Atti convegno - Phytoplasmarecovery.net

Petria 9 Suppl. , 2009, - 09 - Resistenza indotta per il controllo di malattie delle piante 

Atti del Workshop: 

“Resistenza indotta per il controllo 

di malattie delle piante: efficacia 

e meccanismi di azione di uno 

strumento sostenibile” 

Proceedings of the Workshop: 

“Induced resistance in the control 

of plant diseases: effectiveness and 

mechanisms of action of a sustainable 

approach” 

Ancona, Italy, 8 giugno/June 2009 

A cura di/Edited by Gianfranco Romanazzi


Comitato Scientifico/Scientific Committee 

Giovanni Paolo Martelli 

Agostino Brunelli 

Roberto Buonaurio 

Piero Attilio Bianco 

Gianfranco Romanazzi 

Comitato Organizzatore/Organizing Committee 

Gianfranco Romanazzi 

Sergio Murolo 

Lucia Landi 

Sandro Nardi 

Domenico D’Ascenzo 

Dipartimento di Scienze Ambientali e delle Produzioni Vegetali, 

Sezione Protezione delle Piante, 

Facoltà di Agraria, 

Università Politecnica delle Marche, 

via Brecce Bianche, I-60 3 Ancona 

Tel. +39 07 220 4336 – Fax +39 07 220 4856 

e.mail: g.romanazzi@univpm.it 

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Presentazione 

L’induzione di resistenza è un mezzo sempre più indagato per il controllo 

delle malattie delle piante e numerose informazioni sull’efficacia e sui meccanismi 

di azione coinvolti sono state acquisite negli ultimi anni. L’argomento è sempre più 

presente in progetti di ricerca nazionali ed internazionali ed è un approccio che spesso 

ben si adatta anche all’agricoltura biologica ed integrata. Nell’occasione sono presenti 

diversi gruppi che si occupano prevalentemente di ricerca di base sull’argomento e 

altri che operano soprattutto su aspetti pratici di pieno campo. L’incontro tende a fare 

il punto della situazione a livello nazionale su aspetti inerenti l’induzione di resistenza 

nei confronti di malattie causate da virus e viroidi, batteri, funghi e fitoplasmi. 

Il Convegno si svolge nell’ambito del Progetto “Valutazione dell’efficacia 

di trattamenti con elicitori nell’induzione del recovery in viti infette da fitoplasmi e 

monitoraggio dell’attività enzimatica nelle piante (acronimo Varenne)” promosso dalla 

Fondazione Cariverona (bando 2007) nel campo dell’ambiente. Ulteriori dettagli sul 

Convegno sono disponibili alla pagina web www.phytoplasmarecovery.net/indres09. 

Gli atti raccolgono i diversi contributi proposti dagli autori sull’argomento 

della resistenza indotta per il controllo delle malattie delle piante, nell’ambito di una 

delle prime ma di certo non ultime iniziative a carattere nazionale su un tema sempre 

più dibattuto, anche alla luce delle novità normative in ambito comunitario relative al 

controllo delle avversità dei vegetali. 

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Presentation 

The use of induced resistance in the control of plant diseases is under 

continually increasing investigation. A large amount of relevant information on its 

effectiveness and the mechanisms of action involved have become available over the 

last few years. This approach is included in Italian and international research projects, 

and it is well accepted also in organic and integrated agriculture. The meeting will 

be attended by researchers who are focussing their attention on basic research, and 

by research groups that work on applied aspects in the open field. The workshop 

will focus on results that have been obtained at a national level regarding induced 

resistance in the control of diseases caused by viruses and viroids, and bacteria, fungi 

and phytoplasma. 

The meeting is organised on the behalf of the “Evaluation of effectiveness of 

treatments with elicitors in the induction of recovery in vines infected by phytoplasmas 

and monitoring of enzymatic activity in plant tissues (Acronym Varenne)” project, which 

is funded by Fondazione Cariverona (bando 2007, campo dell’ambiente). Further details 

on the meeting are available at the webpage www.phytoplasmarecovery.net/indres09. 

The proceedings include research results proposed by the authors on the 

subject of induced resistance in the control of plant diseases, which will be a part 

of one of the first, and certainly not the last, meetings at national level on a topic of 

increasing interest, particularly considering the latest news of EU legislation on the 

control of plant pests and diseases. 

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PROGRAMMA 

08.30 - Registrazione dei partecipanti e affissione dei poster 

09.00 - Saluto delle autorità 

09.30 - relazione introduttiva 

La resistenza indotta nelle piante: attuali conoscenze e prospettive 

future 

R. Buonaurio 

0.00 - SeSSione Virus e Viroidi – Coordinatore: GioVanni Paolo Martelli 

Induzione del silenziamento genico post-trascrizionale per la resistenza 

a Plum Pox Virus (PPV) 

V. Ilardi, E. Di Nicola-Negri 

Valutazione di genotipi di pesco per la resistenza al virus della vaiolatura 

del susino (PPV) ceppo M 

L. Ferretti, M. Barba, I. Verde, L. Conte , L. Campus, G. Pasquini 

Induzione di tolleranza al Cucumber Mosaic Virus (CMV) in pomodoro 

V. Ilardi, E. Di Nicola-Negri, L. Salandri, P. Tavladoraki 

I chitosani: induttori di resistenza alle virosi, ma non solo 

M. Iriti, F. Faoro 

.00 - Pausa caffè 

. 5 - SeSSione Batteri – Coordinatore: roBerto Buonaurio 

Selezione di batteri antagonisti dalla rizosfera di fagiolo per la lotta 

biologica contro le malattie del fagiolo causate da batteri e funghi 

N. S. Iacobellis, V. Shanmugaiah, P. Lo Cantore 

Impiego di batteri induttori di resistenza/promotori della crescita di 

piante in orticoltura 

M. Zaccardelli, F. Campanile 

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.45 - SeSSione FitoPlasMi – Coordinatore: Piero attilio Bianco 

Uso di induttori di resistenza per il controllo del legno nero della vite in 

pieno campo 

G. Romanazzi, S. Murolo, V.A. Prota, A. Masciulli, D. D’Ascenzo, R. 

Garau 

CY: un sistema modello per lo studio dell’attività di elicitori di resistenza 

nei confronti delle fitoplasmosi 

C. Marzachi, R. D’Amelio, G. Berta, E. Gamalero, N. Massa, S. Sampò, D. 

Bosco. 

Attivita’ del fungo endofita Epicoccum nigrum Link contro 

‘Candidatus Phytoplasma mali’ in piante di Catharanthus roseus (L.) G. 

Don 

R. Musetti, S. Grisan, C. Paduano, M. Martini, R. Polizzotto, R. Osler 

Batteri endofiti isolati da viti sane, affette da giallumi e risanate 

(recovered) 

D. Bulgari, P. Casati, L. Brusetti, F. Quaglino, D. Daffonchio, P.A. Bianco 

Espressione genica indotta in viti delle varietà Sangiovese e Chardonnay 

sintomatiche e recovered da Legno nero 

L. Landi, G. Romanazzi 

3.00 - Pausa Pranzo 

4.30 - SeSSione iv: FunGhi – Coordinatore: aGostino Brunelli 

L’induzione di resistenza nella protezione delle colture dalle malattie 

fungine 

R. M. De Miccolis Angelini, S. Pollastro, F. Faretra 

Valutazione della resistenza indotta da biostimolanti su pomodoro nei 

confronti di Phytophthora infestans 

A.R. Veronesi, I. Portillo, R. Roberti, M. Collina, A. Brunelli 

L’induzione di resistenza nella difesa integrata del melone nei confronti 

di malattie fungine di origine tellurica 

M.P. Aleandri, R. Reda, M. Antonelli, D. Martignoni, R. Tardani, L. Varvaro, 

P. Magro, G. Chilosi 

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Prove di induzione di resistenza per la difesa delle mele in post-raccolta 

M. Quaglia, M. Fabrizi, L. Ederli, S. Pasqualini, A. Zazzerini 

Induzione di resistenza sistemica: uno dei principali meccanismi d’azione 

dei biofitofarmaci a base di funghi antagonisti 

F. Vinale, S.L. Woo, M. Ruocco, R. Marra, F. Scala, P. Cavallo, M. Lorito 

5.45 - Pausa caffè 

6.00 - Presentazione dei poster 

Uso di induttori di resistenza per il controllo dei marciumi postraccolta 

di fragola 

M. Santini, L. Landi, E. Feliziani, S. Murolo, G. Romanazzi 

Interazione tabacco-oidio-afidi: ruolo di alcuni semiochimici nella 

resistenza indotta SA-dipendente e JA-dipendente 

M. Quaglia, M. Fabrizi, C. Zadra, D. Volpe, L. Ederli, C. Marucchini, A. 

Zazzerini 

Acqua ozonata come induttore di resistenza verso le malattie delle 

piante 

C. Paciolla, S. De Leonardis, C. Fumarola, F. Ciccarese 

Trichoderma koningii come possibile induttore di resistenza a Cercospora 

beticola in barbabietola da zucchero 

P.L. Burzi, S. Galletti, S. Marinello, S. Cianchetta, C. Cerato 

I trattamenti con chitosano e fosfito influiscono sul contenuto di polifenoli 

totali e sul potere antiossidante dell’uva e del vino 

S. Vitalini, F. Faoro, G. Di Tommaso, D. Di Tommaso, M. . Borgo, A. Piaggesi, 

G. Fico, F. Tomé, M. Iriti 

Attività di batteri antagonisti e loro biomolecole contro patogeni fungini 

e possibile induzione di resistenza in piante ortive 

D. Vitullo, G. Lima, F. De Curtis e V. De Cicco 

Induzione di resistenza in piante di olivo contro i marciumi radicali 

mediante micorrizzazione 

A. Carlucci, F. Lops, G. Romanazzi, E. Santilli, G. Tataranni, S. Frisullo 

7.00 - Dibattito e conclusione dei lavori 

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PLANT INDUCED RESISTANCE: CURRENT KNOWLEDGE 

AND FUTURE DIRECTIONS 

R. Buonaurio 

Dipartimento di Scienze Agrarie, Università degli Studi di Perugia, 

Via Borgo XX Giugno 74, I-06 2 Perugia 

E-mail: buonaurio@unipg.it 

Fundamental and applied aspects of plant induced resistance, a phenomenon 

that was first described in the early 20 th century, have been widely studied over the 

last 30 years. There are two forms of induced resistance: systemic acquired resistance 

(SAR) and induced systemic resistance (ISR). These have been characterized as 

distinct phenomena based on the types of inducing agents and the host signalling 

pathways that result in resistance expression (Walters and Heil, 2007). Biologically 

induced SAR develops in the presence of localized cell death, which is mainly due to 

pathogens causing a hypersensitive reaction. It depends on salicylic acid signalling 

and the systemic expression of genes for pathogenesis related (PR) proteins. ISR is 

induced by certain strains of plant-growth-promoting rhizobacteria, and it depends 

on the perception of ethylene and jasmonic acid, rather than being associated with 

the expression of PR proteins. SAR and ISR provide broad spectrum resistance, 

which is effective against viruses, bacteria, phytoplasma, oomycota, fungi and abiotic 

stresses. By genetic and molecular investigations, it has been possible to: i) elucidate 

many aspects of the signalling events that lead to induced resistance expression, 

especially in the model plant Arabidopsis thaliana; and ii) hypothesize some 

resistance mechanisms. One of the outcome of these studies has been the discovery of 

a number of chemicals that can trigger SAR (Schreiber and Desveaux, 2008). Among 

these, acibenzolar-S-methyl, a functional analogue of salicylic acid, has proven to 

probably be the most effective in the control of plant diseases (Scarponi et al., 200 ; 

Buonaurio et al., 2002; Iriti and Faoro, 2003; Leadbeater and Staub, 2007; Faoro et 

al., 2008). Despite the intense research activities performed over these last few years, 

many aspects of induced resistance remain to be elucidated. Fundamental research 

by genome, transcriptome, and especially proteome and metabolome analyses, are 

needed to establish the nature of the long-distance signal(s) that are responsible 

for the systemic property of induced resistance, and to provide further information 

on the complex crosstalk between the SAR and ISR signalling pathways. This last 

information is necessary to exploit both the types of induced resistance, which have 

different spectra of effectiveness, as has been documented in Arabidopsis (Pieterse 

and Van Loon, 2007). Applied research into the study of the effects of climatic and 

edaphic factors and cultural practices on the expression of induced resistance, might 

explain the variable effectiveness of chemical SAR inducers in field, which is the 

main limit that hinders commercial exploitation of induced resistance. 

Key words: ISR, Jasmonates, Salicylic acid, SAR 

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La resistenza indotta nelle piante: attuali conoscenze e prospettive future 

Gli aspetti di base e applicativi della resistenza indotta nelle piante, fenomeno 

descritto per la prima volta all’inizio del XX secolo, sono stati ampiamente studiati negli 

ultimi trent’anni. Due forme di resistenza indotta: systemic acquired resistance (SAR) 

e induced systemic resistance (ISR) sono state descritte come distinti fenomeni, sulla 

base degli induttori che le generano e delle vie metaboliche ad esse associate (Walters 

e Heil, 2007). La SAR indotta biologicamente nelle piante si sviluppa in presenza di 

morte cellulare localizzata, principalmente quella causata da patogeni che inducono 

reazione di ipersensibilità. Questa resistenza segue una via metabolica dipendente 

dall’acido salicilico ed è associata all’espressione di geni per le proteine della 

patogenesi (PR). L’ISR è indotta invece da alcuni rizobatteri in grado di promuovere 

lo sviluppo delle piante; si manifesta attraverso l’attivazione di una via metabolica 

dipendente da etilene e acido giasmonico; non è associata all’espressione di geni PR. 

SAR e ISR hanno un ampio spettro d’azione che si esplica nei confronti di virus, 

batteri, fitoplasmi, oomiceti, funghi e stress abiotici. Mediante indagini genetiche e 

molecolari è stato possibile: i) chiarire molti aspetti delle vie di trasduzione di segnale 

che conducono all’espressione della resistenza indotta, soprattutto nella pianta modello 

Arabidopsis thaliana; ii) ipotizzare alcuni meccanismi responsabili della resistenza. 

I risultati di tali ricerche hanno condotto tra l’altro alla scoperta di diversi induttori 

chimici di SAR (Schreiber e Desveaux, 2008), tra i quali l’acibenzolar-S-metile, un 

analogo funzionale dell’acido salicilico, risulta essere il più efficace nella difesa delle 

malattie delle piante (Scarponi et al., 200 ; Buonaurio et al., 2002; Iriti e Faoro, 2003; 

Leadbeater e Staub, 2007; Faoro et al., 2008). Nonostante l’intensa attività di ricerca di 

quest’ultimi anni, molti aspetti della resistenza indotta rimangono ancora da chiarire. 

La ricerca di base, attraverso genomica, trascrittomica e soprattutto proteomica e 

metabolomica, potrà stabilire tra l’altro la natura del/i segnale/i di lunga distanza che 

assicurano le proprietà sistemiche della resistenza e fornire ulteriori informazioni 

sulle complesse intercomunicazioni esistenti tra le vie metaboliche della SAR e della 

ISR (Pieterse e Van Loon, 2007), un punto assai utile per sfruttare entrambi i tipi di 

resistenza, che come noto hanno in Arabidopsis spettri d’azione diversi. La ricerca 

applicativa, attraverso lo studio degli effetti di fattori climatici, edafici e delle pratiche 

colturali sull’espressione della resistenza potrà, ad esempio, permettere di spiegare 

la variabile efficacia degli induttori chimici di SAR osservata in pieno campo, un 

aspetto che rappresenta uno dei principali ostacoli allo sfruttamento nella pratica della 

resistenza indotta. 

Parole chiave: Acido alicilico, Giasmonati, ISR, SAR 

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References/Lavori citati 

buonaurio r., l. SCarPoni, m. ferrara, P. Sidoti, a. bertona, 2002. Induction of systemic 

acquired resistance in pepper plants by acibenzolar-S-methyl against bacterial 

spot disease. European Journal of Plant Pathology, 108, 4 -49. 

faoro f., d. maffi, d. Cantu, m. iriti, 2008. Chemical-induced resistance against 

powdery mildew in barley: the effects of chitosan and benzothiadiazole. 

Biocontrol, 53, 387-40 . 

iriti m., f. faoro, 2003 Benzothiadiazole (BTH) induces cell-death independent 

resistance in Phaseolus vulgaris against Uromyces appendiculatus. Journal of 

Phytopathology, 151, 7 - 80. 

leadbeater a., t. Staub, 2007. Exploitation of induced resistance: a commercial 

perspective. In: D. Walters, A. Newton and G. Lyon (Eds), Induced resistance 

for plant defence. A sustainable approach to crop protection. Blackwell 

Publishing, Oxford, UK, 229-242. 

PieterSe C.m.j., l.C. van loon, 2007. Signalling cascades involved in induced resistance. 

In: D. Walters, A. Newton and G. Lyon (Eds), Induced resistance for plant 

defence. A sustainable approach to crop protection. Blackwell Publishing, 

Oxford, UK, 65-88. 

SCarPoni l., r. buonaurio, l. martinetti, 200 . Persistence and translocation of a 

benzothiadiazole derivative in tomato plants in relation to systemic acquired 

resistance against Pseudomonas syringae pv. tomato. Pest Management 

Science, 57, 262-268. 

SChreiber k., d. deSveaux, 2008. Message in a bottle: chemical biology of induced 

resistance in plants. The Plant Pathology Journal, 24, 245-268. 

walterS d., m. heil, 2007. Costs and trade-offs associated with induced resistance. 

Physiological and Molecular Plant Pathology, 71, 3- 7. 

0


Sessione I: Virus and Viroidi 

Coordinatore: Giovanni Paolo Martelli 


Induzione del silenziamento genico post-trascrizionale per la resistenza a 

Plum Pox Virus (PPV) 

L. Ferretti, M. Barba, I. Verde, L. Conte, L. Campus, G. Pasquini 

Valutazione di genotipi di pesco per la resistenza al virus della vaiolatura del 

susino (PPV) ceppo M 

V. Ilardi, E. Di Nicola-Negri, L. Salandri, P. Tavladoraki 

Induzione di tolleranza al Cucumber Mosaic Virus (CMV) in pomodoro 


I chitosani: induttori di resistenza alle virosi, ma non solo


INDUCTION OF POST-TRANSCRIPTIONAL GENE 

SILENCING FOR 

PluM POx viruS (PPV) RESISTANCE 


CRA - PAV Centro di Ricerca per la Patologia Vegetale 

Via C.G. Bertero, 22, I-00 56 Roma 

E-mail: vincenza.ilardi@entecra.it 

Among other functions, gene silencing in plants acts as a defence mechanism 

against viral infections. Double-stranded RNA (dsRNA) triggers degradation of 

homologous RNAs in the cell. Plum pox virus (PPV) is the causal agent of sharka, 

one of the most detrimental diseases of stone fruits. There are six PPV strains (M, 

D, Rec, EA, W and C) but D, M and Rec are the most important from an economical 

point of view. To date, it has not been possible to recover virus-infected plants by 

treating them with chemicals, and breeding programmes for PPV resistance have 

met with limited success. 

To obtain resistance to PPV infection, we developed four PPV-M-derived 

gene constructs (UTR/P , P /HCPro, HCPro and HCPro/P3) based on hairpin 

RNAi technology. In model plants, none of the constructs induced immunity to the 

transgene-homologous PPV isolate (Di Nicola-Negri et al., 2005; Ilardi et al., 2007). 

