ANTIFONGIGRAMME :
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<strong>ANTIFONGIGRAMME</strong> :<br />
Evaluation de la carte AST-YSO1®<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
sur l’automateVitek2 ®<br />
Responsable de Stage :<br />
Mme Lysiane Tissières Lovey
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Table des matières<br />
1. Sommaire / Summary............................................................................................. 4<br />
2. Généralités ............................................................................................................. 5<br />
2.1 Bref historique ................................................................................................ 5<br />
2.2 Caractéristiques générales ............................................................................ 6<br />
2.3 Les Candida..................................................................................................... 7<br />
2.3.1 Candida albicans........................................................................................ 8<br />
2.3.2 Candida tropicalis..................................................................................... 10<br />
2.3.3 Candida glabrata ...................................................................................... 10<br />
2.3.4 Candida parapsilosis ................................................................................ 11<br />
2.3.5 Candida krusei.......................................................................................... 11<br />
2.3.6 Candida lusitaniae.................................................................................... 12<br />
2.3.7 Candida kefyr ........................................................................................... 13<br />
2.3.8 Candida guilliermondii .............................................................................. 13<br />
2.4 Les Cryptococcus......................................................................................... 14<br />
2.4.1 Cryptococcus neoformans........................................................................ 14<br />
2.5 Épidémiologie ............................................................................................... 15<br />
2.6 Clinique.......................................................................................................... 15<br />
2.7 Diagnostic...................................................................................................... 18<br />
2.7.1 Prélèvement ............................................................................................. 18<br />
2.7.2 Examen direct .......................................................................................... 18<br />
2.7.3 Culture...................................................................................................... 18<br />
2.7.4 Identification ............................................................................................. 18<br />
2.7.5 Antifongigramme ...................................................................................... 18<br />
2.8 Traitements.................................................................................................... 18<br />
3. Travail pratique......................................................................................................22<br />
3.1 Introduction ................................................................................................... 22<br />
3.2 Situation du travail dans son environnement ............................................ 22<br />
3.3 Objectifs......................................................................................................... 22<br />
3.4 Matériel et méthodologie.............................................................................. 23<br />
3.4.1 Matériel..................................................................................................... 23<br />
3.4.2 Présentation des techniques .................................................................... 24<br />
3.4.2.1 ATB FUNGUS 3 ®................................................................................ 24<br />
3.4.2.2 Carte Vitek AST-YS01®..................................................................... 27<br />
Gloor Ariane 2/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
3.5 Analyse des résultats .................................................................................................. 30<br />
3.5.1 Premiers essais et actions correctives ..................................................... 30<br />
3.5.2 Explications des tableaux de résultats...................................................... 30<br />
3.6 Tableaux des résultats ................................................................................. 31<br />
3.7 Interprétation................................................................................................. 41<br />
3.7.1 Pourcentages de concordance et discordance entre l’ATB FUNGUS 3 ® et<br />
la Carte Vitek AST-YS01® ....................................................................... 41<br />
3.7.2 Pourcentages de concordance et discordance entre nos résultats et ceux<br />
obtenus dans l’étude précédente ............................................................. 44<br />
3.7.3 Reproductibilité......................................................................................... 44<br />
3.8 Discussion..................................................................................................... 45<br />
3.8.1 Avantages et inconvénients de l’ATB FUNGUS 3 ® ................................... 45<br />
3.8.2 Avantages et inconvénients de la carte Vitek AST-YS01®....................... 46<br />
3.9 Conclusion et synthèse................................................................................ 46<br />
3.10 Perspectives................................................................................................ 47<br />
4. Remerciements .....................................................................................................48<br />
5. Glossaire ...............................................................................................................48<br />
6. Bibliographie..........................................................................................................51<br />
6.1 Livre ............................................................................................................... 51<br />
6.2 Brochure ........................................................................................................ 51<br />
6.3 Supports de cours, documents non publiés .............................................. 51<br />
6.4 Internet........................................................................................................... 52<br />
7. Annexes.................................................................................................................53<br />
7.1 Procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®............................................................... 53<br />
7.2 Feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ® .................................................. 54<br />
7.3 Résultats de l’étude précédente .................................................................. 55<br />
Gloor Ariane 3/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
1. Sommaire<br />
Ces vingt dernières années, le nombre croissant de patients immunodéficients a<br />
généré une forte augmentation d’infections fongiques. Ces infections sont<br />
diagnostiquées de plus en plus précocement et traitées à l’aide de nouveaux<br />
antifongiques moins toxiques et mieux tolérés. La sensibilité des levures aux<br />
antifongiques doit être déterminée rapidement au moyen d’une méthode fiable.<br />
L’objectif de cette étude est d’évaluer la carte AST-YS01 ® sur l’automate Vitek2 ® et<br />
de comparer les résultats obtenus avec l’ATB FUNGUS 3® qui est la méthode utilisée<br />
actuellement. Nous avons testé 50 souches de Candida ainsi que 2 souches de<br />
référence ATCC. Ces souches avaient été testées dans une étude similaire.<br />
46/50 souches ont donné des résultats identiques avec les deux méthodes. 4<br />
souches ont donné des discordances mineures (2 avec le fluconazole, et 2 avec la<br />
flucytosine). Aucune discordance majeure n’a été observée.<br />
La carte AST-YS01 ® ne contient que 4 antifongiques et l’itraconazole n’est pas<br />
présent. Les CMI obtenues ont une meilleure précision ainsi qu’une bonne<br />
reproductibilité et sont interprétées par un automate. Le coût est légèrement plus<br />
élevé que celui de la galerie ATB FUNGUS 3® . La simplicité et la rapidité de<br />
préparation de l’analyse font que cette méthode est la plus adaptée au travail de<br />
routine d’un grand laboratoire de bactériologie. Cependant, l’ATB FUNGUS 3® reste<br />
une bonne alternative pour un laboratoire non automatisé.<br />
1. Summary<br />
These last twenty years, the growing number of immunodeficients patients generated<br />
a significant increase of fungal infections. These infections are diagnosed earlier and<br />
treated with new antifungal less toxic and better tolerated. The yeast sensibility for<br />
the antifungal must be fast determined by a sure method.<br />
The objectives of this study is to assess the AST-YS01 ® card on the automat Vitek2 ®<br />
and to compare results acquired with the ATB FUNGUS 3® which is the method used<br />
nowadays. We tested 50 strains of yeast as well as 2 reference ATCC strains. These<br />
strains had already been tested in a previous study.<br />
46/50 strains gave identical results with both methods. 4 strains gave minor<br />
discrepancies (2 with the fluconazol, and 2 with the flucytosine). No major<br />
discrepancy was observed.<br />
The AST-YS01 ® card contains only 4 antifungals and the itraconazol is not present.<br />
Acquired MIC has a better precision as well as a good reproducibility and is<br />
interpreted by an automat. The cost is a slightly higher then the other method.<br />
Simplicity and fastness of the preparation make this method more suitable for our<br />
laboratory. However, the ATB FUNGUS 3® is a good choise for a not automated<br />
laboratory.<br />
Gloor Ariane 4/62<br />
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2. Généralités<br />
Ces vingt dernières années, la mycologie médicale s’est fortement transformée avec<br />
une explosion d’infections fongiques. Chaque année, la liste des « nouveaux<br />
champignons » isolés s’allonge. C’est la conséquence du nombre croissant de<br />
patients immunodéficients.<br />
Ces changements ont entraîné des progrès majeurs dans la connaissance<br />
épidémiologique et physiopathologique des infections ainsi que de nouvelles<br />
possibilités diagnostiques et thérapeutiques.<br />
De plus, il existe de nouveaux antifongiques comme le voriconazole, la caspofongine<br />
ou le posaconazole.<br />
2.1 Bref historique<br />
Si aujourd’hui les champignons constituent un règne bien individualisé, il n’en a pas<br />
toujours été ainsi. On les a longtemps assimilés au règne végétal de part leur<br />
morphologie (thalle, spores, etc.), de part leur absence de mobilité et leur nutrition<br />
(absorption).<br />
Au 18 ème siècle, le monde vivant était partagé en 2 règnes : le végétal et l’animal. Le<br />
règne végétal regroupait les plantes et les algues, qui sont des espèces<br />
photosynthétiques, les bactéries et les champignons. Le règne animal, quant à lui,<br />
était composé à la fois d’êtres unicellulaires, c’est-à-dire les Protozoaires et des<br />
Métazoaires.<br />
Selon D. Chabasse, Cl. Guiguen. N. Contet-Audonneau (1999) :<br />
En 1866, le naturaliste et philosophe allemand Haeckel proposa d’y ajouter un<br />
troisième règne, celui des Protistes, ce que Copeland transformera plus tard en<br />
Protoctistes pour y regrouper la plupart des unicellulaires c’est-à-dire des<br />
bactéries, les Protozoaires, les Myxomycètes et autres protistes fongoïdes en<br />
raison de leur similitude avec les Rhizopodes. Les champignons et les algues<br />
sont quant à eux restés encore longtemps associés au règne végétal. (p.3)<br />
C’est en 1969 que l’américain Wittaker propose un système taxinomique à 5 règles<br />
soit les monomères (bactéries), les protistes, les végétaux, les champignons et les<br />
animaux.<br />
Gloor Ariane 5/62<br />
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2.2 Caractéristiques générales<br />
Les champignons, que l’on appelle également mycètes, sont des organismes<br />
eucaryotes uni- ou pluricellulaires, dépourvus de chlorophylle, ce qui les distingue<br />
des végétaux.<br />
Il s’agit d’un organisme hétérotrophe qui se nourrit par absorption et non par<br />
phagocytose. Les champignons, contrairement aux végétaux, sont dépourvus de<br />
pigment chlorophyllien et ainsi ne peuvent pas incorporer directement le carbone<br />
minéral dans leurs cellules. C’est pourquoi ils dépendent de matières organiques<br />
préformées, c’est-à-dire déjà présentes et produites par d’autres organismes vivants.<br />
C’est la raison pour laquelle, dans la nature, les champignons colonisent les<br />
organismes morts ou en décomposition, trouvant ainsi dans cette source les<br />
nutriments essentiels à leur vie soit du carbone, de l’azote, des sels minéraux, etc.<br />
La reproduction se fait selon un mode asexué mais qui peut être sexué dans<br />
certaines conditions.<br />
Les champignons sont des êtres immobiles mais qui produisent un nombre<br />
considérable de spores habituellement non flagellées pour pallier à ce handicap.<br />
La partie constitutive est désignée sous le nom de thalle ou mycélium. Leur paroi est<br />
constituée de chitine (comme chez les insectes), ce qui leur procure une sorte de<br />
résistance face aux contraintes du milieu extérieur. Les champignons possèdent un<br />
noyau avec une membrane nucléaire, des nucléoles et le plasmalemme composé de<br />
glycoprotéines, phospholipides et d’ergostérol qui correspond au cholestérol de<br />
toutes les autres cellules. Cette particularité donne une cible idéale pour les<br />
antifongiques qui seront très spécifiques, sans action sur les autres cellules.<br />
Selon D. Chabasse, Cl. Guiguen. N. Contet-Audonneau (1999) :<br />
Le pouvoir pathogène du champignon n’est pas uniquement dû à son<br />
parasitisme ou à son développement chez l’homme ou l’animal. Il peut, en<br />
produisant des toxines issues de son mycélium, être directement à l’origine<br />
d’intoxication alimentaire, ou bien, par l’accumulation de ses toxines libérées<br />
dans des végétaux consommés, être un agent de mycotoxinoses chez<br />
l’homme ou l’animal. (p.2)<br />
Les levures, quant à elles, possèdent un thalle unicellulaire. Il s’agit d’un mycète<br />
unicellulaire qui ne possède qu’un seul noyau et qui se reproduit soit de façon<br />
asexuée par bourgeonnement, soit de façon sexuée par formation de spores.<br />
Chaque bourgeon qui se sépare va développer une nouvelle levure, certains restent<br />
groupés et forment de nouvelles colonies.<br />
Les levures sont plus grandes que les bactéries, elles sont généralement sphériques<br />
ou ovoïdes.<br />
Gloor Ariane 6/62<br />
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Ci-dessous, vous trouvez un schéma de la fréquence des principales espèces de<br />
levures appartenant au genre Candida, isolées en France :<br />
11%<br />
Fréquence des divers espèces de levures appartenant au genre Candida<br />
1%<br />
1%<br />
4%<br />
4%<br />
2%<br />
2%<br />
C.albicans<br />
C.glabrata<br />
C.tropicalis<br />
C.parapsilosis<br />
C.krusei<br />
C.kefyr<br />
C.guilliermondii<br />
Autres<br />
Cette étude à été réalisée par GEMO : Groupe d’étude des mycoses opportunistes,<br />
auprès de 25 laboratoires de mycologie.<br />
En comparaison, voici les résultats obtenus au département de bactériologie de<br />
l’ICHV, Sion (2008).<br />
Comme nous pouvons le constater, il y a environ 75% de Candida albicans.<br />
3%<br />
1%<br />
1%<br />
1%<br />
1%<br />
15%<br />
2.3 Les Candida<br />
Gloor Ariane 7/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
75%<br />
Pourcentages des divers espèces de levures isolées<br />
1%<br />
1%<br />
76%<br />
C. albicans<br />
C. glabrata<br />
C. kefyr<br />
C. krusei<br />
C. lus itaniae<br />
C. paraps ilos is<br />
Candida sp<br />
C. tropic alis<br />
Autres<br />
Les levures du genre Candida sont des champignons unicellulaires mesurant de 4 à<br />
6 μm de long. Elles se multiplient par bourgeonnement ou éventuellement sous<br />
forme de pseudomycélium ou mycélium.<br />
Il s’agit de levures blanches, opaques, de formes ovoïdes, Gram positif et non<br />
encapsulées avec une petite protubérance à une extrémité.
