Principe de fonctionnement des pipettes à déplacement d ... - BiOutils

Guidedu pipetageGilsonRÉPÉTABILITÉplaques de microtitrationVISCOSITÉCONTAMINATIONADNARNDÉPLACEMENTPERFORMANCESPOSITIFMode DirectÉCHANTILLONS AQUEUXspécificationsJUSTESSEDeuxième EditionLouis Pasteur,le père de la biologie moderne,1822-1895Il y a plus d’un siècle, Louis Pasteur donnaitune nouvelle forme aux pipettes en verrepour empêcher le reflux de liquide. Lapipette Pasteur continue à être utilisée denos jours. La première amélioration significativeconcernant les pipettes eut lieu à lafin des années 50 grâce à l’introductiond’une pipette à piston pour remplacer lepipetage par la bouche potentiellementdangereux. Les premières pipettesmanuelles étaient équipées d’un volumepréétabli (pipettes à volume fixe). Une améliorationsupplémentaire fut apportée parl’introduction du réglage pas à pas (pipettesà volume variable).Le pipetage depuis Louis PasteurEn 1972, le docteur Warren Gilson introduisitune pipette de haute précision qui pouvaitêtre réglée sur n’importe quel volumedans la limite de son domaine d’utilisation…pour n’importe quelle décimale(réglage continu). Son originalité… pour évitertoute erreur, résidait dans le fait que levolume sélectionné était affiché sur lapipette (lecture directe).Vingt-cinq ans plus tard, les pipettes deprécision Gilson représentent la référencemondiale en termes d’exactitude, de fidélitéet de fiabilité.Photo publiée avec la permissionde l’Institut Pasteur.QuitterImprimerSommaire

Chapitre 1Choix de la pipette la mieux adaptée à votre applicationPrise en compte des caractéristiques physiques de l’échantillon - - - - - - - - 7 Échantillons aqueux Échantillons visqueux Échantillons radioactifs et corrosifs Échantillons biologiques, ADN, ARNPrincipe de fonctionnement des pipettes à déplacement d’air et à déplacement positif 8En savoir plus… Toutes les pipettes à déplacement d’air ne se valent pasEn savoir plus… Pipetage sans fautePrise en compte du volume de liquide à transférer - - - - - - - - - - - - - - - - - 14 Plage d’utilisation des pipettes Pipetman Plage d’utilisation des pipettes Microman Plage d’utilisation des pipettes DistrimanEn savoir plus… Comment lire le volume ?Chapitre 2Choix du cône correspondant à votre pipetteÉvaluation des cônes - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 17En savoir plus… Plus qu’il n’y paraîtChoix du cône le mieux adapté à votre application - - - - - - - - - - - - - - - - - 18 Cônes en racks Cônes stérilisés Cônes à filtreEn savoir plus… Comment empêcher la contamination par les aérosols ?Chapitre 3Utilisation correcteOrganisation optimale du poste de travail - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 21Mise en place d’un cône jetable - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 22En savoir plus… Comment monter des cônes sur une pipette multicanal ?Affichage du volume - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 24Recommandations pour le pipetage direct ou inverse - - - - - - - - - - - - - - - 25En savoir plus… Pré-rinçageÉjection du cône usagé et stockage de la pipette en position verticale - - - - 32En savoir plus… Pourquoi utiliser un portoir de pipettes ?Chapitre 4Prévention de la contaminationTypes de contamination et méthodes pour les éviter - - - - - - - - - - - - - - - - 34 Risque personnel Pipette / échantillon Échantillon / pipette Échantillon / échantillonDécontamination du Pipetman - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 36Chapitre 5Entretien de la pipetteDiagnostic rapide - Inspection du Pipetman en deux minutes - - - - - - - - - - 39En savoir plus… Comment déterminer l’âge de la pipette ?En savoir plus… Comment empêcher la corrosion du piston ?En savoir plus… Comment obtenir une mise en place correcte des cônes ?En savoir plus… Quelles sont les principales causes de fuites ?En savoir plus… Comment les solvants organiques provoquent-ils des fuites ?Réparation au laboratoire ou retour au SAV ? - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 43Chapitre 6Étalonnage et réglageÀ quoi correspondent les spécifications publiées ? - - - - - - - - - - - - - - - - - 45En savoir plus… Qu’est-ce que l’exactitude ? Qu’est-ce que la fidélité ?Calcul de l’exactitude et de la fidélité volumétriques - - - - - - - - - - - - - - - - 46Utilisation de la méthode gravimétrique - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 47Procédure d’étalonnage - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 49Fréquence des tests - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 49Glossaire - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 50AnnexeANNEXE I • Exemple d’étalonnage - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 52ANNEXE II • Facteur Z - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 53ANNEXE III • Perte par évaporation - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 54

• Bouton-Poussoir• Bouton-Poussoir• Sélection rapidedu volume• Sélection rapidedu volumeBouton de l’éjecteur• Ejecteur de capillaireet de pistonPipette à déplacement d’airPIPETMANMolette(sélection fine du volume)Affichage du volumètreEjecteur de cônesAffichage du volumètreEmboutporte capillaireMICROMANPipette à déplacement positifA10369HEmbout porte-cônesCapillaireet piston jetablesA10369HNuméro desérieNuméro desérieCône jetableRepère d’identificationAnneaud’étanchéitéPistonFiltreMarquesde niveauCapillaireQuitterImprimerSommaire

Choix de la pipette la mieuxadaptée à votre application1.1Prise en compte des caractéristiques physiquesde l’échantillonChapitre 1Chapitre 1De nos jours, il existe despipettes pour répondre pratiquementà tous vos besoins…,solutions aqueuses, composésdenses, visqueux ou radioactifs,séquençage de l’ADN, distributiond’échantillonsliquides, remplissage deplaques de microtitration, etc.Le type d’analyse que vouseffectuez, les caractéristiquesphysiques du liquide et ledomaine d’utilisation déterminentle choix de la pipette etdes cônes à utiliser.ÉchantillonsaqueuxÉchantillonsvisqueuxÉchantillons radioactifs, corrosifs,...Échantillons aqueuxÀ condition d’être manipulées et entretenues correctement,les pipettes Pipetman ® donneront des résultats exactsavec la plupart des liquides rencontrés dans les laboratoires.Pour distribuer un grand nombre de fractions, utilisez plutôtune pipette à répétition Distriman .Échantillons visqueux ou volatilsDans ces cas, la pipette Microman ® est plus facile à utiliser.Le Microman vous fournit des résultats reproductiblesavec des échantillons très visqueux, tels que le glycérol, lesdétergents et le miel. Le Microman est également recommandépour des liquides particulièrement volatils (chloroforme)ou denses (mercure) qui sont souvent difficiles à aspirer.Échantillons radioactifs et corrosifsLes pipettes Microman sont spécialement étudiées pourtraiter des liquides agressifs sans danger pour l’utilisateur nirisque pour l’instrument.Échantillons biologiques, ADN, ARNVous avez le choix d’utiliser soit un Pipetman avec descônes à filtre autoclavables Diamond ® (0,1 µL- 1 ml), soitun Microman autoclavable (Modèles M10 et M100) avecdes capillaires et pistons stérilisés. Utilisés correctement,ces appareils assurent des résultats fidèles et exempts deÉchantillonsbiologiques,contamination. Pour des distributions multiples, optez plutôtADN, ARNpour une pipette à répétition Distriman avec une microseringue6 stérilisée DistriTip .7PipetmanMicromanMicromanPipetman8X2008X200DistrimanMicromanDistrimanQuitterImprimerSommaire

1.2 Principe de fonctionnement des pipettes àdéplacement d’air et à déplacement positifChapitre 1Les pipettes des gammes Pipetman, Micromanet Distriman se différencient surtout par leur principede fonctionnement.Qu’est-ce qu’une pipetteà déplacement d’air ?Qu’est-ce qu’une pipetteà déplacement positif ?Trois points essentielsTrois points essentielsPipetman8X200Les Pipetman (à un ou plusieurs canaux) sont despipettes à déplacement d’air.1 • Elles sont recommandées pour les échantillonsaqueux et pour le travailde laboratoire en général.2 • Il existe toujours un matelas d’air(volume mort) entre le piston de la pipetteet l’échantillon liquide.3 • Le piston fait partie intégrante de la pipette.1 • Elles sont recommandées pour les échantillonsdifficiles (visqueux, denses, volatils,radioactifs, corrosifs).2 • Le piston est en contact direct avec l’échantillon(sans matelas d’air).3 • Le piston est un consommable (il ne fait paspartie intégrante de la pipette).MicromanDistrimanLes Microman et Distriman sont des pipettesà déplacement positif.pistonemboutemboutpistonjetablecapillairejetableimportantLe piston parfaitmatelas d'aircône jetableQuand vous sélectionnez le volume sur une pipette à déplacementd’air, le piston ajuste le volume du matelas d’air, qui à sontour détermine le volume de liquide à aspirer. Afin que le volumed’échantillon corresponde exactement au volume sélectionné,le piston doit être parfait. Les pistons du Pipetman sontdonc examinés individuellement pour s’assurer qu’ils ne présententaucun défaut. Ils sont même nettoyés individuellementpour éliminer toute trace de poussière.échantillonéchantillonnez de pistonLe piston faisant partie intégrante des pipettesPipetman, un piston parfait garantit une mesure parfaite.8 9QuitterImprimerSommaire

