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TECNICHE UTILIZZATE NELLA RICERCA
Come indici di stress ossidativo sono stati misurati: produzione di derivati della lipoperossidazione
lipidica (TBARS); livello intracellulare di glutatione, principale molecola antiossidante intracellulare, sia
nella forma ridotta (GSH) che ossidata (GSSG); attività della via dei pentosi (PPP); attività della G6PD e
della 6PGD (due enzimi del PPP). Come indice di attivazione pro-infiammatoria è stata misurata la sintesi di
NO. L’azione citotossica delle polveri è stata determinata in base al rilascio di lattato deidrogenasi (LDH)
nell’ambiente extracellulare.
RISULTATI DELLA RICERCA E LORO SIGNIFICATO
Tutti i campioni di silice hanno mostrato effetti citotossici, evidenziati dal rilascio di LDH nel mezzo
extracellulare. L'effetto, osservato dopo 24 ore di incubazione, è risultato dose-dipendente, con valore
massimale a 100 µg/cm2. Però la minima concentrazione necessaria per indurre una significativa
citotossicità differiva tra i campioni. La FK320 ha indotto un significativo rilascio di LDH a partire da 40
µg/cm2, mentre il Qz, la VS e l'A50 sono risultati citotossici a partire già a 10 µg/cm2. La FK320 è risultata
significativamente meno citotossica delle altre polveri testate.
Dopo 24 ore di incubazione con 80 µg/cm2 di VS, A50 o Qz si è osservato un accumulo di TBARS; al
contrario, l'incubazione con la stessa dose di FK320 non ha prodotto effetti significativi. A 20 µg/cm2 nessun
campione di silice ha modificato significativamente i livelli di TBARS rispetto alle cellule di controllo. Dopo
24 ore di incubazione con 20 µg/cm2 di polveri di silice, solo l'A50 ha indotto una diminuzione del PPP.
Questo effetto era evidente sul PPP attivato dall'agente ossidante menadione. A 80 µg/cm2 tutte le silici
hanno prodotto una significativa riduzione del PPP. L'inibizione era evidente sia sul PPP basale che sul PPP
attivato da menadione.
L'A50, ma non le altre silici, a 20 µg/cm2 ha significativamente diminuito anche l'attività della G6PD, il
principale enzima regolatore del PPP. L'attività G6PD è stata inibita da tutti i campioni di silice a 80 µg/cm2,
in concordanza con quanto osservato sull'attività PPP. D'altra parte l'attività della 6PGD, che catalizza una
tappa successiva del PPP, non è stata significativamente inibita da alcuna silice. Una ridotta attività
PPP/G6PD potrebbe compromettere la capacità di mantenere livelli intracellulari adeguati di GSH, necessari
a proteggere la cellula dallo stress ossidativo.
In accordo con questa ipotesi, dopo 24 ore di incubazione con 20 µg/cm2, solo l'A50 ha
significativamente diminuito i livelli intracellulari di GSH, ed in parallelo aumentato i livelli di GSSG. A 80
µg/cm2 tutte le silici hanno indotto un calo significativo di GSH, associato ad un aumento di GSSG. Dopo
24 ore di incubazione, solo l'A50 ha indotto accumulo extracellulare di nitrito. A 80 µg/cm2 A50, VS e Qz
hanno significativamente indotto la sintesi di nitrito. Invece la FK320 non ha prodotto variazioni di rilievo
dei livelli di nitrito extracellulare alle dosi testate.