant
l’environnement du placenta. À la suite de ces études, il
a été proposé que la Syncytine-A et -B jouent un rôle dans la formation
du syncytiotrophoblaste placentaire in vivo. Pour mieux comprendre
la régulation de la transcription de la Syncytine-A et -B dans
le placenta durant des conditions physiologiques et pathologiques,
la structure du transcrit de chacun de ces gènes sera déterminée en
plus des régions d’importance pour l’activité promotrice. Nous avons
démontré par RT-PCR que la Syncytine-A et la Syncytine-B sont exprimées
dans le placenta de souris. Ensuite, la structure partielle du
transcrit de la Syncytine-A a été déterminée par 5’RACE. L’analyse
des séquences de la Syncytine-A a révélé la présence de différents
épissages alternatifs du transcrit ayant le même site d’initiation de
transcription, situé en aval d’une boite TATA. L’analyse des séquences
génomiques situées en aval des ORFs de la Syncytine-A et -B a
révélé la présence de plusieurs signaux potentiels de polyadénylation,
bien que le site fonctionnel de polyadénylation reste encore à
déterminer. Des mutants de délétion seront réalisés sur les régions
promotrices de la Syncytine-A et –B, afin de déterminer les facteurs
de transcription jouant un rôle dans la régulation de la transcription
de ces deux protéines. Ces études vont nous permettent de mieux
comprendre le fonctionnement et le rôle des glycoprotéines d’enveloppe
des rétrovirus endogènes dans la formation du placenta chez
la souris.

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Page 55
37 - Protonated Form of Carboxylated Chitosan for Drug Controlled
Release
Tu Hao Tran 1, Tien Canh Le 1, Patrick Gosselin 2, Mircea-Alexandru
Mateescu 1.
1 Département de Chimie & Centre BioMed, UQAM, Case postale
8888, Succ. Centre-ville, Montréal (Québec), Canada, H3C
3P8. 2 Corealis Pharma, 141 Avenue du Président-Kennedy, Suite
SB – 6520, Montréal (Québec), Canada, H2X 3Y7
Ibuprofen (iso-butyl-propanoic-phenolic acid) is a non-steroidal
anti-inflammatory drug (NSAID) with analgesic and antipyretic
properties. It is extensively used in the treatment of many chronic
diseases such as rheumatoid arthritis, degenerative joint disease
and ankylosing spondylitis. Ibuprofen and other NSAID regain popularity
since the recent withdrawal of Vioxx® and Bextra®
(cyclooxygenase-2 inhibitors). To our knowledge, there is no sustained
release formulation of ibuprofen approved in the USA.
Due to its short half-life and good permeability throughout the
gastrointestinal tract, ibuprofen is a potential candidate for oral
solid dosage controlled release formulation. The present study
describes the grafting of carboxylic groups on chitosan with the
aim to increase the cohesion force between particles by additional
intermolecular interactions and to evaluate protonated forms
of carboxyethyl chitosan derivative as matrices for ibuprofen
controlled delivery. Tablets containing native chitosan disintegrate
rapidly in simulated dissolution media (USP28 method). Differently,
monolithic tablets containing protonated form of carboxylated
chitosan with ibuprofen or sodium ibuprofenate as model
drugs, allow particularly long release times.

