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ANTIFONGIGRAMME :

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<strong>ANTIFONGIGRAMME</strong> :<br />

Evaluation de la carte AST-YSO1®<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

sur l’automateVitek2 ®<br />

Responsable de Stage :<br />

Mme Lysiane Tissières Lovey


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Table des matières<br />

1. Sommaire / Summary............................................................................................. 4<br />

2. Généralités ............................................................................................................. 5<br />

2.1 Bref historique ................................................................................................ 5<br />

2.2 Caractéristiques générales ............................................................................ 6<br />

2.3 Les Candida..................................................................................................... 7<br />

2.3.1 Candida albicans........................................................................................ 8<br />

2.3.2 Candida tropicalis..................................................................................... 10<br />

2.3.3 Candida glabrata ...................................................................................... 10<br />

2.3.4 Candida parapsilosis ................................................................................ 11<br />

2.3.5 Candida krusei.......................................................................................... 11<br />

2.3.6 Candida lusitaniae.................................................................................... 12<br />

2.3.7 Candida kefyr ........................................................................................... 13<br />

2.3.8 Candida guilliermondii .............................................................................. 13<br />

2.4 Les Cryptococcus......................................................................................... 14<br />

2.4.1 Cryptococcus neoformans........................................................................ 14<br />

2.5 Épidémiologie ............................................................................................... 15<br />

2.6 Clinique.......................................................................................................... 15<br />

2.7 Diagnostic...................................................................................................... 18<br />

2.7.1 Prélèvement ............................................................................................. 18<br />

2.7.2 Examen direct .......................................................................................... 18<br />

2.7.3 Culture...................................................................................................... 18<br />

2.7.4 Identification ............................................................................................. 18<br />

2.7.5 Antifongigramme ...................................................................................... 18<br />

2.8 Traitements.................................................................................................... 18<br />

3. Travail pratique......................................................................................................22<br />

3.1 Introduction ................................................................................................... 22<br />

3.2 Situation du travail dans son environnement ............................................ 22<br />

3.3 Objectifs......................................................................................................... 22<br />

3.4 Matériel et méthodologie.............................................................................. 23<br />

3.4.1 Matériel..................................................................................................... 23<br />

3.4.2 Présentation des techniques .................................................................... 24<br />

3.4.2.1 ATB FUNGUS 3 ®................................................................................ 24<br />

3.4.2.2 Carte Vitek AST-YS01®..................................................................... 27<br />

Gloor Ariane 2/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3.5 Analyse des résultats .................................................................................................. 30<br />

3.5.1 Premiers essais et actions correctives ..................................................... 30<br />

3.5.2 Explications des tableaux de résultats...................................................... 30<br />

3.6 Tableaux des résultats ................................................................................. 31<br />

3.7 Interprétation................................................................................................. 41<br />

3.7.1 Pourcentages de concordance et discordance entre l’ATB FUNGUS 3 ® et<br />

la Carte Vitek AST-YS01® ....................................................................... 41<br />

3.7.2 Pourcentages de concordance et discordance entre nos résultats et ceux<br />

obtenus dans l’étude précédente ............................................................. 44<br />

3.7.3 Reproductibilité......................................................................................... 44<br />

3.8 Discussion..................................................................................................... 45<br />

3.8.1 Avantages et inconvénients de l’ATB FUNGUS 3 ® ................................... 45<br />

3.8.2 Avantages et inconvénients de la carte Vitek AST-YS01®....................... 46<br />

3.9 Conclusion et synthèse................................................................................ 46<br />

3.10 Perspectives................................................................................................ 47<br />

4. Remerciements .....................................................................................................48<br />

5. Glossaire ...............................................................................................................48<br />

6. Bibliographie..........................................................................................................51<br />

6.1 Livre ............................................................................................................... 51<br />

6.2 Brochure ........................................................................................................ 51<br />

6.3 Supports de cours, documents non publiés .............................................. 51<br />

6.4 Internet........................................................................................................... 52<br />

7. Annexes.................................................................................................................53<br />

7.1 Procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®............................................................... 53<br />

7.2 Feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ® .................................................. 54<br />

7.3 Résultats de l’étude précédente .................................................................. 55<br />

Gloor Ariane 3/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

1. Sommaire<br />

Ces vingt dernières années, le nombre croissant de patients immunodéficients a<br />

généré une forte augmentation d’infections fongiques. Ces infections sont<br />

diagnostiquées de plus en plus précocement et traitées à l’aide de nouveaux<br />

antifongiques moins toxiques et mieux tolérés. La sensibilité des levures aux<br />

antifongiques doit être déterminée rapidement au moyen d’une méthode fiable.<br />

L’objectif de cette étude est d’évaluer la carte AST-YS01 ® sur l’automate Vitek2 ® et<br />

de comparer les résultats obtenus avec l’ATB FUNGUS 3® qui est la méthode utilisée<br />

actuellement. Nous avons testé 50 souches de Candida ainsi que 2 souches de<br />

référence ATCC. Ces souches avaient été testées dans une étude similaire.<br />

46/50 souches ont donné des résultats identiques avec les deux méthodes. 4<br />

souches ont donné des discordances mineures (2 avec le fluconazole, et 2 avec la<br />

flucytosine). Aucune discordance majeure n’a été observée.<br />

La carte AST-YS01 ® ne contient que 4 antifongiques et l’itraconazole n’est pas<br />

présent. Les CMI obtenues ont une meilleure précision ainsi qu’une bonne<br />

reproductibilité et sont interprétées par un automate. Le coût est légèrement plus<br />

élevé que celui de la galerie ATB FUNGUS 3® . La simplicité et la rapidité de<br />

préparation de l’analyse font que cette méthode est la plus adaptée au travail de<br />

routine d’un grand laboratoire de bactériologie. Cependant, l’ATB FUNGUS 3® reste<br />

une bonne alternative pour un laboratoire non automatisé.<br />

1. Summary<br />

These last twenty years, the growing number of immunodeficients patients generated<br />

a significant increase of fungal infections. These infections are diagnosed earlier and<br />

treated with new antifungal less toxic and better tolerated. The yeast sensibility for<br />

the antifungal must be fast determined by a sure method.<br />

The objectives of this study is to assess the AST-YS01 ® card on the automat Vitek2 ®<br />

and to compare results acquired with the ATB FUNGUS 3® which is the method used<br />

nowadays. We tested 50 strains of yeast as well as 2 reference ATCC strains. These<br />

strains had already been tested in a previous study.<br />

46/50 strains gave identical results with both methods. 4 strains gave minor<br />

discrepancies (2 with the fluconazol, and 2 with the flucytosine). No major<br />

discrepancy was observed.<br />

The AST-YS01 ® card contains only 4 antifungals and the itraconazol is not present.<br />

Acquired MIC has a better precision as well as a good reproducibility and is<br />

interpreted by an automat. The cost is a slightly higher then the other method.<br />

Simplicity and fastness of the preparation make this method more suitable for our<br />

laboratory. However, the ATB FUNGUS 3® is a good choise for a not automated<br />

laboratory.<br />

Gloor Ariane 4/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2. Généralités<br />

Ces vingt dernières années, la mycologie médicale s’est fortement transformée avec<br />

une explosion d’infections fongiques. Chaque année, la liste des « nouveaux<br />

champignons » isolés s’allonge. C’est la conséquence du nombre croissant de<br />

patients immunodéficients.<br />

Ces changements ont entraîné des progrès majeurs dans la connaissance<br />

épidémiologique et physiopathologique des infections ainsi que de nouvelles<br />

possibilités diagnostiques et thérapeutiques.<br />

De plus, il existe de nouveaux antifongiques comme le voriconazole, la caspofongine<br />

ou le posaconazole.<br />

2.1 Bref historique<br />

Si aujourd’hui les champignons constituent un règne bien individualisé, il n’en a pas<br />

toujours été ainsi. On les a longtemps assimilés au règne végétal de part leur<br />

morphologie (thalle, spores, etc.), de part leur absence de mobilité et leur nutrition<br />

(absorption).<br />

Au 18 ème siècle, le monde vivant était partagé en 2 règnes : le végétal et l’animal. Le<br />

règne végétal regroupait les plantes et les algues, qui sont des espèces<br />

photosynthétiques, les bactéries et les champignons. Le règne animal, quant à lui,<br />

était composé à la fois d’êtres unicellulaires, c’est-à-dire les Protozoaires et des<br />

Métazoaires.<br />

Selon D. Chabasse, Cl. Guiguen. N. Contet-Audonneau (1999) :<br />

En 1866, le naturaliste et philosophe allemand Haeckel proposa d’y ajouter un<br />

troisième règne, celui des Protistes, ce que Copeland transformera plus tard en<br />

Protoctistes pour y regrouper la plupart des unicellulaires c’est-à-dire des<br />

bactéries, les Protozoaires, les Myxomycètes et autres protistes fongoïdes en<br />

raison de leur similitude avec les Rhizopodes. Les champignons et les algues<br />

sont quant à eux restés encore longtemps associés au règne végétal. (p.3)<br />

C’est en 1969 que l’américain Wittaker propose un système taxinomique à 5 règles<br />

soit les monomères (bactéries), les protistes, les végétaux, les champignons et les<br />

animaux.<br />

Gloor Ariane 5/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.2 Caractéristiques générales<br />

Les champignons, que l’on appelle également mycètes, sont des organismes<br />

eucaryotes uni- ou pluricellulaires, dépourvus de chlorophylle, ce qui les distingue<br />

des végétaux.<br />

Il s’agit d’un organisme hétérotrophe qui se nourrit par absorption et non par<br />

phagocytose. Les champignons, contrairement aux végétaux, sont dépourvus de<br />

pigment chlorophyllien et ainsi ne peuvent pas incorporer directement le carbone<br />

minéral dans leurs cellules. C’est pourquoi ils dépendent de matières organiques<br />

préformées, c’est-à-dire déjà présentes et produites par d’autres organismes vivants.<br />

C’est la raison pour laquelle, dans la nature, les champignons colonisent les<br />

organismes morts ou en décomposition, trouvant ainsi dans cette source les<br />

nutriments essentiels à leur vie soit du carbone, de l’azote, des sels minéraux, etc.<br />

La reproduction se fait selon un mode asexué mais qui peut être sexué dans<br />

certaines conditions.<br />

Les champignons sont des êtres immobiles mais qui produisent un nombre<br />

considérable de spores habituellement non flagellées pour pallier à ce handicap.<br />

La partie constitutive est désignée sous le nom de thalle ou mycélium. Leur paroi est<br />

constituée de chitine (comme chez les insectes), ce qui leur procure une sorte de<br />

résistance face aux contraintes du milieu extérieur. Les champignons possèdent un<br />

noyau avec une membrane nucléaire, des nucléoles et le plasmalemme composé de<br />

glycoprotéines, phospholipides et d’ergostérol qui correspond au cholestérol de<br />

toutes les autres cellules. Cette particularité donne une cible idéale pour les<br />

antifongiques qui seront très spécifiques, sans action sur les autres cellules.<br />

