C. difficile GDH - Meridian Bioscience, Inc.

4. Bei diesem Assay wurden keine Probenmatrixstörungen beobachtet, da die Proben
vor dem Testen stark mit Probendiluent verdünnt werden. Aus diesem Grund
werden die als Assay-Bestandteile mitgelieferten Positiv- und Negativkontrollen in
Matrizes zubereitet, die dem Probendiluent gleichen. Falls die Zusammensetzung
der Kontrollmaterialien mit der der Testproben identisch sein soll, kann der
Anwender dies durch Verdünnen bekanntermaßen positiver und negativer Proben
mit Probendiluent gemäß dem Abschnitt PROBENVORBEREITUNG dieser
Packungsbeilage erreichen. In die Testvertiefungen 100 μL der vom Benutzer
zubereiteten Kontrollen geben.
ERWARTUNGSWERTE
Die Häufigkeit der durch C.-difficile verursachten, mit Antibiotika assoziierten Diarrhö ist
abhängig von mehreren Faktoren, darunter: Patientenpopulation, Art der Einrichtung und
Epidemiologie. Berichten zufolge beträgt die Inzidenz von C.-difficile-Infektionen bei
Patienten, die vermutlich an mit Antibiotika assoziierter Diarrhö leiden, 15–25 %. 4 Jedoch
können die Positivitätsquoten einzelner Einrichtungen außerhalb dieses Bereichs liegen.
GRENZEN DES VERFAHRENS
1. Nur zur In-vitro-Diagnostik bestimmt.
2. Der Test ist qualitativ und es sollte keine quantitative Interpretation der Werte
erfolgen.
3. Ein positives Ergebnis bestimmt keine C.-difficile-Infektion oder das Vorliegen von
toxigenem C. difficile, sondern zeigt lediglich den Nachweis des Organismus an.
Alle positiven Premier C.-difficile-GDH Stuhlproben sind zu testen, um ein Vorliegen
von toxigenem C.-difficile zu bestätigen.
4. Eine übermäßige Testinkubation kann vermehrt zu falsch positiven Testergebnissen
führen. Dagegen können kürzere Inkubationsdauern als in dieser Packungsbeilage
angegeben vermehrt zu falsch negativen Testergebnissen führen. Die in dieser
Packungsbeilage angegebenen Inkubationsdauern sind einzuhalten.
5. Staphylococcus aureus (Cowan-Stamm I) und Clostridium sporogenes haben sich
mit Premier C. difficile GDH als kreuzreaktiv erwiesen.
6. Deser Test ist ausschließlich für ungeformte Stuhlproben ohne
Konservierungsmittel vorgesehen. Die Leistungsmerkmale bei anderen klinischen
Probentypen wurden nicht ermittelt.
SPEZIFISCHE LEISTUNGSMERKMALE
Premier C. difficile GDH wurde von fünf unabhängigen Testzentren im Südwesten,
Südosten und Mittleren Westen der USA untersucht. Es wurden insgesamt 733
qualifizierte Patientenproben untersucht; bei allen Proben handelte es sich um
Prospektivproben. Die Proben stammten von männlichen (46 %) und weiblichen (53 %)
Personen. Bei 1 % der Patienten war das Geschlecht nicht bekannt. Die Altersgruppen
der Patienten reichten von 22 Tagen bis 99 Jahren. Es zeigten sich keine auf Alter oder
Geschlecht der Patienten zurückzuführenden Testleistungsunterschiede. In den
folgenden Tabellen ist die Assay-Leistung nach klinischem Standort und Patientenalter
aufgeführt.