En savoir plusChapitre 1Toutes les pipettes à déplacement d’airne se valent pasPour des applications comme leséquençage de l’ADN ou des procéduresbiochimiques qui nécessitent deséchantillons minuscules et précieux,deux modèles de Pipetman assurentune exactitude et une fidélité exceptionnelles,de 0,1 à 2 µL pour le modèle P2 etde 0,5 à 10 µL pour le modèle P10.Un volume d’air minimum entre lepiston et l’échantillon rend la performancemoins sensible aux variations de températureet aux caractéristiques du liquide,telles que la pression et la densité devapeur.joint de pistonemboutporte-cônespiston intégrécône jetableEn savoir plusPipetagesans fauteLe piston des Microman entre en contact direct(déplacement positif) avec l’échantillon.Il n’y a aucun matelas d’air qui se dilate ou secontracte en fonction de la densité ou de la températuredes échantillons.Le volume demandé est aspiré entièrement. Lepiston étanche empêche les aérosols dangereux,radioactifs ou corrosifs de pénétrer dans l’emboutde la pipette.Choisissez une pipette à pistonprotégé pour éliminer tout risque decontamination croisée et de contact avecl’échantillon.Pipetteà piston protégéPendant la distribution, le piston se déplace leLe Pipetman sans lubrification nécessite un entretien réduit et diminue lerisque de fuites et de contamination.long de la paroi interne du capillaire avec uneparfaite étanchéité, ce qui assure la distributionprécise de pratiquement tout type d’échantillonvisqueux, du glycérol à la colle.importantLubrification, pour ou contre ?Certaines pipettes ont des pistons lubrifiés, d’autres – comme le Pipetman – utilisent unetechnologie à «joints secs». Les pistons lubrifiés doivent être relubrifiés régulièrement souspeine de voir apparaître des fuites. La graisse peut être détériorée par les vapeurs desliquides pipetés… encore une cause de fuite. La lubrification peut aussi introduire des particulescontaminantes dans le corps de la pipette.Pour éviter toute contamination, le capillaireet le piston doivent être remplacés après chaque échantillon. Ils sont éjectés automatiquement.Ne jamais lubrifier les Pipetman Gilson.… vous n’avez pas à les toucher.12 13QuitterImprimerSommaire

1.3Prise en compte du volume de liquide à distribuerChapitre 1PipetmanLes huit modèles du Pipetman Gilson sont prévuspour distribuer des volumes précis entre 0,1 µL et 10ml. Les Pipetman sont également disponibles pourdes volumes fixes de 2 µL à 1 ml.ModèlePlage d’utilisationP2 0.1 - 2 µLP10 0.5 - 10 µLP20 2 - 20 µLP100 20 - 100 µLP200 50 - 200 µLP1000 200 - 1000 µLP5000P10mL1 - 5 mL1 - 10 mLimportantLe volume maximal pourles pipettes Pipetman et Micromanest indiqué sur le dessusdu bouton-poussoir.En savoir plusQComment lirele volume ?ALe volume est indiqué surle volumètre numériqueMicromanDistrimanµLModèleM10 1 - 10 µLM25 3 - 25 µLPlage d’utilisationM50 20 - 50 µLM100 10 - 100 µLM250 50 - 250 µLM1000 200 - 1000 µLLa pipette répétitive Distriman accepte trois seringuesdifférentes (micro, mini et maxi) permettant de distribuerdes aliquotes (même fractionnées) entre 1 µL et1,25 ml.SeringuePlage d’utilisation(Volume total de la seringue) des aliquotesMicro (125 µL) 1 to 12.5 µLMini (1250 µL) 10 to 125 µLMaxi (12.5 ml)100 µL to 1.25 mlimportantLe volume total pouvantêtre aspiré est indiquésur le côté de chaque seringueDistriTip.Pipetman P20MIN.0 1 22 2 00 5 02 µlINT.12.5 µlPipetman P200MIN.05050 µlINT.125125 µlPipetman P1000MIN.020200 µlINT.075750 µlMAX.20 µlMAX.200200 µlMAX.1001000 µlExemples d’affichage de volumed’un PipetmanLe volume est affiché sous forme de trois chiffreslus de haut en bas. L’illustration à gauche montrel’affichage du volume minimum (MIN.) et maximum(MAX.). Elle montre également desexemples d’affichage de volumes intermédiaires(INT.).Les chiffres en rouge représentent des dixièmesde microlitres (µL) sur la P20 et de millilitres (ml)sur la P1000. Vous trouverez la correspondanceexacte avec les autres modèles en consultantvotre documentation.Exemples pris parmi les modèlesde Pipetman les plus courants,P20, P200 and P1000.14 15QuitterImprimerSommaire

Choix du cônecorrespondant à la pipette2.1Evaluation des cônesChapitre 2Chapitre 2Les micropipettes, telles quePipetman et Microman,doivent toujours être utiliséesen association avec un côneadapté. Les cônes pour lesMicroman sont égalementappelés "capillaires".Les cônes pour les Distrimansont également appelés"seringues".Utilisées correctement,toutes ces pipettes assurentexactitude et fidélitéà condition d'utiliser lescônes Gilson adéquats.Sécurité avant tout !Les capillaires et pistonsGilson pour le Micromansont incassables.Le risque d'accident lié auxcapillaires en verre est donctotalement éliminé.GARANTIEDE QUALITÉ DE FABRICATIONChaque cône de précisionDiamond ® est individuellementgravé du logo Gilson et d'unnuméro d'identification.A l'aide de ce numéro, il est possibled'identifier le moule et mêmede déterminer l'empreinte exacteayant servi à la fabrication ducône.GARANTIEDE TRAÇABILITÉLe numéro de lot sur chaqueboîte et sachet permet de retracerl'itinéraire des cônes entre leconditionnement et l'expéditionau laboratoire.D I A M O N D10 µLSterilizedfilter tipsDF10STCERTIFIED QUALITY TIPSBATCH No.A584587.14TI P SP R E C I SI O NBien qu'ils aient l'air tous identiques, les cônes nesont pas tous les mêmes. Le choix d'un cône de mauvaisequalité peut compromettre vos résultats.Choisissez plutôt un cône recommandé par le fabricantde la pipette et vérifiez toujours les points suivants :Fiche d'évaluation de côneAspect physique oui nonPropre et exempt de particules de poussière ?Taille et géométrie parfaites ? . . . . . . . . . . . . . . .(pour une étanchéité absolue)Surface lisse et régulière ? . . . . . . . . . . . . . . . . .(rétention de liquide minimale)Orifice sans aspérités ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(empêche la formation de gouttelettes)Translucide . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .(sans additifs ou colorants contaminants)Résistance chimique . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .Garantie du fabricant de cônes oui nonIdentification de la marque ? . . . . . . . . . . . . . . .Numéro d'identification sur le cône ? . . . . . . . . .Numéro de lot sur la boîte ? . . . . . . . . . . . . . . . .Certificat de qualité ? . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .importantLes cônes Gilson Diamond sont fournisavec des valeurs typiques de relargage demétaux trace. Ces concentrations sontréduites au niveau de bruit analytique après5 à 10 rinçages avec de l'acide concentré.Plus qu'il n'y paraîtCes photos prises sousmicroscope montrentquelques-unes des différencesentre des cônesde bonne et de mauvaisequalité.16 17En savoir plusOrificeimparfaitExtrémité parfaiteSurfacerugueuseExcès dematière plastiqueQuitterImprimerSommaire