Selon D. Chabasse, Cl. Guiguen. N. Contet-Audonneau (1999) :<br />

Le pouvoir pathogène du champignon n’est pas uniquement dû à son<br />

parasitisme ou à son développement chez l’homme ou l’animal. Il peut, en<br />

produisant des toxines issues de son mycélium, être directement à l’origine<br />

d’intoxication alimentaire, ou bien, par l’accumulation de ses toxines libérées<br />

dans des végétaux consommés, être un agent de mycotoxinoses chez<br />

l’homme ou l’animal. (p.2)<br />

Les levures, quant à elles, possèdent un thalle unicellulaire. Il s’agit d’un mycète<br />

unicellulaire qui ne possède qu’un seul noyau et qui se reproduit soit de façon<br />

asexuée par bourgeonnement, soit de façon sexuée par formation de spores.<br />

Chaque bourgeon qui se sépare va développer une nouvelle levure, certains restent<br />

groupés et forment de nouvelles colonies.<br />

Les levures sont plus grandes que les bactéries, elles sont généralement sphériques<br />

ou ovoïdes.<br />

Gloor Ariane 6/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Ci-dessous, vous trouvez un schéma de la fréquence des principales espèces de<br />

levures appartenant au genre Candida, isolées en France :<br />

11%<br />

Fréquence des divers espèces de levures appartenant au genre Candida<br />

1%<br />

1%<br />

4%<br />

4%<br />

2%<br />

2%<br />

C.albicans<br />

C.glabrata<br />

C.tropicalis<br />

C.parapsilosis<br />

C.krusei<br />

C.kefyr<br />

C.guilliermondii<br />

Autres<br />

Cette étude à été réalisée par GEMO : Groupe d’étude des mycoses opportunistes,<br />

auprès de 25 laboratoires de mycologie.<br />

En comparaison, voici les résultats obtenus au département de bactériologie de<br />

l’ICHV, Sion (2008).<br />

Comme nous pouvons le constater, il y a environ 75% de Candida albicans.<br />

3%<br />

1%<br />

1%<br />

1%<br />

1%<br />

15%<br />

2.3 Les Candida<br />

Gloor Ariane 7/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

75%<br />

Pourcentages des divers espèces de levures isolées<br />

1%<br />

1%<br />

76%<br />

C. albicans<br />

C. glabrata<br />

C. kefyr<br />

C. krusei<br />

C. lus itaniae<br />

C. paraps ilos is<br />

Candida sp<br />

C. tropic alis<br />

Autres<br />

Les levures du genre Candida sont des champignons unicellulaires mesurant de 4 à<br />

6 μm de long. Elles se multiplient par bourgeonnement ou éventuellement sous<br />

forme de pseudomycélium ou mycélium.<br />

Il s’agit de levures blanches, opaques, de formes ovoïdes, Gram positif et non<br />

encapsulées avec une petite protubérance à une extrémité.


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Les Candida poussent sur une gélose Sabouraud contenant des antibiotiques<br />

antibactériens à 25°C ou 37°C selon l’origine du prélèvement. Les colonies de<br />

levures sont visibles en 24 à 48 heures.<br />

En ce qui concerne la morphologie, elle est assez pauvre. L’identification se fait en<br />

grande partie grâce à des tests biochimiques. Le thalle est fait de levures très<br />

allongées qui restent attachées les unes aux autres, formant des pseudo-filaments<br />

qui sont caractéristiques du genre.<br />

Il existe plusieurs espèces de Candida dont voici les plus fréquentes.<br />

2.3.1 Candida albicans<br />

http://www.microbelibrary.org/microbelibrary/files/ccImages<br />

/Articleimages/Buxton/07%20Spt%20fungi/Candida%20albi<br />

cans%20fig2.jpg<br />

2001, William McDonald, M.D.<br />

Revised: 31 December 2000<br />

Il s’agit de l’espèce la plus fréquemment isolée, 60-80% des cas.<br />

Candida albicans est une levure cosmopolite, commensale des muqueuses oropharyngées,<br />

gastro-intestinales et génito-urinaires. Elle peut occasionnellement<br />

coloniser la peau.<br />

Elle fait partie de la famille des Deuteromycètes.<br />

Levures ovalaires ou rondes au microscope, sur gélose, elles sont blanches,<br />

crémeuses, lisses, formant des « pattes », des colonies étoilées qui permettent de<br />

les identifier sur les géloses Columbia (COS) et Chocolat PolyVitex. (PVX).<br />

Gloor Ariane 8/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

http://labmed.ucsf.edu/education/residency/f<br />

ung_morph/fungal_site/thumbnails/calbicans-on-cnaofw4.jpg<br />

En vieillissant, elles forment un pseudomycélium : filaments avec des zones<br />

rétrécies.<br />

La raison pour laquelle les colonies de Candida albicans forment des sortes de<br />

pattes est qu’ils forment des tubes germinatifs grâce au sérum contenu dans les<br />

géloses (test de blastèse).<br />

Un autre moyen permettant de les identifier est d’isoler les levures sur un milieu<br />

chromogène comme par exemple Albicans ID produit par bioMérieux® SA. La<br />

couleur bleue est caractéristique des colonies de C. albicans. Elle est liée à<br />

l’hydrolyse spécifique d’un substrat chromogène d’hexosaminidase.<br />

L’inhibition de la flore bactérienne est obtenue par l’association de 2 antibiotiques : le<br />

chloramphénicol et la gentamicine. Ce milieu est tamponné afin de faciliter la<br />

croissance des levures et d’optimiser l’expression de la réaction enzymatique.<br />

http://www.biomerieux.fr/upload/Candida<br />

2_thumb2_thumb.jpg<br />

Gloor Ariane 9/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.3.2 Candida tropicalis<br />

Candida tropicalis représente 25% des isolats de levures de ce genre en pathologie<br />

humaine. Son pouvoir pathogène est comparable à celui du Candida albicans.<br />

Candida tropicalis est isolé dans la nature, le sol, les végétaux et l’eau.<br />

Cette levure est apparentée aux Ascomycètes.<br />

Elle a une forme variable, ronde à allongée et ces colonies poussent rapidement.<br />

Elles sont crémeuses, blanches, lisses ou légèrement plissées. Elles sont souvent<br />

associées à un pseudomycélium.<br />

Un milieu chromogène (Albicans ID) permet de les identifier, les colonies sont de<br />

couleur rose.<br />

2.3.3 Candida glabrata<br />

http://www.labmed.ch/doc/doc_download.cfm?<br />

uuid=36309A76D9D9424C4F9520A5E21C82<br />

8F&&IRACER_AUTOLINK&&<br />

Candida glabrata représente environ 8% des isolats de levures du genre Candida<br />

isolées de prélèvements cliniques.<br />

Cette espèce est apparentée aux Ascomycètes.<br />

Il s’agit de levures de forme ronde ou allongée et de petite taille. Elles sont blanches,<br />

crémeuses, plates, brillantes. Le pseudomycélium est parfois absent, rudimentaire<br />

ou abondant. Au microscope, nous voyons de petites levures qui ne filamentent pas.<br />

Candida glabrata est souvent retrouvé au niveau des muqueuses génitales.<br />

https://www.hardydirefphotoagnostics.<br />

com/catalog2/hugo//g301_hccandida_<br />

cglabrata_66032_hugo.jpg<br />

Gloor Ariane 10/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.3.4 Candida parapsilosis<br />

Candida parapsilosis est une levure saprophyte, responsable d’environ 7% des<br />

infections dues aux levures du genre Candida. Cette levure fait partie de la flore<br />

normale de la peau chez l’homme.<br />

Il s’agit d’une espèce apparentée aux Ascomycètes.<br />

Elle a une forme variable, ronde à ovale. Les colonies croissent rapidement, sont<br />

blanches, crémeuses, lisses ou plissées. Cette levure est parfois associée à un fin<br />

pseudomycélium.<br />

Candida parapsilosis est le deuxième Candida responsable de septicémies après le<br />

Candida albicans. Chez les personnes immunodéprimées, il provoque des infections<br />

profondes.<br />

Ci-dessous, un graphique représentant les pourcentages de diverses espèces de<br />

Candida responsables de septicémies. Ces statistiques proviennent du laboratoire<br />

de bactériologie de l’ICHV, de Sion (2007-2008).<br />

Pourcentages des divers espèces de levures<br />

responsables de septicémies<br />

2%<br />

3%<br />

2.3.5 Candida krusei<br />

10%<br />

http://iph.fgov.be/ClinBiol/bckb33/activities/e<br />

xternal_quality/rapports/ATLAS/Mycology/Y<br />

easts_fichiers/slide0034_image022.jpg<br />

Gloor Ariane 11/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

85%<br />

C.albicans<br />

C.glabrata<br />

C.parapsiolosis<br />

C.tropicalis<br />

Candida krusei est une levure saprophyte qui représente 4% des isolats de levures<br />

du genre Candida obtenus à partir de prélèvements cliniques.


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Il s’agit de levures appartenant aux Ascomycètes.<br />

Elles sont allongées, ovales à cylindriques. Sur la gélose, elles ont un aspect blanc,<br />

mat et « poilu ».<br />

Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou abondant.<br />

Ces levures ne sont pas retrouvées dans la nature, mais elles ont été isolées de<br />

divers aliments comme par exemple des produits laitiers ou de la bière.<br />

Elles sont responsables de diarrhées entre autres pathologies.<br />

Le Candida krusei est résistant au Fluconazole.<br />

2.3.6 Candida lusitaniae<br />

https://www.hardydiagnostics.com/catalo<br />

g2/hugo/refphoto/g301_hccandida_ckrus<br />

ei_14243_hugo.jpg<br />

Candida lusitaniae est une levure de la flore normale de la peau, de l’appareil génitourinaire<br />

et de l’appareil respiratoire de l’homme.<br />

Initialement, cette levure a été isolée du tractus digestif des animaux à sang chaud.<br />

Ce Candida est essentiellement responsable d’infections viscérales profondes.<br />

Il s’agit d’une espèce s’apparentant aux Ascomycètes.<br />

De forme ronde à allongée et d’aspect blanc, lisse et crémeux, cette levure est<br />

brillante sur la gélose.<br />

Elles sont parfois associées à un fin pseudomycélium.<br />

http://scielo.isciii.es/img/revistas/aseo/v82n6/f09-01.jpg<br />

Gloor Ariane 12/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.3.7 Candida kefyr<br />

Chez l’homme, Candida kefyr est une levure saprophyte de la muqueuse<br />

respiratoire. Il est peu retrouvé sur la peau. Cette levure peut être isolée des produits<br />

laitiers.<br />

Il s’agit de levures appartenant à la famille des Lipomycetaceae. Son synonyme<br />

usuel est Candida pseudotropicalis.<br />

Elles sont de forme variable rondes à allongées. Ces levures se reproduisent par<br />

bourgeonnement multilatéral. Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou<br />

abondant. Parfois, il y a présence d’un vrai mycélium.<br />

C’est une levure rarement impliquée en pathologie. Cependant elle peut être<br />

responsable d’infections pulmonaires et de septicémies chez l’homme, ainsi que de<br />

lésions superficielles de la peau.<br />

2.3.8 Candida guilliermondii<br />

http://www.medmicro.wisc.edu/resources/im<br />

agelib/mycology/images/c_kefyr.jpg<br />

Candida guilliermondii est une levure très répandue dans la nature. Elle est présente<br />

chez la plupart des animaux ainsi que chez l’homme. Cette levure peut provoquer<br />

des onyxis, des intertrigos, des infections cutanées, des infections urinaires, etc. Ce<br />