The production of plant resistant to a wide range of PPV isolates is essential for 

effective control of the virus. R plants were challenged with PPV isolates belonging 

to M, D, Rec, C and EA strains collected from Prunus species in different geographic 

areas (Italy, Hungary, Greece and Egypt). All of the lines were resistant to the PPV- 

D, M and Rec isolates. Moreover, line 6 transformed with the UTR/P sequence 

was also resistant to the distantly related PPV-C and PPV-EA strains (Di Nicola- 

Negri and Ilardi, 2006). To determine whether temperature can affect induction of 

PPV resistance with the UTR/P construct, PPV infection tests were performed at 

different temperatures on UTR/P R2 homozygous plants. Although previously 

it was shown that at low temperature ( 5 °C) both virus- and transgene-triggered 

RNA silencing are inhibited, we observed that resistance to PPV conferred by RNA 

silencing of the PPV UTR/P sequences is not temperature dependent. 

As plant viruses have evolved proteins to suppress RNA silencing, mixed 

infection with PPV and Cucumber mosaic virus (CMV) and PPV and Potato virus Y 

(PVY) were performed, to determine whether the presence of functional heterologous 

viral suppressors can affect the induction of PPV resistance by the UTR/P construct. 

Plants harbouring the PPV 5’ UTR/P construct are resistant to PPV infection in 

2


mixed infection with viruses expressing 2b or HCPro suppressors. All of these data 

strongly suggest that the UTR/P construct is of particular practical interest to obtain 

stone fruit plants that are resistant to a broad range of PPV strains. 

Key words: RNAi, Sharka, Silencing suppressor, Virus. 

Induzione del silenziamento genico post-trascrizionale 

per la resistenza a Plum Pox virus (PPV) 

Una delle funzioni del silenziamento genico nelle piante è la difesa dalle 

infezioni virali mediante degradazione sequenza-specifica dell’RNA. La presenza di 

RNA a doppia elica (dsRNA) nelle cellule vegetali è in grado di indurre e pilotare 

questo meccanismo molecolare. La Sharka è una grave malattia delle drupacee. 

L’agente eziologico è il Plum pox virus (PPV), patogeno da quarantena per il quale 

è prevista la lotta obbligatoria. In natura esistono sei ceppi di PPV (M, D, Rec, EA, 

W e C) benché i più importanti da un punto di vista economico siano M, D e Rec. A 

tutt’oggi non è possibile curare le piante malate né sono disponibili in natura fonti 

utili di resistenza genetica. 

Facendo esprimere in piante modello quattro molecole di dsRNA con 

sequenza omologa al genoma di PPV (UTR/P , P /HCPro, HCPro e HCPro/P3) si è 

ottenuta immunità nei confronti dell’isolato ISPaVe 44 (ceppo M) a partire dal quale 

sono stati prodotti i geni sintetici (Di Nicola-Negri et al., 2005). Per l’induzione di 

tale immunità si è visto essere sufficiente la presenza di un singolo locus con una 

singola copia del gene (Ilardi et al., 2007). Al fine di verificare la capacità di resistenza 

ad ampio spettro sono state effettuate prove d’infezione con isolati di PPV afferenti 

ai ceppi D, M, Rec, EA e C prelevati da diverse matrici vegetali in differenti aree 

geografiche. Tutti i costrutti sono stati in grado di indurre immunità verso gli isolati 

dei ceppi D, M e Rec; il costrutto UTR/P anche nei confronti dei ceppi EA e C, più 

lontani filogeneticamente (Di Nicola-Negri e Ilardi, 2006). Confrontando la sequenza 

nucleotidica dei costrutti e delle relative sequenze nel genoma dei diversi isolati si 

è trovata una correlazione diretta tra capacità di indurre resistenza e presenza di 

regioni di omologia superiori ad una ventina di nucleotidi. Dati presenti in letteratura 

indicano che il silenziamento è inibito a basse temperature. Per controllare la capacità 

di indurre resistenza al variare della temperatura sono stati effettuati esperimenti di 

infezione a 5, 25 e 30 °C con una linea T 2 di piante esprimente il costrutto UTR/P . 

Le piante sono risultate immuni all’infezione di PPV a tutte le temperature, anche 

quando ripetutamente inoculate con il virus (Di Nicola-Negri et al., 2007). 

Così come le piante hanno evoluto il silenziamento genico per difendersi dai 

virus, i virus hanno coevoluto proteine, i soppressori del silenziamento, per inibire 

3


tale meccanismo. Per appurare se la presenza di soppressori funzionali fosse in grado 

di inibire il silenziamento del PPV, piante UTR/P sono state inoculate con PPV e 

Cucumber mosaic virus (CMV) e con PPV e Potato virus Y (PVY). Nonostante la 

presenza dei soppressori eterologhi 2b e HCPro, espressi rispettivamente da CMV 

e da PVY, il costrutto UTR/P è riuscito ad indurre immunità a PPV. Visti i risultati 

conseguiti in pianta modello è lecito pensare che l’induzione del silenziamento genico 

post-trascrizionale ad opera del costrutto UTR/P possa essere una delle migliori 

strade da percorrere per l’ottenimento di resistenza alla sharka nelle drupacee. 

Parole chiave: RNAi, Sharka, Soppressore silenziamento, Virus. 

Acknowledgements 

This study was carried out within the Progetto finalizzato MiPAAF – CIPE 

FRU.MED. Sottoprogetto PRO VI SUD. 


di niCola negri e., a. brunetti, m. tavazza, v. ilardi, 2005. Hairpin RNAmediated 

silencing of Plum pox virus P1 and HC-Pro genes for efficient 

and predictable resistance to the virus. Transgenic Research, 14, 989-994. 

di niCola-negri e.,v. ilardi, 2006. Silencing of PPV 5’ UTR/P sequences confers 

resistance to a wide range of PPV isolates. Journal of Plant Pathology, 88, 

S 9-S20. 

di niCola-negri e., l. Salandri, v. ilardi, 2007. Temperature does not affect 

resistance to PPV conferred by RNA silencing of PPV 5’ UTR/P sequence. 

Journal of Plant Pathology, 89, S 6. 

ilardi v., e. di niCola negri, a. brunetti, a. gentile, S. montiCelli, C. damiano, 

2007. RNA interference for Sharka disease resistance. Acta Horticulturae, 

738, 593-599. 

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EVALUATION OF PEACH GENOTYPES FOR RESISTANCE 

TO A PPV-M ISOLATE 

L. Ferretti 1 , M. Barba 1 , I. Verde 2 , L. Conte 2 , L. Campus 1 , G. Pasquini 1 

CRA-PAV Centro di ricerca per la Patologia Vegetale 

Via C.G. Bertero, 22, I-00 56 Roma 

2 CRA-FRU Centro di Ricerca per la Frutticoltura 

Via Fioranello, 52, I-00 34 Roma 

E-mail: graziella.pasquini@entecra.it 

Plum pox virus (PPV) causes serious damage to stone fruits and it is considered 

a detrimental pathogen: it causes heavy economic losses that have exceeded 0,000 

million euros over the last 30 years (Cambra et al., 2006). The use of highly tolerant 

genotypes might significantly aid in the disease management, especially in those 

areas in which the virus is established, traditionally devoted to stone fruits cultivation. 

Resistance to PPV has been described in Prunus davidiana and other wild genotypes, 

and genetic resistance shows a complex pattern of quantitative inheritance (Decroocq et 

al., 2005). In recent years, several research projects have been based on the evaluation 

of the resistance obtained in breeding programmes involving wild genotypes that have 

been considered resistant to PPV. 

In the framework of the Italian national project: ‘Peach breeding for resistance 

to Plum pox virus’, 22 peach selections were obtained from different cross breedings, 

including Prunus genotypes considered tolerant or resistant to PPV; these were 

evaluated for response to PPV-M infection. The tested selections were grafted onto 

GF305 peach seedlings and successively infected with a PPV-M isolate (GR00 9). 

For each selection, three plants were inoculated and a healthy one was used as a 

negative control. All of these peach selections were submitted to symptoms evaluation 

according to the scale reported by Decroocq et al. (2005), both on grafted scions 

and on rootstock. All asymptomatic selections were tested by different diagnostic 

techniques (ELISA, RT-PCR and TaqMan real time RT-PCR) for virus detection and 

plant response classification. 

After one year of observations, no symptoms were reported because of the 

high temperature that occurred after PPV inoculation, which probably interfered with 

the virus replication. However, most samples assayed with TaqMan real time RT- 

PCR were positive ( 0/ 22). At the second year of the trial, 82.8% ( 0 / 22) of 

the plants were sensitive, and showed symptoms of different severity, both on the 

selection and for GF 305; 4. % (5/ 22) did not show symptoms on grafted scions, but 

gave heavy symptomatology on the rootstock, whereas no symptoms were seen in the 

remaining theses ( 6/ 22). Among the 2 asymptomatic selections, 5 were negative 

when assayed both by ELISA and RT-PCR. These selections should be considered 

resistant or immune according with the scale proposed by Faggioli et al., ( 999), 

5


although all of them were positive when assayed with the more sensitive technique, 

TaqMan real-time RT-PCR (Olmos et al., 2005), This revealed the presence of a very 

low virus titre. 

These very interesting selections, as seven from ‘Maria Aurelia’ x SD45 F 

hybrid (P. persica x P. davidiana) and eight obtained from different cross-breeding 

between commercial peach cultivars and weeping peaches (S2678). They will be 

maintained in screenhouses to verify possible symptoms appearance in time and will 

be submitted to quantitative TaqMan real time RT-PCR for evaluation of the virus 

titre. 

Key words: Prunus davidiana, Real time RT-PCR, Sharka, Tolerance. 

Valutazione di genotipi di pesco per la resistenza al virus della 

vaiolatura del susino (PPV) ceppo M 

La Sharka, causata dal virus della vaiolatura del susino (PPV), è la più grave 

malattia delle drupacee, poiché ha indotto una perdita economica in tutto il mondo 

stimata intorno ai 0 miliardi di euro negli ultimi 30 anni (Cambra et al., 2006). La 

individuazione di varietà con un elevato grado di tolleranza all’infezione potrebbe 

contribuire, in areali storicamente e naturalmente vocati alla coltivazione delle 

drupacee e in cui la malattia è ormai insediata, al mantenimento della redditività 

economica. La recente acquisizione delle conoscenze sulla resistenza quantitativa 

espressa da alcuni genotipi di Prunus spp., in particolare il P. davidiana, nei confronti 

del PPV (Decroocq et al., 2005) ha indotto l’impiego di tali genotipi in programmi 

di miglioramento genetico per il trasferimento dei caratteri di resistenza a varietà di 

interesse agronomico. 

Nell’ambito del P.F. Nazionale: ‘Miglioramento genetico del pesco per la 

resistenza al virus della sharka’, 22 selezioni di pesco, ottenute da incroci tra varietà 

commerciali e diversi genotipi ritenuti resistenti, sono state sottoposte a valutazione 

per stabilirne il grado di suscettibilità al PPV. Tutte le selezioni sono state innestate 

sul portinnesto/indicatore pesco GF305 e sperimentalmente infettate con un ceppo 

di PPV-M (GR00 9) tramite inserzione di tessuto sul germoglio della selezione 

innestata. Per ciascuna selezione sono state inoculate 3 piante ed una è stata mantenuta 

come controllo negativo. Tutte le piante sono state sottoposte ad osservazione 

sintomatologica sia sulla selezione che sul portinnesto/indicatore, utilizzando la scala 

riportata da Decroocq et al. (2005). Tutte le tesi risultate asintomatiche sulla selezione 

sono state poi analizzate mediante utilizzo di diverse tecniche diagnostiche (ELISA, 

RT-PCR e TaqMan real time RT-PCR) per poter effettuare una classificazione del 

grado di resistenza/tolleranza. 

Al primo anno di osservazione non è stato possibile individuare alcuna 

sintomatologia a causa delle elevate temperature ambientali verificatesi dopo 

6


l’inoculazione sperimentale che hanno, probabilmente interferito con la capacità 

replicativa del virus e, quindi, con l’induzione di sintomi. Tuttavia la maggior parte 

delle selezioni ( 0/ 22), sottoposte a saggio diagnostico mediante la TaqMan real 

time RT-PCR, sono risultate infette dal virus. Al secondo anno di osservazione una 

percentuale dell’82,8% ( 0 / 22) delle tesi ha evidenziato sintomi di diversa intensità 

sia sul germoglio ottenuto dall’innesto che sull’indicatore; una percentuale del 4, % 

(5/ 22) non ha evidenziato sintomi sulla selezione, ma una severa sintomatologia 

sul GF305; nelle rimanenti tesi ( 3, %) ( 6/ 22) non è stato rilevato alcun sintomo. 

Delle 2 selezioni asintomatiche 5 sono risultate negative sia al saggio sierologico 

ELISA che al saggio molecolare effettuato tramite RT-PCR, risultando, secondo la 

terminologia di Faggioli et al. ( 999), resistenti quando sintomatiche sull’indicatore 

(3/ 5), o immuni quando asintomatiche anche sul GF305 ( 2/ 5). Tutte le 5 

selezioni sono risultate però positive alla TaqMan real time RT-PCR (Olmos et al., 

2005), tecnica diagnostica molto sensibile che ha rilevato la presenza di quantità 

estremamente basse del virus all’interno dei tessuti. 

Sulla base di questi risultati preliminari, 7 selezioni derivate da incroci 

’Maria Aurelia’ x l’ibrido F SD45 (P. persica x P. davidiana) e 8 selezioni ottenute 

da differenti incroci tra cultivars di pesco commerciali e pesco piangente (S2678) 

risultano, al momento, particolarmente interessanti. Tali piante verranno mantenute 

in screen-houses per valutare la persistenza della risposta all’infezione e sottoposte 

ad analisi quantitativa tramite TaqMan real time RT-PCR per la determinazione della 

concentrazione del virus. 

Parole chiave: Prunus davidiana, Real time RT-PCR, Sharka, Tolleranza. 


This study was carried out within the preogramme P.F. PPV-CON 

‘Miglioramento genetico del pesco per la resistenza al virus della sharka’’, financed 

by the Ministero delle Politiche Agricole Alimentari e Forestali. 


Cambra m., n. CaPote, a. myrta, g. llaCer, 2006. Plum pox virus and the estimated 

costs associated with sharka disease. OEPP/EPPO Bulletin, 36, 202-204. 

deCrooCq v., m. foulongne, P. lambert, o.l. gall, C. mantin, t. PaSCal, v. SChurdilevraud, 

j. kervella, 2005. Analogues of virus resistance genes map to QTLs 

for resistance to sharka disease in Prunus davidiana. Molecular Genetic and 

Genomics, 272, 680-689. 

7


faggioli f., g. di lernia, g. PaSquini, m. barba, 999. La diagnosi precoce del virus 

della Sharka in albicocco. Italus Hortus, 6, 92-93. 

olmoS a., e. bertolini, m. gil, m. Cambra, 2005. Real-time for quantitative detection 

of non-persistently transmitted Plum pox virus RNA targets in single aphids. 

Journal of Virological Methods, 128, 5 - 55. 

8


CuCuMBEr MOSAiC viruS (CMV) TOLERANCE 

INDUCTION ON TOMATO 

V. Ilardi 1 , E. Di Nicola Negri 1 , L. Salandri 1 , P. Tavladoraki 2 

CRA- PAV Centro di Ricerca per la Patologia Vegetale 

Via C.G. Bertero, 22, I-00 56 ROMA 

2 Università “Roma Tre” Dipartimento di Biologia 

E-mail: vincenza.ilardi@entecra.it 

One of the new strategies to fight plant pathogens is to induce or bolster 

the endogenous plant defences. The polyamines are low-molecular-weight organic 

compounds that are involved in plant defence responses, directly as molecular 

signals, or indirectly by their catabolic products (Walters, 2003). Treatment with 

substances that can interfere with polyamine metabolism might be useful to contrast 

diseases, like viruses that are not affected by chemicals. In this study, we worked 

with Cucumber mosaic virus (CMV), one of the most detrimental pathogens of 

vegetables crops, which causes important yield losses worldwide (Palukaitis et al., 

992). Over the last twenty years, as well as the use of transgenic plants, different 

approaches have been explored to control CMV infection, although none of these has 

been proven to succeed in the control of this viral pest. 

To analyse the influence of polyamines on CMV infection, four tomato cvs 

(corbarino, galatino, vesuviano and UC82B) and one hybrid (tomito) were treated 

with putrescine and spermidine, as well as the polyamine analogue guazatine. Plants 

were sprayed with a water solution of 0.5 mM polyamines or guazatine, plus a 

silicone surfactant (silwet 0.0 %) at days T - and T 0 , and at 0. mM at day T + , and 

then weekly to the end of the experimental period. CMV mechanical inoculation was 

performed at time T 0 with the partially purified virus (the subscript number indicates 

the day from inoculation). As controls for each tomato cvs, there were : a) healthy 

plants, H 2 O + silwet treated; b) healthy plants, putrescine + silwet, spermidine + 

silwet, or guazatine + silwet treated; and c) CMV-infected plants, H 2 O + silwet 

treated; d) untreated CMV infected plants. Viral infection was monitored by visual 

inspection of the plants and indirectly by ELISA. The plants were grown in pots. The 

experiments were performed in a greenhouse, arranging the treatments in separate 

boxes, to avoid contamination during spraying. 

In the CMV infected plants, the putrescine + silwet, spermidine + silwet and 

guazatine + silwet treatments induced changes in their vegetative and fruit growth. 

The levels of these changes was cv related. The viral symptoms were attenuated 

although the CMV concentration in the treated plants did not change. Although several 

studies have suggested that silicon activates plant defence mechanisms (Fauteux 

et al., 2005), unexpectedly, the best results for each tomato cvs were obtained by 

treating infected plants with H 2 O + silwet. These results will be study in depth. 

Key words: Polyamines, Resistance, Surfactant, Virus. 

9


Induzione di tolleranza al Cucumber Mosaic virus (CMV) in pomodoro 

L’induzione di resistenza o tolleranza a patogeni mediante somministrazione 

di sostanze naturali o sintetiche è una strategia alternativa e innovativa per il 

controllo delle fitopatie, in particolare per quelle che non possono essere curate con 

agrofarmaci come è il caso delle virosi. Lo scopo della ricerca presentata è quello di 

interferire con particolari processi biochimici del pomodoro per indurre tolleranza al 

virus del mosaico del cetriolo (CMV) che infetta numerose specie di interesse agrario 

riducendone fortemente la produttività (Palukaitis et al., 992). Allo scopo si è scelto 

di intervenire sul metabolismo delle poliammine (PA), piccole molecole basiche che 

nelle piante sono coinvolte anche nei meccanismi di difesa dalle infezioni (Walters, 

2003). 

Quattro varietà di pomodoro (corbarino, galatino, vesuviano e UC82B) 

ed un ibrido (tomito) sono stati trattati con le poliammine spermidina e putrescina 

e con l’analogo guazatina. Le piante sono state nebulizzate con soluzioni acquose 

contenenti un bagnante (silwet 0,0 %) e le singole PA alla concentrazione di 0.5 

mM al tempo T - e T 0 e di 0. mM da T + e poi settimanalmente fino al termine delle 

prove. L’inoculazione meccanica è avvenuta al tempo T 0 con CMV parzialmente 

purificato (i numeri al pedice indicano i giorni dall’inoculazione con CMV). Come 

controllo per ogni varietà di pomodoro sono state inserite le tesi sane (piante trattate 

con H 2 O + silwet; putrescina + silwet; spermidine + silwet; guazatina + silwet) 

e le tesi infette (piante inoculate con CMV e trattate con H 2 O + silwet; inoculate 

con CMV e non trattate). Gli esperimenti sono stati effettuati in vaso, in serra, 

mantenendo le singole tesi in box separati per evitare contaminazioni durante la 

nebulizzazione dei trattamenti. Le piante sono state monitorate per l’insorgenza dei 

sintomi e periodicamente analizzate in ELISA indiretta per la determinazione della 

concentrazione virale. 