2.2Choix du cône le mieux adapté à l'applicationChapitre 2Les cônes Gilson existent en différents conditionnements : Vrac en sachetsC'est une solution économique pour le travail de routine. Ils peuvent être placés à la maindans des racks vides pour faciliter l’utilisation, ou pour l'autoclavage. Sur rack pour une mise en place facilesans contact manuelDes couvercles à charnières protègent les cônes de la poussière. Le rack de 96 positionsest pratique pour remplir des plaques de microtitration avec un Pipetman multicanal. Descodes couleurs aident à l'identification. Les cônes sont prêts pour l'autoclavage au laboratoire.Les portoirs de cônes sont réutilisables. Sur rack stérilisé pourtravailler dans des conditions stérilesIrradiés aux rayons gamma en usine et fournis dans un rack scellé. Sur rack et avec filtre autoclavableLes cônes à filtre empêchent les aérosols contaminants de pénétrer dans la pipette. Lescônes à filtre Gilson Diamond peuvent être autoclavés au laboratoire.En savoir plusComment empêcherla contamination par les aérosols ?Quand vous utiliser la PCR ou toute autre méthoded’amplification, il est indispensable d’empêcher la contaminationpar les aérosols; de même quand vous pipetezdes solutions d’ADN/ARN, des matières infectieuses,des échantillons radioactifs etc...Gilson propose deux solutions :Pipetman1 Utilisez un Pipetman avec des cônes à filtreDiamond stérilisés quand vous devez faire faceen même temps à au moins deux des problèmessuivants : Sur rack stérilisé avec filtreDes cônes à filtre irradiés en usine fournis dans un rack scellé. Sous blister individuel stériliséA ouvrir juste avant l'utilisation pour conserver l'avantage de la stérilisation jusqu'au derniermoment. C'est une bonne solution si vous utilisez seulement une petite quantité de cônes.Sur rackEn vracMicroman• travail sous conditions stériles• pipetage d'échantillons aqueux• prévention de la contamination croisée.2 Utilisez un Microman avec des capillaires etpistons stérilisés quand vous devez faire faceen même temps à au moins deux des problèmessuivants :• travail sous conditions stériles• pipetage d'échantillons visqueux• prévention de la contamination croisée.Sous18blister individuelPour plus de renseignements, voir page 35.19QuitterImprimerSommaire

Utilisationoptimale3.1Organisation du poste de travailChapitre 3Chapitre 3Pour optimiser vos résultats,la pipette a son importance,mais il ne faut pas oublier del'utiliser correctement.1 • Organisez tout d'abordvotre poste de travailen vue d'une efficacitémaximale et d'une fatigueminimale.2 • Assurez-vous que le côneest correctement montéet s'adapte bien avant desélectionner le volume.3 • Affichez le volume souhaité.4 • Choisissez le mode depipetage (mode inverseou direct) en fonction del'échantillon à traiter.5 • Ejectez le cône usagéet stockez la pipette enposition verticale pour évitertout endommagementainsi que la contaminationcroisée.Prenez un peu de tempspour vous organiser• Ajustez la hauteur de votre chaise outabouret de sorte que le plan de travailse trouve à la bonne hauteurquand vous êtes en position assise.• Si possible, travaillez toujours en gardantles mains sous le niveau desépaules.• Voyez si vous pouvez réduire la hauteurde certaines applications, tellesque le chargement de gel.• Les tables/ paillasses réglables constituentune bonne solution.importantUn bon test consiste à vérifiersi vous pouvez poser lecoude confortablement surle plan de travail.Récipient à labonne hauteurRécipient placétrop hautRécipientplacé trop basVeillez surtout à effectuer un pipetage régulier• Pour favoriser des gestes réguliers et une bonne synchronisation, ayeztous les objets nécessaires à portée de main.• Placez les objets les plus utilisés devant vous. Les objets moins utiliséspeuvent rester légèrement en retrait.• L'ouverture du récipient destiné aux cônes usagés doit se trouver à lamême hauteur que l'extrémité de la pipette.Un peu de détente estnécessaire• Si possible, essayez d'alterner périodiquementdifférents types de travail.• Maintenez un rythme de travail convenable,sans précipitation. Posez la pipette de tempsen temps et accordez une petite pause à vosmains.• Changez régulièrement de position assise.Appuyez-vous contre le dossier de la chaise etdétendez vos épaules et vos bras.20 21QuitterImprimerSommaire

3.2Mise en place d'un cône jetableChapitre 3PipetmanDistrimanPour monter un cône jetable sur unPipetman, maintenez la micropipette d'une mainet appliquez un mouvement légèrement tournantpour bien fixer le cône sur l'embout de la micropipetteet assurer l'étanchéité.Les cônes Diamond pour Pipetmansont disponibles sur des racks TIPACKpour une mise en place facile sanscontact manuel.Pour monter des DistriTips sur unDistriman, consultez le manuel d'instruction.Mise en place d'un cône jetablesur un PipetmanAppuyez avec unléger mouvementde rotationEvitez d'utiliser lapipette comme s'ils'agissait d'un marteauEn savoir plusComment monter des cônessur une pipette multicanalAction saccadée surun rack standardMicromanPour monter un ensemble capillaire/pistonsur un Microman, appuyez sur le bouton-poussoirjusqu'à la deuxième butée. Les mâchoires dela pipette s'ouvrent automatiquement et saisissentle piston, plaçant le capillaire/piston dans la positioncorrecte.Pour une protection maximalecontre la contamination, lescapillaires/pistons pour Micromansont disponibles pré-assemblés surracks et stérilisés.8X200Mise en place de cônes sur une pipettemulticanal Pipetman 8X200. Quand vous utilisezune pipette multicanal avec un rack de cônesstandard, il n'est pas toujours facile de monter leshuit cônes en même temps. Il faut appuyer fort,parfois de façon répétée et saccadée. Le conceptbreveté du “ Rocky Rack ” permet une mise enplace rapide, et les cônes ne tombent plus.importantChoisissez toujours un cônerecommandé par le fabricant de lapipette (voir page 16).importantNe jamais essayer d'utiliser unemicropipette sans cône approprié.Geste souple avec un rackRocky Rack22 23QuitterImprimerSommaire

3.3Affichage du volume3.4Conseils pour le pipetage direct ou inverseChapitre 3Affichage du volumeTenez le corps de la micropipette d'une main et utilisezl'autre main pour tourner la molette – ou le bouton-poussoir.Cette opération est réalisable facilement d'uneseule main. Cette nouvelle fonction du bouton-poussoirest disponible sur toutes les pipettes Microman et lespipettes Pipetman fabriquées depuis avril 1995.Une astuce utile pour améliorerla fidélitéTerminez l’affichage toujours dans le sens des aiguillesd'une montre. De cette façon, en présence de jeu mécanique,celui-ci s'exerce toujours sur la même position.Voici comment sélectionner le volume :• Pour diminuer le volume, tournez la molette lentementjusqu'à ce que le volume souhaité soit affiché. Nedépassez pas la position requise.• Pour augmenter le volume, tournez la molette approximativementd'un tiers de tour au-delà du volume souhaitéet revenez ensuite lentement pour diminuer levolume jusqu'à atteindre l’affichage voulu.Une astuce utile pour améliorerl’exactitude100Alignement incorrect :erreur100Alignement correct :lecture justePour éviter les erreurs de parallaxe, assurez-vous quel'affichage du volume se trouve directement dans votreligne de vision. Pour une lecture de près, il peut être utilede fermer un œil.BoutonpoussoirMoletteimportantPour éviter tout endommagementintérieur de la pipette, ne jamaisessayer de forcer le volume au-delàdes limites indiquées dans lestableaux de la page 14.Le choix du mode opératoire peut avoirun impact significatif sur les résultatsanalytiques.Les pipettes Gilson sont calibrées pour le pipetage enmode direct. Les fabricants sont tenus d'annoncer tousles modes de pipetage autorisés et de spécifier le modepour lequel l'appareil est calibré.Le mode direct correspond à la façon habituellede pipeter avec une pipette à déplacement d'aircomme le Pipetman.Voir page 26.Le mode direct pour les pipettes à déplacementpositif comme le Microman élimine la course depurge.Voir page 30.Le mode inverse est seulement possible avec despipettes à déplacement d'air. Il est utilisé pour lessolvants ou les liquides légèrement visqueux.Voir page 28.NettoyageSi nécessaire (pour les liquides visqueux, tels que lescrèmes), essuyez l'extérieur du cône ou du capillaireavec un tissu à usage médical. Ne pas toucher l'orifice.Choisissez un chiffon qui soit résistant, non pelucheux,et inerte aux acides et solvants. Débarrassez-vous duchiffon en respectant les règles de sécurité et d'hygiène.importantLors du travail sur des échantillons à risque,ne pas nettoyer la partie jetable.La profondeur d'immersion dans le liquidene doit pas dépasser 3 mm.Ensuite, il suffit d'effleurer la paroi latéraledu récipient.En savoir plusPré-rinçageOn obtient normalement uneplus grande uniformité etrépétabilité de la distributionen utilisant des surfaces decontact identiques pour toutesles aliquotes. Ce résultat estobtenu grâce à un pré-rinçageavec le même liquide quecelui distribué. Pour le prérinçage,aspirez avec le côneet redistribuez le liquide dansle récipient d'origine.QQuand faut-il pré-rincerle cône ?RLe pré-rinçage est nécessaire• à chaque changement decône• à chaque augmentation duvolumeNe pas oublier de pré-rincer• les capillaires et pistons duMicroman• les DistriTips du Distriman24 25QuitterImprimerSommaire