Candida peut être à l’origine de septicémies chez les personnes immunodéprimées.<br />

Il s’agit de levures appartenant à la famille des Ascomycètes.<br />

Elles sont de forme variable rondes à allongées. Ces levures se reproduisent par<br />

bourgeonnement multilatéral. Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou<br />

abondant. Parfois, il y a présence d’un vrai mycélium.<br />

http://microbiology.mtsinai.on.ca/mig/yeasts<br />

/index.shtml<br />

Gloor Ariane 13/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.4 Les Cryptococcus<br />

2.4.1 Cryptococcus neoformans<br />

Le Cryptococcus neoformans est une levure très répandue dans la nature<br />

notamment dans l’air, sur les fruits, les plantes, le lait de vache, le bois et certains<br />

aliments.<br />

Il s’agit de levures appartenant à la famille des Basidiomycètes.<br />

Le Cryptococcus neoformans est un hôte du tube digestif du pigeon chez qui il ne<br />

provoque aucune maladie ; le principal réservoir est la fiente d’oiseaux séchée, en<br />

particulier celle du pigeon.<br />

Cette levure est également un saprophyte de l’homme. La contamination, quant à<br />

elle, est surtout aérienne, mais elle peut être orale ou cutanée. Le Cryptococcus<br />

neoformans peut provoquer des méningites sub-aiguës ou une primo infection<br />

pulmonaire le plus souvent latente chez les personnes immunodéprimées, en<br />

particulier chez les sidéens (chez 10% des patients VIH+ environ). Lorsque l’on<br />

découvre un Cryptococcus, une recherche d’immunosuppression (VIH,…) s’impose<br />

systématiquement.<br />

Des localisations osseuses et des septicémies ont également été signalées.<br />

Ces levures sont de forme variable rondes à allongées, encapsulées. Il n’y a pas de<br />

pseudomycélium. Elles se reproduisent par bourgeonnement multilatéral. Elles sont<br />

pigmentées en beige à ocre.<br />

La mise en évidence de la capsule se fait grâce à l’encre de chine.<br />

Quant au traitement, il est long et difficile.<br />

http://microbiology.mtsinai.on.ca/mig/yeasts/index.shtml<br />

Gloor Ariane 14/62<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

2.5 Épidémiologie<br />

Il n’y a que le Candida albicans et le Candida glabrata qui vivent en commensaux<br />

dans le tube digestif, la bouche et les voies génitales de l’homme et de la femme.<br />

Quant aux autres espèces, elles sont le plus souvent issues du milieu extérieur. Ces<br />

dernières sont aussi saprophytes et peuvent se retrouver quelquefois sur la peau et<br />

les muqueuses.<br />

En effet, les Candida sont des levures opportunistes, profitant d’un affaiblissement<br />

du système immunitaire ou d’autres facteurs favorisants pour provoquer une<br />

candidose. Il est important de bien séparer les divers facteurs favorisants qui<br />

peuvent être liés soit à l’hôte, c’est-à-dire des facteurs intrinsèques, soit à des<br />

facteurs extrinsèques ou exogènes le plus souvent occasionnés par un traitement.<br />

De plus, il existe la possibilité d’un colportage surtout en milieu hospitalier.<br />

Il semblerait que de nouvelles espèces de Candida émergent comme par exemple le<br />

Candida dubliniensis, qui est proche du Candida albicans et qui apparaît depuis<br />

l’arrivée et la propagation du VIH.<br />

En ce qui concerne les Cryptococcus neoformans, il s’agit de champignons<br />

saprophytes dans le milieu extérieur, opportunistes. La cryptococcose survient le<br />

plus souvent chez les sujets immunodéprimés.<br />

2.6 Clinique<br />

Les Candida ne provoquent pas de maladie chez les personnes saines. Les autres<br />

microorganismes inhibent leur développement ; ce n’est que lors d’un état<br />

d’immunodépression ou d’une multiplication exagérée qu’il devient pathogène.<br />

Les candidoses sont des affections cosmopolites causées par un Candida. Leur<br />

pathogénicité dépend de plusieurs facteurs : de leurs localisations très variées, de<br />

l’espèce et de leur quantité.<br />

Le pouvoir pathogène des Candida est principalement lié au potentiel invasif de sa<br />

forme filamenteuse.<br />

Il existe divers facteurs favorisant les candidoses dont voici quelques exemples :<br />

• Facteurs favorisants généraux<br />

- Âge : prématuré, personne âgée<br />

- Thérapeutiques : antibiotiques, immunosuppresseurs, etc.<br />

- États pathologiques : diabète, SIDA<br />

- États physiologiques : grossesse<br />

• Facteurs favorisants locaux<br />

- Humidité, Macération<br />

- Acidité<br />

- Radiothérapie<br />

Gloor Ariane 15/62<br />

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Il existe différents types de candidoses comme par exemple les candidoses<br />

superficielles, les candidoses génito-urinaires, les candidoses profondes, et les<br />

candidoses allergiques.<br />

Candidoses cutanées et unguéales<br />

Intertrigo : Au niveau de tous les replis cutanés<br />

chauds et humides, les plis de l’aine,<br />

sous-mammaires, axillaires et<br />

interfessiers. Il existe également<br />

l’intertrigo palmaire et plantaire.<br />

Onyxis et périonyxis : Au niveau de la sertissure de l’ongle.<br />

Candidoses digestives<br />

Candidose buccale ou muguet : Il s’agit d’un enduit blanchâtre<br />

recouvrant la langue, la face interne<br />

des joues, le voile du palais ainsi que<br />

le pharynx. Cette pathologie est<br />

fréquente chez les nouveau-nés et les<br />

patients immunodéprimés.<br />

http://parasito.montpellierwired.com/myco/muguet_bebe.jpg<br />

Candidose oesophagienne : Pathologie fréquente chez les sidéens.<br />

Candidose gastro-intestinale<br />

et anale : S’accompagne souvent d’un intertrigo<br />

périanal avec envahissement du sillon<br />

interfessier et des plis génito-cruraux<br />

(correspond aux organes génitaux et<br />

aux cuisses) et même du siège chez<br />

les nourrissons.<br />

Candidoses génito-urinaires<br />

Vulvo-vaginite: Caractérisée par une leucorrhée<br />

abondante, grumeleuse blanchâtre,<br />

avec un prurit vulvaire, les muqueuses<br />

sont recouvertes d’un enduit<br />

blanchâtre.<br />

Il s’agit d’une complication du diabète,<br />

de l’emploi de contraceptifs, d’une<br />

grossesse.<br />

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Balano-posthite: Caractérisée par une irritation intense<br />

de la muqueuse avec un enduit<br />

blanchâtre. Il s’agit d’une infection de la<br />

muqueuse du gland et du prépuce.<br />

Candidoses profondes<br />

Candidoses septicémiques<br />

et disséminées : Il s’agit d’une altération de l’état<br />

général, d’origine endogène (avec un<br />

foyer digestif) ou exogène (à partir d’un<br />

traumatisme vasculaire, cathéter). La<br />

symptomatologie est maigre. Le patient<br />

présente une fièvre inexpliquée, ne<br />

cédant pas aux antibiotiques.<br />

Les sites de dissémination sont les<br />

reins, le cœur, les poumons, le foie, les<br />

yeux, le système nerveux et la peau.<br />

Candidoses allergiques<br />

Elle est due à une allergie aux métabolites des Candida. Les foyers peuvent être<br />

cutanés ou respiratoires.<br />

Cryptococcose pulmonaire<br />

Celle-ci correspond à la primo-infection qui est presque toujours asymptomatique.<br />

Cryptococcose méningo-encéphalique<br />

Le Cryptococcus neoformans a un tropisme pour le système nerveux central. Le<br />

patient est pris de nausées, de céphalées, de fièvre peu importante, etc. Il ressent<br />

une hypertension intracrânienne. Il présente des troubles du caractère, de la<br />

mémoire et du sommeil.<br />

Cryptococcose cutanée<br />

Celle-ci résulte d’une dissémination hématogène sous forme de papules<br />

acnéiformes, d’ulcérations sur le visage et les extrémités.<br />

Cryptococcose généralisée<br />

Cette pathologie est fréquente chez les sidéens. Cette levure est retrouvée dans les<br />

urines, les lavages broncho-alvéolaires, le L.C.R, les hémocultures, etc.<br />

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2.7 Diagnostic<br />

2.7.1 Prélèvement<br />

En premier lieu, un prélèvement est effectué. Celui-ci peut être sous forme<br />

d’hémoculture, d’une biopsie ou d’un frottis lors de lésions cutanées et cutanéomuqueuses.<br />

2.7.2 Examen direct<br />

L’examen direct montre des levures bourgeonnantes avec ou sans filaments.<br />

2.7.3 Culture<br />

Un milieu Sabouraud est ensemencé. Cette gélose comprend des antibiotiques<br />

antibactériens. Selon l’origine du prélèvement, la gélose est placée dans une étuve à<br />

30°C. Les colonies poussent en 24 à 48 heures.<br />

2.7.4 Identification<br />

Le Candida albicans est facilement identifiable grâce à sa morphologie en étoile sur<br />

les géloses COS et PVX. Pour les autres espèces, elles seront identifiées par un<br />

repiquage sur un milieu chromogène et des tests biochimiques au moyen de galeries<br />

ou de cartes Vitek YST de bioMérieux® SA.<br />

2.7.5 Antifongigramme<br />

Ci-dessous, voici les techniques disponibles pour l’antifongigramme :<br />

• La technique de culture en cupules avec des concentrations critiques<br />

d’antifongiques. Il s’agit d’une méthode standardisée qui permet de déterminer<br />

la sensibilité des Candida sp et Cryptococcus neoformans à 5 antifongiques<br />

de concentrations différentes.<br />

• La technique en carte Vitek est une méthode standardisée, automatisée et<br />

rapide. Cette méthode utilise 4 antifongiques à 4 concentrations différentes.<br />

2.8 Traitements<br />

Il faut avant tout diminuer voire supprimer les facteurs favorisants. Ensuite, un<br />

traitement est administré au patient. Ce traitement est délicat car on utilise des<br />

produits devant être actifs sur le métabolisme de la cellule, d’où le nombre réduit<br />

d’antifongiques à disposition.<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Selon la Conférence de consensus commune (13.05.2004) :<br />

Les cibles antifongiques sont : la paroi de la cellule fongique (échinocandine) ;<br />

sa membrane cytoplasmique, en bloquant l’incorporation (polyènes) ou la<br />

synthèse (azolés) de l’ergostérol ; la biosynthèse des acides nucléiques<br />

(flucytosine).<br />

In vitro, l’amphotéricine B est fongicide, le voriconazole est fongistatique sur le<br />