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Les Candida poussent sur une gélose Sabouraud contenant des antibiotiques<br />
antibactériens à 25°C ou 37°C selon l’origine du prélèvement. Les colonies de<br />
levures sont visibles en 24 à 48 heures.<br />
En ce qui concerne la morphologie, elle est assez pauvre. L’identification se fait en<br />
grande partie grâce à des tests biochimiques. Le thalle est fait de levures très<br />
allongées qui restent attachées les unes aux autres, formant des pseudo-filaments<br />
qui sont caractéristiques du genre.<br />
Il existe plusieurs espèces de Candida dont voici les plus fréquentes.<br />
2.3.1 Candida albicans<br />
http://www.microbelibrary.org/microbelibrary/files/ccImages<br />
/Articleimages/Buxton/07%20Spt%20fungi/Candida%20albi<br />
cans%20fig2.jpg<br />
2001, William McDonald, M.D.<br />
Revised: 31 December 2000<br />
Il s’agit de l’espèce la plus fréquemment isolée, 60-80% des cas.<br />
Candida albicans est une levure cosmopolite, commensale des muqueuses oropharyngées,<br />
gastro-intestinales et génito-urinaires. Elle peut occasionnellement<br />
coloniser la peau.<br />
Elle fait partie de la famille des Deuteromycètes.<br />
Levures ovalaires ou rondes au microscope, sur gélose, elles sont blanches,<br />
crémeuses, lisses, formant des « pattes », des colonies étoilées qui permettent de<br />
les identifier sur les géloses Columbia (COS) et Chocolat PolyVitex. (PVX).<br />
Gloor Ariane 8/62<br />
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http://labmed.ucsf.edu/education/residency/f<br />
ung_morph/fungal_site/thumbnails/calbicans-on-cnaofw4.jpg<br />
En vieillissant, elles forment un pseudomycélium : filaments avec des zones<br />
rétrécies.<br />
La raison pour laquelle les colonies de Candida albicans forment des sortes de<br />
pattes est qu’ils forment des tubes germinatifs grâce au sérum contenu dans les<br />
géloses (test de blastèse).<br />
Un autre moyen permettant de les identifier est d’isoler les levures sur un milieu<br />
chromogène comme par exemple Albicans ID produit par bioMérieux® SA. La<br />
couleur bleue est caractéristique des colonies de C. albicans. Elle est liée à<br />
l’hydrolyse spécifique d’un substrat chromogène d’hexosaminidase.<br />
L’inhibition de la flore bactérienne est obtenue par l’association de 2 antibiotiques : le<br />
chloramphénicol et la gentamicine. Ce milieu est tamponné afin de faciliter la<br />
croissance des levures et d’optimiser l’expression de la réaction enzymatique.<br />
http://www.biomerieux.fr/upload/Candida<br />
2_thumb2_thumb.jpg<br />
Gloor Ariane 9/62<br />
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2.3.2 Candida tropicalis<br />
Candida tropicalis représente 25% des isolats de levures de ce genre en pathologie<br />
humaine. Son pouvoir pathogène est comparable à celui du Candida albicans.<br />
Candida tropicalis est isolé dans la nature, le sol, les végétaux et l’eau.<br />
Cette levure est apparentée aux Ascomycètes.<br />
Elle a une forme variable, ronde à allongée et ces colonies poussent rapidement.<br />
Elles sont crémeuses, blanches, lisses ou légèrement plissées. Elles sont souvent<br />
associées à un pseudomycélium.<br />
Un milieu chromogène (Albicans ID) permet de les identifier, les colonies sont de<br />
couleur rose.<br />
2.3.3 Candida glabrata<br />
http://www.labmed.ch/doc/doc_download.cfm?<br />
uuid=36309A76D9D9424C4F9520A5E21C82<br />
8F&&IRACER_AUTOLINK&&<br />
Candida glabrata représente environ 8% des isolats de levures du genre Candida<br />
isolées de prélèvements cliniques.<br />
Cette espèce est apparentée aux Ascomycètes.<br />
Il s’agit de levures de forme ronde ou allongée et de petite taille. Elles sont blanches,<br />
crémeuses, plates, brillantes. Le pseudomycélium est parfois absent, rudimentaire<br />
ou abondant. Au microscope, nous voyons de petites levures qui ne filamentent pas.<br />
Candida glabrata est souvent retrouvé au niveau des muqueuses génitales.<br />
https://www.hardydirefphotoagnostics.<br />
com/catalog2/hugo//g301_hccandida_<br />
cglabrata_66032_hugo.jpg<br />
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2.3.4 Candida parapsilosis<br />
Candida parapsilosis est une levure saprophyte, responsable d’environ 7% des<br />
infections dues aux levures du genre Candida. Cette levure fait partie de la flore<br />
normale de la peau chez l’homme.<br />
Il s’agit d’une espèce apparentée aux Ascomycètes.<br />
Elle a une forme variable, ronde à ovale. Les colonies croissent rapidement, sont<br />
blanches, crémeuses, lisses ou plissées. Cette levure est parfois associée à un fin<br />
pseudomycélium.<br />
Candida parapsilosis est le deuxième Candida responsable de septicémies après le<br />
Candida albicans. Chez les personnes immunodéprimées, il provoque des infections<br />
profondes.<br />
Ci-dessous, un graphique représentant les pourcentages de diverses espèces de<br />
Candida responsables de septicémies. Ces statistiques proviennent du laboratoire<br />
de bactériologie de l’ICHV, de Sion (2007-2008).<br />
Pourcentages des divers espèces de levures<br />
responsables de septicémies<br />
2%<br />
3%<br />
2.3.5 Candida krusei<br />
10%<br />
http://iph.fgov.be/ClinBiol/bckb33/activities/e<br />
xternal_quality/rapports/ATLAS/Mycology/Y<br />
easts_fichiers/slide0034_image022.jpg<br />
Gloor Ariane 11/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
85%<br />
C.albicans<br />
C.glabrata<br />
C.parapsiolosis<br />
C.tropicalis<br />
Candida krusei est une levure saprophyte qui représente 4% des isolats de levures<br />
du genre Candida obtenus à partir de prélèvements cliniques.