Déplacement d'air/ Mode directChapitre 3La précision du mode directrepose sur la régularité du fluxet de la pression d’air (pipettesà déplacement d'air) ou surl’étanchéité de l’ensemble capillaire/piston(pipettes à déplacementpositif).position de repos1 Préparation2 Aspiration3 DistributionPurge4 5Tenir l’instrument dans une positionverticale. Appuyer doucement surle bouton-poussoir jusqu'à la premièrebutée.Immerger l'extrémité du cône dansle liquide*. Laisser le piston remonterlentement à sa position derepos. Attendre une seconde desorte que la totalité du liquide puissePositionner le cône à un angle de10 à 45° par rapport à la paroi dutube récepteur. Appuyer doucementsur le bouton-poussoir jusqu'àla première butée.Attendre une seconde, appuyerensuite sur le bouton-poussoir jusqu'àla deuxième butée. Cette coursede "purge" chasse toute traced'échantillon du cône. Retirer laLaisser le piston remonter jusqu'àla position de repos.remonter dans le cône.pipette en faisant glisser l'extrémitédu cône le long de la paroi du tube.Repospremière butéedeuxième butée ou purge* La profondeur d'immersion du cônepeut avoir une influence significativesur les résultats. Si le cône estimmergé trop profondément, desgouttelettes se forment à l'extérieurdu cône et seront déposées enmême temps que l'échantillon. Si lecône n'est pas immergé à une profondeursuffisante, il se crée un effetde tourbillon et la pipette n'aspirepas le volume sélectionné.volume profondeurd'immersionµL mm0,1 - 1 11 - 100 2-3101 - 1000 2-41001 µL -10 ml 3-626 27QuitterImprimerSommaire

Déplacement d'air/ Mode inverseDans le pipetage en modeinverse, la course de purge estutilisée pendant la préparation.Quand le liquide est aspiré, unequantité de liquide égale à l'airde purge déplacé est ajoutée.1 23 4 5PreparationTenir l'appareil dans une positionverticale. Appuyer doucement surle bouton-poussoir jusqu'à ladeuxième butée.AspirationImmerger l'extrémité du cône dansle liquide*. Laisser le piston remonterlentement à sa position derepos. Attendre une seconde afinque la totalité du liquide puisseremonter dans le cône.DistributionPositionner le cône à un angle de10 à 45° par rapport à la paroi dutube récepteur. Appuyer doucementsur le bouton-poussoir jusqu'àla première butée. Attendreune seconde.Ré-aspirationSi le cône doit être réutilisé pourune nouvelle aspiration du mêmeéchantillon, maintenir le piston à laposition intermédiaire et recommencerà partir de l'opération 2.Purge complèteAttendre une seconde et purger. Sile cône ne doit pas être réutilisé,appuyer sur le bouton-poussoirjusqu'à la position de purge audessusd'un récipient pour déchetset éjecter ensuite le cône.Chapitre 3position de repospremière butéedeuxième butée oupurgeCette quantité compense la pelliculede liquide qui reste à l’intérieurdu cône pendant la distribution.* La profondeur d'immersion du cônepeut avoir une influence significativesur les résultats. Si le cône estimmergé trop profondément, desgouttelettes se forment à l'extérieurdu cône et seront déposées enmême temps que l'échantillon. Si lecône n'est pas immergé à une profondeursuffisante, il se crée un effetde tourbillon et la pipette n'aspirepas le volume sélectionné.volume profondeurd'immersionµL mm0,1 - 1 11 - 100 2-3101 - 1000 2-41001 µL -10 ml 3-628 29QuitterImprimerSommaire

Déplacement positifSur les pipettes à déplacementpositif, le piston entre encontact direct avec le liquide;il n'y a pas de volume d'airintermédiaire.Le contact direct améliorel’exactitude et la fidélité avecles liquides trop denses ou tropvisqueux pour être déplacés parde l'air. Le contact direct permetl'aspiration de liquidesvolatils sans évaporation. Deplus, l'absence d'air permet unpipetage rapide sans formationd'aérosols.1 Préparation2 Aspiration3 Distribution 4 EjectionAppuyer sur le bouton-poussoirjusqu'à la première butée. Le pistonse déplace jusqu'à la position souhaitée.Immerger le capillaire/piston dansle liquide*. Relâcher le boutonpoussoirpour le laisser remonterjusqu'à la position de repos. Le pistonAppuyer sur le bouton-poussoirjusqu'à la première butée. Le pistondescend et chasse le liquide ducapillaire.Enfoncer le piston complètementjusqu'à la deuxième et dernièrebutée. Le capillaire et le piston sontéjectés sans contact manuel.remonte et la pression atmo-sphérique fait monter le volume deliquide souhaité dans le capillaire.position de repospremière butéeéjectionChapitre 3* La profondeur d'immersion du cônepeut avoir une influence significativesur les résultats. Si le cône estimmergé trop profondément, desgouttelettes se forment à l'extérieurdu cône et seront déposées enimportantmême temps que l'échantillon. Si leLe piston et le capillairecône n'est pas immergé à une profondeursuffisante, il se crée un effetsont des composants volumétriquesdes pipettes àde tourbillon et la pipette n'aspiredéplacement positif. Lespas le volume sélectionné.deux pièces étant envolume profondeurcontact avec le liquide,µLd'immersionelles doivent toutes lesmmdeux être remplacées fréquemment0,1 - 1 1pour éviter1 - 100 2-3toute contamination croisée101 - 1000 2-4et assurer une parfaiteétanchéité.1001 µL -10 mL 3-630 31QuitterImprimerSommaire

3.5 Ejection du cône usagé et stockage dela pipette en position verticaleChapitre 3Pour éviter de toucher des cônes contaminés,tenez la pipette au-dessus d'unepoubelle et appuyez sur le bouton-poussoirde l'éjecteur.importantLes cônes usagés contiennent duliquide résiduel, surtout quand lapipette est utilisée en mode inverse.Pensez à prendre les précautionsnécessaires quand vous les éliminez.Des sachets autoclavables sont disponiblespour la collecte, la stérilisationet/ou l'élimination des déchets dangereux.Des sachets spéciaux et desEn savoir plusQPourquoi utiliser un portoir de pipettes ?RPour empêcher toute corrosion, contaminationet endommagementconteneurs anti-bêta sont égalementdisponibles pour les déchets radioactifssolides et liquides.Ne pas laisser les pipettes sur une paillasseoù elles pourraient entrer en contactavec des produits chimiquesou tomber et se casser.PIPETMANélimination sanscontact avec le côneMICROMANélimination sans contactavec le capillaire et le pistonLes pipettes doivent toujours être stockées verticalement pourempêcher le liquide de remonter dans l'embout de la pipette.Toujours éliminer les cônesQuand faut-il changer decône ?Distribution répétitive d'échantillonsusagés. Le liquide résiduelpeut endommager la pipette.Pour une distribution répétitive d'un même liquide(diluant, tampon ou réactif), utilisez le même cône. Cetteméthode est économique et efficace. Il est recommandéde pré-rincer le cône avant de commencer une séried'essais.Transfert d'échantillons différentsChoisissez un nouveau cône pour chaque nouveauliquide. Il est recommandé de pré-rincer chaque nouveaucône.32 33QuitterImprimerSommaire

Prévention de lacontamination4.1Types de contamination et méthodespour les éviterChapitre 4Chapitre 4La prévention de lacontamination dans leslaboratoires nécessitel'application de précautionsstrictes. Parmi celles-ci, ontrouve la décontamination despipettes, le port de gants et lechoix d'un cône adéquat.L'importance de cesprécautions est évidente quandon considère la sensibilitéextrême des techniquesmodernes, telles que la PCRqui permet la détection d'uneseule molécule. Il fautégalement tenir compte desdangers de la radioactivité etdu risque de contaminationpersonnelle par des microorganismespathogènes.Risque personnelActions préventives• Porter une blouse.• Porter des gants.• Porter des lunettes desécurité.• Porter un masque.• Nettoyer la paillasse avantet après le travail avec unnettoyant correspondant àl'application (culture decellules, composantsradioactifs, échantillonspathogènes, ...).• Travailler sous une hotte.• Travailler derrière un écrande protection contre laradioactivité.• Eviter de toucher descônes usagés.• Utiliser des capillaires etpistons incassables.Pipette/échantillonDes cônes contaminés, ou unepipette contaminée, vont à leurtour contaminer l'échantillon.Actions préventives• Utiliser des cônes stériliséset nettoyer ou autoclaver lespièces de la pipette qui sonten contact avec l'échantillon(voir pages 36-37).• Changer de cône aprèschaque échantillon.Echantillon/pipetteIl peut se produire une contaminationsi l'échantillon ou desaérosols de l'échantillon peuvententrer dans le corps de la pipette.Actions préventives• Pour empêcher que desliquides ne remontent dans lecorps de la pipette, éviter d'inclinerla pipette de manièreexcessive et stocker l'instrumenttoujours verticalement.• Relâcher le bouton-poussoirlentement.• Pour éviter la contaminationpar aérosols, utiliser descônes à filtre avec lePipetman ou choisir unepipette Microman à déplacementpositif avec une barrièreanti-aérosol intégrée.Echantillon/échantillon(également appelé rétentionde l'échantillon)Une partie de l'échantillon (A) peutadhérer à la paroi interne du côneaprès la distribution de l'échantillon.La partie restante de l'échantillon(A) peut se mélanger avecl'échantillon suivant (B) et provoquerun résultat d'essai faussé.Action préventiveChanger de cône après chaqueéchantillonéchantillon Aresté à l'intérieurdu côneRétention de l'échantilloncontamination del'échantillon BRisque deAucun risque decontamination contamination34 35par aérosolspar aérosolsPipetmanaveccône standardfiltrevolume d'airnon protégé(aérosols)Pipetmanaveccône à filtrevolume d'airprotégébarrièreanti-aérosolMicromanaveccapillaireet pistonpistonQuitterImprimerSommaire