Candida sp., la caspofungine est fongicide sur Candida sp. La pertinence<br />

clinique de ces données expérimentales n’est pas établie. (p.8)<br />

Pour les candidoses superficielles, on utilisera un antifongique topique et pour les<br />

profondes un antifongique systémique.<br />

Les principaux antifongiques sont les suivants :<br />

Amphotéricine B<br />

Il s’agit actuellement du traitement de choix pour les infections fongiques<br />

systémiques, comme les candidoses profondes et les infections neuroméningées ou<br />

pulmonaires dues au Cryptococcus neoformans.<br />

Son utilisation est délicate du fait de sa néphrotoxicité.<br />

L’Amphotéricine B agit par stimulation de la consommation d’O2, la transformation de<br />

l’ATP en ADP et par la formation de complexes insolubles avec les stérols, ce qui<br />

aboutit à l’altération de la perméabilité cellulaire fongique.<br />

Elle a une activité fongistatique à faible concentration et fongicide à concentration<br />

élevée.<br />

Quelques rares cas de résistances primaires sur les Candida lusitaniae et tropicalis<br />

ont été signalés.<br />

Nom commercial : FUNGIZONE®, ABELCET®<br />

Flucytosine = Fluoro 5 Catosine = 5FC<br />

Il s’agit de l’un des antifongiques les plus anciens, son mode d’action est le suivant:<br />

Après pénétration dans les cellules fongiques, la 5 FC est transformée en 5 FU par la<br />

cytosine désaminase.<br />

Deux mécanismes antifongiques vont alors agir :<br />

Le premier implique la transformation du 5 FU en 5-fluorouracile triphosphate qui en<br />

s’incorporant à l’ADN fongique, va inhiber la synthèse protéique.<br />

Le second implique la transformation du 5 FU en 5-fluorodeoxyuridine qui est un<br />

inhibiteur de la thymidylate synthétase par conséquent de la synthèse d’ADN<br />

fongique.<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Le Candida tropicalis présente parfois une résistance à l’encontre de cet<br />

antifongique.<br />

La flucytosine est un médicament de réserve. Les médecins préfèrent prescrire<br />

d’autres antifongiques moins toxiques.<br />

Griséofulvine = Grisefulvine®<br />

Nystatine = Mycostatine®<br />

Les antifongiques azolés<br />

Nom commercial : ANCOTIL®<br />

Il s’agit de la classe la plus utilisée à ce jour.<br />

Ce sont des triazolés fongistatiques à effet systémique.<br />

Ils inhibent l’enzyme fongique (C14 déméthylase, cytochrome P 450-dépendante) qui<br />

est nécessaire à la formation du principal stérol, l’ergostérol, de la membrane<br />

cellulaire des champignons.<br />

Ils sont indiqués pour le traitement des Candida, Aspergillus, Blastomyces,<br />

Histoplasma, Coccidiodes, Trichophyton et Cryptococcus neoformans.<br />

• Fluconazole<br />

Son spectre d’activité préférentiel est le Candida albicans et le<br />

Cryptococcus neoformans.<br />

En revanche, cet antibiotique est inactif sur les Candida krusei et<br />

dubliniensis ainsi que quelques rares Candida glabrata, car ils<br />

possèdent une résistance primaire.<br />

Il est en général bien toléré, mais à fortes doses, une toxicité<br />

hépatique ou neurologique peut se développer.<br />

• Itraconazole<br />

Nom commercial : Diflucan®<br />

Cet antibiotique est utilisé avec succès dans les méningites à<br />

Cryptococcus à des concentrations très faibles voire<br />

indétectables, ceci parce qu’il s’accumule dans les cellules de<br />

l’hôte.<br />

Nom commercial : Sporanox®<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

• Voriconazole<br />

Il s’agit d’un antifongique triazolé à large spectre d’action. C’est<br />

un inhibiteur de la synthèse d’ergostérol. Les indications du<br />

voriconazole sont les infections fongiques invasives à<br />

Aspergillus, Candida, Scedosporium, Fusarium.<br />

Le voriconazole est apparu plus efficace et mieux toléré que<br />

l’Amphotéricine B dans le traitement de l’aspergillose invasive.<br />

• Posaconazole<br />

Nom commercial : VFEND®<br />

Il s’agit d’un nouvel antifongique de la classe des azolés. Il s’agit<br />

d’un inhibiteur de biosynthèse de l’ergostérol, constituant de la<br />

membrane fongique. Il a une activité antifongique à large<br />

spectre. Il couvre les levures du genre Candida, les moisissures<br />

du genre Aspergillus, les zygomycètes et le Cryptococcus<br />

neoformans.<br />

Les échinocandines<br />

• Caspofungine<br />

Nom commercial : Noxafil®<br />

L’acétate de caspofungine inhibe la synthèse du bêta (1,3)-Dglucane,<br />

un constituant essentiel de la paroi cellulaire de<br />

nombreux champignons filamenteux et de nombreuses levures.<br />

Le bêta (1,3)-D-glucane n’est pas présent dans les cellules de<br />

mammifères.<br />

Aucune méthode standardisée pour la détermination de la<br />

sensibilité n’a été établie pour la nouvelle classe des<br />

échinocandines et les résultats d’études sur la sensibilité ne sont<br />

pas forcément corrélés aux observations cliniques.<br />

Nom commercial : Cancidas®<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3. Travail pratique<br />

3.1 Introduction<br />

La partie pratique de cette étude a été réalisée au laboratoire de bactériologie de<br />

l’ICHV de Sion de juillet à août 2008.<br />

3.2 Situation du travail dans son environnement<br />

Ces vingt dernières années, la mycologie médicale s’est fortement transformée avec<br />

une explosion d’infections fongiques. Chaque année, le nombre d’espèces<br />

pathogènes identifiées augmente. De nouvelles résistances pour des espèces<br />

jusque là sensibles commencent à émerger.<br />

Il y a un nombre croissant de patients immunodéficients. La cause est l’utilisation de<br />

chimiothérapies plus agressives, les traitements immunosuppresseurs plus intenses<br />

chez les transplantés, l’utilisation d’une antibiothérapie à large spectre et le virus<br />

VIH.<br />

Il est impératif de pouvoir déterminer la sensibilité des levures aux antifongiques au<br />

moyen d’une méthode simple, rapide, fiable et standardisée.<br />

3.3 Objectifs<br />

L’objectif de cette étude est de comparer la nouvelle carte Vitek AST-YS01® avec<br />

une galerie commerciale ATB FUNGUS 3 ® toutes deux produites par bioMérieux®<br />

SA. Le but étant de définir la méthode la plus adaptée au laboratoire de bactériologie<br />

de l’ICHV de Sion.<br />

Pour ce faire, nous avons testé les espèces de Candida suivantes :<br />

C. albicans C. glabrata<br />

C. tropicalis C. krusei<br />

C. parapsilosis C. guilliermondii<br />

C. lusitaniae C. kefyr<br />

Cryptococcus neoformans<br />

Nous avons choisi ces espèces pour déterminer leur sensibilité aux divers<br />

antifongiques. Les résultats obtenus seront analysés puis comparés. Différents<br />

critères tels que la précision des CMI, la facilité d’utilisation et d’interprétation, ainsi<br />

que le coût, les avantages et inconvénients, les problèmes rencontrés, la durée de<br />

validité seront pris en compte.<br />

Le test qui répondra le mieux à ces critères sera introduit en routine au laboratoire de<br />

bactériologie à l’ICHV de Sion.<br />

Gloor Ariane 22/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Ci-dessous, voici les deux antifongigrammes utilisés pour réaliser cette étude :<br />

• ATB FUNGUS 3 ® de bioMérieux® SA (Réf. 14 204)<br />

• Carte Vitek AST-YS01® de bioMérieux® SA (Réf. 22 108)<br />

Les cinq antifongiques suivants seront pris en compte dans notre étude :<br />

• Flucytosine<br />

• Amphotéricine B<br />

• Fluconazole<br />

• Voriconazole<br />

• Itraconazole (présent uniquement dans l’ATB FUNGUS 3 ®)<br />

Deux souches ATCC de référence provenant de l’Institut Pasteur à Paris permettront<br />

de vérifier les techniques utilisées, de définir leur reproductibilité et de valider les<br />

résultats obtenus.<br />

• ATCC 6258 Candida krusei<br />

• ATCC 22019 Candida parapsilosis<br />

La plupart des souches avaient été testées par une autre étudiante à l’ICHV de Sion<br />

dans une étude précédente, ce qui permet d’avoir une comparaison des résultats.<br />

En annexe 7.3, vous trouverez les résultats de l’étude antérieure.<br />

3.4 Matériel et méthodologie<br />

3.4.1 Matériel<br />

Pour la réalisation de cette étude, 50 souches de Candida ont été sélectionnées<br />

dans la « souchothèque » du laboratoire de bactériologie de l’ICHV à Sion dont :<br />

30 C. albicans 4 C. glabrata<br />

2 C. tropicalis 7 C. krusei<br />

2 C. parapsilosis 1 C. guilliermondii<br />

1 C. lusitaniae 1 C. kefyr<br />

2 Cryptococcus neoformans<br />

1 souche ATCC 6258 Candida krusei<br />

1 souche ATCC 22019 Candida parapsilosis<br />

Gloor Ariane 23/62<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Chaque souche est traitée de la même manière et dans les mêmes conditions :<br />

• Le premier jour, la souche est décongelée et repiquée sur COS.<br />

• Elle va ensuite pousser lentement à 35°C pendant 24 heures<br />

• Le lendemain, la souche est repiquée pour la deuxième fois sur COS<br />

• Réincubation à 35°C pendant 24 heures<br />

• Puis, le jour suivant, la galerie sera inoculée et mise à l’étuve et la carte Vitek<br />

sera préparée en parallèle puis analysée sur l’automate Vitek2®.<br />

• Après 24 heures pour les Candida sp et 48 heures pour les Cryptococcus<br />

neoformans, la lecture des galeries est effectuée.<br />

En ce qui concerne la carte Vitek, nous obtenons des résultats après 13<br />

heures pour les Candida et après environ 20 heures pour les Cryptococcus<br />

neoformans.<br />

3.4.2 Présentation des techniques<br />

Principe :<br />

3.4.2.1 ATB FUNGUS 3 ®<br />

Il permet de déterminer la sensibilité des Candida et des Cryptococcus neoformans<br />

aux antifongiques en milieu semi-liquide dans des conditions très proches de la<br />

technique de référence de micro dilution.<br />

La galerie comporte 16 paires de cupules, la première sans antifongique servant de<br />

témoin de croissance.<br />

Les 15 paires suivantes contiennent 5 antifongiques à différentes concentrations<br />

permettant de déterminer des CMI.<br />

Pour déterminer cette CMI, on va rechercher et quantifier dans chaque cupule une<br />

croissance par lecture visuelle. L’appréciation peut différer d’une personne à l’autre.<br />

L’appréciation par lecture automatique n’est pas disponible au laboratoire.<br />