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Il s’agit de levures appartenant aux Ascomycètes.<br />
Elles sont allongées, ovales à cylindriques. Sur la gélose, elles ont un aspect blanc,<br />
mat et « poilu ».<br />
Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou abondant.<br />
Ces levures ne sont pas retrouvées dans la nature, mais elles ont été isolées de<br />
divers aliments comme par exemple des produits laitiers ou de la bière.<br />
Elles sont responsables de diarrhées entre autres pathologies.<br />
Le Candida krusei est résistant au Fluconazole.<br />
2.3.6 Candida lusitaniae<br />
https://www.hardydiagnostics.com/catalo<br />
g2/hugo/refphoto/g301_hccandida_ckrus<br />
ei_14243_hugo.jpg<br />
Candida lusitaniae est une levure de la flore normale de la peau, de l’appareil génitourinaire<br />
et de l’appareil respiratoire de l’homme.<br />
Initialement, cette levure a été isolée du tractus digestif des animaux à sang chaud.<br />
Ce Candida est essentiellement responsable d’infections viscérales profondes.<br />
Il s’agit d’une espèce s’apparentant aux Ascomycètes.<br />
De forme ronde à allongée et d’aspect blanc, lisse et crémeux, cette levure est<br />
brillante sur la gélose.<br />
Elles sont parfois associées à un fin pseudomycélium.<br />
http://scielo.isciii.es/img/revistas/aseo/v82n6/f09-01.jpg<br />
Gloor Ariane 12/62<br />
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2.3.7 Candida kefyr<br />
Chez l’homme, Candida kefyr est une levure saprophyte de la muqueuse<br />
respiratoire. Il est peu retrouvé sur la peau. Cette levure peut être isolée des produits<br />
laitiers.<br />
Il s’agit de levures appartenant à la famille des Lipomycetaceae. Son synonyme<br />
usuel est Candida pseudotropicalis.<br />
Elles sont de forme variable rondes à allongées. Ces levures se reproduisent par<br />
bourgeonnement multilatéral. Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou<br />
abondant. Parfois, il y a présence d’un vrai mycélium.<br />
C’est une levure rarement impliquée en pathologie. Cependant elle peut être<br />
responsable d’infections pulmonaires et de septicémies chez l’homme, ainsi que de<br />
lésions superficielles de la peau.<br />
2.3.8 Candida guilliermondii<br />
http://www.medmicro.wisc.edu/resources/im<br />
agelib/mycology/images/c_kefyr.jpg<br />
Candida guilliermondii est une levure très répandue dans la nature. Elle est présente<br />
chez la plupart des animaux ainsi que chez l’homme. Cette levure peut provoquer<br />
des onyxis, des intertrigos, des infections cutanées, des infections urinaires, etc. Ce<br />
Candida peut être à l’origine de septicémies chez les personnes immunodéprimées.<br />
Il s’agit de levures appartenant à la famille des Ascomycètes.<br />
Elles sont de forme variable rondes à allongées. Ces levures se reproduisent par<br />
bourgeonnement multilatéral. Le pseudomycélium peut être absent, rudimentaire ou<br />
abondant. Parfois, il y a présence d’un vrai mycélium.<br />
http://microbiology.mtsinai.on.ca/mig/yeasts<br />
/index.shtml<br />
Gloor Ariane 13/62<br />
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2.4 Les Cryptococcus<br />
2.4.1 Cryptococcus neoformans<br />
Le Cryptococcus neoformans est une levure très répandue dans la nature<br />
notamment dans l’air, sur les fruits, les plantes, le lait de vache, le bois et certains<br />
aliments.<br />
Il s’agit de levures appartenant à la famille des Basidiomycètes.<br />
Le Cryptococcus neoformans est un hôte du tube digestif du pigeon chez qui il ne<br />
provoque aucune maladie ; le principal réservoir est la fiente d’oiseaux séchée, en<br />
particulier celle du pigeon.<br />
Cette levure est également un saprophyte de l’homme. La contamination, quant à<br />
elle, est surtout aérienne, mais elle peut être orale ou cutanée. Le Cryptococcus<br />
neoformans peut provoquer des méningites sub-aiguës ou une primo infection<br />
pulmonaire le plus souvent latente chez les personnes immunodéprimées, en<br />
particulier chez les sidéens (chez 10% des patients VIH+ environ). Lorsque l’on<br />
découvre un Cryptococcus, une recherche d’immunosuppression (VIH,…) s’impose<br />
systématiquement.<br />
Des localisations osseuses et des septicémies ont également été signalées.<br />
Ces levures sont de forme variable rondes à allongées, encapsulées. Il n’y a pas de<br />
pseudomycélium. Elles se reproduisent par bourgeonnement multilatéral. Elles sont<br />
pigmentées en beige à ocre.<br />
La mise en évidence de la capsule se fait grâce à l’encre de chine.<br />
Quant au traitement, il est long et difficile.<br />
http://microbiology.mtsinai.on.ca/mig/yeasts/index.shtml<br />
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2.5 Épidémiologie<br />
Il n’y a que le Candida albicans et le Candida glabrata qui vivent en commensaux<br />
dans le tube digestif, la bouche et les voies génitales de l’homme et de la femme.<br />
Quant aux autres espèces, elles sont le plus souvent issues du milieu extérieur. Ces<br />
dernières sont aussi saprophytes et peuvent se retrouver quelquefois sur la peau et<br />
les muqueuses.<br />
En effet, les Candida sont des levures opportunistes, profitant d’un affaiblissement<br />
du système immunitaire ou d’autres facteurs favorisants pour provoquer une<br />
candidose. Il est important de bien séparer les divers facteurs favorisants qui<br />
peuvent être liés soit à l’hôte, c’est-à-dire des facteurs intrinsèques, soit à des<br />
facteurs extrinsèques ou exogènes le plus souvent occasionnés par un traitement.<br />
De plus, il existe la possibilité d’un colportage surtout en milieu hospitalier.<br />
Il semblerait que de nouvelles espèces de Candida émergent comme par exemple le<br />
Candida dubliniensis, qui est proche du Candida albicans et qui apparaît depuis<br />
l’arrivée et la propagation du VIH.<br />
En ce qui concerne les Cryptococcus neoformans, il s’agit de champignons<br />
saprophytes dans le milieu extérieur, opportunistes. La cryptococcose survient le<br />
plus souvent chez les sujets immunodéprimés.<br />
2.6 Clinique<br />
Les Candida ne provoquent pas de maladie chez les personnes saines. Les autres<br />
microorganismes inhibent leur développement ; ce n’est que lors d’un état<br />
d’immunodépression ou d’une multiplication exagérée qu’il devient pathogène.<br />
Les candidoses sont des affections cosmopolites causées par un Candida. Leur<br />
pathogénicité dépend de plusieurs facteurs : de leurs localisations très variées, de<br />
l’espèce et de leur quantité.<br />
Le pouvoir pathogène des Candida est principalement lié au potentiel invasif de sa<br />
forme filamenteuse.<br />
Il existe divers facteurs favorisant les candidoses dont voici quelques exemples :<br />
• Facteurs favorisants généraux<br />
- Âge : prématuré, personne âgée<br />
- Thérapeutiques : antibiotiques, immunosuppresseurs, etc.<br />
- États pathologiques : diabète, SIDA<br />
- États physiologiques : grossesse<br />
• Facteurs favorisants locaux<br />
- Humidité, Macération<br />
- Acidité<br />
- Radiothérapie<br />
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Il existe différents types de candidoses comme par exemple les candidoses<br />
superficielles, les candidoses génito-urinaires, les candidoses profondes, et les<br />
candidoses allergiques.<br />
Candidoses cutanées et unguéales<br />
Intertrigo : Au niveau de tous les replis cutanés<br />
chauds et humides, les plis de l’aine,<br />
sous-mammaires, axillaires et<br />
interfessiers. Il existe également<br />
l’intertrigo palmaire et plantaire.<br />
Onyxis et périonyxis : Au niveau de la sertissure de l’ongle.<br />
Candidoses digestives<br />
Candidose buccale ou muguet : Il s’agit d’un enduit blanchâtre<br />
recouvrant la langue, la face interne<br />
des joues, le voile du palais ainsi que<br />
le pharynx. Cette pathologie est<br />
fréquente chez les nouveau-nés et les<br />
patients immunodéprimés.<br />
http://parasito.montpellierwired.com/myco/muguet_bebe.jpg<br />
Candidose oesophagienne : Pathologie fréquente chez les sidéens.<br />
Candidose gastro-intestinale<br />
et anale : S’accompagne souvent d’un intertrigo<br />
périanal avec envahissement du sillon<br />
interfessier et des plis génito-cruraux<br />
(correspond aux organes génitaux et<br />
aux cuisses) et même du siège chez<br />
les nourrissons.<br />
Candidoses génito-urinaires<br />
Vulvo-vaginite: Caractérisée par une leucorrhée<br />
abondante, grumeleuse blanchâtre,<br />
avec un prurit vulvaire, les muqueuses<br />
sont recouvertes d’un enduit<br />
blanchâtre.<br />
Il s’agit d’une complication du diabète,<br />
de l’emploi de contraceptifs, d’une<br />
grossesse.<br />
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Balano-posthite: Caractérisée par une irritation intense<br />
de la muqueuse avec un enduit<br />
blanchâtre. Il s’agit d’une infection de la<br />
muqueuse du gland et du prépuce.<br />
Candidoses profondes<br />
Candidoses septicémiques<br />
et disséminées : Il s’agit d’une altération de l’état<br />
général, d’origine endogène (avec un<br />
foyer digestif) ou exogène (à partir d’un<br />
traumatisme vasculaire, cathéter). La<br />
symptomatologie est maigre. Le patient<br />
présente une fièvre inexpliquée, ne<br />
cédant pas aux antibiotiques.<br />
Les sites de dissémination sont les<br />
reins, le cœur, les poumons, le foie, les<br />
yeux, le système nerveux et la peau.<br />
Candidoses allergiques<br />
Elle est due à une allergie aux métabolites des Candida. Les foyers peuvent être<br />
cutanés ou respiratoires.<br />
Cryptococcose pulmonaire<br />
Celle-ci correspond à la primo-infection qui est presque toujours asymptomatique.<br />
Cryptococcose méningo-encéphalique<br />
Le Cryptococcus neoformans a un tropisme pour le système nerveux central. Le<br />
patient est pris de nausées, de céphalées, de fièvre peu importante, etc. Il ressent<br />
une hypertension intracrânienne. Il présente des troubles du caractère, de la<br />
mémoire et du sommeil.<br />
Cryptococcose cutanée<br />
Celle-ci résulte d’une dissémination hématogène sous forme de papules<br />
acnéiformes, d’ulcérations sur le visage et les extrémités.<br />
Cryptococcose généralisée<br />
Cette pathologie est fréquente chez les sidéens. Cette levure est retrouvée dans les<br />
urines, les lavages broncho-alvéolaires, le L.C.R, les hémocultures, etc.<br />
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2.7 Diagnostic<br />
2.7.1 Prélèvement<br />
En premier lieu, un prélèvement est effectué. Celui-ci peut être sous forme<br />
d’hémoculture, d’une biopsie ou d’un frottis lors de lésions cutanées et cutanéomuqueuses.<br />
2.7.2 Examen direct<br />
L’examen direct montre des levures bourgeonnantes avec ou sans filaments.<br />
2.7.3 Culture<br />
Un milieu Sabouraud est ensemencé. Cette gélose comprend des antibiotiques<br />
antibactériens. Selon l’origine du prélèvement, la gélose est placée dans une étuve à<br />
30°C. Les colonies poussent en 24 à 48 heures.<br />
2.7.4 Identification<br />
Le Candida albicans est facilement identifiable grâce à sa morphologie en étoile sur<br />
les géloses COS et PVX. Pour les autres espèces, elles seront identifiées par un<br />
repiquage sur un milieu chromogène et des tests biochimiques au moyen de galeries<br />
ou de cartes Vitek YST de bioMérieux® SA.<br />
2.7.5 Antifongigramme<br />
Ci-dessous, voici les techniques disponibles pour l’antifongigramme :<br />
• La technique de culture en cupules avec des concentrations critiques<br />
d’antifongiques. Il s’agit d’une méthode standardisée qui permet de déterminer<br />
la sensibilité des Candida sp et Cryptococcus neoformans à 5 antifongiques<br />
de concentrations différentes.<br />
• La technique en carte Vitek est une méthode standardisée, automatisée et<br />
rapide. Cette méthode utilise 4 antifongiques à 4 concentrations différentes.<br />
2.8 Traitements<br />
Il faut avant tout diminuer voire supprimer les facteurs favorisants. Ensuite, un<br />
traitement est administré au patient. Ce traitement est délicat car on utilise des<br />