4.2Décontamination d'une pipette PipetmanChapitre 4Si votre pipette risque d'être contaminée, l'une des procédures suivantes doit être effectuéeavant toute autre utilisation ou tout autre entretien de l'instrument.AutoclavageIl s'agit du moyen de stérilisation le plus courant. Les cônes Gilson Diamond et certainespièces des pipettes Pipetman peuvent être stérilisés en laboratoire en respectant lesconditions suivantes : chaleur humide/ 121°C/ 20 minutes/ 1 bar.NB : L'autoclavage a un champ d'action limité et ne détruira pasles RNases, par exemple.Pièces de Pipetman autoclavablesDécontamination chimiqueCette technique est utilisée par Gilson pour décontaminer les pipettes renvoyées au serviceaprès-vente. Le Pipetman est démonté et entièrement plongé dans un bac à ultrasonscontenant un détergent recommandé pour les appareils de laboratoire. Ensuite, les piècessont immergées dans une solution virucide, bactéricide et fongicide. Il est fortementrecommandé de rincer la pipette à l’eau et de la sécher soigneusement.NB : Une solution de formaldéhyde à 2% (CIDEX ® de Johnson and Johnson) est utiliséecouramment. Le Clorox ® à 10% a été recommandé comme décontaminant pour l’éliminationdes matrices d’ADN dans les laboratoires PCR*. Cependant, alors qu’il esttoujours possible de trouver un liquide présentant les bonnes propriétés pour faireface à un risque donné, aucun liquide spécifique ne peut agir efficacement contretous les risques.Rayonnement UVLes plans de travail peuvent être décontaminés en les exposant à une lumière ultravioletteà 300nm pendant 15 minutes. Cette méthode n’est pas recommandée pour les pipettesparce que, contrairement aux liquides ou vapeurs contaminants, les rayons UV ne peuventpas entrer à l’intérieur de la pipette.écrou raccordemboutporte-côneéjecteurRayons bêta (β) ou gamma (γ)Cette méthode est utilisée par les fabricants pour des produits vendus sous l’appellation“stérilisés”. Les rayons pénétrants sont hautement efficaces pour les matières plastiquesrelativement inertes utilisées pour fabriquer les consommables des pipettes. Coûteuse etnécessitant des installations spéciales, cette irradiation est réservée aux utilisateurs degrande quantités de consommables.NB : Le choix des rayons gamma ou bêta est déterminé par le type de matière plastiqueutilisée pour fabriquer la pipette ou le consommable.côneOxyde d’éthylèneL’oxyde d’éthylène et son produit réactionnel, l’éthylène chlorydrine, sont hautementtoxiques et mutagènes. Ils sont donc réservés à la stérilisation des matières plastiquesqui pourraient être endommagées par une irradiation.Certaines pièces, comme le piston et la poignée, ne peuvent pas être autoclavées sans affecter l’exactitudeet la fidélité de la pipette.*A. Prince et L. Andrus, PCR : How to kill unwanted DNA, Bio Techniques 1992, 12, 359-360. PCR est une marquede Hoffman Laroche36 37QuitterImprimerSommaire

Entretien dela pipette5.1Diagnostic rapide :Inspection du Pipetman en deux minutesChapitre 5Pour une longue durée de vieet des performances optimales,les pipettes doivent êtrerenvoyées pour une révisioncomplète une fois par an.Si vous êtes confronté à unepetite difficulté technique,il est très probable que cedysfonctionnement puisse êtrecorrigé directement chez vous.Etape 1Identification duPipetmanEtape 2Evaluation des fonctionsde pipetageEtape 3Test de fuiteEtape 4DémontageEtape 1Identification duPipetman Utilisez le numéro desérie pour identifierla pipette et déterminerson âge. Vérifiez la fiche devie de la pipette pourretrouver la date dela dernière maintenance.QComment déterminerl'âge de la pipette ?RToutes les pipettesGilson portent un numérode série qui identifiela pipette et la date defabrication.En savoir plusChapitre 5Avertissement : Utiliseruniquement des piècesdétachées d'origine Gilsondisponibles chez Gilson.Un diagnostic rapide duPipetman vous permet dedétecter des défauts et dedécider si la pipette doitêtre réparée chez vous ourenvoyée chez Gilson pourla maintenance.Etape 5RemontageimportantNe jamais manipuler unepipette d'origine inconnuesans porter des gants. Ellepourrait être contaminée.Gestion des dossiersSelon les Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL),il faut conserver des enregistrements détaillés dechaque étape de la procédure analytique. Quandune pipette est utilisée, le laboratoire doit pouvoirfournir les informations suivantes :• Identité de la pipette (numéro d'identification).• Historique de la pipette (dates d'entretien,réparations dans le laboratoire, étalonnage,réglage, nom de l'opérateur, etc.).• Spécifications.• Méthode de contrôle.• Conditions d'environnement.Ces informations peuvent être classées manuellement,mais de plus en plus de laboratoires setournent vers des systèmes informatisés de gestionde la Qualité, tels que le logiciel GilsonQualiTrace .Exemple de numéro de sérieA10369HLa première lettre (A) représente l'annéede fabrication.Le numéro (10369) est le numérode fabrication individuel.La dernière lettre (H) correspond aumois de fabrication.38 39LettreABCDEGHJKLMNPQRSTAnnée19841985198619871988198919901991199219931994199519961997199819992000LettreABCDEGHJKLMNMoisJanvierFévrierMarsAvrilMaiJuinJuilletAoûtSeptembreOctobreNovembreDécembreQuitterImprimerSommaire

Chapitre 5Etape 2Evaluation desfonctions depipetage Passez toute la plagede volume en revue enutilisant le réglage parle bouton-poussoir.(Sur les pipettes antérieures àmai 1995, utilisez la molette. VoirPour en savoir plus, page 24).- La molette doit tourner sansà-coups.- L'affichage des valeurs minimales et maximalesdoit correspondre à la gamme desvolumes nominaux de la pipette comme indiquédans le manuel d'instruction (ou voir page14).- Vérifiez l'alignement et le mouvement de l'affichagedu volumètre. Sélectionnez le volume maximalet appuyez lentement sur le boutonpoussoir.Le mouvement doit être régulier. Des "àcoups"ou des variations de friction peuventêtre dus à une rayure ou à la corrosion dupiston, ou être provoqués par une tige decommande tordue. Ecoutez si le ressortproduit un bruit qui indiquerait un positionnementincorrect à l'intérieur du Pipetman. Montez un cône Gilson et appuyez surl'éjecteur pour vérifier son bonfonctionnement.QComment empêcher lacorrosion du piston ?RAprès chaque contact avecdes liquides corrosifs, lepiston doit être nettoyé àl'alcool avec un chiffondoux. Veillez à éviter toutchoc ou rayure.Vous trouverez plus derenseignements sur les pistonsen page 8.En savoir plusQComment obtenirune mise en place correctedes cônes ?R• Utilisez toujours des cônesGilson pour les Pipetman.• Poussez l’éjecteur de cônevers le haut pour vous assurerqu’il est bien en place.• Nettoyez l’embout porte-côneà l'alcool. S'il est usé oua subi une attaque chimique,commandez une nouvellepièce chez Gilson.Etape 3Test de fuite Pour les PipetmanP1000 à P10 ml- Sélectionnez le volumemaximal et remplissezle cône avec de l'eau.- Laissez reposer pendant20 secondes.Si une goutte apparaîtà l'extrémité du cône,la pipette fuit. Pour les PipetmanP2 à P200- Sélectionnez le volume maximalet remplissez le cône.- Laissez reposer pendant 20 secondes.Si une goutte apparaît à l'extrémitédu cône, la pipette fuit.Si aucune goutte n'apparaît, replongezle cône dans le liquide d'essai.- Pendant l'immersion, le niveau du liquidedans le cône doit rester constant.Si le niveau dans le cône descend,la pipette fuit.QQuelles sont les principalescauses de fuites ?R• Rayure ou endommagement del’embout porte-cône• Cônes non adaptés• Joints défectueux• Pression de vapeur provenantde solvants organiquesQREn savoir plusComment les solvants organiquesprovoquent-ils des fuites ?Quand un solvant organique est utiliséavec une pipette à déplacement d'air, desfuites peuvent se produire. Ces fuitessont provoquées par la différence entrela pression de vapeur du solvant et lapression du matelas d'air entre le pistonet l'échantillon (voir page 9).Solution1 • Utilisez une pipette à déplacement positif sansmatelas d'air (voir page 6).2 • Si vous utilisez une pipette à déplacementd'air, saturez le matelas d'air de votre pipetteen vapeur de solvant en aspirant et distribuantdu solvant de façon répétée. La fuite disparaîtquand l'équilibre de pression est atteint.40 41QuitterImprimerSommaire