Il trattamento con guazatina + silwet, putrescina + silwet e spermidina + 

silwet delle diverse varietà-ibrido di pomodoro inoculate con CMV ha comportato 

un incremento nello sviluppo vegetativo delle piante e nella pezzatura delle bacche 

prodotte. L’entità di questo effetto cambia in relazione al genotipo considerato. Il 

trattamento ha comportato, inoltre, un miglioramento nella risposta all’infezione 

virale da un punto di vista sintomatologico, pur non avendo influito in maniera 

statisticamente significativa sulla concentrazione del CMV nelle piante. Benché 

sia noto l’effetto del silicone nell’attivazione delle difese nelle piante (Fauteux et 

al., 2005), un risultato inaspettato e che dovrà essere approfondito, è stato quello 

ottenuto nella tesi di controllo inoculata con CMV e trattata H 2 O + silwet. Questa, 

tra tutte le tesi inoculate con CMV, è stata quella che ha dato la resa maggiore sia per 

l’ibrido sia per le varietà studiate. 

Parole chiave: Poliammine, Resistenza, Surfactante, Virus. 

20



This work was carried out within the project: Progetto finalizzato MiPAAF 

– CIPE PROM. 


fauteux f., w. remuS-borel, j.g. menzieS, r.r. belanger, 2005. Silicon and plant 

disease resistance against pathogenic fungi. FEMS Microbiology Letters, 

249, 1–6. 

PalukaitiS m., j. rooSSinCk, r.g. dietzgen, r.i. franCki, 1992. Cucumber mosaic 

virus. Advances in Virus Research, 41, 281-348. 

walterS d., 2003. Resistance to pathogens: possibile roles for free polyamines and 

polyamine catabolism. New Phytologist, 159, 09- 5. 

2


CHITOSANS: ANTIVIRAL COMPOUNDS, BUT NOT ONLY 


Dipartimento di Produzione Vegetale, Università di Milano e CNR, 

Istituto di Virologia Vegetale 

Via Celoria 2, I-20 33 Milano 

E-mail: franco.faoro@unimi.it 

Chitosans (CHTs) are deacetylated chitin derivatives that are non-toxic, and 

cheap, polyamines. They have a variable number of amino groups that are available 

for their biological activity, which, in turn, depends on the molecular weight (MW), 

viscosity and deacetylation degree (DD) of the oligomers/ polymers (Hadwiger 

et al., 994). CHTs act as pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), and 

can stimulate the plant defence machinery, particularly against viral diseases (Iriti 

and Faoro, 2009a). The mechanisms of action of CHTs include oxidative burst, 

hypersensitive response (HR), callose apposition, phytoalexin and pathogenesisrelated 

(PR) protein synthesis (Conrath et al., 989; Agrawal et al., 2002; Iriti et al., 

2006). 

We have recently shown that CHT treatments raise ABA levels over 

three-fold in bean leaves. This ABA increment mediates both callose depositions, 

involved in virus resistance (Iriti and Faoro, 2008), and partial stomatal closure, 

which makes CHTs antitranspirant compounds as well (Iriti et al., 2009b). In spite 

of these interesting properties, the use of CHTs in crop protection is still hampered 

by some limitations: first of all, their species-specific activity. This means that each 

crop should be treated with a specific CHTs, in terms of MW range and DD (Iriti 

et al., 2009c). Another limitation is their solubility, although water-soluble CHTs 

are now available. Unfortunately, chemical processing to obtain water-soluble CHTs 

often alters their properties, weakening their actions as resistance inducers. The most 

common commercially available CHTs have MWs from 0 kDa up to 20 kDa and 

over, and they must be dissolved in a solvent, usually acetic, ascorbic or lactic acid. 

Although the solvent has little influence on their activity as resistance inducers, it 

can be a determinant in impairing virus transmission by insect vectors (Iriti et al., 

2009c). Solvent type can also be important when using CHTs as antitranspirants, 

as we have shown by measuring stomatal conductance to water vapour (G w ) and 

transpiration rate (E) of treated bean plants (Iriti et al., 2009b). 

To screen the potential biological activity of a CHT solution on a specific plant 

species, we set up a rapid method based on the elicitation of callose apposition in 

floating leaf fragments, and correlating this with the induced resistance to tobacco 

necrosis virus (Faoro and Iriti, 2007). This method also allows the testing of the 

phytotoxicity of different CHT solutions, thus avoiding time-consuming trials with 

numerous plants. In conclusion, the selection of a suitable CHT, with a homogenous 

22


composition in terms of polymer fragment length, MW range and crop-specific 

dilution, certainly contributes to their successful use as resistance inducers, with 

other “side-beneficial” effects, among which there is the containment of mycotoxin 

contamination and the enhancement of bioactive phytochemicals in plant foodstuffs 

(Cuero, 999). 

Keywords: Antitranspirants, Induced resistance, Viral diseases. 

I chitosani: induttori di resistenza alle virosi, ma non solo 

I chitosani (CHTs), derivati deacetilati della chitina, sono delle poliammine 

atossiche e poco costose, con un numero variabile di gruppi amminici che ne 

caratterizzano l’attività biologica. Quest’ultima dipende, a sua volta, dal peso 

molecolare (MW), dalla viscosità e dal grado di deacetilazione (DD) degli oligomeri/ 

polimeri (Hadwiger et al., 994). I CHTs agiscono da elicitori (PAMPs, pathogen 

associated molecular patterns), in grado di stimolare i meccanismi di difesa della 

pianta, in particolare contro le virosi (Iriti e Faoro, 2009a). L’azione dei CHTs si esplica 

attraverso lo scoppio ossidativo, la reazione di ipersensibilità (HR), l’apposizione di 

callosio, la sintesi di fitoalessine e proteine di patogenesi (PR) (Conrath et al., 989; 

Agrawal et al., 2002; Iriti et al., 2006). 

Abbiamo recentemente dimostrato che i trattamenti con CHT aumentano 

tre volte il livello di ABA in foglie di fagiolo. L’incremento di ABA media sia la 

sintesi di callosio, coinvolta nella resistenza ai virus (Iriti e Faoro, 2008), che la 

parziale chiusura stomatica, attribuendo ai CHTs anche attività antitraspirante (Iriti 

et al., 2009b). Nonostante queste interessanti caratteristiche, l’utilizzo dei CHTs 

nel controllo delle malattie presenta alcune limitazioni, come la loro attività speciespecifica. 

Pertanto ogni coltura dovrebbe essere trattata con uno specifico CHT, sia 

in termini di MW che DD, oltreché ad una concentrazione adeguata (Iriti et al., 

2009c). Un’altra limitazione è che i CHTs sono solubili in soluzioni, sebbene siano 

attualmente disponibili formulati solubili in acqua. Purtroppo il processo chimico 

per ottenere quest’ultimi può alterarne le proprietà come induttori di resistenza. I 

più comuni CHTs disponibili in commercio hanno MW variabili da poche migliaia a 

oltre 00 kDa e devono essere sciolti in un acido debole, generalmente acetico, lattico 

o ascorbico. Sebbene il solvente sembri influenzare poco l’attività di induzione dei 

meccanismi di difesa, può invece essere determinante nell’impedire la trasmissione 

dei virus tramite insetti vettori (Iriti et al., 2009c). Il tipo di solvente può essere 

anche importante quando i CHTs sono usati come antitraspiranti, come dimostrato 

mediante misure di conduttanza stomatica (G w ) e di traspirazione (E) in fagiolo (Iriti 

et al., 2009b). 

Per determinare la potenziale attività biologica dei diversi CHTs sulle varie 

specie di piante abbiamo messo a punto un metodo rapido basato sull’elicitazione 

23


di callosio in frammenti foliari, correlando l’intensità della sintesi con il grado di 

resistenza indotta a TNV (Faoro e Iriti, 2007). Questo metodo consente anche di 

verificare la fitotossicità delle diverse soluzioni di CHTs, evitando laboriosi screening 

con numerose piante test. In conclusione, la scelta di un appropriato CHT, con una 

composizione omogenea sia in termini di lunghezza dei frammenti di polimero, DD, 

MW e diluizione, certamente ne determina il successo come induttore di resistenza, 

con altri benefici effetti collaterali, quali il contenimento della contaminazione da 

micotossine e l’incremento del contenuto di polifenoli e altri antiossidanti (Cuero, 

999). 

Parole chiave: Antitraspiranti, Malattie da virus, Resistenza indotta. 


agrawal g. k., r. rakwal, S. tamogami, m. yonekura, a. kubo, h. Saji, 2002. 

Chitosan activates defence/stress response(s) in the leaves of Oryza sativa 

seedlings. Plant Physiology and Biochemistry, 40, 06 - 069. 

Conrath u., a. domard, h. kauSS, 989. Chitosan-elicited synthesis of callose 

and of coumarin derivatives in parsley cell suspension cultures. Plant Cell 

Report, 8, 52- 55. 

Cuero r.g., 999. Antimicrobial action of exogenous chitosan. In: Chitin and 

Chitinases, P. Jollès, R.A.A. Muzzarelli (Eds), Birkhauser Verlag, Basel, 

Switzerland, 3 5-322. 

faoro f., m. iriti, 2007. Callose synthesis as a tool to screen chitosan efficacy in 

inducing plant resistance to pathogens. Caryologia, 60, 2 - 24. 

hadwiger l.a., t. ogawa, h. kuyama, 994. Chitosan polymer sizes effective in 

inducing phytoalexin accumulation and fungal suppression are verified with 

synthesized oligomers. Molecular Plant-Microbe Interaction, 7, 53 –533. 

iriti m., m. Sironi, S. gomaraSCa, a. P. CaSazza, C. Soave, f. faoro, 2006. Cell 

death-mediated antiviral effect of chitosan in tabacco. Plant Physiology and 

Biochemistry, 44, 893-900. 

iriti m., f. faoro, 2008. Abscisic acid mediates the chitosan-induced resistance in 

plant against viral disease. Plant Physiology and Biochemistry, 46, 06- 

. 

iriti m., f. faoro, 2009a. Chitosan as a MAMP, searching for a PRR. Plant Signaling 

and Behavior, 4, 66-68. 

24


iriti m., v. PiCChi, m. roSSoni, S. gomaraSCa, n. ludwig, m. gargano, f. faoro, 

2009b. Chitosan antitranspirant activity is due to abscisic acid-dependent 

stomatal closure. Experimental Environmental Botany, doi: 0. 0 6/ 

j.envexpbot.2009.0 .004. 

iriti m., v. PiCChi, d. maffi, f. faoro, 2009c. Chitosan in induced resistance: more 

chances than limits or viceversa?. In: Proceedings of the 5th Meeting of the 

IOBC Working Group “Induced Resistance in Plants against Insects and 

Diseases” Granada, Spain. 

25


Sessione II: Batteri 

Coordinatore: Roberto Buonaurio 


Selezione di batteri antagonisti dalla rizosfera di fagiolo per la lotta biologica 

contro le malattie del fagiolo causate da batteri e funghi 


Impiego di batteri induttori di resistenza/promotori della crescita di piante in 

orticoltura


SELECTION OF ANTAGONISTIC BEAN RHIZOSPHERE 

BACTERIA FOR THE BIOLOGICAL CONTROL OF BEAN 

DISEASES CAUSED BY BACTERIA AND FUNGI 


Dipartimento di Biologia, Difesa e Biotecnologie Agro Forestali 

Università degli Studi della Basilicata, 

viale dell’Ateneo Lucano 0, I-85 00, Potenza 

E-mail: iacobellis@unibas.it 

Common beans are cultivated world-wide and they represent the most 

important grain legumes for human consumption. However, bean cultivation is limited 

by several diseases caused by fungi, viruses and bacteria, including common bacterial 

blight, which is widespread because of its efficient seed transmission. Disease control 

is difficult because of the lack of efficient and/or environmentally safe bactericides and 

the limited availability of commercially acceptable resistant bean cultivars. Hence, 

there is an urgent need for eco-compatible measures for disease management. 

The objectives of this study were: to isolate bacteria from the bean rhizosphere 

and evaluate their antagonistic activities against the main bacterial and fungal bean 

diseases. In all, 62 bacterial isolates were evaluated for their antimicrobial activities 

against important bean bacterial and fungal pathogens, for their Gram character, 

for the production of fluorescent pigments as well as hydrolytic enzymes, and for 

their possible interactions in the pathogenicity/ virulence (Bakker et al., 2007) of 

Xanthomonas campestris pv. phaseoli var. fuscans (xcpf) on bean plants in greenhouses 

and on plantlets in vitro. For the latter, bean seeds were surface sterilised and bacterized 

with suspensions of the potential antagonists, and then sown. Suspension aliquots 

of a selected and representative virulent strain of xcpf were syringe infiltrated into 

trifoliate leaves, and then plants were monitored for symptom development. Bean 

seeds treated as above were introduced in sterile Petri plates and then cotyledon leaves 

were prick-inoculated with bacterial masses of the above xcpf strain and monitored for 

symptom development. 

Sixty out of 62 bacterial isolates showed antimicrobial activity in dual 

culture assays, among which 57 produced at least one of the following hydrolytic 

enzymes: amylase, cellulase, chitinase, glucanase, pectinase and protease. Among 44 

antagonistic isolates so far evaluated for their possible interference in the pathogenicity/ 

virulence of xcpf on bean plants, 7 caused a clear reduction in lesion size (ranging 

from 30% to 66%), both in vitro and under greenhouse conditions, when compared 

to those induced on plants derived from non-bacterised bean seeds. It is not excluded 

that induced systemic resistance (ISR) is involved in this feature. ISR is an important 

mechanism of biological control shown by a number of plant-growth-promoting 

28


rhizobacteria when applied to roots or seeds (Bakker et al., 2007). Of note, a disease 

symptom reduction was seen both in vitro and in greenhouse pathogenicity assays, 

suggesting that the former assay may be useful for the screening of large numbers of 

rhizobacteria for selection of potential antagonistic ones. Further studies are necessary 

to assess the protection of the bean plants by the above 7 bacterial isolates, and to 

define the mechanism involved. 

Keywords: Common bacterial blight, Induced systemic resistance, Rhizobacteria. 

Selezione di batteri antagonisti dalla rizosfera di fagiolo per la lotta biologica 

contro le malattie del fagiolo causate da batteri e funghi 

Il fagiolo è estesamente coltivato in tutto il mondo e rappresenta la 

leguminosa più importante per il consumo umano. Comunque, la coltura è limitata da 

diverse malattie causate da funghi, virus e batteri incluso la maculatura comune che 

risulta essere presente nella gran parte delle aree di coltivazione della leguminosa a 

causa dell’efficiente trasmissione per seme del patogeno. La gestione della malattia è 

difficile a causa della mancanza di battericidi efficaci ed ecocompatibili e dalla limitata 

disponibilità di varietà di fagiolo resistenti e, conseguentemente, risulta necessaria la 

messa a punto di misure di lotta efficaci ed ecocompatibili. 

Gli obiettivi di questo studio sono: l’isolamento di batteri dalla rizosfera 

di piante di fagiolo e valutazione della loro capacità antagonista verso le principali 

malattie batteriche e fungine della leguminosa. Centosessantadue isolati batterici sono 

stati valutati per l’attività antimicrobica verso ceppi dei principali patogeni batterici e 

fungini del fagiolo, per il carattere di Gram, per la produzione di pigmenti fluorescenti 

e di enzimi idrolitici, e per la loro possibile interazione nella patogenicità/virulenza 

(Bakker et al., 2007) di Xanthomonas campestris pv. phaseoli var. fuscans (xcpf) su 

piante di fagiolo in serra ed in vitro. Allo scopo semi di fagiolo dopo sterilizzazione 

sono stati batterizzati con sospensioni dei potenziali antagonisti e seminati. Foglioline 

della prima trifogliata sono state inoculate mediante infiltrazione con siringa e le piante 

osservate per le sviluppo dei sintomi. Semi di fagiolo trattati come sopra sono state 

messe a germinare in piastre Petri sterili e le foglie cotiledonari sono state inoculate 

con masse batteriche del ceppo di xcpf e osservate per sviluppo dei sintomi. 

Sessanta dei suddetti 62 isolati hanno mostrato attività antibatterica e/o 

antifungina e 57 di essi hanno prodotto almeno uno dei seguenti enzimi idrolitici: 

amilasi, cellulasi, chitinasi, glucanasi pectinasi e proteasi. Dei 44 isolati fino ad ora 

valutati per la loro possibile interferenza sulla virulenza/patogenicità di un ceppo di 

xcpf su fagiolo sette hanno causato una significativa riduzione delle lesioni (30-66%) in 

confronto a quelle ottenute su piante ottenute da semi non batterizzati. Non si esclude 

29


che la resistenza sistemica indotta (RSI) sia responsabile di tale comportamento. La 

RSI è un importante meccanismo alla base della capacità antagonista di alcuni batteri 

della rizosfera quando applicati a radici o seme (Bakker. et al. 2007). Notevole è il 

fatto che la riduzione dei sintomi è stata osservata sia nei saggi di patogenicità in 

vitro e in serra suggerendo che il primo saggio può essere utile per lo screening di un 

numero elevato di rizobatteri. Naturalmente ulteriori studi sono necessari per valutare 

l’efficacia di tali isolati batterici in condizioni di infezioni naturali e per definirne il 

meccanismo. 

Parole chiave: Maculatura comune del fagiolo, Resistenza sistemica indotta, 

Rizobatteri. 


bakker P.a.h.m., C.m.j. PieterSe, l.C. van loon, 2007. Induced systemic resistance 

by fluorescent Pseudomonas spp. Phytopathology, 97, 239-243. 

30


USE OF RESISTANCE INDUCING/PLANT GROWTH 

PROMOTING BACTERIA IN HORTICULTURE 


CRA-Centro di Ricerca per l’Orticoltura, Azienda Agraria di Battipaglia 

Strada Statale 8, I-8409 Battipaglia (SA) 

E-mail: massimo.zaccardelli@entecra.it 

A lot of studies have inferred the use of bacteria for induced systemic resistance 

(ISR) to control phytopathogenic fungi, bacteria and viruses. Often, Pseudomonas 

spp. and Bacillus spp. are ISR bacteria, and moreover, a lot of these are plant-growthpromoting 

rhizobacteria (PGPR) (Zaccardelli et al., 2005, 2007). PGPR are of great 

interest for studies on host/bacteria interactions and for low-input agriculture. 

The aim of this study was to illustrate the use of ISR/PGPR in horticulture, 

and in particular, on tomato. PGPR are most often used on crops as seed treatment 

(ST), soil application (SA) and ST+SA. Treatments carried out with P. fluorescens as 

PGPR have induced synthesis of peroxidase and polyphenol oxidase when inoculated 

to control Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici; ST and SA are effective methods 

and can be used to manage diseases under field conditions (Usharani et al., 2008). 

Some PGPR strains can induce plant resistance under field conditions, providing 

effective suppression of bacterial speck and spot of tomato, which can be improved 

by the integration of rhizosphere-applied PGPR and foliage-applied biological control 

agents (Ji et al., 2006). The possibility to use selected mixtures of PGPR with tomato 

cultivation is a valid perspective. 

Mixtures of different PGPR were used to control soil-borne pathogens 

of tomato. Seeds and roots of tomato transplants infested with F. oxysporum f. sp. 

lycopersici were inoculated with the suspensions of single bacterial strains or with 

their combinations. Although single bacterial inoculations significantly decreased 

the density of Fusarium sp., only the mixture of bacteria positively affected plant 

growth and reduced plant infection by this soil-borne pathogen (Szczch et al., 2008). 