Matériel :<br />

Composition d’un kit :<br />

• 25 galeries en emballage individuel avec déshydratant<br />

• 25 couvercles d’incubation<br />

• 25 ampoules d’ATB F2 Medium<br />

• 25 fiches de résultats<br />

• 1 notice<br />

Matériel non fourni :<br />

• NaCl 0.85% 3 ml<br />

• Ecouvillons<br />

• Pipette électronique ATB 135 μl avec les embouts<br />

• Pipette calibrée 20 μl et les embouts<br />

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Mode opératoire :<br />

• A partir d’une culture fraîche sur COS, prélever quelques colonies à l’aide d’un<br />

écouvillon stérile et les dissoudre dans une ampoule de 3 ml de NaCl 0.85%,<br />

afin de réaliser une suspension d’opacité équivalente à l’étalon 2 MacFarland.<br />

• Contrôler la pureté de l’inoculum en l’isolant sur une gélose non sélective.<br />

• Transférer 20 μl de cette suspension à l’aide d’une pipette calibrée dans l’ATB<br />

Medium 1, homogénéiser.<br />

• Inoculer la galerie en distribuant 135 μl de la dilution dans chaque cupule à<br />

l’aide de la pipette électronique ATB. La concentration est d’environ 4 x 10 3<br />

levures/cupule.<br />

• Mettre le couvercle<br />

• Incuber : - 24 heures à 35°C pour les Candida à l’étuve O2<br />

- 48 heures à 35°C pour les Cryptococcus neoformans à l’étuve<br />

O2<br />

Pour les Candida dont la croissance dans les cupules témoins est insuffisante,<br />

incuber dans les mêmes conditions pendant 24 heures.<br />

En annexe 7.1, vous trouverez la procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />

Lecture et interprétation :<br />

Pour faciliter la lecture, placer la galerie sur un fond noir.<br />

Pour chaque antifongique, commencer la lecture par la concentration la plus faible et<br />

noter un score de croissance pour chacune des cupules comparativement aux<br />

cupules témoins. L’absence de croissance dans l’une ou l’autre, ou les 2 cupules<br />

témoins invalide la galerie.<br />

Score<br />

Absence de réduction de croissance 4<br />

Légère réduction de croissance 3<br />

Réduction marquée de croissance 2<br />

Très faible croissance 1<br />

Absence de croissance 0<br />

Pour ce qui est de l’Amphotéricine B, la CMI correspond à la concentration<br />

d’antifongique la plus faible permettant d’obtenir un score de 0, donc une inhibition<br />

complète.<br />

Pour le Fluconazole, la Flucytosine, l’Itraconazole, le Voriconazole, du fait du<br />

phénomène de croissance résiduelle, la CMI correspond à la concentration<br />

d’antifongique la plus faible permettant d’obtenir un score de 2,1 ou 0.<br />

En annexe 7.2, vous trouverez une feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />

Gloor Ariane 25/62<br />

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Concentrations critiques des CMI (en mg/l) recommandées pour les Candida sp.<br />

en catégories cliniques<br />

SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />

FLUCYTOSINE ≤ 4 8 -16 ≥ 32<br />

AMPHOTERICINE B Une CMI ≥ 2 suggère une résistance<br />

FLUCONAZOLE ≤ 8 16 - 32 ≥ 64<br />

ITRACONAZOLE ≤ 0.125 0.25 – 0.5 ≥ 1<br />

VORICONAZOLE ≤ 1 2 ≥ 4<br />

Note : Le Candida krusei est une espèce intrinsèquement résistante au Fluconazole,<br />

le test doit être systématiquement interprété comme RESISTANT.<br />

Concentrations critiques des CMI (en mg/l) recommandées pour les Cryptococcus<br />

neoformans en catégories cliniques<br />

SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />

FLUCYTOSINE ≤ 4 8 - 16 ≥ 32<br />

AMPHOTERICINE B Une CMI ≥ 2 suggère une résistance<br />

FLUCONAZOLE ≤ 4 8 ≥ 16<br />

ITRACONAZOLE Non défini<br />

VORICONAZOLE Non défini<br />

Note : Les CMI habituellement obtenues pour le Cryptococcus neoformans sont 0.5<br />

et 1 mg/l.<br />

Ci-dessous, une galerie ATB FUNGUS 2 ® de bioMérieux® SA, modèle précédant<br />

l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />

Galerie ATB FUNGUS 2 ®, bioMérieux SA<br />

Marchand S., (2004-2005)<br />

La principale différence entre ces deux générations de galerie ATB FUNGUS est la<br />

présence d’un cinquième antifongique pour l’ATB FUNGUS 3 ®, soit le voriconazole.<br />

Gloor Ariane 26/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

L’automate :<br />

3.4.2.2 Carte Vitek AST-YS01®<br />

Le Vitek2® dispose d’un système automatisé capable de traiter la majorité des tests<br />

de routine avec un rendu des résultats fiable et rapide. Il détecte des résistances<br />

même faiblement exprimées. Plus de 330 espèces microbiennes peuvent être<br />

identifiées grâce à une base de données optimisée. Cet appareil est composé de<br />

différents éléments essentiels :<br />

La Station Compacte Satellite (SCS)<br />

Il s’agit d’un petit ordinateur destiné à récupérer les données suivantes : code à<br />

barre des différentes cartes, nom du germe, code à barre du prélèvement ou<br />

numéro du prélèvement, identité du technicien ayant effectué l’analyse permettant<br />

d’assurer une bonne traçabilité.<br />

La cassette<br />

La cassette comporte une puce mémoire utilisée pour connaître le contenu de la<br />

cassette. Cette cassette sert également au support des cartes. Le Vitek2® se<br />

charge automatiquement de la dilution à effectuer.<br />

La carte Vitek AST-YS01®<br />

La carte Vitek AST-YS01® comportant 64 cupules réactionnelles.<br />

Les cartes sont inoculées avec les diverses suspensions. Le module de<br />

remplissage utilise une chambre à vide et une pompe. Lorsqu’une cassette atteint<br />

ce stade la pompe évacue l’air de la chambre. Puis, le vide est lentement rompu.<br />

L’augmentation de la pression d’air dans la chambre pousse la suspension par le<br />

tube de transfert dans les canaux et les micro-cuves de la carte. Ensuite, les tubes<br />

de transfert sont scellés. La carte et son contenu sont ainsi hermétiquement<br />

fermés.<br />

Incubation et lecture<br />

Liste des produits 2007 bioMérieux<br />

(22.02.2009)<br />

Le système de transport place le porte-cassette de telle sorte qu’un mécanisme<br />

met chaque carte dans l’emplacement du carrousel, où elles restent pendant toute<br />

la durée de l’analyse.<br />

Le carrousel, qui a une capacité de 60 cartes, tourne toutes les 15 minutes de<br />

façon à placer chaque carte en position de lecture. La tête de lecture déplace la<br />

Gloor Ariane 27/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

carte à travers les blocs optiques. Après la lecture, la carte reprendra sa place dans<br />

le carrousel ou l’incubation à 35,5°C se poursuit jusqu’à la lecture suivante.<br />

Principe :<br />

Cette technique permet également de déterminer la sensibilité des Candida et des<br />

Cryptococcus neoformans aux antifongiques en milieu semi-liquide.<br />

Cette carte comprend 64 cupules réactionnelles comprenant quatre antifongiques<br />

dont le fluconazole, le voriconazole, la flucytosine et l’amphotéricine B à quatre<br />

concentrations différentes.<br />

La lecture s’effectue à 660 nm. L’analyse du taux de croissance est effectuée toutes<br />

les 15 minutes en cinétique. Puis, pour chaque antibiotique, un algorithme spécifique<br />

convertit les valeurs brutes (RTU) en CMI calculée. Pour calculer les CMI, l’automate<br />

contrôle le remplissage des cupules, puis vérifie les valeurs brutes. Il élimine les<br />

valeurs brutes aberrantes liées au bruit de fond et aux souches difficiles à mettre en<br />

suspension.<br />

Ensuite, il détermine la durée d’incubation de la carte. Dans la cupule contrôle, il<br />

évalue la vitesse de croissance du germe. La lecture s’arrêtera si la croissance dans<br />

tous les puits est suffisante. Celle-ci sera considérée comme la plus haute pouvant<br />

être mesurée pour cet antibiotique.<br />

Pour finir les résultats de CMI sont interprétés en S-I-R en fonction des<br />

concentrations critiques spécifiques des différents comités.<br />

Matériel :<br />

Composition d’un kit :<br />

• 20 cartes en emballage individuel avec déshydratant<br />

• 1 notice<br />

Matériel non fourni :<br />

http://www.biomerieux.ch/upload/vitek2_sm<br />

artcarrierstation1_thumb1.jpg<br />

• NaCl 0.85%<br />

• Tube en plastique stérile pour la dilution<br />

• Ecouvillons<br />

Gloor Ariane 28/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Mode opératoire :<br />

• A partir d’une culture fraîche sur COS, prélever quelques colonies à l’aide d’un<br />

écouvillon stérile et les dissoudre dans environ 3 ml de NaCl 0.45%, afin de<br />

réaliser une suspension d’opacité équivalente à l’étalon 2 MacFarland.<br />

• Contrôler la pureté de l’inoculum en l’isolant sur une gélose non sélective.<br />

• Tout d’abord, il faut placer le portoir sur la station satellite qui est un poste de<br />

travail nous permettant de programmer les analyses à effectuer, le nom du<br />

germe etc. Le tube contenant la suspension est alors placé sur le portoir. Le<br />

code barre de la carte AST-YS01® est scanné, puis la carte est introduite<br />

dans le tube.<br />

• Un tube vide est ajouté à côté du tube contenant la suspension. Le Vitek2®<br />

se charge automatiquement de la dilution à effectuer avec du NaCl 0.45%. Il<br />

homogénéise la suspension par aspiration et refoulement, puis il inocule les<br />

cartes. Pour finir, les cartes sont isolées de l’extérieur et l’analyse commence.<br />