Tabelle 1. Leistungsmerkmale nach klinischem Standort
Positive Proben Negative Proben
Stand-ort
Standorte
insgesamt
Premier
GDH/
Kultur
Empfindlichkeit
(in %)
95-%-VB
Premier
GDH/
Kultur
Spezifität
(in %)
95-%-VB
108/117 92.3% 86.0 – 95.9% 590/616 95.8% 93.9 – 97.1%
Standort 1 13/16 81,3 % 57,0 – 93,4 % 84/87 96,6 % 90,3 – 98,8 %
Standort 2 28/30 93,3 % 78,7 – 98,2 % 132/140 94,3 % 89,1 – 97,1 %
Standort 3 44/46 95,7 % 85,5 – 98,8 % 147/153 96,1 % 91,7 – 98,2 %
Standort 4 15/15 100,0 % 79,6 – 100,0 % 169/175 96,6 % 92,7 – 98,4 %
Standort 5 8/10 80,0 % 49,0 – 94,3 % 58/61 95,1 % 86,5 – 98,4 %
• Abweichende Proben wurden mit einem von der US-amerikanischen Lebens- und
Arzneimittelbehörde FDA zugelassenen ELISA-Test für den C. difficile GDH-Nachweis
untersucht.
• Sechzehn der 26 falsch positiven Proben fielen beim Testen mit einem anderen von der
FDA zugelassenen GDH-Assay positiv aus.
• Acht der neun falsch negativen Proben fielen beim Testen mit einem anderen von der FDA
zugelassenen GDH-Assay negativ aus.
Tabelle 2. Leistungsmerkmale nach Patientenalter
Positive Proben Negative Proben
Patientenalter
0 bis 28
Tage
29 Tage
bis < 2
Jahre
> 2 Jahre
bis < 12
Jahre
12 Jahre
bis < 18
Jahre
18 Jahre
bis 21
Jahre
Premier
GDH/
Kultur
Empfindlichkeit
(in
%)
95-%-VB
Premier
GDH/
Kultur
Spezifität
(in %)
95-%-VB
0/0 N/A N/A 1/1 100.0 % 20,7 – 100,0 %
22/24 91,7 % 74,2 – 97,7 % 56/60 93,3 % 84,1 – 97,4 %
24/25 96,0 % 80,5 – 99,3 % 106/109 97,2 % 92,2 – 99,1 %
9/11 81,8 % 52,3 – 94,9 % 59/61 96,7 % 88,8 – 99,1 %
3/4 75,0 % 30,1 – 95,4 % 22/23 95,7 % 79,0 – 99,2 %
> 21 Jahre 50/53 94,3 % 84,6 – 98,1 % 345/361 95,6 % 92,9 – 97,3 %
Keine
Angaben
0/0 N/A N/A 1/1 100,0 % 20,7 – 100,0 %
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WIEDERHOLBARKEIT
Assay-Präzision, Schwankungen innerhalb eines Assays sowie Schwankungen zwischen
Assays wurden anhand eines Referenzprofils aus Pools negativer Proben, die mit C.difficile
GDH-Antigen beimpft wurden, erstellt. Das Wiederholbarkeitsprofil bestand aus
mäßig positiven (n=3), schwach positiven (n=3), hochgradig negativen (n=3) und
negativen Proben (n=1). Die schwach positiven und hochgradig negativen Proben
wurden nahe der Empfindlichkeitsgrenze des Assays erstellt. Jede Probe wurde in drei
verschiedenen Labors an fünf aufeinander folgenden Tagen zweimal täglich untersucht.
Die Wiederholbarkeit der Probenzubereitungen, die über oder unter der
Analysenempfindlichkeitsgrenze liegen, betrug 100 % ohne Schwankungen innerhalb
eines Assays bzw. zwischen Assays.