It was observed that PGPR strains can elicit systemic phytoalexin accumulation in 

tomato. Moreover, it has been noted that key enzymes of the lipoxygenase pathway 

are stimulated in plants treated with bacteria (Akram et al., 2008). In spite of their 

direct actions, these PGPR isolates trigger the defence-related enzymes involved in the 

phenylpropanoid pathway and phenolics. Higher activities of phenylalanine ammonia 

lyase (PAL), peroxidase, polyphenol oxidase [catechol oxidase] and ß- ,3 glucanase 

were observed by inoculation of B. subtilis and P. chlororaphis to control damping off 

of Capsicum annum, and significant increases in plant growth were seen; effects of 

these ISR/PGPR isolates were equivalent to the standard fungicide Ridomil (Kavitha 

et al., 2005). PGPR could have a major role also in reducing tomato spotted wilt virus 

(TSWV) and increasing yield in tomato (Samiyappan, 2005). Strains of P. fluorescens 

3


were investigated for their ability to control TSWV in tomato, both alone and in 

mixtures; in tomato plants treated with P. fluorescens, there was increased activities of 

polyphenol oxidase [catechol oxidase], β- ,3-glucanase and chitinase and enhanced 

growth and yield, compared to control plants (Kandan et al., 2005). Recently, a strain 

of P. putida that can increase yield and protect tomato against viruses in open field was 

selected (Zaccardelli et al., 2007). Managing bacterial canker disease of tomato was 

achieved using different strains of B. pumilus, B. subtilis and B. amyloliquefaciens 

as plant-growth-promoting rhizobacteria; the level of PAL and total phenol contents 

increased significantly upon bacterial treatment, and the reduction in bacterial canker 

disease incidence was directly proportional to the increases in PAL and total phenol 

contents (Girish and Umesha, 2005). 

Key words: Bacillus spp., Biological control, Pseudomonas spp., Tomato. 

Impiego di batteri induttori di resistenza/promotori della crescita 

di piante in orticoltura 

Numerose attività di ricerca hanno per oggetto l’impiego di batteri in grado 

di indurre una resistenza sistemica (ISR) per il controllo di funghi, batteri e virus 

fitopatogeni. Spesso, Pseudomonas spp. e Bacillus spp. sono batteri ISR e, inoltre, 

molti di loro sono capaci di promuovere la crescita delle piante (PGPR) (Zaccardelli 

et al., 2005, 2007). I PGPR trovano molto interesse negli studi di interazione ospite/ 

batteri e nell’agricoltura a basso impatto ambientale. Lo scopo di questo lavoro è 

quello di illustrare i risultati inerenti l’impiego di ISR/PGPR in orticoltura, con 

particolare riferimento al pomodoro. 

I PGPR vengono impiegati sulle colture generalmente mediante trattamento 

ai semi (TS), mediante applicazioni al terreno (TT) o mediante TS + TT. Trattamenti 

eseguiti impiegando P. fluorescens come PGPR hanno indotto la sintesi di perossidasi 

e polifenolossidasi quando inoculati per controllare Fusarium oxysporum f. sp. 

lycopersici; TS e TT sono risultati efficaci e possono essere utilizzati nel controllo 

delle malattie in condizioni di pieno campo (Usharani et al., 2008). Alcuni ceppi 

PGPR sono risultati capaci di indurre resistenza sistemica in planta, in condizioni di 

pieno campo, nei riguardi della maculatura e macchiettatura batterica del pomodoro; il 

controllo di queste batteriosi può essere incrementato integrando, tra loro, trattamenti 

alla rizosfera con PGPR e trattamenti alla parte aerea con agenti di biocontrollo (Ji et 

al., 2006). La possibilità di impiegare miscele selezionate di PGPR nella coltivazione 

del pomodoro è una valida prospettiva. 

Miscele di differenti PGPR sono state impiegate nel controllo di patogeni 

“soil-borne” di pomodoro. Semi e radici di piantine di pomodoro infettate con F. 

oxysporum f. sp. lycopersici sono state inoculate con sospensioni di singoli ceppi 

batterici o con loro combinazioni. Sebbene le inoculazioni con i singoli ceppi hanno 

ridotto significativamente la densità di Fusarium sp., solo le miscele di batteri hanno 

32


influenzato positivamente la crescita delle piante e ridotte le infezioni dovute a questo 

patogeno (Szczch et al., 2008). E’ stato osservato che i ceppi PGPR possono elicitare 

l’accumulo sistemico di fitoalessine in pomodoro. Inoltre, è stato notato che enzimi 

chiave del pathway della lipossigenasi sono stimolati nelle piante trattate con batteri 

(Akram et al., 2008). Questi isoloati PGPR innescano la sintesi di enzimi legati alla 

difesa coinvolti nel pathway dei fenilpropanoidi e in quello dei fenoli. Elevate attività 

di fenilalanina ammonio liasi (PAL), perossidasi, polifenolossidasi [catecolo ossidasi] 

e β- ,3 glucanasi, sono state osservate in seguito all’inoculazione con B. subtilis e 

P. chlororaphis per controllare il “damping off” di Capsicum annum; inoltre, è stato 

osservato un significativo incremento nella crescita delle piante; gli effetti di questi 

isolati ISR/PGPR sono stati equivalenti a quelli del fungicida Ridomil (Kavitha et al., 

2005). I PGPR possono giocare un ruolo importante anche nella riduzione degli attacchi 

del virus dell’avvizzimento maculato del pomodoro (TSWV) e nell’incremento della 

produzione in pomodoro (Samiyappan, 2005). Ceppi di P. fluorescens sono stati testati 

per la loro abilità di controllare TSWV in pomodoro, sia impiegandoli singolarmente 

che in miscela; nelle piante di pomodoro trattate con il batterio è incrementata l’attività 

di polifenolossidasi, β- ,3-glucanasi e chitinasi ed è incrementata la crescita e la 

produzione rispetto alle piante testimone (Kandan et al., 2005). Recentemente è stato 

selezionato un ceppo di P. putida capace di incrementare la produzione e di proteggere 

il pomodoro nei riguardi di attacchi virali in pieno campo (Zaccardelli et al., 2007). Il 

controllo del cancro batterico del pomodoro è stato realizzato impiegando differenti 

ceppi di B. pumilus, B. subtilis e B. amyloliquefaciens come PGPR; il livello di PAL e 

il contenuto totale di fenoli è incrementato significativamente in seguito al trattamento 

batterico e la riduzione dell’incidenza del cancro batterico è stata proporzionale 

all’incremento del livello di PAL e del contenuto totale di fenoli (Girish e Umesha, 

2005). 

Parole chiave: Bacillus spp., Controllo biologico, Pomodoro, Pseudomonas spp. 


akram a., m. ongena, f. duby, j. dommeS, P. thonart, 2008. Systemic resistance and 

lipoxygenase-related defence response induced in tomato by Pseudomonas 

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bacterial canker of tomato. Archives of Phytopathology and Plant Protection, 

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conditions using foliar biological control agents and plant growth-promoting 

rhizobacteria. Biological Control, 36, 358-367. 

33


kandan a., m. ramiah, v.j. vaSanthi, r. radjaCommare, r. nandakumar, a. 

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e impiego, in pieno campo, di batteri promotori della crescita (PGPR) per la 

produzione e la difesa del pomodoro. Agroindustria, 6(3), 67- 70. 

34


Sessione III: Fitoplasmi 

Coordinatore: Piero Attilio Bianco 

G. Romanazzi, S. Murolo, V.A. Prota, A. Masciulli, D. D’Ascenzo, R. Garau 

Uso di induttori di resistenza per il controllo del legno nero della vite in pieno 

campo 

C. Marzachi, R. D’Amelio, G. Berta, E. Gamalero, N. Massa, S. Sampò, D. Bosco 

CY: un sistema modello per lo studio dell’attività di elicitori di resistenza nei 

confronti delle fitoplasmosi 


Attivita’ del fungo endofita Epicoccum nigrum Link contro ‘Candidatus 

Phytoplasma mali’ in piante di Catharanthus roseus (L.) G. Don 

D. Bulgari, P. Casati, L. Brusetti, F. Quaglino, D. Daffonchio, P.A. Bianco 

Batteri endofiti isolati da viti sane, affette da giallumi e risanate (recovered) 


Espressione genica indotta in viti delle varietà Sangiovese e Chardonnay 

sintomatiche e recovered da Legno nero


USE OF RESISTANCE INDUCERS TO CONTROL 

GRAPEVINE BOIS NOIR IN THE VINEYARD 

G. Romanazzi 1 , S. Murolo 1 , V.A. Prota 2 , A. Masciulli 1 , D. D’Ascenzo 2 , R. Garau 3 

Department of Environmental and Crop Sciences, Plant Protection Section, Marche 

Polytechnic University 

Via Brecce Bianche, I-60 3 Ancona 

2 Dipartimento di Protezione delle Piante, Università degli Studi di Sassari 

Via E. de Nicola, I-07 00 Sassari 

3 ARSSA Servizio Fitosanitario Regionale, Regione Abruzzo 

Via Nazionale 38, I-650 0 Villanova Pesaro 

E-mail: g.romanazzi@univpm.it 

Phytoplasmoses are severe diseases of grapevine and other crops, and at 

present there are no known effective means to reduce the number of infected plants. 

A strategy to reduce the number of symptomatic plants thus lies in the induction 

of recovery, a spontaneous phenomenon that occurs in nature. Recovery has been 

successfully induced for yellows-infected grapevines exposed to abiotic stress, such 

as transplantation (Osler et al., 993), and partial uprooting or pulling (Romanazzi and 

Murolo, 2008). A further innovative possibility for the control of grapevine yellows 

involves spraying the plant canopy with resistance inducers. In Sardinia, treatments of 

Bois noir (BN) infected grapevines with a commercial product containing glutathione 

and oligisaccharines has provided interesting results (Garau et al., 2007), as have 

treatments with bioactivators carried out in Emilia Romagna (Mazio et al., 2008). A 

stronger schedule of treatment with resistance inducers carried out in central Italy gave 

considerable disease reductions (Romanazzi et al., 2009). Treatments with elicitors 

carried out on Catharanthus roseus, Arabidopsis thaliana and Chrysanthemum 

carinatum have been shown to be effective in phytoplasma transmission prevention 

(Prati et al., 2004; Bressan and Purcell, 2005; Chiesa et al., 2007; D’Amelio et al., 

2007). The aim of the present study is to evaluate the effectiveness of field treatments 

with several resistance inducers for the control of grapevine BN. 

Five commercial products based on resistance inducers were sprayed on 

the canopies of BN infected grapevines cv Chardonnay, as chitosan, Phosetyl-Al, 

glutathion and oligisaccharines mixture (two formulations) and acibenzolar-S-methyl 

(benzothiadiazole, BTH). The treatments were carried out in central Italy in 2007 and 

2008 and in Sardinia in 2008, on a weekly schedule from the beginning of June to the 

middle of July 2007, and then from the beginning of May to the beginning of August 

2008 (nine applications). The products were sprayed from a backwards engine sprayer 

at an equivalent volume of ,000 litres/ha solution. Each treatment was applied to 35 

plants in 2007 and 5 in 2008. The same number of plants were used as untreated 

36


controls. All of the treatments increased the incidence of recovered plants with respect 

to the controls. The best results through the two years of investigation were obtained 

using Kendal, Olivis and Bion. Aliette and Chito Plant allowed efficient control of 

BN only in the first year of trials, when a high rate of naturally recovered vines was 

seen, as in the 2008 in Sardinia. Overall, a strong decrease in BN symptomatic plants 

occurred in an experimental field after the two years of treatments, from 30% to 9.5% 

(including the untreated controls). Although the data need to be confirmed in further 

trials, a new strategy for the reduction of BN infections by treatments with resistance 

inducers has now been set up. 

Key words: Induced resistance, Recovery, Vitis vinifera. 

Uso di induttori di resistenza per il controllo del Legno nero 

della vite in pieno campo 

Le fitoplasmosi rappresentano gravi malattie della vite e di altre colture, 

per il controllo delle quali al momento non sono disponibili mezzi di lotta utili alla 

limitazione del numero di piante infette. Una via per tentare di limitare il numero 

di piante infette potrebbe essere l’induzione del recovery, un fenomeno che in 

natura può avvenire spontaneamente (Caudwell, 96 ). Tale possibilità è stata 

messa applicando con successo alle viti infette da giallumi stress abiotici quali 

l’estirpazione e l’immediato reimpianto (Osler et al., 993), l’estirpazione controllata 

o lo strattonamento (Romanazzi e Murolo, 2008). Una possibilità innovativa per il 

controllo dei giallumi della vite consiste nell’irrorazione di induttori di resistenza sulla 

chioma della pianta. In Sardegna, trattamenti con un prodotto commerciale a base di 

glutatione e oligosaccarine su viti infette da Legno nero (LN) hanno fornito risultati 

interessanti (Garau et al., 2007), analogamente a prove svolte in Emilia Romagna con 

altri bioattivatori (Mazio et al., 2008). Un calendario di trattamenti con un maggior 

numero di applicazioni ha determinato rilevanti riduzioni nel numero di piante con 

sintomi di LN (Romanazzi et al., 2009). Trattamenti con promotori delle resistenze 

della pianta effettuati su Catharanthus roseus, Arabidopsis thaliana o Chrysanthemum 

carinatum hanno mostrato una buona attività nella riduzione della trasmissione di 

fitoplasmi (Prati et al., 2004; Bressan e Purcell, 2005; Chiesa et al., 2007; D’Amelio 

et al., 2007). Obiettivo del lavoro è stato quindi la valutazione dell’efficacia di 

trattamenti con induttori di resistenza nel controllo del LN della vite. 

Cinque prodotti commerciali a base di induttori di resistenza, quali chitosano, 

Phosetyl-Al, miscela di glutatione e oligosaccarine (due formulati) e acibenzolar-Smetile 

(benzotiadiazolo o BTH) sono stati irrorati sulla vegetazione di viti della cv 

Chardonnay affette da LN localizzate in un vigneto in Italia centrale nel 2007 e nel 2008 

ed in Sardegna nel 2008. I trattamenti sono stati effettuati settimanalmente dall’inizio di 

giugno a metà luglio 2007 (7 applicazioni), e dall’inizio di maggio all’inizio di agosto 

37


2008 (tredici applicazioni), distribuendo i prodotti con una irroratrice a spalla a motore 

con un volume equivalente di 000 litri/ha di ogni soluzione. Ogni trattamento è stato 

applicato a 35 piante nel 2007 e 5 nel 2008. Altrettante piante sono state utilizzate 

come testimone non trattato. Tutti i trattamenti hanno incrementato l’incidenza del 

recovery rispetto al testimone non trattato. I migliori risultati complessivamente nei 

due anni di sperimentazione sono stati ottenuti con Kendal, Olivis e Bion, mentre 

Aliette e Chito Plant hanno permesso di ottenere un miglior contenimento del LN 

solo nel primo anno, in cui è stata anche registrata un’elevata incidenza di recovery 

naturale, mentre un simile fenomeno è stato registrato nel 2008 in Sardegna. Alla fine 

dei due anni di sperimentazione, i trattamenti nel complesso hanno determinato una 

rilevante riduzione del numero di piante con sintomi di LN nel vigneto oggetto della 

sperimentazione, passando dal 30 al 9,5% (incluse le piante testimone). Sebbene i dati 

richiedano ulteriori conferme, è stata sperimentata con successo una nuova strategia 

che prevede l’uso di induttori di resistenza per il controllo del LN della vite. 

Parole chiave: Recovery, Resistenza indotta, Vitis vinifera. 


This work was carried out within the projects “Varenne”, funded by the 

Fondazione Cariverona (Bando 2007), and MIUR PRIN 2005074429_002. 

Lavori citati/ references 

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phytoplasma by the vector Colladonus montanus to Arabidopsis 

thaliana, a new experimental host plant. Plant Disease, 89, 2 - 24. 

Caudwell a., 1961. Les phénomènes de rétablissement chez la flavescence dorée de 

la vigne. Annales des Epiphyties, 12, 347-354. 

ChieSa S., S. Prati, g. aSSante, d. maffi, P.a. bianCo, 2007. Activity of synthetic 

and natural compounds for phytoplasma control. Bulletin of Insectology, 60, 

3 3-3 4. 

d’amelio r., n. maSSa, e. gamalero, g. d’agoStino, S. SamPò, g. berta, f. faoro, 

m. iriti, d. boSCo, C. marzaChì, 2007. Preliminary results on the evaluation 

of the effects of elicitors of plant resistance on chrysanthemum yellows 

phytoplasma infection. Bulletin of Insectology, 60, 3 7-3 8. 

38


garau r., v.a. Prota, a. SeChi, g. moro, 2007. Applicazioni di biostimolanti su 

Chardonnay e Vermentino affetti da “legno nero” e loro influenza sul 

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fitoplasmosi della vite e dei fruttiferi basate su recovery, resistenze indotte e 

antagonisti” - Ancona, 2- 3. 

mazio P., a. montermini, P. brignoli, 2008. Indagine preliminare degli effetti 

di trattamenti con bioattivatori nei confronti delle manifestazioni 

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inducers for the control of grapevine Bois noir. Journal of Plant Pathology 

(in press). 

39


CY: A MODEL SYSTEM TO STUDY THE ACTIVITY OF 

ELICITORS OF PLANT RESISTANCE TO PHYTOPLASMA 

INFECTION 

C. Marzachì 1 , R. D’Amelio 2 , G. Berta 3 , E. Gamalero 3 , N. Massa 3 , 

S. Sampò 3 D. Bosco 2 

Istituto di Virologia Vegetale, CNR 

Strada delle Cacce, 73, I- 0 35 Torino 

2 Di.Va.P.R.A. - Entomologia e Zoologia Applicate all’Ambiente “Carlo Vidano”, 

Università degli Studi di Torino 

via L. da Vinci 44, I- 0095 Grugliasco (TO) 

3 Università del Piemonte Orientale Amedeo Avogadro, 

Dipartimento Scienze Ambiente & Vita 

Via Bellini 25, I- 5 00 Alessandria 

E-mail: c.marzachi@ivv.cnr.it 

Phytoplasmas are wall-less bacteria that are associated with economically 

important diseases affecting fruit trees, vegetables, ornamentals and weeds, mostly 

causing proliferation, stunting, yellowing and virescence or phyllody (Seemüller et 

al., 998). They are phloem-limited and transmitted by leafhoppers, planthoppers and 

psyllids in a persistent manner (Weintraub and Beanland, 2006). For some crops, the 

losses are important and chemical treatments against the insect vectors are required 

by law, with a negative impact on environment and human health. Phytoplasma 

infection depends on the interactions among the three partners (plant, pathogen and 

vector), and the resistance elicitors, a fourth partner, increases the complexity of the 

interaction. For this reason, a model system is an important tool to study the effects of 

elicitors against phytoplasma infection. Delays of symptom development and of plant 

death, as well as of symptom severity, have been used to evaluate the activity of ) 

the vescicular-arbuscular fungi Glomus mosseae; 2) the rhizobacteria Pseudomonas 

fluorescens S PF and 3) mixed inoculum of these two as elicitors of resistance on 

chrysanthemum yellows disease of daisy (CY). Multiplication as well as viability of 

CY phytoplasma (CYp) at different times post inoculation have been used to evaluate 

the direct effects of G. mosseae, P. fluorescens S PF and a mixed inoculum of 

both on the phytoplasma. Morphological parameters such as plant dry weight and 

root architecture, were measured to evaluate the effects of the three elicitors on CYinfected 

plants. CY is caused by a strain of “Candidatus Phytoplasma asteris” which 

infects a variety of dicotyledonous plants and is transmitted with different efficiencies 

by several species of leafhoppers (Bosco et al., 2007). CY represent an optimal model 

system due to several aspects, among which there are: i) short incubation time of 

the phytoplasma in the plant and its short latency in the vector; ii) rapid and obvious 

symptom development; iii) extremely high transmission efficiency; iv) monovoltine 

40


vector that can be reared under controlled conditions; and v) availability of detection 

as well as quantification tools for the phytoplasma in the plant and in the insect. We 

have shown that the three treatments provided some protection from the disease and 

some significant delay of symptoms, with no direct effect towards the pathogen. 

Key words: Candidatus Phytoplasma asteris, Glomus mosseae, Macrosteles quadripunctulatus, 

Pseudomonas fluorescens. 