Il n’y a ainsi pas de risque de contamination pour le personnel.<br />

• BioMérieux® assure des résultats dans les 13 heures pour les Candida et 20<br />

heures pour les Cryptococcus neoformans.<br />

Lecture et interprétation :<br />

Gloor Ariane 29/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Ci-dessus, voici un rapport de laboratoire. Nous voyons qu’il s’agit d’un Candida<br />

albicans et qu’il est sensible aux quatre antifongiques. Nous remarquons également<br />

les différentes CMI. Pour finir, l’automate interprète les résultats.<br />

Nous constatons également que l’analyse a duré environ 13 heures.<br />

SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />

AMPHOTERICINE B 1 2 4<br />

FLUCONAZOLE ≤ 8 16 - 32 ≥ 64<br />

FLUCYTOSINE ≤ 4 8 -16 ≥ 32<br />

VORICONAZOLE ≤ 1 2 ≥ 4<br />

3.5 Analyse des résultats<br />

3.5.1 Premiers essais et actions correctives<br />

Les Candida glabrata poussent plus lentement que les autres espèces. De ce fait,<br />

les galeries ATB FUNGUS 3 ® doivent être incubées 1 jour de plus.<br />

Pour les cartes Vitek le temps d’incubation reste le même que pour les autres<br />

espèces soit environ 13 h.<br />

Lors de discordances majeures (S-R ou R-S) entre les deux tests, la souche est à<br />

nouveau testée.<br />

3.5.2 Explications des tableaux de résultats<br />

Dans les tableaux des pages suivantes, les résultats sont exprimés de la manière<br />

suivante :<br />

CMI : Plus faible dilution d’antifongique montrant une<br />

inhibition de croissance de 80 à 100% par rapport<br />

à un contrôle de pousse sans antifongique (cupule<br />

contrôle).<br />

Sensible (S) : Il s’agit de souches pour lesquelles la probabilité<br />

de succès thérapeutique, dans le cas d’un<br />

traitement à dose habituelle est acceptable.<br />

La quantité d’antibiotique se trouvant dans les<br />

cupules est suffisante pour inhiber la croissance de<br />

la souche in vitro.<br />

Intermédiaire (I) : Il s’agit de souches pour lesquelles le succès<br />

thérapeutique est imprévisible.<br />

L’action de l’antifongique sur la souche n’est pas<br />

garantie.<br />

Résistante (R) : Il s’agit de souches pour lesquelles il existe une<br />

forte probabilité d’échec thérapeutique.<br />

L’antifongique n’inhibe pas la croissance de la<br />

souche in vitro.<br />

Gloor Ariane 30/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Les résultats des 50 souches et des souches ATCC obtenus avec les différents tests<br />

ont été comparés et interprétés de la manière suivante :<br />

Concordance : Les résultats obtenus par les deux tests sont<br />

identiques ou identiques à ceux obtenus par<br />

l’étudiante précédente.<br />

Discordance : Les résultats obtenus par les deux tests sont<br />

différents l’un de l’autre ou différents de ceux<br />

obtenus par l’étudiante précédente.<br />

Nous considérons trois discordances différentes :<br />

Discordance « very major »: Elle correspond à une différence de CMI de plus de<br />

2 dilutions. C’est le cas lorsque nous rendons un<br />

résultat S à la place de R. Il s’agit d’un faux<br />

sensible. Cela peut mettre la vie du patient en<br />

danger !<br />

Discordance majeure: Elle correspond à une différence de CMI de<br />

maximum 2 dilutions. C’est le cas lorsque nous<br />

rendons un résultat R à la place de S. Il s’agit d’un<br />

faux résistant. Cette erreur de mettra personne en<br />

danger puisque le résultat est résistant donc le<br />

médecin ne prescrira pas ce traitement.<br />

Discordance mineure : Elle correspond à une différence de CMI de<br />

maximum 1 dilution, soit à un S à la place d’un I ou<br />

à un I à la place d’un R et inversement.<br />

3.6 Tableaux des résultats<br />

Sur les pages suivantes, vous trouverez les tableaux de résultats détaillés.<br />

Gloor Ariane 31/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Résultats: Candida albicans<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine<br />

Amphotéricine<br />

B Fluconazole Itraconazole<br />

≤0.125/ 0.25-0.5 /<br />

Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

8 Hémoculture ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

9 Sp ≤4 S ≤2 S 8 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 8 S ≤0.12 S<br />

10 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 1 R 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≥64 R ≤0.12 S<br />

11 Gorge ≤4 S ≤2 S 8 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />

12 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 0,25 I 0,5 S ≤1 S ≤0.25 S 32 I ≤0.12 S<br />

13 Sp ≤4 S ≤2 S ≥128 R 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≥64 R 0,25 S<br />

14 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

15 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

16 Pl. profonde ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

17 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

18 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

19 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

20 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

21 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

22 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

23 Pus profond ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Gloor Ariane 32/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x (contaminations, discordance ?) Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

Résultats: Candida albicans suite<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

24 L. Pleural ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

25 Lèvre ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

26 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

27 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

28 Urine sondée ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

29 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

30 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

31 Expectoration ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

32 Gorge ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

33 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

34 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

35 Bouche ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

36 Gorge ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

37 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Gloor Ariane 33/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Résultats: Candida tropicalis<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

47 Expectoration ≤4 S ≤2 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

48 Expectoration ≥32 R ≤2 S 1 S 0,125 S ≤0.06 S ≥64 R ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Résultats: Candida glabrata<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≥64 R ≤0.12 S<br />

40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S 32 I ≤0.12 S<br />

41 Aspiration 4 S ≤0.5 S 4 S 0,5 I 0,25 S 4 S 0,5 S 8 S ≤0.12 S<br />

42 Hémoculture ≤4 S ≤2 S 2 S 0,25 I 0,06 S ≤1 S 0,5 S 4 S ≤0.12 S<br />

43 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S 4 S ≤0.12 S<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

Gloor Ariane 34/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Résultats: Candida parapsilosis<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

44 ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />

45 Biop.fémur ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

Gloor Ariane 35/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Résultats: Candida krusei<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

1 ≤4 S ≤2 S 8 R 0,125 S 0,25 S 16 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />

2 Urotube ≤4 S ≤2 S 8 R 0,25 I 0,125 S 4 S 1 S 2 R ≤0.12 S<br />

3 Urine ≤4 S ≤2 S 8 R 0,5 I 0,25 S 4 S 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />

4 Cathéter CQ 16 I ≤2 S 8 R 0,125 S 0,25 S 8 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />

5 Gorge ≤4 S ≤2 S 32 R 0,125 S 0,5 S ≤1 S 0,5 S ≥64 R 0,25 S<br />

6 AB 16 I ≤2 S 8 R 0,5 I 0,25 S 8 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />

7 Cathéter ≤4 S ≤2 S 8 R 0,125 S 0,125 S 8 I ≤0.25 S 8 R ≤0.12 S<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

Gloor Ariane 36/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Résultats: Candida lusitaniae<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

46 Expectoration ≥32 R ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S 32 R ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Résultats: Candida kefyr<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

49 ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

Gloor Ariane 37/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Résultats: Candida guilliermondii<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

50 CQ GB ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />

Résultats: Cryptococcus neoformans<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

38 LCR ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S pas de résultat<br />

39 Hémoc ≤4 S 0,5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S pas de résultat<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

38/62


Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Discordances ATB FUNGUS 3 ® - carte Vitek<br />

ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />

≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />

1 ≤4 S ≤2 S 8 R 0.125 S 0.25 S 16 I 0.5 S 8 R ≤0.12 S<br />

40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0.06 S ≤1 S 0.5 S ≥64 R ≤0.12 S<br />

40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0.06 S ≤1 S 0.5 S 32 I ≤0.12 S<br />

12 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 0.25 I 0.5 S ≤1 S ≤0.25 S 32 I ≤0.12 S<br />

7 Cathéter ≤4 S ≤2 S 8 R 0.125 S 0.125 S 8 I ≤0.25 S 8 R ≤0.12 S<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

50 souches testées 4 discordances entre ATB FUNGUS 3 ® - carte Vitek<br />

1 « very major »<br />

4 mineures<br />

Souche testées 2x puis donne 1<br />

discordance mineure<br />

Les résultats obtenus ont été comparé à ceux de l’étude précédente. Ci-dessous, voici les discordances observées.<br />

39/62


Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />

Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />

Réincuber 1 jour de plus<br />

50 souches testées<br />

Discordances entre mes résultats et les résultats de l’étude<br />

précédente<br />

1 « very major »<br />

31 discordances au<br />

3 majeures<br />

total 27 mineures<br />

40/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3.7 Interprétation<br />

3.7.1 Pourcentages de concordance et discordance entre l’ATB FUNGUS 3 ® et<br />

la Carte Vitek AST-YS01®<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Candida albicans<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 30/30 = 100% 30/30 = 100% 29/30 = ~97% 30/30 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - 1/30 = ~3% -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida tropicalis<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100 2/2 = 100<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida glabrata<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 4/4 = 100% 4/4 = 100% 3/4 = 75% 4/4 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - 1/4 = 25% -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida parapsilosis<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

41/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Candida krusei<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 5/7 = ~71% 7/7 = 100% 7/7 = 100% 7/7 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

2/7 = ~29% - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida lusitaniae<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida kefyr<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Candida guilliermondii<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Gloor Ariane 42/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Cryptococcus neoformans<br />

Flucytosine Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Voriconazole<br />

Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100% ND<br />

Discordances<br />

mineures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - -<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

D’après le fabriquant, le résultat en carte du voriconazole pour le Cryptococcus<br />

neoformans n’est pas disponible (ND). C’est la raison pour laquelle nous avons testé<br />

5 souches de Cryptococcus neoformans. Effectivement, nous n’avons obtenu aucun<br />

résultat.<br />

Nous voyons clairement que la majorité des discordances se situe au niveau des<br />

antifongiques Flucytosine pour les Candida krusei et le Fluconazole pour les Candida<br />

albicans et glabrata.<br />

Nous constatons également que le Cryptococcus neoformans et certaines espèces<br />

de Candida ont une concordance parfaite comme pour le C. guilliermondii, C. kefyr,<br />

C. lusitaniae, C. parapsilosis et le C. tropicalis.<br />

Pour le Candida albicans, nous notons 1 discordance mineure pour 30 souches<br />

testées, ce qui est tout à fait acceptable.<br />

Par contre, pour le Candida krusei, il y a 2 discordances sur 7 souches testées. Pour<br />

finir, nous constatons qu’il y a 1 discordance sur 4 souches testées pour le Candida<br />

glabrata. Il s’agit de la souche pour laquelle nous avons eu le plus de discordances.<br />

Comme nous pouvons le constater, il y a environ 25% de discordances pour le<br />

Fluconazole pour le Candida glabrata ce qui correspond aux données de la<br />

littérature.<br />

Le voriconazole est actuellement le traitement de choix pour cette espèce.<br />

Quant aux Candida krusei, le traitement de choix est le voriconazole et la<br />

caspofongine qui est un nouveau traitement.<br />

Gloor Ariane 43/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3.7.2 Pourcentages de concordance et discordance entre nos résultats et ceux<br />

obtenus dans l’étude précédente<br />

Résultat étude précédente ATB FUNGUS 2 ® – mes résultats<br />

Flucytosine<br />

Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Itraconazole<br />

Concordances 12/15 = 80% 15/15 = 100% 11/15 = ~73% 5/15 = ~33%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

3/15 = 20% - 2/15 = ~13% 8/15 = ~54%<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - 1/15 = ~7% 2/15 = ~13%<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - 1/15 = ~7% -<br />

Remarques - - - -<br />

Résultat étude précédente FUNGITEST – mes résultats<br />

Flucytosine<br />

Amphotéricine<br />

B<br />

Fluconazole Itraconazole<br />

Concordances 9/15 = 60% 11/13 = ~85% 6/15 = 40% 9/13 = ~69%<br />

Discordances<br />

mineures<br />

6/15 = 40% 2/13 = ~15% 9/15 = 60% 3/13 = ~23%<br />

Discordances<br />

majeures<br />

- - - 1/13 = ~8%<br />

Discordances<br />

very majeur<br />

- - - -<br />

Remarques - 2 ininterprétables - 2 ininterprétables<br />

Comme l’antifongique itraconazole n’est pas présent dans les cartes Vitek, nous<br />

avons comparé nos résultats avec ceux obtenus dans l’étude précédente.<br />

En comparant ces résultats, nous nous apercevons que c’est au niveau du<br />

fluconazole qu’il y a le plus de discordances. Il y a également peu de concordance<br />

au niveau de l’itraconazole.<br />

Nous constatons qu’il y a tout de même une meilleure correspondance avec les<br />

résultats de l’ATB FUNGUS 2 ® bien que le nombre de discordances soit relativement<br />