produits devant être actifs sur le métabolisme de la cellule, d’où le nombre réduit<br />
d’antifongiques à disposition.<br />
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Selon la Conférence de consensus commune (13.05.2004) :<br />
Les cibles antifongiques sont : la paroi de la cellule fongique (échinocandine) ;<br />
sa membrane cytoplasmique, en bloquant l’incorporation (polyènes) ou la<br />
synthèse (azolés) de l’ergostérol ; la biosynthèse des acides nucléiques<br />
(flucytosine).<br />
In vitro, l’amphotéricine B est fongicide, le voriconazole est fongistatique sur le<br />
Candida sp., la caspofungine est fongicide sur Candida sp. La pertinence<br />
clinique de ces données expérimentales n’est pas établie. (p.8)<br />
Pour les candidoses superficielles, on utilisera un antifongique topique et pour les<br />
profondes un antifongique systémique.<br />
Les principaux antifongiques sont les suivants :<br />
Amphotéricine B<br />
Il s’agit actuellement du traitement de choix pour les infections fongiques<br />
systémiques, comme les candidoses profondes et les infections neuroméningées ou<br />
pulmonaires dues au Cryptococcus neoformans.<br />
Son utilisation est délicate du fait de sa néphrotoxicité.<br />
L’Amphotéricine B agit par stimulation de la consommation d’O2, la transformation de<br />
l’ATP en ADP et par la formation de complexes insolubles avec les stérols, ce qui<br />
aboutit à l’altération de la perméabilité cellulaire fongique.<br />
Elle a une activité fongistatique à faible concentration et fongicide à concentration<br />
élevée.<br />
Quelques rares cas de résistances primaires sur les Candida lusitaniae et tropicalis<br />
ont été signalés.<br />
Nom commercial : FUNGIZONE®, ABELCET®<br />
Flucytosine = Fluoro 5 Catosine = 5FC<br />
Il s’agit de l’un des antifongiques les plus anciens, son mode d’action est le suivant:<br />
Après pénétration dans les cellules fongiques, la 5 FC est transformée en 5 FU par la<br />
cytosine désaminase.<br />
Deux mécanismes antifongiques vont alors agir :<br />
Le premier implique la transformation du 5 FU en 5-fluorouracile triphosphate qui en<br />
s’incorporant à l’ADN fongique, va inhiber la synthèse protéique.<br />
Le second implique la transformation du 5 FU en 5-fluorodeoxyuridine qui est un<br />
inhibiteur de la thymidylate synthétase par conséquent de la synthèse d’ADN<br />
fongique.<br />
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Le Candida tropicalis présente parfois une résistance à l’encontre de cet<br />
antifongique.<br />
La flucytosine est un médicament de réserve. Les médecins préfèrent prescrire<br />
d’autres antifongiques moins toxiques.<br />
Griséofulvine = Grisefulvine®<br />
Nystatine = Mycostatine®<br />
Les antifongiques azolés<br />
Nom commercial : ANCOTIL®<br />
Il s’agit de la classe la plus utilisée à ce jour.<br />
Ce sont des triazolés fongistatiques à effet systémique.<br />
Ils inhibent l’enzyme fongique (C14 déméthylase, cytochrome P 450-dépendante) qui<br />
est nécessaire à la formation du principal stérol, l’ergostérol, de la membrane<br />
cellulaire des champignons.<br />
Ils sont indiqués pour le traitement des Candida, Aspergillus, Blastomyces,<br />
Histoplasma, Coccidiodes, Trichophyton et Cryptococcus neoformans.<br />
• Fluconazole<br />
Son spectre d’activité préférentiel est le Candida albicans et le<br />
Cryptococcus neoformans.<br />
En revanche, cet antibiotique est inactif sur les Candida krusei et<br />
dubliniensis ainsi que quelques rares Candida glabrata, car ils<br />
possèdent une résistance primaire.<br />
Il est en général bien toléré, mais à fortes doses, une toxicité<br />
hépatique ou neurologique peut se développer.<br />
• Itraconazole<br />
Nom commercial : Diflucan®<br />
Cet antibiotique est utilisé avec succès dans les méningites à<br />
Cryptococcus à des concentrations très faibles voire<br />
indétectables, ceci parce qu’il s’accumule dans les cellules de<br />
l’hôte.<br />
Nom commercial : Sporanox®<br />
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• Voriconazole<br />
Il s’agit d’un antifongique triazolé à large spectre d’action. C’est<br />
un inhibiteur de la synthèse d’ergostérol. Les indications du<br />
voriconazole sont les infections fongiques invasives à<br />
Aspergillus, Candida, Scedosporium, Fusarium.<br />
Le voriconazole est apparu plus efficace et mieux toléré que<br />
l’Amphotéricine B dans le traitement de l’aspergillose invasive.<br />
• Posaconazole<br />
Nom commercial : VFEND®<br />
Il s’agit d’un nouvel antifongique de la classe des azolés. Il s’agit<br />
d’un inhibiteur de biosynthèse de l’ergostérol, constituant de la<br />
membrane fongique. Il a une activité antifongique à large<br />
spectre. Il couvre les levures du genre Candida, les moisissures<br />
du genre Aspergillus, les zygomycètes et le Cryptococcus<br />
neoformans.<br />
Les échinocandines<br />
• Caspofungine<br />
Nom commercial : Noxafil®<br />
L’acétate de caspofungine inhibe la synthèse du bêta (1,3)-Dglucane,<br />
un constituant essentiel de la paroi cellulaire de<br />
nombreux champignons filamenteux et de nombreuses levures.<br />
Le bêta (1,3)-D-glucane n’est pas présent dans les cellules de<br />
mammifères.<br />
Aucune méthode standardisée pour la détermination de la<br />
sensibilité n’a été établie pour la nouvelle classe des<br />
échinocandines et les résultats d’études sur la sensibilité ne sont<br />
pas forcément corrélés aux observations cliniques.<br />
Nom commercial : Cancidas®<br />
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ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
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3. Travail pratique<br />
3.1 Introduction<br />
La partie pratique de cette étude a été réalisée au laboratoire de bactériologie de<br />
l’ICHV de Sion de juillet à août 2008.<br />
3.2 Situation du travail dans son environnement<br />
Ces vingt dernières années, la mycologie médicale s’est fortement transformée avec<br />
une explosion d’infections fongiques. Chaque année, le nombre d’espèces<br />
pathogènes identifiées augmente. De nouvelles résistances pour des espèces<br />
jusque là sensibles commencent à émerger.<br />
Il y a un nombre croissant de patients immunodéficients. La cause est l’utilisation de<br />
chimiothérapies plus agressives, les traitements immunosuppresseurs plus intenses<br />
chez les transplantés, l’utilisation d’une antibiothérapie à large spectre et le virus<br />
VIH.<br />
Il est impératif de pouvoir déterminer la sensibilité des levures aux antifongiques au<br />
moyen d’une méthode simple, rapide, fiable et standardisée.<br />
3.3 Objectifs<br />
L’objectif de cette étude est de comparer la nouvelle carte Vitek AST-YS01® avec<br />
une galerie commerciale ATB FUNGUS 3 ® toutes deux produites par bioMérieux®<br />
SA. Le but étant de définir la méthode la plus adaptée au laboratoire de bactériologie<br />
de l’ICHV de Sion.<br />
Pour ce faire, nous avons testé les espèces de Candida suivantes :<br />
C. albicans C. glabrata<br />
C. tropicalis C. krusei<br />
C. parapsilosis C. guilliermondii<br />
C. lusitaniae C. kefyr<br />
Cryptococcus neoformans<br />
Nous avons choisi ces espèces pour déterminer leur sensibilité aux divers<br />
antifongiques. Les résultats obtenus seront analysés puis comparés. Différents<br />
critères tels que la précision des CMI, la facilité d’utilisation et d’interprétation, ainsi<br />
que le coût, les avantages et inconvénients, les problèmes rencontrés, la durée de<br />
validité seront pris en compte.<br />
Le test qui répondra le mieux à ces critères sera introduit en routine au laboratoire de<br />
bactériologie à l’ICHV de Sion.<br />
Gloor Ariane 22/62<br />
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Ci-dessous, voici les deux antifongigrammes utilisés pour réaliser cette étude :<br />
• ATB FUNGUS 3 ® de bioMérieux® SA (Réf. 14 204)<br />
• Carte Vitek AST-YS01® de bioMérieux® SA (Réf. 22 108)<br />
Les cinq antifongiques suivants seront pris en compte dans notre étude :<br />
• Flucytosine<br />
• Amphotéricine B<br />
• Fluconazole<br />
• Voriconazole<br />
• Itraconazole (présent uniquement dans l’ATB FUNGUS 3 ®)<br />
Deux souches ATCC de référence provenant de l’Institut Pasteur à Paris permettront<br />
de vérifier les techniques utilisées, de définir leur reproductibilité et de valider les<br />
résultats obtenus.<br />
• ATCC 6258 Candida krusei<br />
• ATCC 22019 Candida parapsilosis<br />
La plupart des souches avaient été testées par une autre étudiante à l’ICHV de Sion<br />
dans une étude précédente, ce qui permet d’avoir une comparaison des résultats.<br />
En annexe 7.3, vous trouverez les résultats de l’étude antérieure.<br />
3.4 Matériel et méthodologie<br />
3.4.1 Matériel<br />
Pour la réalisation de cette étude, 50 souches de Candida ont été sélectionnées<br />
dans la « souchothèque » du laboratoire de bactériologie de l’ICHV à Sion dont :<br />
30 C. albicans 4 C. glabrata<br />
2 C. tropicalis 7 C. krusei<br />
2 C. parapsilosis 1 C. guilliermondii<br />
1 C. lusitaniae 1 C. kefyr<br />
2 Cryptococcus neoformans<br />
1 souche ATCC 6258 Candida krusei<br />
1 souche ATCC 22019 Candida parapsilosis<br />
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Chaque souche est traitée de la même manière et dans les mêmes conditions :<br />
• Le premier jour, la souche est décongelée et repiquée sur COS.<br />
• Elle va ensuite pousser lentement à 35°C pendant 24 heures<br />
• Le lendemain, la souche est repiquée pour la deuxième fois sur COS<br />
• Réincubation à 35°C pendant 24 heures<br />
• Puis, le jour suivant, la galerie sera inoculée et mise à l’étuve et la carte Vitek<br />
sera préparée en parallèle puis analysée sur l’automate Vitek2®.<br />
• Après 24 heures pour les Candida sp et 48 heures pour les Cryptococcus<br />
neoformans, la lecture des galeries est effectuée.<br />
En ce qui concerne la carte Vitek, nous obtenons des résultats après 13<br />
heures pour les Candida et après environ 20 heures pour les Cryptococcus<br />
neoformans.<br />
3.4.2 Présentation des techniques<br />
Principe :<br />
3.4.2.1 ATB FUNGUS 3 ®<br />
Il permet de déterminer la sensibilité des Candida et des Cryptococcus neoformans<br />
aux antifongiques en milieu semi-liquide dans des conditions très proches de la<br />
technique de référence de micro dilution.<br />
La galerie comporte 16 paires de cupules, la première sans antifongique servant de<br />
témoin de croissance.<br />
Les 15 paires suivantes contiennent 5 antifongiques à différentes concentrations<br />
permettant de déterminer des CMI.<br />
Pour déterminer cette CMI, on va rechercher et quantifier dans chaque cupule une<br />
croissance par lecture visuelle. L’appréciation peut différer d’une personne à l’autre.<br />
L’appréciation par lecture automatique n’est pas disponible au laboratoire.<br />
Matériel :<br />
Composition d’un kit :<br />
• 25 galeries en emballage individuel avec déshydratant<br />
• 25 couvercles d’incubation<br />
• 25 ampoules d’ATB F2 Medium<br />
• 25 fiches de résultats<br />
• 1 notice<br />
Matériel non fourni :<br />
• NaCl 0.85% 3 ml<br />
• Ecouvillons<br />
• Pipette électronique ATB 135 μl avec les embouts<br />
• Pipette calibrée 20 μl et les embouts<br />
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Mode opératoire :<br />
• A partir d’une culture fraîche sur COS, prélever quelques colonies à l’aide d’un<br />
écouvillon stérile et les dissoudre dans une ampoule de 3 ml de NaCl 0.85%,<br />
afin de réaliser une suspension d’opacité équivalente à l’étalon 2 MacFarland.<br />
• Contrôler la pureté de l’inoculum en l’isolant sur une gélose non sélective.<br />
• Transférer 20 μl de cette suspension à l’aide d’une pipette calibrée dans l’ATB<br />
Medium 1, homogénéiser.<br />
• Inoculer la galerie en distribuant 135 μl de la dilution dans chaque cupule à<br />
l’aide de la pipette électronique ATB. La concentration est d’environ 4 x 10 3<br />
levures/cupule.<br />
• Mettre le couvercle<br />
• Incuber : - 24 heures à 35°C pour les Candida à l’étuve O2<br />
- 48 heures à 35°C pour les Cryptococcus neoformans à l’étuve<br />