CY: un sistema modello per lo studio dell’attività di elicitori di resistenza nei 

confronti delle fitoplasmosi 

I fitoplasmi sono batteri fitopatogeni, privi di parete cellulare, agenti eziologici 

di numerose malattie economicamente importanti di specie fruttifere, orticole, ed 

ornamentali; essi possono anche causare malattie in specie spontanee. Proliferazione, 

accestimento, giallumi, virescenza e fillodia sono i principali sintomi causati 

dall’infezione da fitoplasmi (Seemüller et al., 1998) che si localizzano nel floema 

della pianta e sono trasmessi in maniera persistente da emitteri omotteri (Weintraub 

e Beanland, 2006). Le fitoplasmosi possono causare seri danni economici in alcune 

colture e spesso esiste l’obbligo di legge per l’espletamento di trattamenti insetticidi 

contro il vettore, con un sicuro impatto negativo sull’ambiente e sulla salute umana. 

L’infezione da fitoplasma dipende dalle interazioni tra tre partners (pianta, patogeno 

e vettore) e la presenza di un quarto elemento (l’elicitore di resistenza) provoca un 

ulteriore aumento della complessità delle interazioni. Per questa ragione è molto 

importante affrontare lo studio sugli effetti degli elicitori di resistenza nei confronti 

delle fitoplasmosi utilizzando un sistema modello. Il ritardo nello sviluppo dei sintomi 

e nella morte della pianta e la gravità dei sintomi sono stati i parametri utilizzati in 

questo lavoro per quantificare l’attività del 1) fungo vescicolo-arbuscolare Glomus 

mosseae, 2) del rizobatterio Pseudomonas fluorescens S PF e 3) di un inoculo misto 

contenente entrambi i microrganismi come elicitori di resistenza nei confronti del 

giallume del crisantemo (CY). La moltiplicazione e la vitalità del fitoplasma del CY 

(CYp) quantificate in momenti diversi dall’inoculo sono stati i parametri utilizzati per 

valutare l’effetto diretto di G. mosseae, P. fluorescens S PF e di un inoculo misto 

di entrambi i microrganismi sul fitoplasma. L’effetto dei tre elicitori di resistenza 

sul crisantemo è stato valutato mediante la quantificazione di parametri morfologici 

come il peso secco e lo sviluppo dell’apparato radicale della pianta infetta da CY. 

CY è causato da un isolato del “Candidatus Phytoplasma asteris” che infetta molte 

specie vegetali ed è trasmesso con diversa efficienza da alcune specie di cicadellidi 

(Bosco et al., 2007). CY è un ottimo modello sperimentale sotto diversi punti di vista, 

tra cui i) un breve periodo di incubazione nella pianta e di latenza nel vettore, ii) 

sviluppo rapido ed evidente dei sintomi, iii) elevatissima efficienza di transmissione, 

4


iv) vettore monovoltino che può essere allevato in condizioni controllate, e v) 

disponibilità di reagenti per la diagnosi e la quantificazione del patogeno nella pianta 

e nell’insetto. Il lavoro svolto ha dimostrato che l’applicazione dei due elicitori, da 

soli o in combinazione, ha prodotto un certo di livello di protezione nei confronti 

dell’infezione, nonché un ritardo nello sviluppo dei sintomi, in assenza di effetti 

diretti sul fitoplasma. 

Parole chiave: Candidatus Phytoplasma asteris, Glomus mosseae, Macrosteles 

quadripunctulatus, Pseudomonas fluorescens. 


The project “Valutazione dell’azione di microrganismi rizosferici ed elicitori 

di resistenza sull’infezione da fitoplasmi in un sistema modello” was funded by 

Regione Piemonte since 2004. 


boSCo d., l. galetto, P. leonCini, P. SaraCCo, b. raCCah, C. marzaChi, 2007. 

Interrelationships between “Candidatus Phytoplasma asteris” and its 

leafhopper vectors. Journal of Economic Entomology, 100, 504- 5 . 

Seemüller e., C. marCone, u. lauer, a. ragozzino, m. göSChl, 998. Current status 

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80, 3-26. 

weintraub P.g., l. beanland, 2006. Insect vectors of phytoplasmas. Annual Review 

of Entomology, 51, 9 - . 

42


ACTIVITY OF THE ENDOPHYTIC FUNGUS EPiCOCCuM 

NiGruM LINK AGAINST ‘CANDiDATuS PHYTOPLASMA 

MALI’ IN CATHArANTHuS rOSEuS (L.) G. DON PLANTS 


Dipartimento di Biologia e Protezione delle Piante, Università di Udine 

via delle Scienze 208, I-33 00 Udine 

E-mail: rita.musetti@uniud.it 

‘Candidatus Phytoplasma mali’ (‘Ca. P. mali’), a phloem-restricted wallless 

prokaryote that belongs to the class of Mollicutes (The IRPCM Phytoplasma/ 

Spiroplasma Working Team – Phytoplasma Taxonomy Group, 2004) is the 

microorganism associated with Apple Proliferation (AP) disease. AP is one of the most 

economically important plant diseases in Europe, where is considered a quarantine 

disease. Almost all apple cultivars are susceptible, and no curative methods are 

available against AP; therefore, the management of infected plants has been mainly 

focused on rogueing and on controlling the insect vectors. Recently, the possibility to 

use endophytes (microorganisms living inside host plants that do not cause disease 

symptoms or apparent injury) as biocontrol agents or resistance inducers for the 

control of phytoplasma diseases has been stressed (Marzorati et al., 2006; Musetti 

et al., 2007). Among fungal endophytes isolated from apple (Camatti-Sartori et al., 

2005; Pellizzer, 2006), Epicoccum nigrum Link is particularly interesting because it 

can produce antibiotics and is used as an antagonist against phytopathogenic fungi 

(Elmer et al., 200 ). 

In this study, we investigated the interactions between ‘Ca. P. mali’ and the 

apple endophyte E. nigrum in the experimental host Catharanthus roseus (L.) G. Don, 

maintained in greenhouses. Ultrastructural and molecular analyses were performed 

to determine whether E. nigrum treatment can protect C. roseus against ‘Ca. P. 

mali’. Moreover, we carried out an evaluation of AP symptoms and a quantification 

of the phytoplasma by SYBR ® Green I real-time PCR using ‘Ca. P. mali’ specific 

primers in endophyte-treated or non-treated periwinkle plants. Transmission electron 

microscopy (TEM) examination revealed that the endophyte treatment caused 

important ultrastructural modification in ‘Ca P. mali’: e.g. irregular and distorted 

shapes, presence of cytoplasm confined to the periphery of the cell, and not well 

distinguishable cell membrane. Plant cytological changes, such as abundant callose 

depositions and P-protein aggregations in the sieve elements, were also observed, 

suggesting the activation of a defence response. Endophyte treatment also induced 

a reduction in symptom severity. In particular, in endophyte-treated periwinkles, 

flowers appeared normal in shape and size, not different from non-infected controls. 

Real-time PCR demonstrated that the ‘Ca. P. mali’ concentration in E. nigrum-treated 

43


plants was about 2.3-fold lower than in non-treated periwinkle plants. 

The results obtained demonstrate that the preventive inoculation with the 

fungal endophyte E. nigrum in C. roseus plants affected the phytoplasma, changing 

their morphology and numbers; the ultrastructural modifications seen in plant tissues 

allowed us to hypothesize an enhancing of the host defense response. 

Key words: Disease control, Endophytes, Real Time PCR, SAR. 

Attivita’ del fungo endofita Epicoccum nigrum Link contro ‘Candidatus 

Phytoplasma mali’ in piante di Catharanthus roseus (L.) G. Don 

‘Candidatus Phytoplasma mali’ (‘Ca. P. mali’), procariote floematico privo di 

parete cellulare, appartenente alla classe dei Mollicutes (The IRPCM Phytoplasma/ 

Spiroplasma Working Team – Phytoplasma Taxonomy Group, 2004) è il microorganismo 

associato alla malattia degli Scopazzi del melo (Apple Proliferation, AP). AP è una 

delle fitopatie economicamente più importanti in Europa, dove è considerata malattia 

da quarantena. Quasi tutte le cultivar di melo sono suscettibili e, non essendo disponibili 

metodi curativi per il controllo, la lotta contro AP è basata principalmente sull’estirpo 

delle piante infette e sulla lotta all’insetto vettore. Recentemente, è stata messa in 

rilievo la possibilità di utilizzare endofiti (microorganismi che vivono all’interno 

delle piante ospiti senza provocare sintomi) come agenti di biocontrollo o induttori di 

resistenza per la lotta contro i fitoplasmi (Marzorati et al., 2006; Musetti et al., 2007). 

Fra i funghi endofiti isolati da melo (Camatti-Sartori et al., 2005; Pellizzer, 2006), 

Epicoccum nigrum Link risulta essere di particolare interesse in quanto produttore di 

antibiotici e già utilizzato come antagonista contro funghi fitopatogeni (Elmer et al., 

200 ). 

In questo lavoro è stata studiata l’interazione tra ‘Ca. P. mali’ e l’endofita 

del melo E. nigrum in piante test di Catharanthus roseus (L.) G. Don, mantenute 

in serra. Sono state effettuate analisi ultrastrutturali e molecolari per verificare se 

l’inoculo preventivo con E. nigrum potesse proteggere C. roseus contro il fitoplasma. 

Inoltre, sulle piante trattate e non trattate con il fungo endofita, è stata effettuata la 

valutazione dell’entità dei sintomi e la quantificazione del fitoplasma all’interno 

dei tessuti mediante SYBR ® Green I real-time PCR con primers specifici per ‘Ca. 

P. mali’. Le osservazioni al microscopio elettronico a trasmissione (TEM) hanno 

messo in evidenza che il trattamento con il fungo endofita ha provocato importanti 

modificazioni ultrastrutturali in ‘Ca. P. mali’, come ad esempio, presenza di forme 

irregolari e distorte ed addensamento del citoplasma, che è apparso confinato alla 

periferia della cellula, alterazioni della membrana cellulare. Sono state anche osservate 

modificazioni ultrastrutturali del tessuto della pianta ospite, correlate all’attivazione di 

meccanismi di difesa, come abbondanti accumuli di callosio e di proteina floematica 

(P-protein) nei tubi cribrosi. Il trattamento con il fungo endofita ha anche provocato 

44


una riduzione della gravità dei sintomi, soprattutto a carico dei fiori che apparivano 

di forma e dimensioni normali, non diversi da quelli presenti sulle piante di controllo 

sane. La real-time PCR ha dimostrato che la concentrazione di ‘Ca. P. mali’ nelle 

piante trattate con l’endofita E. nigrum era di circa 2.3 volte inferiore rispetto a quella 

presente nelle piante di C. roseus non trattate. 

I risultati ottenuti hanno dimostrato che l’inoculo preventivo del fungo endofita 

E. nigrum in piante di C. roseus ha influito qualitativamente e quantitativamente su 

‘Ca. P. mali’; le modificazioni ultrastrutturali osservate nei tessuti vegetali farebbero 

ipotizzare un aumento delle risposte di difesa nell’ospite. 

Parole chiave: Controllo delle malattie, Endofiti, PCR in tempo reale, SAR. 


The work was funded by Friuli Venezia Giulia region. 


Camatti-Sartori v., r.t. da Silva-ribeiro, r.m. valdebenito-Sanhueza, f.C. 

PagnoCCa, S. eCheverrigaray, j.l. azevedo, 2005. Endophytic yeasts and 

filamentous fungi associated with southern Brazilian apple (Malus domestica) 

orchards subjected to conventional, integrated or organic cultivation. Journal 

of Basic Microbiology, 45, 397-402. 

elmer P.a.g., e.a. alCoCk, f. Parry, 200 . Epicoccum nigrum as a biological control 

and as a source of antimicrobial metabolites. Page 339 in: Proceedings of 

the 3 th Biennal Conference of Australasian Plant Pathology Society. Cairns, 

Australia. 

international reSearCh Programme on ComParative myCoPlaSmology, irPCm, 

PhytoPlaSma/SPiroPlaSma working team – PhytoPlaSma taxonomy grouP, 

2004. ‘Candidatus Phytoplasma’, a taxon for the wall-less, non helical 

prokaryotes that colonise plant phloem and insects. International Journal of 

Systematic and Evolutionary Microbiology, 54, 243- 255. 

marzorati m., a. alma, l. SaCChi, m. Pajoro, S. Palermo, l. bruSetti, n. raddadi, 

a. balloi, r. tedeSChi, e. Clementi, S. Corona, f. quaglino, P.a. bianCo, 

t. beninati, C. bandi, d. daffonChio, 2006. A novel Bacteroidetes symbiont 

is localized in Scaphoideus titanus, the insect vector of Flavescence dorée in 

Vitis vinifera. Applied and Environmental Microbiology, 72, 467- 475. 

45


muSetti r., r. Polizzotto, S. griSan, m. martini, S. borSelli, l. Carraro, r. 

oSler, 2007. Effects induced by fungal endophytes in Catharanthus roseus 

L. tissues infected by phytoplasmas. Bulletin of Insectology, 60, 293-294. 

Pellizzer l., 2006. Endofiti del melo: diagnosi e caratterizzazione. Tesi di laurea a.a. 

2005-2006. 

46


BACTERIAL ENDOPHYTES ISOLATED FROM HEALTHY, 

YELLOWS DISEASED AND RECOVERED GRAPEVINE 

PLANTS 

D. Bulgari 1 , P. Casati 1 , L. Brusetti 2 , F. Quaglino 1 , D. Daffonchio 3 , P.A. Bianco 1 

Dipartimento di Produzione Vegetale - Sezione Patologia Vegetale, 

Università degli Studi 

via Celoria 2, I-20 33 Milano, 

2 Facoltà di Scienze e Tecnologie, Libera Università di Bolzano 

Sernesistrasse , I-39 00, Bolzano, 

3 Dipartimento di Scienze e Tecnologie Alimentari e Microbiologiche, Università 

degli Studi 

via Celoria 2, I-20 33 Milano 

E-mail: paola.casati@unimi.it 

Bacteria residing in plant tissues without inducing symptoms of diseases are 

defined as endophytes (Wilson, 1995; Hallman et al., 997). These are assumed to 

enter plant tissues from the adjacent rhizosphere by passive diffusion or by active 

selection. Bacterial endophytes are associated with different parts of plants, such 

as roots, tubers, stem and leaves, where they mainly inhabit the vascular system, 

the intercellular spaces, and/or the cell cytoplasm (Berg et al., 2005). In nature, 

endophytes (fungi, bacteria and actinomyces) can lessen or prevent the deleterious 

effects of pathogens by different mechanisms (Lodewyckx et al., 2002), such as: 

competition for root niches and nutrients; production of allelochemicals (biocidal 

volatiles, antibiotics and lytic enzymes), and induced of systemic resistance (ISR). 

Recent studies have suggested the possible involvement of endophytes (Fungi and 

Bacteria) in the recovery from grapevine yellows (GY) diseases (Musetti et al., 2005; 

Bulgari et al., 2007). 

To identify potential agents of recovery among bacterial endophytes, the 

bacterial communities associated with healthy, GY-diseased and recovered grapevine 

plants were characterized by cultivation-dependent methods. Grapevine leaves were 

sterilized by washing with sterile water (control plates), treating with 70% ethanol 

solution, and 2% sodium hypochlorite, and the sterilized tissues were ground in a precooled 

mortar and mixed with a saline solution. Partial volumes of both homogenates 

and washing solutions (control plates) were incubated on two different media: Luria- 

Bertani (LB) and Tryptic Soya Agar (TSA). Bacterial growth was detected in the 

plates inoculated with leaf homogenates, while no growth was seen on control plates. 

These data support the thesis that the bacteria identified by cultivation-dependent 

methods are endophytes. Isolated bacteria were identified through the amplification 

of 6S rDNA using bacterial universal primer pairs followed by sequencing of the 

PCR products. 

47


The comparison between nucleotide sequences obtained in the present 

study and those present in the GenBank database allowed us to identify the genus 

Bacillus (uncultured Bacillus) in all grapevine plants analyzed; B. subtilis was 

detected both in healthy and GY-diseased plants, while B. pumilus was found only 

in recovered plants. Furthermore, the genera Stenotrophomonas, Methylobacterium, 

Pectobacterium, Enterobacter, Brevundimonas and Agrobacterium were identified 

in healthy grapevine; the genera Brevibacillus, Staphylococcus and Sphingomonas 

were described in GY-diseased grapevine, and the genus Acaricomes was detected in 

recovered grapevine. These results confirm previous data on the variation of microbial 

composition in healthy, GY-diseased and recovered grapevine plants (Bulgari et al., 

2008). Furthermore, the bacterial communities associated with healthy plants were 

characterized by more diversity than those associated with symptomatic and recovered 

plants. 

Key words: Biocontrol agent, Flavescence dorée, Phytoplasmas, Recovery, 6S 

rDNA. 

Batteri endofiti isolati da viti sane, affette da giallumi e risanate (recovered) 

Tutti i batteri in grado di colonizzare internamente le piante, inclusi quelli 

fitopatogeni, sono definiti endofiti (Wilson, 1995; Hallman et al., 997). Questi 

batteri, normalmente localizzati nella rizosfera, possono penetrare nella pianta dalle 

radici, colonizzare i tessuti vascolari e gli spazi intercellulari e risiedere all’interno 

delle cellule (Berg et al., 2005). In natura, è noto che gli endofiti (funghi, batteri 

ed attinomiceti) sono in grado di prevenire o ridurre i danni provocati dai patogeni 

attraverso diversi meccanismi (Lodewyckx et al., 2002) quali: la competizione 

per i nutrienti e per una nicchia ecologica, la produzione di inibitori allelochimici 

(batteriocine, antibiotici, enzimi litici), e l’induzione della risposta sistemica (ISR). 

Studi recenti hanno suggerito il possibile coinvolgimento degli endofiti (funghi 

e batteri) nel fenomeno del recovery da fitoplasmosi in vite (Musetti et al., 2005; 

Bulgari et al., 2007). 

Per questo, al fine di identificare i batteri endofiti potenziali agenti di recovery, 

in questo lavoro la comunità batterica endofita associata a viti sane, affette da giallumi 

e recovered è stata caratterizzata con metodi dipendenti dalla coltivazione. Per isolare 

unicamente gli endofiti, le foglie di vite sono state sterilizzate con soluzioni di 

etanolo 70% ed ipoclorito di sodio 2% e, in seguito, triturate con mortaio e pestello in 

presenza di una soluzione salina. Sia le acque di lavaggio della fase di sterilizzazione 

che l’omogenato ottenuto sono stati piastrati su due differenti terreni agarizzati: 

Luria-Bertani (LB) e Tryptic Soy Agar (TSA). La crescita microbica, rilevata su tutti 

i triturati fogliari testati, non è mai stata osservata sulle acque di lavaggio piastrate 

48


su entrambi i terreni: ciò supporta l’ipotesi che i batteri isolati siano endofiti. Tali 

batteri sono stati identificati mediante amplificazione del gene 16S rDNA con primers 

universali per batteri e successivo sequenziamento. 

Il confronto delle sequenze ottenute con quelle depositate in GenBank ha 

permesso di individuare la presenza, in tutte le viti analizzate, del genere Bacillus 

(Bacillus sp. non coltivabili); B. subtilis è stato identificato sia in viti sane che infette, 

mentre B. pumilus solo in viti recovered. Inoltre, in viti sane sono stati identificati 

i generi Stenotrophomonas, Methylobacterium, Pectobacterium, Enterobacter, 

Brevundimonas e Agrobacterium; in viti affette da giallumi sono stati descritti i generi 

Brevibacillus, Staphylococcus e Sphingomonas; in viti recovered è stato individuato il 

genere Acaricomes. Tali dati sottolineano la variazione della composizione microbica 

in viti dal differente stato sanitario, come già evidenziato in un precedente lavoro 

(Bulgari et al., 2008), e mostrano che la comunità batterica associata a viti sane 

presenta una maggiore ricchezza in specie rispetto a quella di viti infette e recovered. 

Parole chiave: Agenti di biocontrollo, Fitoplasmi, Flavescenza dorata, Recovery, 6S 

rDNA. 