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38 - L’inhibition de l’endocytose a un effet différent sur la captation
sélective des esters de cholestérol des LDL et HDL par le récepteur
scavenger BI dans les hépatocytes humains
Félix Tremblay *, Louise Falstrault *, David Rhainds **, Louise Brissette *
* Département des sciences biologiques, Université du Québec à
Montréal, ** Faculté de pharmacie, Université de Montréal,
Adresse actuelle : Genizon BioSciences, Saint-Laurent, Québec
L’intervention de mécanismes d’endocytose lors de la captation
sélective (CS) des esters de cholestérol (EC) de HDL et de LDL par
le récepteur scavenger de classe B type I (SR-BI) ne fait toujours
pas l’unanimité en raison des différents modèles étudiés. Afin d’élucider
l’importance de l’endocytose lors de la CS, des cellules
HepG2 ont été traitées avec différents inhibiteurs d’endocytose
(25 mM de NH4Cl; 0,45 M de sucrose [choc hyperosmotique]; 5
mM de NaN3 et 50 mM de 2-D-désoxyglucose [privation d’ATP])
avant d’être incubées en présence de lipoprotéines (HDL3 ou
LDL) radiomarquées dans leur portion lipidique (3H-CE) ou dans
leur portion protéique (125I). Les résultats indiquent que la CS des
EC-LDL (calculée comme la différence, en masse, entre l’association
lipidique et l’association protéique) est réduite de 38 à 64
% en présence de ces traitements, alors que celle des EC-HDL3
est inchangée. On note aussi une diminution de 85 à 100% de la
dégradation des LDL en présence de ces traitements, confirmant
leur capacité à inhiber une voie classique de l’endocytose. Les
diminutions observées de CS et d’endocytose n’ont pu être attribuées
à une diminution de l’interaction entre les récepteurs et les
LDL à la surface cellulaire, tel que démontré par des essais de
liaison en présence des traitements. Nos études démontraient
déjà une régulation différente de la CS à partir des HDL et des
LDL par le SR-BI. Ces résultats ajoutent à la différence observée
entre ces deux ligands abondants dans le plasma chez l’humain.

Centre de Recherches Biomédicales
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39 - Evidence d’une dérégulation de protéines d’enveloppe d’HERVs
dans la pré-éclampsie
Amandine Vargas, Frédérique LeBellego, Julie Lafond and Benoit Barbeau
*
*Département des Sciences Biologiques, Université du Québec à Montréal,
Montréal, Québec, Canada
Près de 8% du génome humain est constitué de séquences d’origine
rétrovirale. Ces séquences nommées HERVs (Human Endogenous Retro-
Virus) représentent des vestiges d’intégrations rétrovirales qui font maintenant
partie de notre génome. Certaines de ces séquences sont toujours
aptes à produire des protéines typiques aux rétrovirus, telles que les
protéines de l’enveloppe ou régulatrices. Ces gènes captifs semblent
intervenir dans la biologie placentaire humaine. Il a été suggéré que des
protéines d’enveloppe d’HERVs, la Syncytine-1 et la Syncytine-2, participent
au développement du placenta. Leurs fonctions sont de provoquer
des événements de fusion cellulaire entre les cellules cytotrophoblastiques
du placenta, permettant la formation de la structure cellulaire
nommée syncytiotrophoblaste. Ces deux gènes pourraient contrôler
l’invasion déciduale et du myomètre, processus soigneusement orchestré
au cours des grossesses normales auquel sont associées certaines
insuffisances, dont la pré-éclampsie (PE). Une déficience de la fusion
cellulaire des trophoblastes primaires obtenus de sujets PE a été mise en
évidence. L’étude a pour but de voir s’il existait une corrélation entre
cette déficience et l’expression des deux gènes Syncytine-1 et Syncytine-2.
L’expression de ces enveloppes rétrovirales dans le placenta à
terme de patientes saines et, pour des patientes souffrant de PE, a été
étudiée en utilisant les techniques de RT-PCR en temps réel et Westernblot.
Les niveaux d’expression de la Syncytine-1 et surtout la Syncytine-2
semblent être fortement diminués chez les patientes présentant les
symptômes d’une PE. De façon quantitative une corrélation entre l’expression
de ces gènes env et la fusion cellulaire est obtenu par un système
de quantification plus objectif utilisant des lignées BeWo. Une population
transfectée de façon stable avec un vecteur renfermant la séquence
codant pour la protéine Tat et, une autre où le vecteur concerné
et transfecté, renfermait un fragment contenant le LTR du VIH-1 et sa
région TAR, placé en amont du gène codant pour la luciférase. Ainsi, les
deux populations mises en co-culture, stimulées avec la forskoline et fusionnant
après un délai, conduisent à une augmentation de la luciférase.
Ce système, tout d’abord testé sur le modèle BeWo sera adapté
aux cellules primaires trophoblastiques. Il deviendra ainsi possible de
quantifier la corrélation fusion cellulaire/niveau d’expression des protéines
d’enveloppe d’HERVs et, dans l’avenir d’utiliser ces protéines
(déficientes) comme nouveaux marqueurs de la PE.