O2<br />
Pour les Candida dont la croissance dans les cupules témoins est insuffisante,<br />
incuber dans les mêmes conditions pendant 24 heures.<br />
En annexe 7.1, vous trouverez la procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />
Lecture et interprétation :<br />
Pour faciliter la lecture, placer la galerie sur un fond noir.<br />
Pour chaque antifongique, commencer la lecture par la concentration la plus faible et<br />
noter un score de croissance pour chacune des cupules comparativement aux<br />
cupules témoins. L’absence de croissance dans l’une ou l’autre, ou les 2 cupules<br />
témoins invalide la galerie.<br />
Score<br />
Absence de réduction de croissance 4<br />
Légère réduction de croissance 3<br />
Réduction marquée de croissance 2<br />
Très faible croissance 1<br />
Absence de croissance 0<br />
Pour ce qui est de l’Amphotéricine B, la CMI correspond à la concentration<br />
d’antifongique la plus faible permettant d’obtenir un score de 0, donc une inhibition<br />
complète.<br />
Pour le Fluconazole, la Flucytosine, l’Itraconazole, le Voriconazole, du fait du<br />
phénomène de croissance résiduelle, la CMI correspond à la concentration<br />
d’antifongique la plus faible permettant d’obtenir un score de 2,1 ou 0.<br />
En annexe 7.2, vous trouverez une feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />
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Concentrations critiques des CMI (en mg/l) recommandées pour les Candida sp.<br />
en catégories cliniques<br />
SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />
FLUCYTOSINE ≤ 4 8 -16 ≥ 32<br />
AMPHOTERICINE B Une CMI ≥ 2 suggère une résistance<br />
FLUCONAZOLE ≤ 8 16 - 32 ≥ 64<br />
ITRACONAZOLE ≤ 0.125 0.25 – 0.5 ≥ 1<br />
VORICONAZOLE ≤ 1 2 ≥ 4<br />
Note : Le Candida krusei est une espèce intrinsèquement résistante au Fluconazole,<br />
le test doit être systématiquement interprété comme RESISTANT.<br />
Concentrations critiques des CMI (en mg/l) recommandées pour les Cryptococcus<br />
neoformans en catégories cliniques<br />
SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />
FLUCYTOSINE ≤ 4 8 - 16 ≥ 32<br />
AMPHOTERICINE B Une CMI ≥ 2 suggère une résistance<br />
FLUCONAZOLE ≤ 4 8 ≥ 16<br />
ITRACONAZOLE Non défini<br />
VORICONAZOLE Non défini<br />
Note : Les CMI habituellement obtenues pour le Cryptococcus neoformans sont 0.5<br />
et 1 mg/l.<br />
Ci-dessous, une galerie ATB FUNGUS 2 ® de bioMérieux® SA, modèle précédant<br />
l’ATB FUNGUS 3 ®.<br />
Galerie ATB FUNGUS 2 ®, bioMérieux SA<br />
Marchand S., (2004-2005)<br />
La principale différence entre ces deux générations de galerie ATB FUNGUS est la<br />
présence d’un cinquième antifongique pour l’ATB FUNGUS 3 ®, soit le voriconazole.<br />
Gloor Ariane 26/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
L’automate :<br />
3.4.2.2 Carte Vitek AST-YS01®<br />
Le Vitek2® dispose d’un système automatisé capable de traiter la majorité des tests<br />
de routine avec un rendu des résultats fiable et rapide. Il détecte des résistances<br />
même faiblement exprimées. Plus de 330 espèces microbiennes peuvent être<br />
identifiées grâce à une base de données optimisée. Cet appareil est composé de<br />
différents éléments essentiels :<br />
La Station Compacte Satellite (SCS)<br />
Il s’agit d’un petit ordinateur destiné à récupérer les données suivantes : code à<br />
barre des différentes cartes, nom du germe, code à barre du prélèvement ou<br />
numéro du prélèvement, identité du technicien ayant effectué l’analyse permettant<br />
d’assurer une bonne traçabilité.<br />
La cassette<br />
La cassette comporte une puce mémoire utilisée pour connaître le contenu de la<br />
cassette. Cette cassette sert également au support des cartes. Le Vitek2® se<br />
charge automatiquement de la dilution à effectuer.<br />
La carte Vitek AST-YS01®<br />
La carte Vitek AST-YS01® comportant 64 cupules réactionnelles.<br />
Les cartes sont inoculées avec les diverses suspensions. Le module de<br />
remplissage utilise une chambre à vide et une pompe. Lorsqu’une cassette atteint<br />
ce stade la pompe évacue l’air de la chambre. Puis, le vide est lentement rompu.<br />
L’augmentation de la pression d’air dans la chambre pousse la suspension par le<br />
tube de transfert dans les canaux et les micro-cuves de la carte. Ensuite, les tubes<br />
de transfert sont scellés. La carte et son contenu sont ainsi hermétiquement<br />
fermés.<br />
Incubation et lecture<br />
Liste des produits 2007 bioMérieux<br />
(22.02.2009)<br />
Le système de transport place le porte-cassette de telle sorte qu’un mécanisme<br />
met chaque carte dans l’emplacement du carrousel, où elles restent pendant toute<br />
la durée de l’analyse.<br />
Le carrousel, qui a une capacité de 60 cartes, tourne toutes les 15 minutes de<br />
façon à placer chaque carte en position de lecture. La tête de lecture déplace la<br />
Gloor Ariane 27/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
carte à travers les blocs optiques. Après la lecture, la carte reprendra sa place dans<br />
le carrousel ou l’incubation à 35,5°C se poursuit jusqu’à la lecture suivante.<br />
Principe :<br />
Cette technique permet également de déterminer la sensibilité des Candida et des<br />
Cryptococcus neoformans aux antifongiques en milieu semi-liquide.<br />
Cette carte comprend 64 cupules réactionnelles comprenant quatre antifongiques<br />
dont le fluconazole, le voriconazole, la flucytosine et l’amphotéricine B à quatre<br />
concentrations différentes.<br />
La lecture s’effectue à 660 nm. L’analyse du taux de croissance est effectuée toutes<br />
les 15 minutes en cinétique. Puis, pour chaque antibiotique, un algorithme spécifique<br />
convertit les valeurs brutes (RTU) en CMI calculée. Pour calculer les CMI, l’automate<br />
contrôle le remplissage des cupules, puis vérifie les valeurs brutes. Il élimine les<br />
valeurs brutes aberrantes liées au bruit de fond et aux souches difficiles à mettre en<br />
suspension.<br />
Ensuite, il détermine la durée d’incubation de la carte. Dans la cupule contrôle, il<br />
évalue la vitesse de croissance du germe. La lecture s’arrêtera si la croissance dans<br />
tous les puits est suffisante. Celle-ci sera considérée comme la plus haute pouvant<br />
être mesurée pour cet antibiotique.<br />
Pour finir les résultats de CMI sont interprétés en S-I-R en fonction des<br />
concentrations critiques spécifiques des différents comités.<br />
Matériel :<br />
Composition d’un kit :<br />
• 20 cartes en emballage individuel avec déshydratant<br />
• 1 notice<br />
Matériel non fourni :<br />
http://www.biomerieux.ch/upload/vitek2_sm<br />
artcarrierstation1_thumb1.jpg<br />
• NaCl 0.85%<br />
• Tube en plastique stérile pour la dilution<br />
• Ecouvillons<br />
Gloor Ariane 28/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Mode opératoire :<br />
• A partir d’une culture fraîche sur COS, prélever quelques colonies à l’aide d’un<br />
écouvillon stérile et les dissoudre dans environ 3 ml de NaCl 0.45%, afin de<br />
réaliser une suspension d’opacité équivalente à l’étalon 2 MacFarland.<br />
• Contrôler la pureté de l’inoculum en l’isolant sur une gélose non sélective.<br />
• Tout d’abord, il faut placer le portoir sur la station satellite qui est un poste de<br />
travail nous permettant de programmer les analyses à effectuer, le nom du<br />
germe etc. Le tube contenant la suspension est alors placé sur le portoir. Le<br />
code barre de la carte AST-YS01® est scanné, puis la carte est introduite<br />
dans le tube.<br />
• Un tube vide est ajouté à côté du tube contenant la suspension. Le Vitek2®<br />
se charge automatiquement de la dilution à effectuer avec du NaCl 0.45%. Il<br />
homogénéise la suspension par aspiration et refoulement, puis il inocule les<br />
cartes. Pour finir, les cartes sont isolées de l’extérieur et l’analyse commence.<br />
Il n’y a ainsi pas de risque de contamination pour le personnel.<br />
• BioMérieux® assure des résultats dans les 13 heures pour les Candida et 20<br />
heures pour les Cryptococcus neoformans.<br />
Lecture et interprétation :<br />
Gloor Ariane 29/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Ci-dessus, voici un rapport de laboratoire. Nous voyons qu’il s’agit d’un Candida<br />
albicans et qu’il est sensible aux quatre antifongiques. Nous remarquons également<br />
les différentes CMI. Pour finir, l’automate interprète les résultats.<br />
Nous constatons également que l’analyse a duré environ 13 heures.<br />
SENSIBLE INTERMEDIAIRE RESISTANTE<br />
AMPHOTERICINE B 1 2 4<br />
FLUCONAZOLE ≤ 8 16 - 32 ≥ 64<br />
FLUCYTOSINE ≤ 4 8 -16 ≥ 32<br />
VORICONAZOLE ≤ 1 2 ≥ 4<br />
3.5 Analyse des résultats<br />
3.5.1 Premiers essais et actions correctives<br />
Les Candida glabrata poussent plus lentement que les autres espèces. De ce fait,<br />
les galeries ATB FUNGUS 3 ® doivent être incubées 1 jour de plus.<br />
Pour les cartes Vitek le temps d’incubation reste le même que pour les autres<br />
espèces soit environ 13 h.<br />
Lors de discordances majeures (S-R ou R-S) entre les deux tests, la souche est à<br />
nouveau testée.<br />
3.5.2 Explications des tableaux de résultats<br />
Dans les tableaux des pages suivantes, les résultats sont exprimés de la manière<br />
suivante :<br />
CMI : Plus faible dilution d’antifongique montrant une<br />
inhibition de croissance de 80 à 100% par rapport<br />
à un contrôle de pousse sans antifongique (cupule<br />
contrôle).<br />
Sensible (S) : Il s’agit de souches pour lesquelles la probabilité<br />
de succès thérapeutique, dans le cas d’un<br />
traitement à dose habituelle est acceptable.<br />
La quantité d’antibiotique se trouvant dans les<br />
cupules est suffisante pour inhiber la croissance de<br />
la souche in vitro.<br />
Intermédiaire (I) : Il s’agit de souches pour lesquelles le succès<br />
thérapeutique est imprévisible.<br />
L’action de l’antifongique sur la souche n’est pas<br />
garantie.<br />
Résistante (R) : Il s’agit de souches pour lesquelles il existe une<br />
forte probabilité d’échec thérapeutique.<br />
L’antifongique n’inhibe pas la croissance de la<br />
souche in vitro.<br />
Gloor Ariane 30/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Les résultats des 50 souches et des souches ATCC obtenus avec les différents tests<br />
ont été comparés et interprétés de la manière suivante :<br />
Concordance : Les résultats obtenus par les deux tests sont<br />
identiques ou identiques à ceux obtenus par<br />
l’étudiante précédente.<br />
Discordance : Les résultats obtenus par les deux tests sont<br />
différents l’un de l’autre ou différents de ceux<br />
obtenus par l’étudiante précédente.<br />
Nous considérons trois discordances différentes :<br />
Discordance « very major »: Elle correspond à une différence de CMI de plus de<br />
2 dilutions. C’est le cas lorsque nous rendons un<br />
résultat S à la place de R. Il s’agit d’un faux<br />
sensible. Cela peut mettre la vie du patient en<br />
danger !<br />
Discordance majeure: Elle correspond à une différence de CMI de<br />
maximum 2 dilutions. C’est le cas lorsque nous<br />
rendons un résultat R à la place de S. Il s’agit d’un<br />
faux résistant. Cette erreur de mettra personne en<br />
danger puisque le résultat est résistant donc le<br />
médecin ne prescrira pas ce traitement.<br />
Discordance mineure : Elle correspond à une différence de CMI de<br />
maximum 1 dilution, soit à un S à la place d’un I ou<br />
à un I à la place d’un R et inversement.<br />
3.6 Tableaux des résultats<br />
Sur les pages suivantes, vous trouverez les tableaux de résultats détaillés.<br />
Gloor Ariane 31/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Résultats: Candida albicans<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine<br />
Amphotéricine<br />
B Fluconazole Itraconazole<br />
≤0.125/ 0.25-0.5 /<br />
Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
8 Hémoculture ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
9 Sp ≤4 S ≤2 S 8 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 8 S ≤0.12 S<br />