The work was carried out within the PRIN Project titled “Le resistenze 

indotte, gli antagonisti ed il recovery, base di studio per un controllo innovativo di 

fitoplasmosi della vite e dei fruttiferi”. 


berg g., a. kreChel, m. ditz, r. Sikora, a. ulriCh, j. hallman, 2005. Endophytic 

and ectophytic potato-associted bacterial commmunities differ in structure 

and antagonistic function against plant pathogenic fungi. FEMS Microbiology 

Ecology, 51, 2 5-229. 

bulgari d., P. CaSati, f. quaglino, g. belli, P.a. bianCo, 2007. Endophytic bacterial 

community in yellows infected and recovered grapevine plants. In: Proceeding 

of national meeting “Nuove possibilità di lotta contro le fitoplasmosi della 

vite e dei fruttiferi basate su recovery, resistenze indotte ed antagonisti”. 

Ancona, 7- 8 settembre, 20-22. 

bulgari d., P. CaSati, f. quaglino, l. bruSetti, d. daffonChio, P.a. bianCo, 2008. 

lh-PCr come metodo di analisi per lo studio del ruolo dei batteri endofiti 

nel fenomeno del recovery in vite. Petria, 18, 369-372. 

hallmann j., a. quadt-hallmann, w.g. miller, r.a. Sikora, S.e. lindow, 200 . 

Endophytic colonization of plants by biocontrol agent Rhizobium etli G 2 in 

relation to Meloidogyne incognita infection. Phytopathology, 91, 4 5-422. 

49


lodewyCkx C., j. vangronSveld, f. PorteouS, e. moore, S. taghavi, m. mezgeay, 

d. van der lelie, 2002. Endophytic bacteria and their potential applications. 

Critical Reviews in Plant Sciences, 21, 583-606. 

muSetti r., m. martini, S. borSelli, r. oSler, 2005. Funghi endofiti della vite con 

possibile implicazione nel recovery da Flavescenza dorata. Petria, 15, 4 - 

43. 

wilSon d. 1995. Endophyte - the evolution of a term, and clarification of its use and 

definition. Oikos, 73, 274-276. 

50


GENE EXPRESSION INDUCED BY BOIS NOIR IN 

SYMPTOMATIC AND RECOVERED GRAPEVINE CVS 

SANGIOVESE AND CHARDONNAY 






Bois noir (BN) is a typical grapevine (Vitis vinifera L.) yellows that is 

widespread in European and Mediterranean vineyards (Boudon-Padieu, 2003; 

Maixner, 2006). This severe disease is associated with a phytoplasma, ‘Candidatus 

Phytoplasma solani’ (stolbur, 6SrXII-A subgroup), and it is a serious phytosanitary 

problem in many Italian regions. Phytoplasma are prokaryotes and obligate symbionts 

of plants and insects. They need both of their hosts for dispersal in nature. As of 

now, there are no known effective disease-control methods that can be applied to 

grapevines infected by these phytoplasma, and resistant cultivars are not available. 

The most common practices are the spraying of insecticides to control insect vectors, 

and the removal of symptomatic plants. Despite these unfavourable characteristics, 

grapevines infected by BN can be subjected to “recovery”, which is the remission of 

symptoms in affected plants (Caudwell, 96 ; Osler et al., 999). This phenomenon 

can be spontaneous or induced (Osler et al., 999; Romanazzi and Murolo, 2008). The 

molecular mechanisms involved on recovery phenomenon are not completely known, 

but it is clear that induced resistance mechanisms are involved (Musetti et al., 2007). 

Aim of the present study was to investigate some molecular aspects related to 

grapevine–phytoplasma interactions by analyzing the expression of defence-related 

genes involved in plant defence mechanisms. The study was performed in leaf tissues 

from grapevines (cvs Sangiovese and Chardonnay) with BN symptoms, and theat 

were asymptomatic and recovered. Their collection was in September 2006 and 2007 

(with foliar symptoms), and in June 2007 (symptomless). 

Gene expression was investigated by quantitative real-time PCR (qRT- 

PCR), focussing on genes involved in the phenylpropanoid pathway, genes related to 

hydrolytic enzymes that are known as pathogenesis-related (PR) proteins, and genes 

involved in oxygen-scavenging enzymes. Comparative qRT-PCR methods were set up 

using SYBR Green technology to show amplification of both target and housekeeping 

genes of grapevine-specific sequences selected from the NCBI GenBank. The 

results show an increased expression of genes related to hydrolytic enzymes and the 

phenylpropanoid pathway in both symptomatic and recovered plants. No significantly 

different expression was detected for the superoxide dismutase, catalase and class III 

peroxidase genes. Significant differences were recorded between the cultivars and 

5


according to the presence of leaf symptoms. These results increase the information 

available that is useful to draw up strategies for the control of this disease. 

Key words: Plant-phytoplasma interaction, qRT-PCR, Recovery, Resistance 

mechanisms. 

Espressione genica indotta in viti sintomatiche e recovered da Legno nero delle 

varietà Sangiovese e Chardonnay 

Il legno nero (LN) è un giallume della vite (Vitis vinifera L.) diffuso in numerosi 

comprensori viticoli italiani ed europei (Boudon Padieu, 2003; Maixner, 2006) che 

può determinare drastiche perdite di produzione. L’agente della malattia, ‘Candidatus 

Phytoplasma solani’ (stolbur, sottogruppo 6SrXII-A), è un organismo procariote 

unicellulare che vive come simbionte obbligato in piante ed insetti vettori, dei quali si 

serve per diffondersi in natura. Allo stato attuale non si conoscono genotipi resistenti 

o metodi di difesa chimica efficaci contro questa fitopatia. Il controllo è rivolto 

principalmente al vettore ed alle sue piante ospiti. Nonostante queste peculiarità, 

questa ampelopatia è soggetta ad un fenomeno noto come recovery, che consiste 

nella remissione spontanea (Caudwell 96 ; Osler et al., 999) o indotta (Osler et al., 

999; Romanazzi e Murolo 2008) dei sintomi di malattia in piante infette. I sistemi 

molecolari alla base del fenomeno non sono completamente noti, ma è chiaro che 

esiste un coinvolgimento di meccanismi riconducibili alla resistenza indotta (Musetti 

et al., 2007). 

Obiettivo del lavoro è stato quello di approfondire alcuni aspetti molecolari 

legati all’interazione vite-fitoplasma valutando l’espressione genica indotta alla 

base dei meccanismi di difesa. Lo studio ha coinvolto due varietà, Chardonnay e 

Sangiovese, per ognuna delle quali sono state individuate piante asintomatiche, 

sintomatiche e recovered da LN (Romanazzi e Murolo, 2008). L’analisi condotta su 

tessuto fogliare campionato in tre diversi momenti, settembre 2006 e 2007 (in presenza 

di sintomi fogliari) e giugno 2007 (in assenza di sintomi) ha riguardato la valutazione 

dell’espressione di alcuni geni che hanno un ruolo chiave nella via biosintetica dei 

fenilpropanoidi, alcuni geni relativi ad enzimi idrolitici funzionalmente correlati alle 

proteine PR e geni coinvolti nella detossificazione da specie reattive dell’ossigeno 

(ROS). 

Per l’analisi è stato messo a punto un protocollo in PCR quantitativa Real Time 

idoneo per la vite, utilizzando la tecnologia SYBR Green, e applicando un metodo di 

calcolo comparativo tra i geni oggetto di studio e geni uniformemente espressi nelle 

cellule vegetali (housekeeping), tutti appositamente selezionati dalla banca genomica 

NCBI. I risultati mostrano un significativo incremento nelle piante sintomatiche e 

nelle piante recovered dell’espressione dei geni correlati agli enzimi idrolitici e 

alla via biosintetica dei fenilpropanoidi, mentre non si evidenzia una differenza 

52


nell’espressione dei geni coinvolti nel metabolismo ROS (superossido dismutasi, 

catalasi e perossidasi di classe III). Differenze nell’espressione genica tra le varietà 

sono state evidenziate in relazione alla presenza dei sintomi della malattia. I risultati 

ottenuti potrebbero contribuire alla comprensione delle modificazioni fisiologiche 

indotte dal LN e fornire un contributo per l’approntamento di misure di contenimento 

della malattia. 

Parole chiave: Interazione pianta-fitoplasma, Meccanismi di resistenza, qRT-PCR, 

Recovery. 


This work was carried out within the projects “Varenne” funded by the 

Fondazione Cariverona (Bando 2007), and MIUR PRIN 2005074429_002. 


boudon-Padieu e., 2003. The situation of Grapevine Yellows and current research 

directions: distribution, diversity, vectors, diffusion and control. Extended 

Abstracts 14th Meeting of the International Council for the Study of Virus and 

Virus-like Diseases of the Grapevine, Locorotondo (BA), Italy, 47-53. 

Caudwell a., 96 . Les phenomenes de retablissement ches la Flavescence dorée de 

la vigne. Annales des Epiphyties, 12, 347-354. 

maixner m., 2006. Grapevine yellows – Current developments and unsolved 

questions. Extended Abstracts 15th Meeting of the International Council for 

the Study of Virus and Virus-like Diseases of the Grapevine, Stellenbosch, 

South Africa, 86-88. 

muSetti r., r. marabottini, m. badiani, m. martini, l. Sanita’ di toPPi, S. borSelli, 

m. borgo, r. oSler, 2007. On the role of H 2 O 2 in the recovery of grapevine 

(Vitis vinifera cv. Prosecco) from Flavescence dorée disease. Functional Plant 

Biology, 34, 750-758. 

oSler r., n. loi, l. Carraro, P. ermaCora, e. refatti, 999. Recovery in plants 

affected by phytoplasmas. Proceedings of the 5th Congress of the European 

Foundation for Plant Pathology, 589-592. 

PeriCa m.C., 2008. Auxin-treatment induces recovery of phytoplasma-infected 

periwinkle. Journal of Applied Microbiology, 105, 826- 834. 

romanazzi g., S. murolo, 2008. Partial uprooting and pulling to induce recovery in 

Bois noir-infected grapevines. Journal of Phytopathology, 156, 747-750. 

53


Sessione IV: Funghi 

Coordinatore: Agostino Brunelli 

R.M. De Miccolis Angelini, S. Pollastro, F. Faretra 

L’induzione di resistenza nella protezione delle colture dalle malattie 

fungine 


Valutazione della resistenza indotta da biostimolanti su pomodoro nei 

confronti di Phytophthora infestans 

M.P. Aleandri, R. Reda, M. Antonelli, D. Martignoni, R. Tardani, L. Varvaro, P. Magro, 

G. Chilosi 

L’induzione di resistenza nella difesa integrata del melone nei confronti di 

malattie fungine di origine tellurica 

M. Quaglia, M. Fabrizi, L. Ederli, S. Pasqualini, A. Zazzerini 


F. Vinale, S.L. Woo, M. Ruocco, R. Marra, F. Scala, P. Cavallo, M. Lorito 

Induzione di resistenza sistemica: uno dei principali meccanismi d’azione 

dei biofitofarmaci a base di funghi antagonisti


Poster 


Uso di induttori di resistenza per il controllo del decadimento post raccolta 

di fragola 

M. Quaglia, M. Fabrizi, C. Zadra, D. Volpe, L. Ederli, C. Marucchini, A. Zazzerini 

Interazione tabacco-oidio-afidi: ruolo di alcuni semiochimici nella resistenza 

indotta SA-dipendente e JA-dipendente 


Acqua ozonata come induttore di resistenza verso le malattie delle piante 

P. L. Burzi, S. Galletti, S. Marinello, S. Cianchetta, C. Cerato 

Trichoderma koningii come possibile induttore di resistenza a Cercospora 

beticola in barbabietola da zucchero 

S. Vitalini, F. Faoro, G. Di Tommaso, D. Di Tommaso, M. Borgo, A. Piaggesi, G. Fico, 

F. Tomé, M. Iriti 

I trattamenti con chitosano e fosfito influiscono sul contenuto di polifenoli 

totali e sul potere antiossidante dell’uva e del vino 

D.Vitullo, G. Lima, F. De Curtis, V. De Cicco 

Attività di batteri antagonisti e loro biomolecole contro patogeni fungini e 

possibile induzione di resistenza in piante ortive 

A. Carlucci, F. Lops, G. Romanazzi, E. Santilli, G. Tataranni, S. Frisullo 

Induzione di resistenza in piante di olivo contro i marciumi radicali mediante 

micorrizzazione


INDUCTION OF PLANT RESISTANCE IN CROP 

PROTECTION AGAINST FUNGAL DISEASES 

R.M. De Miccolis Angelini, S. Pollastro, F. Faretra 

Department of Plant Protection and Applied Microbiology, University of Bari 

Via Amendola, 65/A, I-70 26 Bari 

E-mail: faretra@agr.uniba.it 

An important contribution to integrated crop protection against fungal 

diseases is provided by a new generation of active substances that can induce defence 

mechanisms in plants. Several natural and synthetic chemicals are well-known as 

inducers of plant resistance against fungal diseases. Two functional analogues of 

salicylic acid, 2,6-dichloroisonicotinic acid (INA) and benzothiadiazole (BTH 

or acibenzolar-S-methyl), are inducers of systemic-acquired resistance (SAR) in 

numerous plant–pathogen combinations. BTH shows a broad spectrum activity and its 

use as a plant activator on some crops, such as tomato, apple and hazel trees, is allowed 

in Italy (BION ® , Syngenta Crop Protection). A number of inorganic compounds (such 

as phosphate salts and silicon), sugars and vitamins, like riboflavin, can also act as 

activators of plant defences. β-Aminobutyric acid (BABA) is another resistance 

inducer that is effective against numerous pathogens, including various downy mildew 

agents. In contrast to most chemical inducers, it can also show a curative effect (Silué 

et al., 2002). The elicitor activities of chitosans are also well known and widely 

experienced for the control of several fungal diseases. Certain polyunsatured fatty 

acids can also act as elicitors, including arachidonic acid, which for example induces 

resistance to Phytophthora infestans in tomato and potato (Cohen et al., 99 ), as can 

bacterial hairpin proteins the activities of which have also been ascertained against 

phytopathogenic fungi. Encouraging results have also been obtained with some plantderived 

elicitors, such as oligogalatturonides and cellodextrins, which can protect 

grapevines from Botrytis cinerea, and oligosaccharines, which can enhance plant 

resistance by stimulating phytoalexin biosynthesis. A novel compound, 3-acetonyl-3hydroxyoxindole, 

which was extracted from an ornamental plant, has been shown to 

induce resistance to Erysiphe cichoracearum in tobacco (Li et al., 2008). Laminarin, a 

glucan from brown algae, is commercially available in France (Iodus 40, Stähler Suisse 

SA) and is used against powdery mildew on wheat; it is also known as an activator 

of grapevine defence against B. cinerea and Plasmopara viticola (Aziz et al., 2003). 

Induction of host defence mechanisms are partly responsible for the activity of certain 

fungicides (Herms et al., 2002). Moreover, probenazole, a fungicide used to control 

rice pathogens, including Magnaporthe grisea, shows only weak antifungal activity 

and is nowadays more properly considered as a resistance-inducing chemical. 

Among biotic inducers of plant resistance, great interest has been aroused by 

plant-growth-promoting rhizobacteria (PGPR) (van Loon et al., 998). In the context of 

57


sustainability, environmental protection and food safety, resistance inducers represent 

an alternative and a potentially promising approach to crop protection management. 

There are some factors that need to be considered: partial efficacy that is often lower 

than that of traditional fungicides, variability of results and their usually preventive 

activity. However, resistance-inducing compounds should be usefully incorporated 

into the integrated pest management of fungal diseases, and is particular useful against 

pathogens that are not easily controlled by traditional methods, and/or are at a high 

risk of acquired fungicide resistance or can easily adapt to resistant plant genotypes. 

Key words: Elicitors, Integrated pest management, Natural compounds. 

L’induzione di resistenza nella protezione delle colture 

dalle malattie fungine 

Un importante contributo alla protezione integrata delle colture dalle 

malattie fungine può derivare da sostanze attive di nuova generazione in grado di 

indurre meccanismi di difesa nelle piante. Numerose sostanze, naturali o di sintesi, 

sono note per la capacità di indurre resistenza a malattie fungine. Due analoghi 

funzionali dell’acido salicilico, l’acido isonicotinico (INA) e il benzotiadiazolo (BTH 

o acibenzolar-S-methyl), sono noti induttori di resistenza sistemica acquisita (SAR) in 

numerose combinazioni pianta-patogeno. Il BTH, presenta un ampio spettro d’azione 

ed il suo uso su alcune colture, come pomodoro, melo e nocciolo, è autorizzato in 

Italia (BION ® , Syngenta Crop Protection). 

Numerosi composti inorganici (come sali di fosforo, silicio, etc.), zuccheri e vitamine, 

come la riboflavina, possono agire da attivatori delle difese delle piante. Un altro 

induttore di resistenza, l’acido β-ammino butirrico (BABA), è efficace contro 

numerosi patogeni, tra cui diversi agenti causali di peronospora e, a differenza di 

molti induttori chimici, mostra qualche effetto curativo (Silué et al., 2002). È nota e 

ampiamente sperimentata l’attività del chitosano per la protezione da diverse malattie 

fungine. Possono inoltre agire da elicitori alcuni acidi polinsaturi, come l’acido 

arachidonico, che ad esempio in pomodoro e patata induce resistenza a Phytophthora 

infestans (Cohen et al., 99 ), e proteine di origine batterica, le arpine, la cui attività 

è stata anche accertata verso funghi fitopatogeni. Risultati incoraggianti sono stati 

ottenuti con alcuni induttori di origine vegetale, come oligogalatturonidi, cellodestrine 

che, ad esempio, inducono resistenza a Botrytis cinerea su vite e oligosaccarine che 

migliorano la resistenza inducendo nelle piante la sintesi di fitoalessine. Una nuova 

molecola, 3-acetonyl-3-hydroxyoxindole, estratta da una pianta ornamentale, su 

tabacco induce resistenza a Erysiphe cichoracearum (Li et al., 2008). La laminarina, 

glucano derivato da alghe brune, da tempo commercializzato in Francia (Iodus 40, 

Stähler Suisse SA), per il contenimento dell’oidio su graminacee, è nota per attivare 

anche le difese della vite da B. cinerea e Plasmopara viticola (Aziz et al., 2003). Nella 

protezione fornita da alcuni fungicidi può essere coinvolta l’induzione di meccanismi 

58


di difesa dell’ospite (Herms et al., 2002). Inoltre, probenazole, un fungicida da tempo 

impiegato per la protezione del riso da patogeni fungini, tra cui Magnaporthe grisea, 

mostra solo una debole attività antifungina è ad oggi più propriamente considerato un 

induttore di resistenza. 

Tra gli induttori di resistenza di natura biotica, particolare interesse suscitano 

alcuni rizobatteri promotori della crescita delle piante (PGPR) (van Loon et al., 998). 

In un’ottica di sostenibilità, tutela dell’ambiente e sicurezza alimentare, gli induttori 

di resistenza rappresentano un approccio alternativo e potenzialmente promettente 

nella gestione delle avversità delle piante. Sono tuttavia da considerare alcuni fattori: 

efficacia solo parziale e inferiore ai tradizionali fungicidi, incostanza dei risultati ed 

azione generalmente solo preventiva. Ciò nonostante, gli induttori di resistenza ben 

si prestano ad essere impiegati in programmi di protezione integrata dalle malattie 

fungine risultando di particolare ausilio per patogeni non efficacemente controllati con 

i metodi tradizionali e verso patogeni ad elevato rischio di acquisizione di resistenza a 

fungicidi o in grado di adattarsi facilmente a genotipi di piante resistenti. 

Parole chiave: Elicitori, Protezione integrata, Sostanze naturali. 


aziz a., b. PoinSSot, x. daire, m. adrian, a. bazier, b. lambert, j.m. joubert, a. 

Pugin, 2003. Laminarin elicits defense responses in grapevine and induces 

protection against Botrytis cinerea and Plasmopara viticola. Molecular 

Plant-Microbe Interactions, 16, 8- 28. 