5.2Réparation au laboratoire ou retour au SAV ?Chapitre 5Etape 4DémontageimportantLes ultra-micropipettes Pipetman, modèles P2 et P10,comportent des pièces miniaturisées. Il est conseilléde ne pas démonter ces pipettes dans le laboratoire. Démontez la partie inférieure de la pipettepour confirmer votre diagnostic. Protocole de démontage :- Ejecter le cône.- Retirer l'éjecteur de cône 1.- Dévisser l'écrou raccord 2.- Séparer la poignée 4 de la partie inférieure 3de la pipette.- Retirer le piston 5 de l’embout porte-cône 6.- Vérifier la surface du piston 5, le joint d’étanchéité7 et le joint torique 8.45278Problème • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • SolutionLa pipette a plus d'un an et sa fiche de vie montre Renvoyez la pipette chez Gilson pourqu'elle n'a pas été révisée au cours des 12 mois précédents:une révision.Problème • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • SolutionPour les modèles autres que P2 et P10, vous avez identifiédes dommages concernant le bouton-poussoir, détachées chez Gilson. Ces pièces peu-Vous pouvez commander des piècesl'écrou raccord, le joint d’étanchéité, le joint torique, vent être remplacées dans le laboratoirel’embout porte-cône ou l'éjecteur :sans affecter les performances de lapipette.Problème • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • SolutionPour tout autre problème, et pour les modèles P2 et Renvoyez la pipette chez GILSON pourP10 :une vérification complète.Ne jamais démonter la partiesupérieure de la pipette.Etape 5Remontage Pour éviter de perdre ou d'endommagerdes pièces fragiles, remontez la pipetteimmédiatement après le diagnostic.Veillez à respecter l'ordre correct des pièces :le joint d’étanchéité 7 doit toujours être mis enplace avant le joint torique 8.361Un bon entretien de routine aideà éviter les réparations coûteuses.Pour mieux savoir comment prendre soin de votrepipette et obtenir des informations sur les stagesde formation, contactez les spécialistes du micropipetageGILSON.42 43QuitterImprimerSommaire

Étalonnage etréglage6.1A quoi correspondent les spécifications publiées ?Chapitre 6Chapitre 6Une pipette est aux liquides cequ'une balance de laboratoireest aux solides. Tout commeles balances et tout autre instrumentde précision,les pipettes doivent être inspectées,nettoyées, entretenueset vérifiées périodiquementde façonà s’assurer de leur fonctionnementdans la limite des spécificationsétablies par leconstructeur.Dans le chapitre 5, nous avonsdécouvert le diagnostic,le nettoyage et l'entretien despipettes. Dans ce chapitre,nous allons découvrir les spécificationset la façon de déterminersi la pipette doit êtreréglée ou non.Quand c'est l'heure ...Tous les jours à cinq heures,je règle ma montre surl'horloge du clocher.Si ma montre indique parfois4h59 et parfois 5h01, on peutdire qu'elle est assez juste,mais pas répétable.Si ma montre indique systématiquement5h02, elle estrépétable mais pas très juste.Les spécifications sont établies par le constructeur.Elles garantissent, en terme de justesse etrépétabilité, les performances de toutes lespipettes pour un modèle et un volume donné.Le tableau ci-dessous indique les performancesque vous pouvez obtenir avec n'importe quelmodèle Pipetman P1000 réglé sur 200, 500 ou1000 µL, à condition que la pipette soit entretenuecorrectement et qu'elle soit utilisée dans lesconditions indiquées.Spécifications 1Vol. Exactitude Fidélitéerreur systématique erreur aléatoireµL E (µL) E (%) S.D. (µL) R.S.D. (%)200 ±3 ±1,5 ≤ 0,6 ≤ 0,30500 ± 4 ± 0,8 ≤ 1,0 ≤ 0,201000 ± 8 ± 0,8 ≤ 1,5 ≤ 0,151Ces spécifications sont définies pour des pipettes utiliséesen mode direct. La méthode gravimétrique est utilisée, latempérature de l'eau désionisée et toutes les autres conditionsétant stabilisées entre 21 et 22°C. Les valeurs indiquéesincluent toutes les composantes de l'erreur dues à lafois à la chaleur normale de la main et au changement decône.En savoir plusQQu'est-ce queRl'exactitude ?L’exactitudereprésente l'aptituded'un instrument de mesureà donner des réponsesproches d'une valeurnominale. *QQu'est-ce que lafidélité ?RLa fidélitéreprésente la capacitéd'un instrument à fournirdes mesures très prochesles unes des autres. *** AFNOR : NF X 07-001, 1994 (F), P. 41.** Voir le glossaire page 50 pour des définitions complètes.Si elle indique toujours 5h00,ma montre est à la fois justeet répétable.exacte mais pas fidèle fidèle mais pas exacte exacte et fidèle44 45QuitterImprimerSommaire

6.2Calcul de l'exactitude et de la fidélité6.3Utilisation de la méthode gravimétriqueChapitre 6“L'exactitude” et la "fidélité" sont des termes qualitatifs. Les termes quantitatifs correspondantssont "erreur systématique" et "erreur aléatoire".• Evaluation de l'exactitudeL'exactitude spécifiée est la limite de l'erreur systématiquequi est la différence entre le volumemoyen des mesures réelles et la valeur nominaleaffichée sur l'instrument. L'erreur systématique (E)peut être estimée comme suit :_E = V - V0E erreur systématique_V0 volume nominalV volume moyen_V =1n ∑ni=1ViVi valeur mesuréen nombre de mesuresL'exactitude d'une pipette peut être expriméeen pourcentage du volume nominal :_E% =V - V0x 100V0importantLa moyenne et le nombre de mesuresdoivent être indiqués. La procédureexpérimentale utilisée doit être décriteafin que d'autres opérateurs puissentla reproduire. Voir l'exemple de spécificationsau chapitre 6.1.• Evaluation de la fidélitéLa fidélité spécifiée est la limite de l'erreur aléatoirequi correspond à la distribution des valeurs mesuréesautour d'une moyenne. Pour les pipettes, lafidélité fait référence à un groupe de données à l'intérieurd'une série.L'erreur aléatoire est alors quantifiée par l'écart-typedes mesures effectuées par rapport à un volumedonné sous les mêmes conditions de mesure.L'écart-type (SD ou "S") peut être estimé commesuit :S =∑ ni=1_V volume moyen_V =1n ∑ni=1ViVi valeur mesuréen nombre de mesures(10 minimum)_(V - Vi)n - 1La fidélité d'une pipette peut aussi être expriméeen pourcentage du volume moyen. Cerésultat est connu sous le nom d'écart-typerelatif (RSD) ou coefficient de variation (CV),et est estimé comme suit :SCD = _ x 100V2La méthode gravimétrique est recommandée par les fabricantsde pipettes et les organisations normatives internationales.Elle est basée sur la détermination du poids deséchantillons d'eau distribués par la pipette.La mise en œuvre de cette méthode nécessite le contrôlestrict des conditions d'environnement et l'utilisation systématiqued'un équipement approprié et contrôlé.Considérations généralesLes pipettes Gilson sont conçues pour compenser leseffets de la chaleur normale de la main pendant la série detests. Cependant, l'appareil évalué ne doit pas être surchauffépar une utilisation prolongée.21.5 °C±1.51013 hPa±25La température doit se situerentre 21,5 ± 1,5°C(293-296 K)La pression barométriquemoyennedans le laboratoire doit être de1013 ± 25hPa (mbar)45-75%L'humidité relative doit êtrecomprise entre 45 et 75% pourréduire la vitesse d'évaporationet contrôler la formation descharges électrostatiques.45-75%NB : Le poids de l'eau pipetée doit être converti en volumeselon le tableau de correction (µL/mg). Voir annexe II.Equipement nécessaire70.7 °F±2.714.5 psi±0.36• Thermomètre étalonnéThermomètre étalonné avec échelle de lecture à 0,1°Cpour mesurer la température ambiante et celle de l'eau audébut et à la fin de la série de tests.• HygromètreHygromètre étalonné pour vérifier l'humidité de l'air pendantle test.• BaromètreBaromètre étalonné pour vérifier la pression atmosphérique.• Eau désioniséeL'eau utilisée pour le test doit être désionisée, exempted'air dissous, et doit être renouvelée deux fois par jour.• BalancesLes balances de laboratoire nécessaires pour le test doiventprésenter au moins les caractéristiques suivantes :Volume testéµL0,1 à 2021 à 200201 à 10000Sensibilitémg0,0010,010,1Ecart-typemg0,0020,020,2*International Organization of Legal MetrologyClasseIOLM*• VerrerieLe matériel de test doit présenter les caractéristiques suivantes:P10ml > 5 ml bécher Ø 40 mm 10 -4 g -250 ml H 100 mm46 47InstrumentsP2 - P20F2 - F25M10M25 à 3 µLM100 à 10 µLP100 - P2008X200F50 - F200M25 - M50M100 à 100 µLM250P1000 - P5000F250 - F1000M1000Volumes0,120 µL20200 µL2005000 µLRéservoird’eauØ 35 mmH 50 mmØ 35 mmH 50 mmØ 50 mmH 70 mmRécipientdepeséeØ 10.5 mmH 13 mmØ 21 mmH 50 mmØ 35 mmH 50 mmBalance10 -6 g10 -5 g10 -4 gE2E2E2AutresCouverclePinceCouvercle-QuitterImprimerSommaire