10 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 1 R 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≥64 R ≤0.12 S<br />
11 Gorge ≤4 S ≤2 S 8 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />
12 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 0,25 I 0,5 S ≤1 S ≤0.25 S 32 I ≤0.12 S<br />
13 Sp ≤4 S ≤2 S ≥128 R 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≥64 R 0,25 S<br />
14 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
15 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
16 Pl. profonde ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 1 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
17 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
18 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
19 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
20 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
21 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
22 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
23 Pus profond ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Gloor Ariane 32/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x (contaminations, discordance ?) Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
Résultats: Candida albicans suite<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
24 L. Pleural ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
25 Lèvre ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
26 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
27 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
28 Urine sondée ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
29 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
30 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
31 Expectoration ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
32 Gorge ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
33 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
34 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
35 Bouche ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
36 Gorge ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
37 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Gloor Ariane 33/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Résultats: Candida tropicalis<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
47 Expectoration ≤4 S ≤2 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
48 Expectoration ≥32 R ≤2 S 1 S 0,125 S ≤0.06 S ≥64 R ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Résultats: Candida glabrata<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S ≥64 R ≤0.12 S<br />
40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S 32 I ≤0.12 S<br />
41 Aspiration 4 S ≤0.5 S 4 S 0,5 I 0,25 S 4 S 0,5 S 8 S ≤0.12 S<br />
42 Hémoculture ≤4 S ≤2 S 2 S 0,25 I 0,06 S ≤1 S 0,5 S 4 S ≤0.12 S<br />
43 Hémoculture ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S 0,5 S 4 S ≤0.12 S<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
Gloor Ariane 34/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Résultats: Candida parapsilosis<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
44 ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />
45 Biop.fémur ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
Gloor Ariane 35/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Résultats: Candida krusei<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
1 ≤4 S ≤2 S 8 R 0,125 S 0,25 S 16 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />
2 Urotube ≤4 S ≤2 S 8 R 0,25 I 0,125 S 4 S 1 S 2 R ≤0.12 S<br />
3 Urine ≤4 S ≤2 S 8 R 0,5 I 0,25 S 4 S 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />
4 Cathéter CQ 16 I ≤2 S 8 R 0,125 S 0,25 S 8 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />
5 Gorge ≤4 S ≤2 S 32 R 0,125 S 0,5 S ≤1 S 0,5 S ≥64 R 0,25 S<br />
6 AB 16 I ≤2 S 8 R 0,5 I 0,25 S 8 I 0,5 S 8 R ≤0.12 S<br />
7 Cathéter ≤4 S ≤2 S 8 R 0,125 S 0,125 S 8 I ≤0.25 S 8 R ≤0.12 S<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
Gloor Ariane 36/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Résultats: Candida lusitaniae<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
46 Expectoration ≥32 R ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S 32 R ≤0.25 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Résultats: Candida kefyr<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
49 ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S ≤0.06 S ≤1 S 0,5 S ≤1 S ≤0.12 S<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
Gloor Ariane 37/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Résultats: Candida guilliermondii<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
50 CQ GB ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S 2 S ≤0.12 S<br />
Résultats: Cryptococcus neoformans<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
38 LCR ≤4 S ≤2 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S pas de résultat<br />
39 Hémoc ≤4 S 0,5 S 1 S 0,125 S 0,06 S ≤1 S ≤0.25 S ≤1 S pas de résultat<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
38/62
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Discordances ATB FUNGUS 3 ® - carte Vitek<br />
ATB FUNGUS 3® Vitek 2 AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Itraconazole Voriconazole Flucytosine Amphotéricine B Fluconazole Voriconazole<br />
≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/ 0.25-0.5 / ≥1 ≤1 / 2 / ≥4 ≤4 / 8-16 / ≥32 ≤2 = S / ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤1 / 2 / ≥4<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat<br />
1 ≤4 S ≤2 S 8 R 0.125 S 0.25 S 16 I 0.5 S 8 R ≤0.12 S<br />
40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0.06 S ≤1 S 0.5 S ≥64 R ≤0.12 S<br />
40 Vagin ≤4 S ≤0.5 S ≤1 S ≤0.125 S 0.06 S ≤1 S 0.5 S 32 I ≤0.12 S<br />
12 Gorge ≤4 S ≤2 S 64 R 0.25 I 0.5 S ≤1 S ≤0.25 S 32 I ≤0.12 S<br />
7 Cathéter ≤4 S ≤2 S 8 R 0.125 S 0.125 S 8 I ≤0.25 S 8 R ≤0.12 S<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
50 souches testées 4 discordances entre ATB FUNGUS 3 ® - carte Vitek<br />
1 « very major »<br />
4 mineures<br />
Souche testées 2x puis donne 1<br />
discordance mineure<br />
Les résultats obtenus ont été comparé à ceux de l’étude précédente. Ci-dessous, voici les discordances observées.<br />
39/62
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC Discordance majeure Discordance « very major »<br />
Discordance mineure Souche testée 2 x Interprétable<br />
Réincuber 1 jour de plus<br />
50 souches testées<br />
Discordances entre mes résultats et les résultats de l’étude<br />
précédente<br />
1 « very major »<br />
31 discordances au<br />
3 majeures<br />
total 27 mineures<br />
40/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
3.7 Interprétation<br />
3.7.1 Pourcentages de concordance et discordance entre l’ATB FUNGUS 3 ® et<br />
la Carte Vitek AST-YS01®<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Candida albicans<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 30/30 = 100% 30/30 = 100% 29/30 = ~97% 30/30 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - 1/30 = ~3% -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida tropicalis<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100 2/2 = 100<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida glabrata<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 4/4 = 100% 4/4 = 100% 3/4 = 75% 4/4 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - 1/4 = 25% -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida parapsilosis<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
41/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Candida krusei<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 5/7 = ~71% 7/7 = 100% 7/7 = 100% 7/7 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
2/7 = ~29% - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida lusitaniae<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida kefyr<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Candida guilliermondii<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100% 1/1 = 100%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Gloor Ariane 42/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Cryptococcus neoformans<br />
Flucytosine Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Voriconazole<br />
Concordances 2/2 = 100% 2/2 = 100% 2/2 = 100% ND<br />
Discordances<br />
mineures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - -<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
D’après le fabriquant, le résultat en carte du voriconazole pour le Cryptococcus<br />
neoformans n’est pas disponible (ND). C’est la raison pour laquelle nous avons testé<br />
5 souches de Cryptococcus neoformans. Effectivement, nous n’avons obtenu aucun<br />
résultat.<br />
Nous voyons clairement que la majorité des discordances se situe au niveau des<br />
antifongiques Flucytosine pour les Candida krusei et le Fluconazole pour les Candida<br />
albicans et glabrata.<br />
Nous constatons également que le Cryptococcus neoformans et certaines espèces<br />
de Candida ont une concordance parfaite comme pour le C. guilliermondii, C. kefyr,<br />
C. lusitaniae, C. parapsilosis et le C. tropicalis.<br />
Pour le Candida albicans, nous notons 1 discordance mineure pour 30 souches<br />
testées, ce qui est tout à fait acceptable.<br />
Par contre, pour le Candida krusei, il y a 2 discordances sur 7 souches testées. Pour<br />
finir, nous constatons qu’il y a 1 discordance sur 4 souches testées pour le Candida<br />
glabrata. Il s’agit de la souche pour laquelle nous avons eu le plus de discordances.<br />
Comme nous pouvons le constater, il y a environ 25% de discordances pour le<br />
Fluconazole pour le Candida glabrata ce qui correspond aux données de la<br />
littérature.<br />
Le voriconazole est actuellement le traitement de choix pour cette espèce.<br />
Quant aux Candida krusei, le traitement de choix est le voriconazole et la<br />
caspofongine qui est un nouveau traitement.<br />
Gloor Ariane 43/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
3.7.2 Pourcentages de concordance et discordance entre nos résultats et ceux<br />
obtenus dans l’étude précédente<br />
Résultat étude précédente ATB FUNGUS 2 ® – mes résultats<br />
Flucytosine<br />
Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Itraconazole<br />
Concordances 12/15 = 80% 15/15 = 100% 11/15 = ~73% 5/15 = ~33%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
3/15 = 20% - 2/15 = ~13% 8/15 = ~54%<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - 1/15 = ~7% 2/15 = ~13%<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - 1/15 = ~7% -<br />
Remarques - - - -<br />
Résultat étude précédente FUNGITEST – mes résultats<br />
Flucytosine<br />
Amphotéricine<br />
B<br />
Fluconazole Itraconazole<br />
Concordances 9/15 = 60% 11/13 = ~85% 6/15 = 40% 9/13 = ~69%<br />
Discordances<br />
mineures<br />
6/15 = 40% 2/13 = ~15% 9/15 = 60% 3/13 = ~23%<br />
Discordances<br />
majeures<br />
- - - 1/13 = ~8%<br />
Discordances<br />
very majeur<br />
- - - -<br />
Remarques - 2 ininterprétables - 2 ininterprétables<br />
Comme l’antifongique itraconazole n’est pas présent dans les cartes Vitek, nous<br />
avons comparé nos résultats avec ceux obtenus dans l’étude précédente.<br />
En comparant ces résultats, nous nous apercevons que c’est au niveau du<br />
fluconazole qu’il y a le plus de discordances. Il y a également peu de concordance<br />
au niveau de l’itraconazole.<br />
Nous constatons qu’il y a tout de même une meilleure correspondance avec les<br />
résultats de l’ATB FUNGUS 2 ® bien que le nombre de discordances soit relativement<br />
élevé.<br />
3.7.3 Reproductibilité<br />
La reproductibilité des deux méthodes est vérifiée grâce à 2 souches ATCC testées<br />
lors de chaque série.<br />
Pour la souche ATCC de Candida parapsilosis, la reproductibilité est excellente pour<br />
les 2 méthodes et les résultats obtenus correspondent à ceux attendus<br />
Pour la souche ATCC de Candida krusei, la reproductibilité est très bonne aussi,<br />
seule une fois les 2 méthodes ont donné une discordance mineure. Une erreur de<br />
manipulation en est sûrement la cause.<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