Cohen y., u. giSi, e. moSinger, 99 . Systemic resistance of potato plants against 

Phytophthora infestans induced by unsaturated fatty acids. Physiological 

and Molecular Plant Pathology, 38, 255-263. 

hermS S., k. SeehauS, h. koehle, u. Conrath, 2002. A strobilurin fungicide enhances 

the resistance of tobacco against tobacco mosaic virus and Pseudomonas 

syringae pv tabaci. Plant Physiology, 130, 20- 27. 

li y., z. zhang, y. jia, y. Shen, h. he, r. fang, x. Chen, x. hao, 2008. 3-acetonyl- 

3-hydroxyoxindole: a new inducer of systemic acquired resistance in plants. 

Plant Biotechnology Journal, 6, 30 -308. 

Silué d., e. Pajot, y. Cohen, 2002. Induction of resistance to downy mildew 

(Peronospora parasitica) in cauliflower by DL--amino-n-butanoic acid 

(BABA). Plant Pathology, 51, 97- 02. 

van loon l.C., P.a.h.m. bakker, C.m.j. PieterSe, 998. Systemic resistance induced 

by rhizosphere bacteria. Annual Review of Phytopathology, 36, 453-483. 

59


EVALUATION OF INDUCED RESISTANCE BY 

BIOSTIMULANTS AGAINST PHYTOPHTHOrA iNFESTANS 

ON TOMATO 


Dipartimento di Protezione e Valorizzazione Agroalimentare, Università di Bologna, 

Viale G. Fanin 46, I-40 27 Bologna, 

E-mail: roberta.roberti@unibo.it 

An interesting perspective of reducing pesticides in the environment is seen 

in the use of products that can induce and enhance the natural defence mechanisms 

of plants against phytopathogens. Beside the well known acibenzolar-S-methyl and 

fosetyl-aluminium, with bactericidal and fungicidal effects, several products have 

been commercialized in Italy that are based on natural substances. These have been 

suggested as fertilizers, promoters of plant growth, and inducers of defence mechanisms. 

For example, Kendal and Pom-PK showed good control of downy mildew on tomato 

(Scannavini et al., 2004; Portillo et al., 2006). Overall, these products comprise 

mixtures of substances with different origins that can induce several effects on plant 

metabolism that are not well known, and these are defined as biostimulants. This study 

aimed to investigate the resistance induced in tomato by some biostimulants of natural 

origins compared with two synthetic compounds. Resistance was evaluated through 

the reduction of disease symptoms caused by Phytophthora infestans and increases in 

foliar enzymatic activities correlated with the biochemical defences of the plants. 

The following biostimulants were used: Algavital (seaweed Ascophyllum 

nodosum extract), Bio-Active (blood meal), Bioforce (plant extracts), Vita-Flow 

(fluid borlande), Kendal and Pom-PK (based on oligosaccharines and glutathione); 

these were compared to Bion (acybenzolar-S-methyl) and Aliette (fosetyl-Al). 

“Marmande” tomato plants were grown in a greenhou and treated with the these 

products at the doses recommended by the manufacturers, at four foliar branches. 

A group of plants was artificially inoculated with P. infestans two days after the 

treatment to assess the biological activity. Another group was used to extract total 

proteins from leaves two days after treatments, to determine the enzymatic activities 

of peroxidase, chitobiosidase and endochitinase by spectrophotometrical assays. 

Separate experiments were conducted to evaluate the effects of oligosaccharines and 

glutathione contained in Kendal and Pom-PK on these enzymatic activities. They 

were applied at the doses indicated by one of the two manufacturing industries, and 

were compared with Bion and Aliette. 

Kendal and Pom-PK significantly reduced the leaf percentage of symptoms 

caused by downy mildew at the same level as the two chemical products Bion and 

Aliette, which are well known as resistance inducers. Also the other biostimulants, 

except for Vita-Flow, reduced the infection significantly, with respect to the control. 

60


Peroxidase activity was increased by all of the products, chitobiosidase activity 

was enhanced by Algavital, Kendal and Bioforce among the biostimulants, while 

endochitinase activity was higher than the control for Algavital, Kendal and Bio- 

Active among the biostimulants, and for Bion among the chemicals. Glutathione, 

oligosaccharines and their mixture caused significant increases in all three of the 

enzymatic activities. In conclusion, almost all of the biostimulants exerted preventative 

actions against downy mildew on tomato, and this effect can be partially explained by 

an increase in enzymatic activities correlated with plant defence induction. 

Key words: Disease control, Fungal diseases, Plant enzymes. 

Valutazione della resistenza indotta da biostimolanti su pomodoro 

nei confronti di Phytophthora infestans 

Nell’ambito della riduzione degli apporti di agrofarmaci nell’ambiente, 

un’interessante prospettiva studiata da tempo è costituita da prodotti in grado di 

stimolare e potenziare le difese naturali della pianta nei confronti delle fitopatie. Ai 

noti acibenzolar-S-methyl e fosetyl-aluminium disponibili come battericidi/fungicidi, 

si sono affiancati sul mercato italiano prodotti di derivazione naturale proposti come 

fertilizzanti, stimolatori della produzione ed anche delle autodifese della pianta. 

Esempi sono Kendal e Pom-PK che hanno mostrato di contenere peronospora su 

vite e pomodoro (Scannavini et al., 2004; Portillo et al., 2006). In generale, questi 

prodotti sono costituiti da miscele di sostanze di varia derivazione e possono avere 

effetti molteplici, non sempre chiaramente identificati, sul metabolismo della pianta 

e sono definiti biostimolanti. Questo studio ha avuto l’obiettivo di confrontare alcuni 

biostimolanti di derivazione naturale con due prodotti di sintesi per la loro capacità 

di stimolare le difese naturali della pianta di pomodoro, attraverso la valutazione 

della riduzione dei sintomi di malattia provocati da Phytophthora infestans e della 

variazione di alcune attività enzimatiche fogliari correlate alle risposte biochimiche 

di difesa della pianta. 

Sono stati considerati i biostimolanti Algavital (estratto di alga Ascophyllum 

nodosum), Bio-Active (carniccio), Bioforce (estratti vegetali), Vita-Flow (borlanda), 

Kendal e Pom-PK (a base di oligosaccarine e glutatione, ecc.) confrontati con Bion 

(acybenzolar-S-methyl) e Aliette (fosetyl-Al). Piante di pomodoro “Marmande”, 

allevate in serra, sono state sottoposte a trattamento con i suindicati prodotti alle dosi 

di etichetta, allo stadio di quattro palchi fogliari. Una parte delle piante è stata inoculata 

artificialmente con P. infestans due giorni dopo il trattamento. Un’altra parte è stata 

utilizzata per il prelievo di foglie (2 giorni dopo il trattamento), dalle quali sono state 

estratte le proteine totali per determinare le loro attività enzimatiche perossidasiche, 

chitobiosidasiche ed endochitinasiche con saggi biochimici allo spettrofotometro. Un 

6


ulteriore esperimento ha valutato gli effetti sulle attività enzimatiche di componenti 

singoli di Kendal e Pom-PK quali oligosaccarine e glutatione, alle dosi indicate da una 

delle due Società produttrici e confrontate Bion e Aliette. 

Con Kendal e Pom-PK la percentuale di superficie fogliare colpita da 

peronospora è stata la più bassa e significativamente uguale a quella ottenuta con i 

prodotti di riferimento, Bion e Aliette, noti per il loro effetto induttore di resistenza. 

Anche gli altri biostimolanti, a parte Vita-Flow, hanno ridotto l’infezione in maniera 

significativa rispetto al testimone. L’attività perossidasica è stata incrementata da tutti 

i prodotti, quella chitobiosidasica dai biostimolanti Algavital, Kendal e Bioforce, e 

l’attività endochitinasica è risultata maggiore per Algavital, Kendal e Bio-Active e 

solo da Bion tra i prodotti di riferimento, rispetto al testimone non trattato. L’effetto 

di glutatione, oligosaccarine e della loro miscela ha determinato aumenti significativi 

delle tre attività enzimatiche esaminate. Si conclude che quasi tutti i biostimolanti 

saggiati esercitano un’attività preventiva nei confronti di peronospora su pomodoro e 

che tale attività può essere in parte giustificata da un incremento di attività enzimatiche 

correlabile all’induzione di una risposta di difesa della pianta. 

Parole chiave: Difesa dalle malattie, Enzimi della pianta, Malattie fungine. 


SCannavini m., barani a., franChi a., bortolotti P., 2004. Impiego di un biostimolante 

su vite nella difesa antiperonosporica. L’Informatore Agrario, 27, 

68-70. 

Portillo i., berardi r., flori P., brunelli a., 2006. Attività antiperonosporica su 

pomodoro e vite di biostimolanti a base minerale, vegetale e animale. Atti 

Giornate Fitopatologiche. Riccione (RN), Italia, 27-29 marzo, II, 4 7-422. 

62


INDUCTION OF RESISTANCE IN THE INTEGRATED 

MANAGEMENT OF MELON FUNGAL SOIL-BORNE 

DISEASES 

M.P. Aleandri, R. Reda, M. Antonelli, D. Martignoni, R. Tardani, L. Varvaro, 

P. Magro, G. Chilosi 

Dipartimento di Protezione delle Piante, Università degli Studi della Tuscia 

Via S. Camillo de Lellis, I-0 00 Viterbo 

E-mail: chilosi@unitus.it 

In recent years, melon cultivation in both greenhouses and the open-field has 

been subjected to significant losses in yield and quality due to an increasing number 

of soil-borne diseases, including fusarium wilt and collapse, caused by Fusarium 

oxysporum f.sp. melonis (FOM) and Monosporascus cannonballus (Chilosi et al., 

2008), respectively. We have carried out a research programme devoted to developing 

sustainable management methods for the control of melon soil-borne pathogens, with 

an emphasis on the potential of induced resistance by chemicals and beneficial microorganisms. 

Induced resistance by chemicals. During screening for potential inducers 

in melon, we found that acybenzolar-S-methyl (BTH) and methyl jasmonate (MeJA) 

application by seed soaking strongly decreased symptoms caused by the soil-borne 

fungal pathogens Didymella bryoniae and Sclerotinia sclerotiorum (Buzi et al., 2004a). 

Moreover, protection of melon against FOM was shown to be achieved by treatments 

with MeJA (Buzi et al., 2004b). The augmented level of resistance recorded on melon 

seedlings has been associated with the rapid increases in the activity and differential 

isoenzyme induction of lipoxygenase and the pathogenesis-related (PR) proteins 

chitinase and peroxidase (Buzi et al., 2004a, 2004b). The effects of MeJA, BTH and 

K 2 HPO 4 in the containment of collapse of melon caused by M. cannonballus was also 

tested by seed soaking and foliar application. Seed application of MeJA significantly 

reduced symptoms in soil artificially inoculated with M. cannonballus. Two-year 

greenhouse experiments in soil naturally infected with M. cannonballus showed 

that MeJA treatments by seed soaking followed by foliar applications provided a 

consistent containment of the disease. The selected compounds differentially induced 

the synthesis in root system of a set of PR protein isoenzymes, markers of induced 

resistance. 

Induced resistance by beneficial bacteria. Soils from a melon-cultivated 

area in the province of Viterbo have been sampled with the aim to isolate and 

characterise local antagonistic bacteria (Antonelli et al., 2007a, 2007b). The species 

isolated have been tested for their in vitro activity against M. cannonballus, FOM, and 

other soil-borne pathogens and for their ability to produce toxic volatile compounds. 

63


In particular, two isolates with in-vitro antagonistic activity, P. putida F4 and B. 

subtilis CR, were tested for their biocontrol activity in the pathosystem melon-M. 

cannonballus. Plants raised from seeds treated with the selected bacteria alone or in 

combination showed a consistent decrease of the disease symptoms. B. subtilis CR 

was able to induce the enhancement of peroxidase activity in melon roots, suggesting 

its capacity to activate induced systemic resistance (ISR) in the plant. 

Induced resistance by mycorrhize. Since of arbuscular mycorrhizal (AM) 

symbiosis can predispose the plant to respond more rapidly to soil-borne pathogens 

through the activation of plant defence responses, we tested the ability of an isolate of 

Glomus intraradices to protect melon plantlets to FOM in greenhouse experiments. 

AM symbiosis was shown to promote plant growth and strongly decrease symptoms 

from the pathogen. 

Key words: Acybenzolar-S-methyl, Antagonistic bacteria, Melon, Methyl jasmonate, 

Mycorrhize. 

L’induzione di resistenza nella difesa integrata del melone nei confronti 

di malattie fungine di origine tellurica 

La coltura del melone sia in serra che in campo ha subìto negli ultimi anni 

importanti perdite di produzione a causa di un numero crescente di malattie di origine 

fungina, tra cui la fusariosi ed il collasso, causate rispettivamente da Fusarium 

oxysporum f.sp. melonis (FOM) e Monosporascus cannonballus (Chilosi et al., 

2008). Allo scopo di promuovere tecniche di controllo di tali malattie secondo un 

modello colturale sostenibile, è stato sviluppato un progetto di ricerca con particolare 

riferimento alla potenzialità rappresentata dall’induzione di resistenza attraverso 

mezzi chimici e biologici. 

Induzione di resistenza attraverso mezzi chimici. Nel quadro di uno 

screening per potenziali induttori chimici attivi su melone, è stato osservato che 

l’acybenzolar-S-methyl (BTH) ed il metil jasmonato (MeJA) applicati al seme sono 

in grado di diminuire efficacemente i sintomi causati dai patogeni fungini di origine 

tellurica Didymella bryoniae e Sclerotinia sclerotiorum (Buzi et al., 2004a). Inoltre, la 

protezione per mezzo di MeJA è stata riscontrata anche nei confronti di FOM (Buzi et 

al., 2004b). L’aumento del livello di resistenza nelle plantule di melone è stato messo 

in relazione con l’incremento di attività e con l’induzione differenziale di lipossigenasi 

e delle proteine di patogenesi (PR) chitinasi e perossidasi (Buzi et al., 2004a, 2004b). 

E’ stato inoltre saggiato l’effetto di MeJA, BTH and K 2 HPO 4 mediante trattamento 

al seme e fogliare nell’induzione di resistenza nei confronti di M. cannonballus. Il 

trattamento al seme con MeJA ha ridotto significantemente i sintomi del patogeno 

in condizioni di inoculazione artificiale. In una prova biennale in serra su suolo 

infetto naturalmente da M. cannonballus, è stata confermata la capacità induttiva di 

MeJA, come trattamento al seme e fogliare nei confronti del patogeno. I composti 

64


saggiati hanno indotto in modo differenziale la sintesi nell’apparato radicale di forme 

isoenzimatiche di una serie proteine PR, considerate marcatrici dell’induzione di 

resistenza. 

Induzione di resistenza per mezzo di batteri benefici. Campioni di suolo 

prelevati in un’area a coltivazione intensiva di melone nella Provincia di Viterbo sono 

stati analizzati con lo scopo di isolare e caratterizzare batteri antagonisti autoctoni 

(Antonelli et al., 2007a, 2007b). Le specie isolate sono state saggiate in vitro per la 

loro capacità di antagonismo nei confronti di M. cannonballus, FOM ed altri patogeni 

fungini tellurici e per la loro capacità di produrre composti volatili tossici. Due isolati 

caratterizzati da capacità antagonistica in vitro, P. putida F4 and B. subtilis CR, sono 

stati saggiati per l’attività di biocontrollo nel patosistema melone – M. cannonballus. 

Il trattamento al seme con le specie batteriche selezionate da sole ed in miscela, ha 

determinato un’apprezzabile diminuzione dei sintomi. B. subtilis CR ha indotto nelle 

radici delle plantule di melone l’accumulo di perossidasi; questo risultato suggerisce 

la capacità del batterio di promuovere la resistenza sistemica indotta (ISR). 

Induzione di resistenza per mezzo di micorrize. Poiché la simbiosi con 

micorrize arbuscolari è in grado di predisporre la pianta a rispondere con prontezza 

nei confronti di patogeni tellurici attraverso l’attivazione di risposte di difesa, è stata 

saggiata la capacità di un isolato di Glomus intraradices di proteggere plantule di 

melone nei confronti di FOM in esperimenti in serra. La simbiosi AM ha promosso in 

melone la crescita della pianta ed ha diminuito significativamente i sintomi prodotti 

dal patogeno. 

Parole chiave: Acybenzolar-S-methyl, Batteri antagonisti, Melone, metil jasmonato, 

Micorrize. 


antonelli m., m.P. aleandri, n. vinCi, g. ChiloSi, l. varvaro, 2007a. Evaluation 

of antagonistic activity of some bacteria against melon soil-borne pathogens. 

Journal of Plant Pathology, 89, 28. 

antonelli m, r. reda, g. ChiloSi, l. varvaro, 2007b. Effect of physiological and 

chemical treatments on bacterial populations present in melon-cultivated 

soils. Journal of Plant Pathology, 89, 29. 

buzi a., g. ChiloSi, d. de Sillo, P. magro, 2004a. Induction of resistance in melon 

to Didymella bryoniae and Sclerotinia sclerotiorum by seed treatments with 

acibenzolar-S-methyl and methyl jasmonate but not with salicylic acid. 

Journal of Phytopathology, 152, 34-42. 

buzi a., g. ChiloSi, P. magro, 2004b. Induction of resistance in melon seedlings 

against soil-borne fungal pathogens by gaseous treatments with methyl 

jasmonate and ethylene. Journal of Phytopathology, 152, 49 -497. 

65


ChiloSi g., r. reda, m.P. aleandri, i. Camele, l. altieri, C. montuSChi, l. 

languiSCo, v. roSSi, g.e. agoSteo, C. maCrì, a. CarluCCi, f. loPS, muCCi, 

m.l. raimondo, S. friSullo, 2008. Fungi associated with root rot and 

collapse of melon in Italy. EPPO Bulletin, 38, 47- 54. 

66


INTERACTIONS OF TOBACCO-OIDIUM-APHIDS: ROLE 

OF SOME SEMIOCHEMICALS IN SA-DEPENDENT AND JA- 

DEPENDENT INDUCED RESISTANCE 

M. Quaglia 1 , M. Fabrizi 1 , C. Zadra 1 , D. Volpe 1 , L. Ederli 2 , 

C. Marucchini 1 , A. Zazzerini 1 

Dipartimento di Scienze Agrarie e Ambientali, Università degli Studi di Perugia 

Borgo XX Giugno, 74, I-06 2 Perugia 

2 Dipartimento di Biologia Applicata, Università degli Studi di Perugia 


E-mail: mara.quaglia@unipg.it 

Over the past few decades it has become well established that semiochemical 

compounds, including volatile organic compounds (VOCs), are emitted from plants 

after biotic or abiotic stress. These compounds can have important roles in plant 

defence (Dudareva et al., 2006). Indeed, investigations carried out on tobacco plants 

infected by the causal agent of powdery mildew showed an increased emission of 

methyl-jasmonate (MeJA), cis-jamone (CisJA), methyl-salicylate (MeSA), and E-2hexenal 

and β-ocimene, with respect to healthy control plants (Quaglia et al., 2007). 

The aim of the present study was to investigate the effects of the induction 

triggered by these compounds in tobacco (Nicotiana tabacum cv Havana 425)–oidium 

[Erysiphe cichoracearum DC, sin. Golovinomyces cichoracearum (DC) V.P. Heluta] 

and tobacco–aphid (Myzus persicae Sulzer) interactions. 

Exogenous treatments with BTH (functional analogue of salicylic acid), 

MeJA and E-2-hexenal protected tobacco plants against both the biotic stresses, 

while treatments with β-ocimene reduced aphid infestations, but increased powdery 

mildew infections. Moreover, BTH treatments induced in tobacco an accumulation of 

PR protein, a marker of the SA-dependent defence pathway, while MeJA treatment 

induced NICTABA transcript accumulation, a response typically related to the JAdependent 

defence pathway in tobacco (Chen et al., 2002). Screening analyses of 

semiochemical emissions from MeJA-treated plants supplied further information 

regarding the jasmonate metabolic pathway. The emission of some terpenes was seen, 

which were negligible in control plants. Thorough examinations will be carries out to 

elucidate the roles of these molecules against the pathogen and the insect. 