6.4 Procédured’étalonnage6.5Fréquence de testsChapitre 6Quelques remarques au sujet des balancesAvec les balances analytiques modernes, seulement deuxbalances sont nécessaires à un laboratoire pour vérifiertout un stock de pipettes allant de 0,1 µL à 10 ml. Unebonne combinaison correspondrait à une balance à sixpositions et une autre fonctionnant sur deux échelles, parexemple 50 g avec une sensibilité de 0,01 mg et 200 gavec une sensibilité de 0,1 mg.Les balances de test doivent être étalonnées, entretenueset agréées par le service des poids et mesures.Pour réduire les vibrations, les balances doivent être placéessur une table de balance ou un support équivalent. Lazone de pesées doit être à l'abri des courants d'air, et l'airambiant doit être exempt de poussière.Conversion Masse/VolumeLa conversion en volume doit tenir compte de la densité duliquide ainsi que de l'évaporation pendant le temps decycle. Pour chaque mesure, le volume correspondant (Vi)peut être calculé comme suit :_Vi = ( Mi + e ) ZMi_eZest la masse lue sur la balanceest la perte d'évaporation moyennependant le temps de cycleexprimé en µl/mg est un facteur deconversion intégrant la flottabilité de l'eaudans l'air, à la température et àla pression barométrique de test.NB : Pour des mesures supérieures à 20 µL, le facteurd'évaporation peut être négligé.Pour vous aider, vous trouverez un exemplecomplet en annexe I.Estimation du facteur Z(facteur de conversion)Le facteur Z ne correspond pas seulement à la densité del'eau ajustée selon les paramètres locaux de température etde pression. Il doit aussi tenir compte de la densité de l'airet de la densité des masses utilisées pour étalonner labalance.Pour les très petits volumes, l'application du facteur Z peutne pas affecter le résultat final.La formule détaillée ainsi que le tableau indiquant le facteurZ à prendre en compte sont fournis en annexe II._Estimation du facteur e(perte par évaporation)L'évaporation qui se produit au cours du test gravimétriquedépend surtout de la température, de l'humidité etdu temps de cycle de travail. Elle peut avoir un effet sensiblesur les mesures des petits volumes (en particulier surles modèles Pipetman P2, P10 et P20, F2, F5, F10 et F20,et les modèles Microman M10 et M25). La perte par évaporationest estimée en exécutant une série de quatrecycles de pesée simulés et en calculant la perte de poidsmoyenne par cycle de pesée en mg. Effectuez chaquecycle de pesée sans ajouter le liquide aspiré dans le récipient.Distribuez le liquide dans un récipient d'essai.L'évaporation moyenne e - est calculée comme suit :_e =1(e1 + e2 + e3 + e4)4Une procédure pour la détermination de e est fournie enannexe III.-1 . . Placer une petite quantité d'eau dans le récipient depesée.2 . . Positionner le consommable (cône ou ensemble capillaire/piston).3 . . Si le test concerne une pipette à volume variable, afficherle volume souhaité. En principe, on teste le volumeminimum et le volume maximum spécifiés.4 . . Pré-rincer le cône une fois par une mesure normalesans la compter pour les calculs.5 . . Noter la température ambiante et celle de l'eau, l'humiditéet la pression barométrique.6 . . Aspirer un échantillon en mode direct.7 . . Mettre la balance à zéro.8 . . Ouvrir la porte de la balance, retirer le récipient depesée, distribuer l'échantillon, remettre sur le plateaude la balance et fermer la porte.9 . . Après stabilisation, noter la valeur (Mi).10 . . Répéter les étapes 6 à 9 autant de fois (n) que nécessairepour le test.11 . . Pour un échantillon inférieur ou égal à 20 µL, estimer laperte par évaporation en répétant les étapes 6 à 8exactement comme pour une pesée d'échantillon normalemais sans ajouter réellement l'échantillon dans lerécipient de pesée. Noter la valeur absolue (ei) et répéterla mesure plusieurs fois (m).12 . . Noter la température, l'humidité et la pression barométrique.Vérifier que les valeurs se trouvent toujours àl'intérieur des limites recommandées.13 . . Utiliser la moyenne des premières et deuxièmes valeursde la température et de la pression barométrique pourdéterminer la correction nécessaire (Z). Voir annexe II.14 . . Calculer l'exactitude et la fidélité et comparer le résultataux spécifications du fabricant. (Voir page 46 pourle calcul de l'exactitude et de la fidélité.)Etant donné que l'exactitude et la fidélité ont une influencedirecte sur la qualité des résultats analytiques, il est impératifde comparer régulièrement les performances despipettes aux spécifications du fabricant.L'analyse gravimétrique est une méthode pratique, largementutilisée pour tester les performances (justesse etrépétabilité) d'une pipette.Tableau de fréquence pour les tests de pipette48 49FréquenceQuotidienneHebdomadaireTous lessix moisTestTest de fuiteTest d'exactitudeTest d'exactitude etde fidélitéimportantMéthodeVoir Inspection endeux minutes (page 41)4 mesures10 mesuresVérifiez toujours si la pipette ne présente pas dedéfaut mécanique (voir inspection en deuxminutes, page 38) avant de procéder à un testgravimétrique.QuitterImprimerSommaire

GLOSSAIREExactitude*Matelas d’airmatelas d'airAliquoteDistributeurErreur (de mesure)*L'exactitude correspond àla capacité d’un instrumentde mesure de donner desréponses proches d’unevaleur nominale.NB : «l'exactitude» est unenotion qualitative.Également appelé «volumemort», le Matelasd’air est le volume d’airsitué entre la partie inférieuredu piston de lapipette et le niveau de lasurface de l’échantillon.Partie mesurée d‘uneentité homogène. C’estun terme général pourdésigner des échantillonsmultiples d’unesolution, d’un mélange,etc.Appareil qui fournit desvolumes prédéterminésd’un liquide prélevé dansun réservoir. Le réservoirpeut être intégré dansl’appareil ou y être raccordé.Erreur (aléatoire)*Résultat d’un mesurage moins la moyenne d’unnombre infini de mesurage du même mesurandeeffectués dans les conditions de répétabilité.NB :1 L’erreur aléatoire est égale à l’erreur moins l’erreur systématique.2 Comme on ne peut faire qu’un nombre fini de mesurages,il est seulement possible de déterminer une estimationde l’erreur aléatoire.Erreur (systématique)*Moyenne qui résulterait d’un nombre infini de mesuragesdu même mesurande, effectués dans lesconditions de répétabilité, moins une valeur vraie dumesurande.NB : 11 L’erreur systématique est égale à l’erreur moins uneerreur aléatoire.2 Comme la valeur vraie, l’erreur systématique et sescauses ne peuvent pas être connues complètement.Bonnes Pratiques de LaboratoireLes Bonnes Pratiques de Laboratoire (BPL) concernentle processus d’organisation et les conditionssous lesquelles des analyses de laboratoire sontplanifiées, effectuées, surveillées, enregistrées etprésentées.Mesurande*Grandeur particulière soumise à un mesurage.Ex. : La pression de vapeur d’un échantillon d’eau donnéà 20°C.NB : La définition du mesurande peut nécessiter des indicationsrelatives à des grandeurs telles que le temps, latempérature et la pression.Volume nominal*Valeur arrondie ouapproximative d’une1100 µl caractéristique d’un instrumentde mesure qui00sert de guide pour sonutilisation.Ex. : a) la valeur 1l marquéesur une fiole jaugée à un trait. - b) 100 µl comme le réglageapparaissant sur le volumètre d’une pipette.Résultat d’un mesurage moins une valeur nominaledu mesurande.NB : Cette différence ou écart-type (positif ou négatif) est expriméesoit dans l’unité de la quantité mesurée (erreur absolue), soiten pourcentage de la valeur nominale (erreur relative).Remarque : Pour le pipetage, il faut réduire au minimumles variations imputables à l’opérateur (ex. : temps decycle).NB : Ne pas sélectionner de volume en dehors des limitesrecommandées.*Définitions extraites d’AFNOR : NF X 07+001, 1994 (F)50 51PipetteFidélitéInstrument destiné à distribuerun volume prédéterminéde liquide d’unrécipient à un autre. Unepipette n’est pas reliée àun réservoir.La fidélité est un termequalitatif. Il s’agit de lacapacité d’un instrumentà fournir des réponses(mesures) très similaires.La fidélité est souventappelée répétabilité et/ou reproductibilité.Répétabilité*(des résultats de mesures)Étroitesse de l’accord entre les résultats des mesuragessuccessifs du même mesurande, mesurageseffectués dans la totalité des mêmes conditions demesure.• même mode opératoire•même observateur• même instrument de mesure utilisé dans lesmêmes conditions• même lieu•Répétition durant une courte période de temps.Reproductibilité*(des résultats de mesures)Étroitesse de l’accord entre les résultats des mesuragessuccessifs du même mesurande. Mesurageseffectués en faisant varier les conditions de mesure(ex. : par un opérateur différent).Échantillond’une population».Rétention d’échantillonPartie représentatived’un liquide à analyser.Le terme «échantillontest»est utilisé pouréviter la confusion avecle terme statistique«échantillon aléatoirePartie de l’échantillonretenue dans l’instrumentaprès la distributionde l’échantillon etqui peut affecter leséchantillons suivants.NB : La rétentiond’échantillon d’unepipette à déplacementpositif est moindre que celle d’une pipette à déplacementd’air.Valeur absolueLa valeur absolue est la valeur qui serait obtenue parune mesure parfaite.Plage d’utilisationVminTminéchantilloVmaxTmaxGamme de volumes etgamme de températures,ainsi que conditionsambiantes pourlesquelles sont donnéesles spécificationsde l’instrument.GLOSSAIREQuitterImprimerSommaire