44/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
3.8 Discussion<br />
3.8.1 Avantages et inconvénients de l’ATB FUNGUS 3 ®<br />
Avantages<br />
Inconvénients<br />
- Le matériel dont on a besoin est fourni dans le kit, sauf le NaCl<br />
0.85%<br />
- Les CMI obtenues sont précises, grâce à plusieurs concentrations<br />
d’antifongiques différentes.<br />
- Interprétation des résultats facilitée par rapport à l’E-test.<br />
- Le prix est relativement bon marché, environ Fr. 140.95.- pour 25<br />
galeries soit Fr. 5.65.- par galerie<br />
- Préparation assez longue comprenant plusieurs étapes<br />
- La lecture de la quantification de la croissance est relativement<br />
difficile au début et peut varier selon les personnes. Le résultat<br />
dépend de notre jugement.<br />
- Parfois résultat peu clair. Le problème provenait certainement<br />
d’une mauvaise préparation ou d’une incubation inadéquate.<br />
- Le temps d’incubation est de 24 heures pour toutes les espèces,<br />
sauf le Candida glabrata (48 heures).<br />
- Après 48 heures, les cupules de la galerie sont parfois sèches et<br />
ininterprétables.<br />
- Le contenu d’un kit est de 25 galeries et la date de péremption est<br />
de 8 mois. Le kit ne sera certainement pas écoulé durant ce laps<br />
de temps.<br />
Gloor Ariane 45/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
3.8.2 Avantages et inconvénients de la carte Vitek AST-YS01®<br />
Avantages<br />
Inconvénients<br />
- La préparation est simple et rapide.<br />
- Facilité de stockage et pour l’élimination des déchets.<br />
- Code barre individuel (reconnaissance du type de carte,<br />
traçabilité, carte périmée rejetée par le système).<br />
- Tout le matériel est fourni, soit la carte. Il manque juste le NaCl<br />
pour faire la suspension.<br />
- Les temps d’incubation prescrits sont plus ou moins corrects pour<br />
toutes les espèces de Candida ainsi que pour le Cryptococcus<br />
neoformans.<br />
- Résultats rapidement disponibles.<br />
- Méthode standardisée et automatisée.<br />
- Reproductibilité excellente.<br />
- Le contenu du kit est de 20 cartes et la date de péremption est de<br />
14 mois, donc adapté à la consommation en routine.<br />
- Le prix est plus élevé que pour l’ATB FUNGUS 3 ® :<br />
environ Fr. 173.40.- pour 20 cartes soit Fr. 8.65.- par carte.<br />
- Il manque l’itraconazole par rapport à la galerie ATB FUNGUS 3 ®.<br />
3.9 Conclusion et synthèse<br />
Personnellement, les deux antifongigrammes obtiennent des résultats plus ou moins<br />
équivalents.<br />
Cependant, les CMI obtenues avec la nouvelle carte Vitek AST-YS01® ont une<br />
meilleure précision ainsi qu’une bonne reproductibilité, car c’est l’automate qui définit<br />
la CMI et non l’œil du technicien.<br />
Après avoir étudié les différents avantages et inconvénients des deux méthodes, je<br />
pense que la nouvelle carte Vitek AST-YS01® est la méthode la plus intéressante<br />
pour un laboratoire tel que celui de l’ICHV de Sion.<br />
Gloor Ariane 46/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
La carte Vitek AST-YS01® ne coûte pas tellement plus cher que les galeries ATB<br />
FUNGUS 3 ®. De plus, il est intéressant d’avoir des CMI précises. La méthode est<br />
automatisée et il y a donc une bonne reproductibilité et pas de variations suivant la<br />
personne qui doit rendre les résultats.<br />
Quant à l’aspect pratique, tout est compris dans le kit à part les tubes en plastique<br />
stériles, les écouvillons et le NaCl à 0.85% soit du matériel utilisé en routine donc<br />
n’engendrant pas de frais supplémentaires.<br />
Un autre point positif est le gain de temps par rapport à l’autre méthode. Ceci est<br />
intéressant pour le médecin afin de prescrire un traitement adéquat rapidement.<br />
Pour ce qui est des résultats, nous rendons ceux obtenus par l’automate. Un autre<br />
point positif est la longue échéance de la date de péremption qui est de 14 mois par<br />
rapport à 8 mois pour les galeries.<br />
Les points négatifs seraient l’absence d’itraconazole par rapport à la galerie ATB<br />
FUNGUS 3 ®, ainsi que la présence des 4 antifongiques présents dans la carte. Il n’y<br />
pas de possibilités de tester d’autres antifongiques.<br />
En ce qui concerne cette galerie il s’agit d’une bonne méthode également.<br />
Cependant, le nombre de manipulations pour la préparation est plus important que<br />
pour la méthode en carte. De plus, les résultats sont moins fiables au niveau des<br />
CMI.<br />
Pour ces raisons, les galeries sont moins bien adaptées à un laboratoire de routine<br />
tel que l’unité de bactériologie de l’ICHV de Sion.<br />
En revanche, le prix est plus intéressant et il y a un antifongique de plus.<br />
3.10 Perspectives<br />
Il serait intéressant de tester en parallèle d’autres méthodes d’antifongigrammes<br />
produits par différents fournisseurs comme par exemple Eurobio ou Biorad.<br />
Ceci permettrait de comparer de manière élargie toutes les techniques actuellement<br />
sur le marché, ou de tester d’autres espèces de Candida comme le Candida<br />
dubliniensis, le C. norvegensis, le C. robusta ou le C. famata.<br />
Un autre point intéressant serait de tester de nouveaux antifongiques comme la<br />
caspofongine ou le posaconazole.<br />
Nous pourrions également tester plus de souches ce qui nous permettrait d’avoir un<br />
meilleur aperçu des capacités de cette nouvelle méthode.<br />
Gloor Ariane 47/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
4. Remerciements<br />
Pour commencer, je souhaite remercier le Dr. Gérard Praz qui m’a permis de réaliser<br />
cette étude au sein du laboratoire de bactériologie de l’ICHV de Sion.<br />
Je remercie également toute l’équipe du laboratoire de bactériologie de l’ICHV pour<br />
leur disponibilité, leur bonne humeur et leur gentillesse.<br />
Je tiens à remercie tout particulièrement Mme Lysiane Tissières Lovey, laborantinecheffe,<br />
qui m’a consacré de son précieux temps et qui m’a guidée et conseillée ainsi<br />
que Dominique Constantin de m’avoir mis à disposition les souches ce qui m’a<br />
permis de réaliser cette étude.<br />
5. Glossaire<br />
• Antifongigramme : Technique de détermination de l’activité d’un ou<br />
plusieurs antifongiques face à un champignon<br />
(levure ou moisissure).<br />
• Antifongique : C’est une substance naturelle ou un médicament<br />
susceptible d’entraver le développement ou bien<br />
de détruire le champignon.<br />
• Ascomycètes : Subdivision des champignons dont le mode de<br />
reproduction sexuée est caractérisé par la<br />
formation d’asques et d’ascospores.<br />
• Ascospores : Spore sexuée des Ascomycètes formée à<br />
l’intérieur d’un asque.<br />
• Asexué : Se dit d’un mode de reproduction qui ne provient<br />
pas de l’union de deux champignons de sexes<br />
opposés, mais résulte d’une simple mitose.<br />
• Asque : Formation sexuée chez les Ascomycètes, soit<br />
arrondie, soit allongée avec une ou deux paroi (s).<br />
Elle renferme les ascospores (après méiose).<br />
• ATCC : American Type Culture Collection. Il s’agit de<br />
souches de référence provenant de l’Institut<br />
Pasteur à Paris permettant de vérifier les<br />
techniques utilisées, de définir leur reproductibilité<br />
et de valider les résultats obtenus.<br />
• Basidiomycètes : Subdivision des champignons dont la reproduction<br />
sexuée est caractérisée par la formation de spores<br />
externes (basidiospores) formés à l’extrémité des<br />
basides.<br />
Gloor Ariane 48/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
• Bourgeonnement : Mode de propagation asexué rencontré souvent<br />
chez les levures. Cela aboutit à la production de<br />
cellules filles issues de la cellule initiale par<br />
séparation d’une excroissance de cette dernière<br />
appelée cellule mère. Le bourgeonnement<br />
multilatéral correspond à un bourgeonnement dans<br />
plusieurs directions.<br />
• Caséeux : Se dit d’une lésion qui a l’aspect et la consistance<br />
du fromage.<br />
• Chitine : C’est un composé polysaccharidique à base de Nacétyl-glucosamine,<br />
qui rentre dans la composition<br />
de la carapace des insectes et des crustacés. Il est<br />
aussi présent à des degrés divers, dans la paroi<br />
des champignons.<br />
• Cosmopolite : Se dit d’un organisme qui vit partout dans le<br />
monde.<br />
• Deutéromycètes : Subdivision regroupant l’ensemble des<br />
champignons dont la reproduction sexuée est<br />
inconnue. Ils comprennent 3 classes : les<br />
Hyphomycètes, les Coelomycètes et les<br />
Blastomycètes.<br />
• Eucaryotes : C’est l’ensemble des êtres vivants qui possèdent<br />
un vrai noyau. Ils se divisent en quatre règnes : les<br />
protistes, les mycètes, les plantes et les animaux.<br />
• Fongicide : Substance (ou médicament) qui est capable dans<br />
certaines conditions, de tuer le champignon.<br />
• Fongistatique : Substance (ou médicament) qui n’est capable que<br />
de ralentir ou d’inhiber la croissance des<br />
champignons sans les détruire.<br />
• Hétérotrophe : Mode nutritionnel des êtres vivants appartenant au<br />
règne animal et à celui des champignons qui pour<br />
se nourrir, utilisent des aliments organiques déjà<br />
produits par d’autres organismes vivants.<br />
• Hexosaminidase : Il s’agit d’une enzyme impliquée dans l’hydrolyse<br />
de plusieurs molécules contenant de l’hexose.<br />
• Hyphe : Chez les champignons, c’est l’élément constitutif<br />
du thalle, d’aspect tubulaire, septé ou non comme<br />
chez les Zygomycètes. L’ensemble des hyphes<br />
constituent le mycélium. Synonyme : filaments<br />
mycéliens.<br />
Gloor Ariane 49/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
• Mac Farland : Unité de mesure d’un trouble produit par des<br />
bactéries dans une solution.<br />
• Métabolite : Se dit du produit de la transformation d’une<br />
substance de l’organisme.<br />
• Monomères : Il s’agit de molécules qui peuvent s’unir les unes<br />
aux autres pour former des polymères.<br />
• Mycélium : Ensemble d’hyphes qui constituent le thalle :<br />
élément végétatif des champignons.<br />
• Mycètes : Il s’agit d’un des cinq règnes du monde vivant<br />
selon la classification de Wittaker (1969) C’est un<br />
organisme eucaryote, hétérotrophe constitué d’un<br />
thalle unicellulaire ou filamenteux, qui vit en<br />
saprophyte ou parfois en parasite. Synonyme :<br />
champignon.<br />
• Mycotoxinose : Intoxication d’orginie alimentaire provoqué par un<br />
champignon microscopique qui s’est développé<br />
dans les aliments (céréales).<br />
• Plasmalemme : Il s’agit de la structure qui définit la cellule. C’est un<br />
constituant universel de toutes les cellules<br />
vivantes.<br />
• Rhizopode : Phylum regroupant les Protozoaires qui se<br />
déplacent et se nourrissent à l’aide d’expansions<br />
cytoplasmiques (exemple : amibes).<br />
• Sabouraud : Milieu de culture habituel en mycologie, il contient<br />
de la gélose (agar-agar), de peptone de soja, du<br />
glucose et de l’H2O distillée. On y additionne<br />
souvent des antibiotiques (gentamicine et<br />
chloramphénicol) et un antifongique pour inhiber la<br />
pousse de certaines moisissures et levures<br />
indésirables.<br />
• Saprophyte : Se dit d’un organisme vivant qui s’alimente dans la<br />
nature à partir de débris organiques en<br />
décomposition (matière morte).<br />
• Spore : Élément qui assure la dispersion et la reproduction<br />
des champignons. Elle provient d’une reproduction<br />
sexuée ou asexuée. Synonyme : propagule<br />
fongique.<br />
Gloor Ariane 50/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
• Taxonomie : Science de la classification qui permet de<br />
regrouper les êtres vivants en taxons (genres,<br />
espèces) selon des critères bien définis.<br />
• Thalle : Ensemble de l’appareil végétatif et reproducteur<br />
d’un champignon. Il peut être unicellulaire (levure)<br />
ou filamenteux.<br />
• Topique Se dit d’un traitement qui s’applique localement,<br />
directement sur la peau et les muqueuses. Le but<br />
est d’agir localement et de diminuer les effets<br />