élevé.<br />

3.7.3 Reproductibilité<br />

La reproductibilité des deux méthodes est vérifiée grâce à 2 souches ATCC testées<br />

lors de chaque série.<br />

Pour la souche ATCC de Candida parapsilosis, la reproductibilité est excellente pour<br />

les 2 méthodes et les résultats obtenus correspondent à ceux attendus<br />

Pour la souche ATCC de Candida krusei, la reproductibilité est très bonne aussi,<br />

seule une fois les 2 méthodes ont donné une discordance mineure. Une erreur de<br />

manipulation en est sûrement la cause.<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

44/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3.8 Discussion<br />

3.8.1 Avantages et inconvénients de l’ATB FUNGUS 3 ®<br />

Avantages<br />

Inconvénients<br />

- Le matériel dont on a besoin est fourni dans le kit, sauf le NaCl<br />

0.85%<br />

- Les CMI obtenues sont précises, grâce à plusieurs concentrations<br />

d’antifongiques différentes.<br />

- Interprétation des résultats facilitée par rapport à l’E-test.<br />

- Le prix est relativement bon marché, environ Fr. 140.95.- pour 25<br />

galeries soit Fr. 5.65.- par galerie<br />

- Préparation assez longue comprenant plusieurs étapes<br />

- La lecture de la quantification de la croissance est relativement<br />

difficile au début et peut varier selon les personnes. Le résultat<br />

dépend de notre jugement.<br />

- Parfois résultat peu clair. Le problème provenait certainement<br />

d’une mauvaise préparation ou d’une incubation inadéquate.<br />

- Le temps d’incubation est de 24 heures pour toutes les espèces,<br />

sauf le Candida glabrata (48 heures).<br />

- Après 48 heures, les cupules de la galerie sont parfois sèches et<br />

ininterprétables.<br />

- Le contenu d’un kit est de 25 galeries et la date de péremption est<br />

de 8 mois. Le kit ne sera certainement pas écoulé durant ce laps<br />

de temps.<br />

Gloor Ariane 45/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

3.8.2 Avantages et inconvénients de la carte Vitek AST-YS01®<br />

Avantages<br />

Inconvénients<br />

- La préparation est simple et rapide.<br />

- Facilité de stockage et pour l’élimination des déchets.<br />

- Code barre individuel (reconnaissance du type de carte,<br />

traçabilité, carte périmée rejetée par le système).<br />

- Tout le matériel est fourni, soit la carte. Il manque juste le NaCl<br />

pour faire la suspension.<br />

- Les temps d’incubation prescrits sont plus ou moins corrects pour<br />

toutes les espèces de Candida ainsi que pour le Cryptococcus<br />

neoformans.<br />

- Résultats rapidement disponibles.<br />

- Méthode standardisée et automatisée.<br />

- Reproductibilité excellente.<br />

- Le contenu du kit est de 20 cartes et la date de péremption est de<br />

14 mois, donc adapté à la consommation en routine.<br />

- Le prix est plus élevé que pour l’ATB FUNGUS 3 ® :<br />

environ Fr. 173.40.- pour 20 cartes soit Fr. 8.65.- par carte.<br />

- Il manque l’itraconazole par rapport à la galerie ATB FUNGUS 3 ®.<br />

3.9 Conclusion et synthèse<br />

Personnellement, les deux antifongigrammes obtiennent des résultats plus ou moins<br />

équivalents.<br />

Cependant, les CMI obtenues avec la nouvelle carte Vitek AST-YS01® ont une<br />

meilleure précision ainsi qu’une bonne reproductibilité, car c’est l’automate qui définit<br />

la CMI et non l’œil du technicien.<br />

Après avoir étudié les différents avantages et inconvénients des deux méthodes, je<br />

pense que la nouvelle carte Vitek AST-YS01® est la méthode la plus intéressante<br />

pour un laboratoire tel que celui de l’ICHV de Sion.<br />

Gloor Ariane 46/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

La carte Vitek AST-YS01® ne coûte pas tellement plus cher que les galeries ATB<br />

FUNGUS 3 ®. De plus, il est intéressant d’avoir des CMI précises. La méthode est<br />

automatisée et il y a donc une bonne reproductibilité et pas de variations suivant la<br />

personne qui doit rendre les résultats.<br />

Quant à l’aspect pratique, tout est compris dans le kit à part les tubes en plastique<br />

stériles, les écouvillons et le NaCl à 0.85% soit du matériel utilisé en routine donc<br />

n’engendrant pas de frais supplémentaires.<br />

Un autre point positif est le gain de temps par rapport à l’autre méthode. Ceci est<br />

intéressant pour le médecin afin de prescrire un traitement adéquat rapidement.<br />

Pour ce qui est des résultats, nous rendons ceux obtenus par l’automate. Un autre<br />

point positif est la longue échéance de la date de péremption qui est de 14 mois par<br />

rapport à 8 mois pour les galeries.<br />

Les points négatifs seraient l’absence d’itraconazole par rapport à la galerie ATB<br />

FUNGUS 3 ®, ainsi que la présence des 4 antifongiques présents dans la carte. Il n’y<br />

pas de possibilités de tester d’autres antifongiques.<br />

En ce qui concerne cette galerie il s’agit d’une bonne méthode également.<br />

Cependant, le nombre de manipulations pour la préparation est plus important que<br />

pour la méthode en carte. De plus, les résultats sont moins fiables au niveau des<br />

CMI.<br />

Pour ces raisons, les galeries sont moins bien adaptées à un laboratoire de routine<br />

tel que l’unité de bactériologie de l’ICHV de Sion.<br />

En revanche, le prix est plus intéressant et il y a un antifongique de plus.<br />

3.10 Perspectives<br />

Il serait intéressant de tester en parallèle d’autres méthodes d’antifongigrammes<br />

produits par différents fournisseurs comme par exemple Eurobio ou Biorad.<br />

Ceci permettrait de comparer de manière élargie toutes les techniques actuellement<br />

sur le marché, ou de tester d’autres espèces de Candida comme le Candida<br />

dubliniensis, le C. norvegensis, le C. robusta ou le C. famata.<br />

Un autre point intéressant serait de tester de nouveaux antifongiques comme la<br />

caspofongine ou le posaconazole.<br />

Nous pourrions également tester plus de souches ce qui nous permettrait d’avoir un<br />

meilleur aperçu des capacités de cette nouvelle méthode.<br />

Gloor Ariane 47/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

4. Remerciements<br />

Pour commencer, je souhaite remercier le Dr. Gérard Praz qui m’a permis de réaliser<br />

cette étude au sein du laboratoire de bactériologie de l’ICHV de Sion.<br />

Je remercie également toute l’équipe du laboratoire de bactériologie de l’ICHV pour<br />

leur disponibilité, leur bonne humeur et leur gentillesse.<br />

Je tiens à remercie tout particulièrement Mme Lysiane Tissières Lovey, laborantinecheffe,<br />

qui m’a consacré de son précieux temps et qui m’a guidée et conseillée ainsi<br />

que Dominique Constantin de m’avoir mis à disposition les souches ce qui m’a<br />

permis de réaliser cette étude.<br />

5. Glossaire<br />

• Antifongigramme : Technique de détermination de l’activité d’un ou<br />

plusieurs antifongiques face à un champignon<br />

(levure ou moisissure).<br />

• Antifongique : C’est une substance naturelle ou un médicament<br />

susceptible d’entraver le développement ou bien<br />

de détruire le champignon.<br />

• Ascomycètes : Subdivision des champignons dont le mode de<br />

reproduction sexuée est caractérisé par la<br />

formation d’asques et d’ascospores.<br />

• Ascospores : Spore sexuée des Ascomycètes formée à<br />

l’intérieur d’un asque.<br />

• Asexué : Se dit d’un mode de reproduction qui ne provient<br />

pas de l’union de deux champignons de sexes<br />

opposés, mais résulte d’une simple mitose.<br />

• Asque : Formation sexuée chez les Ascomycètes, soit<br />

arrondie, soit allongée avec une ou deux paroi (s).<br />

Elle renferme les ascospores (après méiose).<br />

• ATCC : American Type Culture Collection. Il s’agit de<br />

souches de référence provenant de l’Institut<br />

Pasteur à Paris permettant de vérifier les<br />

techniques utilisées, de définir leur reproductibilité<br />

et de valider les résultats obtenus.<br />

• Basidiomycètes : Subdivision des champignons dont la reproduction<br />

sexuée est caractérisée par la formation de spores<br />

externes (basidiospores) formés à l’extrémité des<br />

basides.<br />

Gloor Ariane 48/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

• Bourgeonnement : Mode de propagation asexué rencontré souvent<br />

chez les levures. Cela aboutit à la production de<br />

cellules filles issues de la cellule initiale par<br />

séparation d’une excroissance de cette dernière<br />

appelée cellule mère. Le bourgeonnement<br />

multilatéral correspond à un bourgeonnement dans<br />

plusieurs directions.<br />

• Caséeux : Se dit d’une lésion qui a l’aspect et la consistance<br />

du fromage.<br />

• Chitine : C’est un composé polysaccharidique à base de Nacétyl-glucosamine,<br />