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40 - L’implication de l’autophagie et de la voie du réticulum endoplasmique
dans l’apoptose induite par l’acroléine chez les cellules
d’adénocarcinome pulmonaire humain A549.
Yulia Zilber, Ahmed Bettaieb, Diana Averill-Bates,
Département des sciences biologiques, UQÀM, Montréal, Canada.
L’acroléine est un aldéhyde α,β-insaturé, très électrophile, auquel
l’être humain est exposé dans plusieurs situations. Ce composé
toxique est un polluant environnemental qui est principalement
présent dans les produits de la combustion de la matière organique
tels que la fumée de cigarette, les gaz d’échappement et
les vapeurs des huiles de cuisson. De façon endogène, l’acroléine
est produite lors d’un stress oxydatif et d’une inflammation
ce qui suggère qu’elle est impliquée dans plusieurs pathologies
telles que les maladies neurodégénératives et respiratoires. L’implication
de l’acroléine dans la mort cellulaire a été démontrée
dans les études précédentes sans pour autant détailler les mécanismes
moléculaires. Le but de ce travail est d’étudier l’implication
du RE dans la transduction du signal apoptotique induit par
l’acroléine chez les cellules d’adénocarcinome humain A549.
Nous étudierons également l’implication de l’autophagie dans la
toxicité de l’acroléine. Notre étude montre que l’acroléine (0-
200µM) induit la réponse aux protéines à conformations anormales
qui se traduit par l’augmentation du taux d’expression du Bip,
la phosphorylation du PERK et du eIF2-α. De plus, l’augmentation
du calcium libre intracellulaire, l’activation des calpaïnes et de la
caspase 12 ainsi que l’augmentation de l’expression de CHOP
montrent que l’acroléine conduit à l’apoptose via la voie du RE.
Par ailleurs, l’acroléine conduit à l’autophagie suite à l’augmentation
des compartiments acides cellulaires et l’augmentation de
l’expression de la Becline et de LC-3. Les résultats suggèrent que
le stress du RE induit par l’acroléine est assez rigoureux pour induire
l’apoptose. Cependant, les interactions entre la voie du RE
de l’apoptose et l’induction de l’autophagie par l’acroléine restent
à élucider.

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Liste des présentateurs/trices par affiches
# Affiche, Présentateur/trice (# Page du résumé)
1 Abed Elie (19) 21 Lemay Vincent (39)
2 Akpa Murielle (20) 22 Lemieux Marc (40)
3 Alikashani Azadeh (21) 23 Lord-Dufour Simon (41)
4 Bazinet Stéfany (22) 24 Mauvoisin Daniel (42)
5 Bélanger Benoît (23) 25 Najyb Ouafa (43)
6 Bergeron Sandoval L-P (24) 26 Nyalendo Carine (44)
7 Boulier Élodie (25) 27 Oufkir Talal (45)
8 Cambos Mathieu (26) 28 Pallepati Pragathi (46)
9 Charfi Cyndia (27) 29 Paradis Mylène (47)
10 Cournoyer Philippe (28) 30 Perreault Richard (48)
11 De Koninck Patrick (29) 31 Petibois-Paillé Sébastien (49)
12 Ethier Chiasson Maude (30) 32 Prévost Michèle (50)
13 Fortier Simon (31) 33 Rojas Sutterlin Shanti (51)
14 Harel Sharon (32) 34 Soltanieh Sahar (52)
15 Janelle Valérie (33) 35 Souchkova Ouliana (53)
16 Labbé David (34) 36 Toufaily Chirine (54)
17 Laflamme Carl (35) 37 Tran Tu Hao (55)
18 Lapensée Martin (36) 38 Tremblay Félix (56)
19 Larocque Germain (37) 39 Vargas Amandine (57)
20 Le Bellego Frédérique (38) 40 Zilber Yulia (58)
Liste des présentateurs/trices oraux
# Présentation, Présentateur/trice (# Page du résumé)
1 Jenna Sarah Dr. (8) 7 Radenne Anne (14)
2 Fanélus Irvens (9) 8 Halin Marilène (15)
3 Martineau Corine (10) 9 Rolland Yannève (16)
4 Amiot Fannie (11) 10 Trahan Christian (17)
5 Bouchard Frédéric (12) 11 Provençal Mathieu (18)
6 Levros Louis-Charles Jr (13)
Conférencier invité : Dr. François Auger (7)