généraux des traitements.<br />
• Tropisme : Le fait d’être attiré vers.<br />
6. Bibliographie<br />
6.1 Livre<br />
• Chabasse,D., Guigen, Cl. & Contet-Audonneau, N. (1999). Mycologie<br />
médicale. Paris : MASSON<br />
• Grigoriu, D., Delacrétaz, J.& Borelli, D. (1984). Traité de mycologie médicale.<br />
Suisse : Payot<br />
6.2 Brochure<br />
• Conférence de consensus commune (2004). Prise en charge des candidoses<br />
et aspergilloses invasives de l’adulte. Paris : ELSEVIER MASSON<br />
• DANNAOUI, E. (31.05.2007). Principaux antifongiques systémiques :<br />
Mécanismes d’action et de résistance, spectre, indications. Centre National de<br />
Référence de la Mycologie et des Antifongiques, Institut Pasteur, Paris<br />
6.3 Supports de cours, documents non publiés<br />
• Chabasse, D., Bouchara, J.-P., de Gentile, L., Brun, S., Cimon, B., Penn, P.<br />
(2004). Cahier de Formation : Biologie médicale N°31 : Les dermatophytes.<br />
[Présentation Power Point]. Bioforma, France<br />
• Chabasse, D., Bouchara, J.-P., de Gentile, L., Brun, S., Cimon, B., Penn, P.<br />
(mars 2002). Cahier de Formation : Biologie médicale N°25 : Les moisissures<br />
d’intérêt médical. [Présentation Power Point]. Bioforma, France<br />
• Constantin, D. (20.09.2003). Classeur des stagiaires.[Polycopié]. Laboratoire<br />
de bactériologie, ICHV Sion<br />
• Freydière, A.-M. (14.06.2007). Méthodes de détermination de la sensibilité<br />
aux antifongiques. [Présentation Power Point]. Centre de Bioforma, France<br />
Gloor Ariane 51/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
6.4 Internet<br />
• Bahji, M., Sbiti, M., Belmaki, A., Agoumi, A. (13.03.2009). Diagnostic<br />
Biologique et identification des levures du genre candida [Page Web]. Accès :<br />
http://www.medramo.ac.ma/fmp/revue_marocaine/ARTICLES/2003-<br />
1/diagnostic%20biologique%20des%20candida.pdf<br />
(Page consultée le 11.03.2009)<br />
• BIOMERIEUX.(06.03.2009). Products VITEK® 2 Antifungal Testing [Page<br />
Web]. Accès :<br />
http://www.biomerieux-diagnostics.com/servlet/srt/bio/clinicaldiagnostics/dynPage?doc=CNL_PRD_CPL_G_PRD_CLN_92<br />
(Page consultée le 01.12.2008)<br />
• BIOMERIEUX.(06.03.2009). Produits ATB FUNGUS 3 [Page Web]. Accès :<br />
http://www.biomerieux.fr/servlet/srt/bio/france/dynPage?doc=FRN_CLN_PRD<br />
_G_PRD_CLN_4 (Page consultée le 01.12.2008)<br />
• Compendium Suisse des Médicaments. (2009). COMPENDIUM SUISSE DES<br />
MEDICAMENTS. [Page Web]. Accès :<br />
http://www.kompendium.ch/Search.aspx?lang=fr<br />
(Page consultée le 12.03.2009)<br />
• LABMED. (12.11.2007). Sujets choisis de mycologie ; Levures : Candida<br />
[Page Web]. Accès :<br />
http://www.labmed.ch/doc/doc_download.cfm?uuid=36309A76D9D9424C4F9<br />
520A5E21C828F&&IRACER_AUTOLINK&&<br />
(Page consultée le 11.03.2009)<br />
• Regents of the University of California.(29.01.2003). Yeasts [Page Web].<br />
Accès :<br />
http://labmed.ucsf.edu/education/residency/fung_morph/launchpage.html<br />
(Page consultée le 08.12.2009)<br />
Gloor Ariane 52/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
7. Annexes<br />
7.1 Procédure pour l’ATB FUNGUS 3 ®<br />
Gloor Ariane 53/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
7.2 Feuille de résultat pour l’ATB FUNGUS 3 ®<br />
Gloor Ariane 54/62<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
7.3 Résultats de l’étude précédente<br />
Résultats: Candida albicans<br />
Flucytosine<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64<br />
≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
6 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
7 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />
8 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
11 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />
23 Gorge 0.5 S 0.5 S 16 I 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I<br />
38 Pus profond 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
45 L.Pleural 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
46 Lèvre 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
50 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
55 Pl.profonde 0.5 S 0.5 S 4 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
56 Urine sondée 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
57 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
58 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />
59 Hemoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
60 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Flu: S<br />
61 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
62 Sputum 0.5 S 0.5 S 64 R 0.25 I < 2 S < 2 S < 64 I
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
82 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
84 Gorge 0.5 S 0.5 S 16 I 2 R < 2 S < 2 S < 64 I < 4 I Incub.A:3j<br />
98 Sputum 0.5 S 0.5 S 64 R 4 R < 2 S < 2 S < 64 I > 4 R Incub.A:2j<br />
99 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
100 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
101 Gorge 0.5 S 0.5 S 64 R 4 R < 2 S < 2 S > 64 R < 4 I Incub.A:2j<br />
102 Gorge 0.5 S 0.5 S 32 I 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I < 0.5 S Incub.A:2j<br />
103 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
104 Gorge 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
105 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
106 Sputum 0.5 S 0.5 S 0.5 S 1.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
107 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
108 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
109 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
110 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
111 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
92 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
95 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Candida albicans suite<br />
ATB FUNGUS 2®<br />
Amphotéricine B<br />
Fluconazol<br />
Itraconazol<br />
Flucytosine<br />
Amphotéricine B<br />
Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
FUNGITEST®<br />
Fluconazol<br />
Itraconazol<br />
56/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B<br />
Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
2 Vagin 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
4 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2 j./ Flu:S<br />
5 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S ≥ 4 R Incub.A:2 j./ Flu:S/ Itr:I<br />
9 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 2 S 0.5 I < 2 S < 2 S < 64 I 4 R Incub.A:2j./ Flu:I/ Itr:R<br />
14 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:3j./ Flu:S<br />
15 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
17 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I ≥ 4 R<br />
19 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 16 I 1 R < 2 S < 2 S ≥ 64 R ≥ 4 R Incub.A:2j./ Flu:S/ Itr:I<br />
37 Aspiration 8 I 0.5 S 2 S 0.5 I < 32 I < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />
39 Aspiration 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
53 Lame 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />
54 Cathéter 2 S 0.5 S 2 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I Incub.A:2j<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Candida glabrata<br />
ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />
Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
57/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />
≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
1 Ulcère 16 I 2 R 16 R 0.5 I < 32 I 32 R < 64 I 4 R<br />
24 Urotube 4 S 0.5 S 16 R 1 R < 32 I < 2 S < 64 I < 4 I<br />
25 Urine 16 I 1 S 32 R 1 R < 32 I < 8 I < 64 I < 4 I<br />
26 Cathéter cq 8 I 1 S 16 R 0.5 I < 32 I < 2 S < 64 I < 0.5 S<br />
28 16 I 0.5 S 16 R 0.5 I < 32 I < 2 S < 64 I
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />
≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
13 Hémoculture 32 R 1 S 1 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
27 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 4 I<br />
31 Sputum 64 R 0.5 S 2 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
32 LBA 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
33 Sputum 32 R 0.5 S 0.25 S 0.125 S 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
36 Pus profond > 64 R 0.5 S 1 S 0.25 I > 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
42 Aspiration 64 R 1 S 2 S 0.25 I 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
43 Sputum 0.5 S 1 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
44 Urine 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
47 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
78 Sputum 1 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
88 Aspiration 32 R 0.5 S 2 S 0.125 S >32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
91 Sputum 64 R 0.5 S 4 S 0.5 I > 32 R < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
96 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Candida tropicalis<br />
ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
59/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
3 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
10 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
12 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
16 Pl.profonde 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
18 Plaie 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
21 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
29 Pied diabétique 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
34 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
48 L.Jackson 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
49 Biopsiefémur 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
51 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
71 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
73 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
75 Urotube 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
76 Urotube 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
94 Oreille 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
96 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Candida parapsilosis<br />
ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />
Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
60/62
Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1<br />
≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
20 Aspiration 0.5 S 0.5 S 2 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 64 I < 4 I<br />
22 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.25 I < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
77 Sputum 32 R 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
87 cq ch 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
90 Sputum 0.5 S 0.5 S 1 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
93 Aspiration 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
97 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S Incub.A:2j<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Candida lusitaniae<br />
ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
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Comparaison de méthode de deux antifongigrammes : ATB FUNGUS 3 ® et Carte Vitek AST-YS01®<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
Flucytosine Amphotéricine B Fluconazol Itraconazol<br />
≤4 / 8-16 / 32 ≥ 2 = R ≤8 / 16-32 / ≥64 ≤0.125/0.25-0.5/≥1 ≤ 2 - ≥ 32 ≤ 2 - ≥ 8 ≤ 8 - ≥ 64 ≤0.5 - ≥ 64<br />
No Localisation CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat CMI Résultat Remarques<br />
40 LCR 0.5 S 0.5 S 0.25 S 0.125 S < 32 I < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
41 Hémoculture 0.5 S 0.5 S 0.5 S 0.125 S < 2 S < 2 S < 8 S < 0.5 S<br />
Gloor Ariane<br />
ICHV , laboratoire de bactériologie, Sion<br />
Travail de diplôme<br />
2008-2009<br />
Souches ATCC Incub.A = Incubation ATB FUNGUS<br />
Discordance mineure<br />
Discordance majeure<br />
Souche testée 2 x<br />
Résultats: Cryptococcus neoformans<br />
ATB FUNGUS 2® FUNGITEST®<br />
ITR = Itraconazol testé au CHUV<br />
FLU = Fluconazol testé au CHUV<br />
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