ANNEXE I - Exemple d’étalonnageANNEXE II - Facteur ZANNEXEVoici un exemple pour évaluer les performancesd’un Pipetman P10 à 1 µl.1. Déterminer la valeur moyenne e dela perte par évaporation ei qui se produitpendant les cycles de pipetage.Procéder comme décrit en annexe III pourdéterminer ei_e =1n ∑mi=1ein : nombre de peséese1 = 0,016 mge2 = 0,018 mge3 = 0,021 mge4 = 0,017 mg_e = (e1+e2+e3+e4) / 4_e = (0,016+0,018+0,021+0,017) / 4_e = 0,018 mg/par cycle2. Remplacer le cône et procéder à lapremière pesée. Ensuite, maintenir uncycle régulier et effectuer les dix mesuressuivantes.Mr = 0,957 mgM1 = 0,968 mgM2 = 0,960 mgM3 = 0,984 mgM4 = 0,942 mgM5 = 0,969 mgM6 = 0,966 mgM7 = 0,955 mgM8 = 0,972 mgM9 = 0,958 mgM10 = 0,967 mgMr est la mesure de rinçage qui n'estpas prise en compte pour le calcul.3. Calculer la masse moyenne._M =1n ∑ni=1Min nombre de pesées_4. Calculer le volume moyen._ _ _V = ( W+e ) x ZPour une température de 21,5°C et une pressiond’air de 1013 hPa, le facteur Z est égalà 1,0032 µl/mg (voir tableau à l’annexe II)._V = (0,964+0,018) x 1,0032_V = 0,985 µl5. Évaluer l'exactitude.Erreur systématique (E) :_E = V - V0V0 valeur nominale réglée sur l'instrumentE = 0,985 - 1 = - 0,015 µlErreur relative (E%) :_E% = ( V - V0 ) x 100 / V0E% = (-0,015 x 100) / 1 = - 1,50 %6. Évaluer la fidélité.Écart-type (S m)Sm =_(Mi - M)n - 1S_2m = 1( Mi - M ) 2S m 2 =19n - 1∑ ni=1∑ ni=1(0,968-0,964) 2 + (0,960-0,964) 2 + (0,984-0,964) 2 +(0,942-0,964) 2 + (0,969-0,964) 2 + (0,966-0,964) 2 +(0,955-0,964) 2 + (0,972-0,964) 2 + (0,958-0,964) 2 +(0,967-0,964) 22Voici l’équation pour le calcul de référence : Z = [1/(PE-PA)] [1-(PA/PB)]Où :PA = densité de l’air à t°C.PE = densité du liquide de test à t°C.PB = densité des masses de la balance. Utiliser 8 g/cc pour PBNB : Les masses conformes à la Recommandation Internationale n°33 de l’IOLM ont été ajustées pourfournir des résultats lors de pesées dans l’air comme si la densité des masses était de 8,0 g/mL.Valeurs du facteur de correction Z (µL/mg) pour l’eau désionisée en fonction de latempérature et de la pression.TempératurePression d’air°C hPa800 853 907 960 1013 106715 1,0018 1,0018 1,0019 1,0019 1,0020 1,002015,5 1,0018 1,0019 1,0019 1,0020 1,0020 1,002116 1,0019 1,0020 1,0020 1,0021 1,0021 1,002216,5 1,0020 1,0020 1,0021 1,0022 1,0022 1,002317 1,0021 1,0021 1,0022 1,0022 1,0023 1,002317,5 1,0022 1,0022 1,0023 1,0023 1,0024 1,002418 1,0022 1,0023 1,0024 1,0024 1,0025 1,002518,5 1,0023 1,0024 1,0025 1,0025 1,0026 1,002619 1,0024 1,0025 1,0025 1,0026 1,0027 1,002719,5 1,0025 1,0026 1,0026 1,0027 1,0028 1,002820 1,0026 1,0027 1,0027 1,0028 1,0029 1,002920,5 1,0027 1,0028 1,0028 1,0029 1,0030 1,003021 1,0028 1,0029 1,0030 1,0030 1,0031 1,003121,5 1,0030 1,0030 1,0031 1,0031 1,0032 1,003222 1,0031 1,0031 1,0032 1,0032 1,0033 1,003322,5 1,0032 1,0032 1,0033 1,0033 1,0034 1,003523 1,0033 1,0033 1,0034 1,0035 1,0035 1,003623,5 1,0034 1,0035 1,0035 1,0036 1,0036 1,003724 1,0035 1,0036 1,0036 1,0037 1,0038 1,003824,5 1,0037 1,0037 1,0038 1,0038 1,0039 1,003925 1,0038 1,0038 1,0039 1,0039 1,0040 1,004125,5 1,0039 1,0040 1,0040 1,0041 1,0041 1,004226 1,0040 1,0041 1,0042 1,0042 1,0043 1,004326,5 1,0042 1,0042 1,0043 1,0043 1,0044 1,004527 1,0043 1,0044 1,0044 1,0045 1,0045 1,004627,5 1,0044 1,0045 1,0046 1,0046 1,0047 1,004728 1,0046 1,0046 1,0047 1,0048 1,0048 1,004928,5 1,0047 1,0048 1,0048 1,0049 1,0050 1,005029 1,0049 1,0049 1,0050 1,0050 1,0051 1,005229,5 1,0050 1,0051 1,0051 1,0052 1,0052 1,005330 1,0052 1,0052 1,0053 1,0053 1,0054 1,0055S m = 0,011 mgM_ i résultats des peséesErreur aléatoire (Sv) :M = (0,968+0,960+0,984+0,942+ 0,969+0,966+0,955+0,972S v = S m x Z_ + 0,958+0,967) / 10M = 0,964 mgS v = 0,011 x 1,0032 = 0,011 µl52 53ANNEXEQuitterImprimerSommaire

ANNEXE III - Perte par évaporationProcédure pour déterminer la pertepar évaporationANNEXEUtilisez la même eau désionisée, le même récipientde pesée et la même balance que ceuxque vous allez utiliser pour le contrôle gravimétrique.1. Remplir le récipient de pesée à moitié avec del’eau désionisée.2. Couvrir le récipient de pesée avec son couvercleet le placer sur la balance à l’aide d’unepince.3. Pipeter un échantillon.4. Tarer la balance et sortir le récipient de peséede la balance.5. Enlever le couvercle à l’aide de la pince.6. Distribuer l’échantillon dans un récipient d’essai.7. Remettre le couvercle en place sur le récipientde pesée et à l’aide de la pince, reposer le récipientsur la balance.8. Lire le résultat négatif e 1(noter la valeur absolue).9. Répéter les étapes 3 à 8, trois fois pour obtenire 2, e 3et e a.10. Calculer la perte par évaporation e à l’aide de laformule_e =1(e1 + e2 + e3 + e4)4Normalement, cette valeur se situe entre0,01mg et 0,03 mg._NOTES54 55QuitterImprimerSommaire