qui rentre dans la composition<br />

de la carapace des insectes et des crustacés. Il est<br />

aussi présent à des degrés divers, dans la paroi<br />

des champignons.<br />

• Cosmopolite : Se dit d’un organisme qui vit partout dans le<br />

monde.<br />

• Deutéromycètes : Subdivision regroupant l’ensemble des<br />

champignons dont la reproduction sexuée est<br />

inconnue. Ils comprennent 3 classes : les<br />

Hyphomycètes, les Coelomycètes et les<br />

Blastomycètes.<br />

• Eucaryotes : C’est l’ensemble des êtres vivants qui possèdent<br />

un vrai noyau. Ils se divisent en quatre règnes : les<br />

protistes, les mycètes, les plantes et les animaux.<br />

• Fongicide : Substance (ou médicament) qui est capable dans<br />

certaines conditions, de tuer le champignon.<br />

• Fongistatique : Substance (ou médicament) qui n’est capable que<br />

de ralentir ou d’inhiber la croissance des<br />

champignons sans les détruire.<br />

• Hétérotrophe : Mode nutritionnel des êtres vivants appartenant au<br />

règne animal et à celui des champignons qui pour<br />

se nourrir, utilisent des aliments organiques déjà<br />

produits par d’autres organismes vivants.<br />

• Hexosaminidase : Il s’agit d’une enzyme impliquée dans l’hydrolyse<br />

de plusieurs molécules contenant de l’hexose.<br />

• Hyphe : Chez les champignons, c’est l’élément constitutif<br />

du thalle, d’aspect tubulaire, septé ou non comme<br />

chez les Zygomycètes. L’ensemble des hyphes<br />

constituent le mycélium. Synonyme : filaments<br />

mycéliens.<br />

Gloor Ariane 49/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

• Mac Farland : Unité de mesure d’un trouble produit par des<br />

bactéries dans une solution.<br />

• Métabolite : Se dit du produit de la transformation d’une<br />

substance de l’organisme.<br />

• Monomères : Il s’agit de molécules qui peuvent s’unir les unes<br />

aux autres pour former des polymères.<br />

• Mycélium : Ensemble d’hyphes qui constituent le thalle :<br />

élément végétatif des champignons.<br />

• Mycètes : Il s’agit d’un des cinq règnes du monde vivant<br />

selon la classification de Wittaker (1969) C’est un<br />

organisme eucaryote, hétérotrophe constitué d’un<br />

thalle unicellulaire ou filamenteux, qui vit en<br />

saprophyte ou parfois en parasite. Synonyme :<br />

champignon.<br />

• Mycotoxinose : Intoxication d’orginie alimentaire provoqué par un<br />

champignon microscopique qui s’est développé<br />

dans les aliments (céréales).<br />

• Plasmalemme : Il s’agit de la structure qui définit la cellule. C’est un<br />

constituant universel de toutes les cellules<br />

vivantes.<br />

• Rhizopode : Phylum regroupant les Protozoaires qui se<br />

déplacent et se nourrissent à l’aide d’expansions<br />

cytoplasmiques (exemple : amibes).<br />

• Sabouraud : Milieu de culture habituel en mycologie, il contient<br />

de la gélose (agar-agar), de peptone de soja, du<br />

glucose et de l’H2O distillée. On y additionne<br />

souvent des antibiotiques (gentamicine et<br />

chloramphénicol) et un antifongique pour inhiber la<br />

pousse de certaines moisissures et levures<br />

indésirables.<br />

• Saprophyte : Se dit d’un organisme vivant qui s’alimente dans la<br />

nature à partir de débris organiques en<br />

décomposition (matière morte).<br />

• Spore : Élément qui assure la dispersion et la reproduction<br />

des champignons. Elle provient d’une reproduction<br />

sexuée ou asexuée. Synonyme : propagule<br />

fongique.<br />

Gloor Ariane 50/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

• Taxonomie : Science de la classification qui permet de<br />

regrouper les êtres vivants en taxons (genres,<br />

espèces) selon des critères bien définis.<br />

• Thalle : Ensemble de l’appareil végétatif et reproducteur<br />

d’un champignon. Il peut être unicellulaire (levure)<br />

ou filamenteux.<br />

• Topique Se dit d’un traitement qui s’applique localement,<br />

directement sur la peau et les muqueuses. Le but<br />

est d’agir localement et de diminuer les effets<br />

généraux des traitements.<br />

• Tropisme : Le fait d’être attiré vers.<br />

6. Bibliographie<br />

6.1 Livre<br />

• Chabasse,D., Guigen, Cl. & Contet-Audonneau, N. (1999). Mycologie<br />

médicale. Paris : MASSON<br />

• Grigoriu, D., Delacrétaz, J.& Borelli, D. (1984). Traité de mycologie médicale.<br />

Suisse : Payot<br />

6.2 Brochure<br />

• Conférence de consensus commune (2004). Prise en charge des candidoses<br />

et aspergilloses invasives de l’adulte. Paris : ELSEVIER MASSON<br />

• DANNAOUI, E. (31.05.2007). Principaux antifongiques systémiques :<br />

Mécanismes d’action et de résistance, spectre, indications. Centre National de<br />

Référence de la Mycologie et des Antifongiques, Institut Pasteur, Paris<br />

6.3 Supports de cours, documents non publiés<br />

• Chabasse, D., Bouchara, J.-P., de Gentile, L., Brun, S., Cimon, B., Penn, P.<br />

(2004). Cahier de Formation : Biologie médicale N°31 : Les dermatophytes.<br />

[Présentation Power Point]. Bioforma, France<br />

• Chabasse, D., Bouchara, J.-P., de Gentile, L., Brun, S., Cimon, B., Penn, P.<br />

(mars 2002). Cahier de Formation : Biologie médicale N°25 : Les moisissures<br />

d’intérêt médical. [Présentation Power Point]. Bioforma, France<br />

• Constantin, D. (20.09.2003). Classeur des stagiaires.[Polycopié]. Laboratoire<br />

de bactériologie, ICHV Sion<br />

• Freydière, A.-M. (14.06.2007). Méthodes de détermination de la sensibilité<br />

aux antifongiques. [Présentation Power Point]. Centre de Bioforma, France<br />

Gloor Ariane 51/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

6.4 Internet<br />

• Bahji, M., Sbiti, M., Belmaki, A., Agoumi, A. (13.03.2009). Diagnostic<br />

Biologique et identification des levures du genre candida [Page Web]. Accès :<br />

http://www.medramo.ac.ma/fmp/revue_marocaine/ARTICLES/2003-<br />

1/diagnostic%20biologique%20des%20candida.pdf<br />

(Page consultée le 11.03.2009)<br />

• BIOMERIEUX.(06.03.2009). Products VITEK® 2 Antifungal Testing [Page<br />

Web]. Accès :<br />

http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinicaldiagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_92<br />

(Page consultée le 01.12.2008)<br />

• BIOMERIEUX.(06.03.2009). Produits ATB FUNGUS 3 [Page Web]. Accès :<br />

http://www.biomerieux.fr/servlet/srt/bio/france/dynPage?doc=FRN_CLN_PRD<br />

_G_PRD_CLN_4 (Page consultée le 01.12.2008)<br />

• Compendium Suisse des Médicaments. (2009). COMPENDIUM SUISSE DES<br />

MEDICAMENTS. [Page Web]. Accès :<br />

http://www.kompendium.ch/Search.aspx?lang=fr<br />

(Page consultée le 12.03.2009)<br />

• LABMED. (12.11.2007). Sujets choisis de mycologie ; Levures : Candida<br />

[Page Web]. Accès :<br />

http://www.labmed.ch/doc/doc_download.cfm?uuid=36309A76D9D9424C4F9<br />

520A5E21C828F&&IRACER_AUTOLINK&&<br />

(Page consultée le 11.03.2009)<br />

• Regents of the University of California.(29.01.2003). Yeasts [Page Web].<br />

Accès :<br />

http://labmed.ucsf.edu/education/residency/fung_morph/launchpage.html<br />

(Page consultée le 08.12.2009)<br />

Gloor Ariane 52/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

7. Annexes<br />

7.1 Procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®<br />

Gloor Ariane 53/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

7.2 Feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ®<br />

Gloor Ariane 54/62<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

7.3 Résultats de l’étude précédente<br />

Résultats: Candida albicans<br />

Flucytosine<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64<br />

≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

6 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

7 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />

8 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

11 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />

23 Gorge 0.5 S 0.5 S 16 I 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I<br />

38 Pus profond 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

45 L.Pleural 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

46 Lèvre 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

50 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

55 Pl.profonde 0.5 S 0.5 S 4 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

56 Urine sondée 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

57 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

58 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />

59 Hemoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

60 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />

61 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

62 Sputum 0.5 S 0.5 S 64 R 0.25 I < 2 S < 2 S < 64 I


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

82 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

84 Gorge 0.5 S 0.5 S 16 I 2 R < 2 S < 2 S < 64 I < 4 I Incub.A:3j<br />

98 Sputum 0.5 S 0.5 S 64 R 4 R < 2 S < 2 S < 64 I > 4 R Incub.A:2j<br />

99 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

100 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

101 Gorge 0.5 S 0.5 S 64 R 4 R < 2 S < 2 S > 64 R < 4 I Incub.A:2j<br />

102 Gorge 0.5 S 0.5 S 32 I 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I < 0.5 S Incub.A:2j<br />

103 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

104 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

105 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

106 Sputum 0.5 S 0.5 S 0.5 S 1.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

107 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

108 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

109 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

110 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

111 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

92 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

95 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Candida albicans suite<br />

ATB FUNGUS 2®<br />

Amphotéricine B<br />

Fluconazol<br />

Itraconazol<br />

Flucytosine<br />

Amphotéricine B<br />

Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

FUNGITEST®<br />

Fluconazol<br />

Itraconazol<br />

56/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B<br />

Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

2 Vagin 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

4 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2 j./ Flu:S<br />

5 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S ≥ 4 R Incub.A:2 j./ Flu:S/ Itr:I<br />

9 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 2 S 0.5 I < 2 S < 2 S < 64 I 4 R Incub.A:2j./ Flu:I/ Itr:R<br />

14 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:3j./ Flu:S<br />

15 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

17 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I ≥ 4 R<br />

19 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 16 I 1 R < 2 S < 2 S ≥ 64 R ≥ 4 R Incub.A:2j./ Flu:S/ Itr:I<br />

37 Aspiration 8 I 0.5 S 2 S 0.5 I < 32 I < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />

39 Aspiration 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

53 Lame 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />

54 Cathéter 2 S 0.5 S 2 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Candida glabrata<br />

ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />

Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

57/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />

≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

1 Ulcère 16 I 2 R 16 R 0.5 I < 32 I 32 R < 64 I 4 R<br />

24 Urotube 4 S 0.5 S 16 R 1 R < 32 I < 2 S < 64 I < 4 I<br />

25 Urine 16 I 1 S 32 R 1 R < 32 I < 8 I < 64 I < 4 I<br />

26 Cathéter cq 8 I 1 S 16 R 0.5 I < 32 I < 2 S < 64 I < 0.5 S<br />

28 16 I 0.5 S 16 R 0.5 I < 32 I < 2 S < 64 I


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />

≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

13 Hémoculture 32 R 1 S 1 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

27 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I<br />

31 Sputum 64 R 0.5 S 2 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

32 LBA 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

33 Sputum 32 R 0.5 S 0.25 S 0.125 S 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

36 Pus profond > 64 R 0.5 S 1 S 0.25 I > 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

42 Aspiration 64 R 1 S 2 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

43 Sputum 0.5 S 1 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

44 Urine 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

47 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

78 Sputum 1 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

88 Aspiration 32 R 0.5 S 2 S 0.125 S >32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

91 Sputum 64 R 0.5 S 4 S 0.5 I > 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

96 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Candida tropicalis<br />

ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

59/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

3 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

10 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

12 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

16 Pl.profonde 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

18 Plaie 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

21 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

29 Pied diabétique 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

34 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

48 L.Jackson 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

49 Biopsiefémur 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

51 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

71 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

73 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

75 Urotube 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

76 Urotube 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

94 Oreille 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

96 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Candida parapsilosis<br />

ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />

Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

60/62


Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />

≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

20 Aspiration 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I < 4 I<br />

22 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

77 Sputum 32 R 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

87 cq ch 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

90 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

93 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

97 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Candida lusitaniae<br />

ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />

≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />

No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />

40 LCR 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

41 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />

Gloor Ariane<br />

ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />

Travail de diplôme<br />

2008-2009<br />

Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />

Discordance mineure<br />

Discordance majeure<br />

Souche testée 2 x<br />

Résultats: Cryptococcus neoformans<br />

ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />

ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />

FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />

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