STUDIEN ZUR KREUZREAKTIVITÄT
Es wurden Kreuzreaktivitätsstudien mit positiven und negativen Stuhlproben durchgeführt,
die mit Bakterien oder Pilzen auf Endkonzentrationen bis zu 1,2 x 10 8 KBE/mL bzw. mit
Viren auf Konzentrationen von mehr als 1 x 10 5 TCID50/mL beimpft waren. Keiner der
folgenden, im Stuhl vorhandenen Organismen reagierte mit Premier C.-difficile GDH:
Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacteroides fragilis,
Campylobacter coli, Campylobacter fetus, Campylobacter jejuni, Candida albicans,
Citrobacter freundii, Clostridium butyricum, Clostridium bifermentans, Clostridium
histolyticum, Clostridium novyi, Clostridium perfringens, Clostridium septicum, Clostridium
sordellii, Clostridium tetani, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Enterococcus
faecalis, Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Escherichia hermannii, Escherichia
fergusonii, Helicobacter pylori, Klebsiella pneumoniae, Lactococcus lactis, Listeria
monocytogenes, Peptostreptococcus anaerobius, Plesiomonas shigelloides,
Porphyromonas asaccharolytica, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa,
Pseudomonas fluorescens, Salmonella Gruppe B, Salmonella Gruppe C, Salmonella
Gruppe D, Salmonella Gruppe E, Serratia liquifaciens, Serratia marcescens, Shigella
boydii, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis, Vibrio parahaemolyticus, Yersinia enterocolitica, Adenovirus Typ 40,
Adenovirus Typ 41, Coxsackievirus Stamm B4, Echovirus Stamm 11, Rotavirus Stamm
WA
Stuhlproben, die mit Staphylococcus aureus (Cowan-Stamm I) und Clostridium
sporogenes beimpft wurden, zeigten Kreuzreaktionen mit dem Premier C.-difficile GDH
Test.
TESTEMPFINDLICHKEIT
Die Testempfindlichkeit von Premier C.-difficile GDH-Assays ist bei Stuhlzusätzen 8
ng/mL.
ASSAY-REAKTIVITÄT
Die folgenden C.-difficile-Stammkulturen verschiedener Quellen ergaben beim Testen mit
Premier C. difficile GDH positive Reaktionen bei 5,7 x 10 7 KBE/mL.
Toxigene C.-difficile-Stämme: 8864, 10463, 43598, 2004052, 2004111, 2004118,
2004205, 2004206, 2005070, 2005257, 2005325, 2006240, 2007431, 2007435, 2007858,
2008016, 2008029, 2008162, 2008188, 2008341, 2008351, 2009018, 2009065, 2009066,
2009099, 2009132, 2009155, 2009277, B1, BI17, BI8, BK6, CF1, G1, J7, K12, Y1
Nicht toxigene C.-difficile-Stämme: 11186, 234, 586, 611, 620, 2C62, 2C165, C122,
UNC19904, X15076
TESTS AUF STÖRSUBSTANZEN
Die folgenden Substanzen zeigten in den angegebenen gesättigten
Lösungen/Verdünnungen und den aufgeführten Endkonzentrationen keine Auswirkungen
auf die Testergebnisse:
Bariumsulfat (5 mg/mL), Stearinsäure/Palmitinsäure (Stuhlfette, 2,65 mg/mL bzw. 1,3
mg/mL), Hämoglobin (3,2 mg/mL), Imodium AD® (Loperamid-HCI, 6,67x10 -3 mg/mL),
Kaopectate® (Wismutsubsalicylat, 0,87 mg/mL), Metronidazol (12,5 mg/mL), Mucin (3,33
mg/mL), Mylanta® (Ammoniumhydroxid mit Magnesiumhydroxid) (4,2 mg/mL), Pepto-
Bismol® (Wismutsubsalicylat, 0,87 mg/mL), Polyethylenglykol 3350 (79.05 mg/mL),
Prilosec® (Omeprazol, 0,5 mg/mL), Simethicone (0,625 mg/mL), Tagamet® (Cimetidin,
0,5 mg/mL), Tums® (Calciumcarbonat, 0,5 mg/mL), Vancomycin – Hydrochlorid (2,5
mg/mL), weiße Blutkörperchen (5 %), Vollblut (25 %)
REFERENCES
1. Dawson LF, Valiente E, Wren B. Clostridium difficile - A continually evolving and
problematic pathogen. Infect Genet Evol 2009;9:1410-1417.
2. Lyerly DM, Barroso LA, Wilkins TD. Identification of the latex-reactive protein of
Clostridium difficile as glutamate dehydrogenase. J Clin Micro 1991;29:2639-2642.
3. Willis, DH, Kraft JA. Confirmation that the latex-reactive protein of Clostridium
difficile is a glutamate dehydrogenase. J Clin Micro 1992;30:1363-1364.
4. Bartlett JG, Gerding D. Clinical Recognition and Diagnosis of Clostridium difficile
infection. Clin Inf Dise 2008;46:S12-18.
SN11082 REV. 04/11