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incidenza della malattia di Wilson di 1/3000 nati vivi. I neonati nati vivi per anno sono circa
15000 e da questi dati il numero dei nuovi casi di malati attesi per anno è risultato essere di
5 casi.
Durante lo screening facendo uso dell’elettroforresi su gel di MDE abbiamo osservato che
oltre alla presenza di bande corrispondenti alla mutazione –441/-427del che migravano più
velocemente rispetto al controllo, erano presenti delle bande che invece migravano più
lentamente (Figura 6) . Il sequencing del DNA corrispondente a queste bande ha evidenziato
la presenza di una inserzione di 21 nucleotidi, -366/-367ins21. Abbiamo effettuato degli
studi di espressione per quanto riguarda la mutazione –366/-367ins21 e abbiamo constatato
che tale inserzione non altera l’espressione del gene (Figura 7).
In seguito per la ricerca delle sei mutazioni più comuni sono stati usati due approcci
entrambi basati sulla tecnologia del TaqMan: quello della quantificazione relativa e quello
della discriminazione allelica . Per la messa a punto dei metodi sono stati usati come
controlli campioni di DNA di pazienti o composti eterozigoti per le mutazioni in studio. In
quest’ultimo caso abbiamo usato tutte le combinazioni delle 6 mutazioni disponibili nella
nostra casistica. La metodica ottimizzata é stata in seguito validata con lo studio su piastra di
94 campioni di DNA (Figura 8 e 9) rivoltisi al nostro laboratorio per l’analisi molecolare
della malattia e caratterizzati genotipicamente con l’uso delle metodiche di SSCP,
sequencing, multiplex PCR e reverse dot blot.
I risultati ottenuti sono stati con i diversi approcci sovrapponibili confermando la messa a
punto della metodica.
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