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CLONAGGIO DEL DNA Clonare significa produrre copie identiche: CLONI. Il CLONAGGIO consiste nella moltiplicazione di un segmento di DNA appartenente ad un dato genoma. Ciò si ottiene unendo tale frammento a una piccola molecola di DNA che serve da trasportatore (VETTORE DI CLONAGGIO). Successivamente si avrà la replicazione di questo DNA modificato (RICOMBINANTE) migliaia o milioni di volte fornendo un gran numero di copie del clone stesso. Il risultato è l’amplificazione selettiva di quel determinato frammento di DNA.
Il clonaggio utilizza diverse metodologie: 1- Un metodo per tagliare il DNA in punti precisi: le ENDONUCLEASI DI RESTRIZIONE 2- Un metodo per unire covalentemente due frammenti di DNA: DNA LIGASI 3- Una piccola molecola di DNA capace di autoreplicarsi: VETTORE DI CLONAGGIO (plasmidi, cosmidi, fagi, BAC, YAC ecc). Quando queste molecole contengono DNA di differente origine vengono dette ricombinanti 4- UNA CELLULA OSPITE che fornisce l’apparato enzimatico necessario per la replicazione del DNA ricombinante. 5- Un metodo per la SELEZIONE delle cellule ospiti che contengano il DNA ricombinante.
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Page 5 and 6: PROPRIETA’ DI UN VETTORE DI CLONA
Page 7 and 8: PLASMIDI
Page 9 and 10: PLASMIDI I plasmidi sono caratteriz
Page 11 and 12: DNA da clonare Plasmide ( O CLONE)
Page 16 and 17: TRASFORMAZIONE Un aspetto important
Page 19 and 20: DNA plasmidico Elettroporazione CaC
Page 21 and 22: CLONAGGIO IN pBR 322
Page 23 and 24: Quando l’ inserzione di un framme
Page 25 and 26: I FAGI I batteriofagi furono descri
Page 27: 15 kb 30 kb 3 kb 50 kb
Page 31 and 32: BAC (Bacterial Artificial Chromosom
Page 33: Ospiti per i vettori di clonaggio L
Page 36 and 37: •Elettroporazione L’intensità
Page 38 and 39: Selezione dei ricombinanti Il DNA r

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