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Liste des participant(e)s
Abed Elie Garneau André Ngo-Duy Cam-Chi
Akpa Murielle Girard Aurelie Nguyen Quynh-Tran
Alikashani Azadeh Giroux Jean-François Nyalendo Carine
Amiot Fannie Gomez C. Andrea L. Odell Derek A.
Annabi Borhane Grondin Mélanie Oufkir Talal
Archambault Denis Haché Sophie Pagano Matteo
Assaad Elias Haddadine Erik Pallepati Pragathi
Auger François Halin Marilène Paquin Joanne
Averill Diana Hamel Francine Paradis Mylène
Barbeau Benoit Harel Sharon Perreault Richard
Bazinet Stéfany Hommel Benjamin Petibois-Paillé Sébastien
Bélanger Benoît Izquierdo Ricardo Poliquin Laurent
Béliveau Richard Janelle Valérie Poudrier Isabelle
Bellehumeur Christian Jenna Sarah Prévost Michèle
Bergeron Sandoval L-P Kerangart Cecile Provençal Mathieu
Bertrand Yanick Labbé David Radenne Anne
Billot Laura Laflamme Carl Rassart Eric
Bouchard Frédéric Lafond Julie Régina Anthony
Boulier Élodie Lanoix Dave Rojas Sutterlin Shanti
Bourque Geneviève Lapensée Martin Rolland Yannève
Brissette Louise Larguet Fadila Roques Elodie
Bugnot Gwendoline Larocque Germain Roy Alain
Calinescu Carmen Le Bellego Frédérique Roy Yves
Cambos Mathieu Le Devedec Frantz Saadé Ziad
Cartman Annie Legault Philippe Saron Wilfried
Charest Marie-Claude Lejeune Laurence Scorza Tatiana
Charfi Cyndia Lemay Vincent Soltanieh Sahar
Conceicao Aline Lemieux Marc Souchkova Ouliana
Cournoyer Philippe Lemire Mirianne St-Louis Marie-Claude
De Koninck Patrick Levros Louis-Charles Jr Tessier Julien
Desrosiers Richard Lord-Dufour Simon Toufaily Chirine
Desrosiers Jérémie Martin Coralie Trahan Christian
Dragon François Martineau Corine Tran Tu Hao
Dronneau Lucie Martin-Falstrault Louise Tremblay Félix
Duchesne Cathia Mateescu M-A Vaillancourt Cathy
Edouard Elsy Mauvoisin Daniel Vargas Amandine
Ethier Chiasson Maude Mercier Lucie Viau Mélanie
Fanélus Irvens Moreau Robert Villeneuve Luc
Fortier Simon Mounier Catherine Zilber Yulia
Fortier Julie Najyb Ouafa

Centre de Recherches Biomédicales
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Centre de Recherches Biomédicales
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Actes du Colloque,
4 e Colloque Annuel, Montréal 30 Avril 2008
Achevé en avril 2008.
BioMed
Dépt. Sc. Biol., UQAM
C.P. 8888, Succursale Centre-Ville
Montréal (QC), H3C 3P8
Tél: (514) 987-3000 poste 2677
Télécopieur: (5140) 987-6763
Centre de Recherches Biomédicales
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Courriel: biomed@uqam.ca
Site internet: www.biomed.uqam.ca