Keywords: BTH, MeJA, NICTABA, PR , Terpenes. 

67


Interazione tabacco-oidio-afidi: ruolo di alcuni semiochimici nella resistenza 

indotta SA-dipendente e JA-dipendente 

Una serie di ricerche condotte negli ultimi decenni hanno dimostrato che le 

piante reagiscono a stress biotici e abiotici con un’alterazione nella composizione di 

metaboliti secondari, anche volatili, che possono avere un ruolo nella difesa (Dudareva 

et al., 2006). Indagini eseguite su piante di tabacco infettate con oidio hanno infatti 

evidenziato un incremento dell’emissione di metil-jasmonato (MeJA), cis-jasmone 

(CisJA), metil-salicilato (MeSA), E-2-esenale e β-ocimene rispetto a piante controllo 

sane (Quaglia et al., 2007). 

Nel presente lavoro è stato indagato l’effetto di alcuni dei composti volatili 

emessi dalle piante infette sull’induzione delle risposte di difesa nelle interazioni 

tabacco (Nicotiana tabacum cv Havana 425)-oidio [Erysiphe cichoracearum DC, sin. 

Golovinomyces cichoracearum (DC) V.P. Heluta] e tabacco-afidi (Myzus persicae 

Sulzer). 

I trattamenti con BTH (analogo funzionale dell’acido salicilico), MeJA ed 

E-2-esenale proteggevano le piante nei confronti di entrambe le avversità, mentre i 

trattamenti con β-ocimene determinavano una diminuzione delle infestazioni di afidi 

ma un aumento delle infezioni di odio. Inoltre, il trattamento con BTH induceva nelle 

piante di tabacco l’accumulo della proteina PR , noto marcatore della via metabolica 

della resistenza SA-dipendente, mentre il trattamento con MeJA induceva l’accumulo 

dei trascritti del gene NICTABA, che in tabacco è una risposta tipicamente correlata 

alla resistenza JA-dipendente (Chen et al., 2002). Ulteriori informazioni riguardanti 

la via metabolica del jasmonato sono state fornite valutando l’emissione di composti 

semiochimici dalle piante trattate con MeJA in confronto a piante controllo. Il 

trattamento con MeJA provocava un aumento dell’emissione di composti di natura 

terpenica non presenti nel controllo. Le indagini proseguiranno al fine di chiarire il 

ruolo di tutte queste molecole nei confronti del patogeno e dell’insetto. 

Parole chiave: BTH, MeJA, NICTABA, PR , Terpeni. 


This work was funded by Fondazione Cassa di Risparmio di Perugia. 

68



Chen y., w.j. PeumanS, b. hauSe, j. braS, m. kumar, P. ProoSt, a. barre, P. rouge, 

e.j.m. van damme, 2002. Jasmonate methyl ester induces the synthesis of a 

cytoplamatic/nuclear chitooligosaccheride-binding lectin in tobacco leaves. 

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dudareva n., f. negre, d.a. nagegowda, i. orlova, 2006. Plant volatiles: recent advances 

and future perspective. Critical Reviews in Plant Sciences, 25, 4 7-440. 

quaglia m., C. zadra, m. fabrizi, d. volPe, a. zazzerini, 2007. Tobacco-Erysiphe 

cichoracearum: a possible role of plant semiochemicals in induced resistance. 

Journal of Plant Pathology, 89(3), 56. 

69


INDUCTION OF SYSTEMIC RESISTANCE: A MAIN 

MECHANISM OF ACTION OF BIOPESTICIDES BASED ON 

ANTAGONISTIC FUNGI 

F. Vinale 1 , S.L. Woo 1 , M. Ruocco 2 , R. Marra 1 , F. Scala 1 , P. Cavallo 3 , M. Lorito 1 

Dipartimento di Arboricoltura, Botanica e Patologia Vegetale, 

Università degli Studi di Napoli “Federico II” 

I-80055 Portici (NA), 

2 IPP-CNR – Istituto per la Protezione delle Piante 

I-80055 Portici (NA), 

3 Dipartimento di Scienze dell’Educazione Università degli Studi di Salerno 

I-84084 Fisciano (SA), 

E-mail:lorito@unina.it 

Numerous biocontrol agents, such as Trichoderma spp. fungal antagonists, have 

beneficial effects on plants because they can not only directly inhibit the pathogens, 

but also colonize root surfaces, exchange compounds that affect plant metabolism, 

enhance plant growth and development, increase nutrient availability, improve crop 

production and induce disease resistance (Harman et al., 2004; Vinale et al., 2008). 

The stimulation of plant defences by Trichoderma was associated with enhanced 

levels of production of pathogenesis-related (PR) proteins and/or accumulation 

of phytoalexins in plants (Howell et al., 2000; Harman et al., 2004). The induced 

systemic-resistance activated by Trichoderma is analogous to that observed with nonpathogenic 

rhizobacteria, whereby the plant defense response is triggered only when 

the presence of the pathogen is detected by the plant. 

During the Trichoderma-plant interaction, different classes of metabolites 

can act as resistance inducers. These include avirulence (avr)-like proteins, enzymes 

such as xylanase, or peptides with elicitor activity that induce the biosynthesis of 

terpenoid phytoalexins and peroxidase activity. We have found evidence that 

Trichoderma produce avr-like gene products that can induce defence mechanisms in 

plants. The effect is analogous to that caused by the products of avr4 and avr9 genes 

of the pathogen Cladosporium fulvum when it is applied to tomato cultivars with 

the corresponding Cf4 and Cf9 resistance genes. Another class of resistance inducer 

includes low-molecular-weight degradation products released from fungal or plant 

host cell walls due to the activities of secreted Trichoderma hydrolytic enzymes. 

These compounds consist of short oligosaccharides with two types of monomers, with 

or without a amino acid residue. The isolated saccharides elicited a hypersensitive 

reaction by the plant when applied to leaves or when injected into root or leaf tissues 

and were also able to stimulate growth and development of Trichoderma, as well as 

to increase the expression of genes involved in the mycoparasitic process (Woo et al., 

2006). 

70


Recently, we investigated the potential of secondary metabolites produced in 

Trichoderma culture filtrates to induce systemic resistance in the plant. A reduction 

in disease symptoms was observed when tomato and canola seedlings were pretreated 

with the purified metabolites, then inoculated with the pathogens Botrytis 

cinerea or Leptosphaeria maculans, respectively. This effect was particularly evident 

when the Trichoderma compounds 6-pentyl-α-pyrone (6PP), harzianopyridone and 

harzianolide were used (Vinale et al., 2008). RT-PCR analysis of plant tissues treated 

with the isolated metabolites indicated that there was over-expression of several genes 

that are normally induced in plant defence. Moreover, analysis by Real Time-PCR 

of tomato plants sprayed with 6PP indicated a considerable increase in PR and PR 

4 gene expression, when compared to water-treated controls (48 h after treatment). 

Finally, we have found that the hydrophobin Hytra secreted by Trichoderma triggers 

plant defence reactions, probably by inducing an oxidative burst and PR and PR4 

gene expression. 

Key words: Avr, Elicitors, Hydrophobin, Induced resistance, Oligosaccharides, 

Secondary metabolites, Trichoderma. 

Induzione di resistenza sistemica: uno dei principali meccanismi d’azione dei 

biofitofarmaci a base di funghi antagonisti 

Numerosi agenti di biocontrollo, come quelli appartenenti al genere 

Trichoderma, possono esercitare sulle piante effetti benefici non solo in virtù della 

loro capacità di contrastare gli agenti fitopatogeni, ma anche perché sono in grado di 

colonizzare la superficie radicale, influenzando il metabolismo della pianta. Alcuni 

ceppi di Trichoderma possono promuovere la crescita della pianta, aumentare la 

disponibilità dei nutrienti, migliorare la produttività e stimolare la resistenza alle 

fitopatie (Harman et al., 2004; Vinale et al., 2008a). L’induzione della resistenza in 

pianta da parte di questi funghi è stata spesso associata ad un aumento di produzione 

di proteine correlate alla patogenesi (proteine PR) e/o all’accumulo di fitoalessine 

(Howell et al., 2000; Harman et al., 2004). Essa è analoga a quella osservata con i 

rizobatteri ed è attivata solo quando in presenza del patogeno. 

Durante l’interazione Trichoderma-pianta, diversi composti possono fungere 

da induttori della resistenza. Tra questi vi sono proteine simili ai prodotti dei geni di 

avirulenza (avr), proteine dotate di attività enzimatica come le xilanasi, o peptidi in 

grado di stimolare la biosintesi di fitoalessine. Le nostre ricerche hanno dimostrato 

che Trichoderma produce composti del tipo avr capaci di indurre meccanismi di difesa 

nelle piante. L’effetto è analogo a quello causato dai prodotti dei geni Avr4 e Avr9 del 

patogeno Cladosporium fulvum quando viene inoculato su piante di pomodoro con i 

corrispondenti geni di resistenza Cf-4 e Cf-9. Altre molecole coinvolte nell’induzione 

7


di resistenza sono quelle a basso peso molecolare rilasciate dalle pareti cellulari 

di funghi o piante in seguito all’azione degli enzimi litici di Trichoderma. Questi 

composti (oligosaccaridi contenenti due tipi di monomeri, con o senza un residuo 

aminoacidico) elicitano reazioni di difesa in pianta quando sono applicati sulle foglie 

o iniettati nei tessuti fogliari o radicali. Inoltre, sono in grado di stimolare le capacità 

di biocontrollo di Trichoderma attivando l’espressione a cascata dei geni coinvolti nel 

micoparassitismo (Woo et al., 2006). 

Abbiamo analizzato il potenziale coinvolgimento nell’induzione della 

resistenza sistemica in pianta di alcuni metaboliti secondari prodotti da Trichoderma 

spp. I risultati hanno evidenziato una riduzione dei sintomi della malattia su piantine 

di pomodoro e canola trattate con i metaboliti purificati ed inoculate, rispettivamente, 

con i patogeni Botrytis cinerea e Leptosphaeria maculans. Questi effetti sono risultati 

particolarmente evidenti per i composti 6-pentil-α-pirone (6PP), harzianopiridone 

and harzianolide (Vinale et al., 2008b). L’analisi RT-PCR ha indicato che i metaboliti 

inducono la sovra-espressione di diversi geni di difesa in pianta. Inoltre, si è osservato, 

mediante esperimenti di Real Time-PCR, un significativo incremento dell’espressione 

dei geni PR e PR4 in piante di pomodoro spruzzate con una soluzione di 6PP (48 h 

dopo il trattamento). Recenti sperimenti hanno evidenziato il ruolo di una idrofobina 

(Hytra ) di Trichoderma nella attivazione di meccanismi di resistenza in pianta, 

probabilmente legata alla induzione del burst ossidativo e dell’espressione di PR e 

PR4. 

Parole chiave: Avr, Elicitori, Idrofobina, Metaboliti secondari, Oligosaccaridi, 

Resistenza indotta, Trichoderma. 


harman g.e., C.r. howell, a. viterbo, i. Chet, m. lorito, 2004. Trichoderma species 

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Phytopathology, 96, 8 - 85. 

72


USE OF RESISTANCE INDUCERS FOR THE CONTROL 

OF POSTHARVEST GRAY MOLD AND RHIZOPUS ROT IN 

STRAWBERRY 






Strawberry (Fragaria × ananassa Duch.) is a perishable fruit, a process 

that occurs mainly after the harvest because it is susceptible to mechanical injury, 

desiccation, decay and physiological disorders. The two most important postharvest 

diseases of strawberries are gray mold, which is caused by Botrytis cinerea Pers., 

and Rhizopus rot, which is induced by Rhizopus stolonifer (Ehrenb.) Vuill. (Maas, 

1998). Both of these diseases can induce severe loss of fruit in the field and during 

long-distance transport and storage. B. cinerea is an eurithermic pathogen that can 

develop at 0 °C, while R. stolonifer requires a temperature of at least 4-5 °C. Control 

of postharvest decay of strawberry during storage can be achieved by physical, 

biological and chemical methods (Ippolito et al., 997; Droby and Lichter, 2004). 

Requests from consumers for fruit free of chemical preservatives have stimulated 

the search for safer alternatives, including the use of antimicrobial films and the 

application of resistance inducers (Elmer and Reglinski, 2006). The use of natural 

biopolymers, such as chitosan, is known to control postharvest diseases of strawberry 

(El Ghaouth et al., 992; Zhang and Quantick, 998; Reddy et al., 2000; Romanazzi 

et al., 2000). Chitosan is an ideal preservative coating for fresh fruit and vegetables 

because of its film-forming and biochemical properties (Bautista Banos et al., 2006; 

Romanazzi et al., 2009). 

The aim of the present study was to evaluate the effectiveness of chitosan 

dissolved in different acids and of commercial and experimental resistance inducers 

in the control of gray mold and Rhizopus rot of strawberry. Moreover, hydrogen 

peroxide production was monitored in chitosan treated fruit. 

Strawberries cv Camarosa were immersed for 0 s in chitosan solutions 

obtained by dissolving the biopolymer in % acetic, hydrochloric, formic and glutamic 

acid. Trials were also carried out using experimental (Algition, Calit, Latic) and 

commercial (Bion, Fitocalcio, Xedabio and a commercial chitosan formulation named 

Chito Plant) products. Fruits dipped in deionised water were used as the control. All 

treatments significantly reduced gray mold and Rizhopus rot of strawberry with respect 

to the control, although with different magnitudes. Chitosan dissolved in acetic acid 

73


and the commercial product Chito Plant performed best. In chitosan treated tissues, 

a decreased hydrogen peroxide production was seen, demonstrating an antioxidant 

activity. The application of these resistance inducers is a very interesting approach for 

conventional agriculture, and it is one of the few possibilities that are available for the 

management of postharvest decay of organic strawberries. 

Key words: Botrytis cinerea, Chitosan, Fragaria × ananassa, Rhizopus stolonifer. 

Uso di induttori di resistenza per il controllo della muffa grigia e 

del marciume acquoso della fragola in postraccolta 

La fragola (Fragaria × ananassa Duch.) è un frutto facilmente deteriorabile, 

soprattutto dopo la raccolta poiché è suscettibile a danni meccanici, disidratazione, 

alterazioni fisiologiche e marciumi. La muffa grigia, causata da Botrytis cinerea 

Pers., ed il marciume acquoso, causato da Rhizopus stolonifer (Ehrenb.) Vuill., sono 

le malattie più importanti della fragola in postraccolta (Maas, 998). Entrambe le 

malattie possono provocare gravi perdite sia in campo, sia durante il trasporto e la 

conservazione. B. cinerea è un fungo euritermico, che si può sviluppare anche a 

0°C mentre R. stolonifer richiede una temperatura di almeno 4-5°C. Il controllo dei 

marciumi postraccolta della fragola può avvenire attraverso l’uso di mezzi fisici, 

chimici e biologici (Ippolito et al., 997; Droby e Lichter, 2004). La richiesta da parte 

dei consumatori di frutta priva di residui di agrofarmaci ha incentivato la ricerca verso 

alternative più salubri, inclusi l’uso di film ad attività antimicrobica e l’applicazione 

di induttori di resistenza (Elmer e Reglinski, 2006). L’utilizzo di un biopolimero 

naturale come il chitosano nel controllo dei marciumi postraccolta della fragola è stato 

ampiamente sperimentato (El Ghaouth et al., 992; Zhang e Quantick, 998; Reddy 

et al., 2000; Romanazzi et al., 2000). Il chitosano è un prodotto ideale per frutta e 

ortaggi freschi poiché grazie alla formazione di una sottile pellicola sulle superfici 

trattate e alle sue proprietà biochimiche aumenta la conservabilità e limita lo sviluppo 

delle malattie fungine (Bautista Banos et al., 2006; Romanazzi et al., 2009). 

L’obiettivo del presente lavoro è stato la valutazione dell’efficacia del 

chitosano dissolto in diversi acidi e di induttori di resistenza sperimentali o commerciali 

nel contenere le perdite dovute alla muffa grigia e al marciume acquoso. Inoltre, è 

stata valutata la produzione di acqua ossigenata nelle fragole trattate con chitosano. 

Fragole della cv. Camarosa sono state immerse per 0 s in soluzioni di 

chitosano ottenute dissolvendo il biopolimero in soluzioni all’ % degli acidi acetico, 

cloridrico, formico e glutammico. Sono state anche utilizzate soluzioni di prodotti 

sperimentali (Algition, Calit, Latic) o commerciali (Bion, Fitocalcio, Xedabio e 

una formulazione di chitosano chiamata Chito Plant). Fragole immerse in acqua 

deionizzata sono state usate come testimone. Tutti i trattamenti hanno indotto una 

significativa riduzione dell’incidenza di muffa grigia e marciume acquoso, sebbene con 

74


una diversa efficacia. I migliori risultati sono stati osservati trattando le fragole con il 

chitosano dissolto in acido acetico e con il prodotto Chito Plant. Nei tessuti trattati con 

chitosano è stata osservata una minor produzione di acqua ossigenata, evidenziando 

un’attività antiossidante del trattamento. L’applicazione di questi induttori di resistenza 

rappresenta un approccio interessante per l’agricoltura convenzionale, ed è una delle 

poche possibilità consentite per la gestione dei marciumi postraccolta in fragolicoltura 

biologica. 

Parole chiave: Botrytis cinerea, Chitosano, Fragaria × ananassa, Rhizopus stolonifer. 


This work was carried out within the project “Use of resistance inducers for the control 

of gray mold”, funded by Marche Polytechnic University. 


bautiSta-bañoS S., a.n. hernández-lauzardo, m.g. velázquez-del valle, m. 

hernández-lóPez, e. ait barka, e. boSquez-molina, C.l. wilSon, 2006. 

Chitosan as a potential natural compound to control pre and postharvest 

diseases of horticultural commodities. Crop Protection, 25, 08- 8. 

droby S., a. liChter, 2004. Post-harvest Botrytis infection: etiology, development 

and management. In: Elad, Y., B. Williamson, P. Tudzynski, N. Delen (Eds.), 

Botrytis: Biology, Pathology and Control. Kluwer Academic Publishers, 

London, UK, 349-367. 

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on two post-harvest pathogens of strawberry fruits. Phytopathology, 82, 398- 

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elmer P.a.g., t. reglinSki, 2006. Biosuppression of Botrytis cinerea in grapes. Plant 

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iPPolito a., f. nigro, g. romanazzi, v. CamPanella, 997. Field application of 

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Bertolini, P., P.C. Sijmons, M.E. Guerzoni, F. Serra (Eds.), Non conventional 

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maaS j.l., 998. Compendium of strawberry diseases. Second Edition. APS Press, St. 

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75


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76


POSTHARVEST CONTROL OF DISEASE ON APPLE FRUITS: 

INDUCED RESISTANCE TRIALS 

M. Quaglia 1 , M. Fabrizi 1 , L. Ederli 2 , S. Pasqualini 2 , A. Zazzerini 1 

Dipartimento di Scienze Agrarie e Ambientali, Università degli Studi di Perugia 


2 Dipartimento di Biologia Applicata, Università degli Studi di Perugia 


E-mail: mara.quaglia@unipg.it 

Fungal pathogens, such as Penicillium expansum and Botrytis cinerea, can 

cause severe post-harvest losses of apple fruits. On stored fruits, the control of these 

diseases is mainly dependent on refrigeration, controlled atmosphere and fungicides. 

However, in the last few years, new defence strategies based on the induction of 

resistance have been investigated (Liu et al., 2005). The objective of our study was 

to determine the effectiveness of treatment by chemical and biological inducers of 

resistance in the apple fruit (Malus domestica L. cv Golden delicious)–P. expansum 

interaction. Benzothiadiazole (BTH), β-aminobutirric acid and Methyl Jasmonate 

were used as the chemical inducers, while two strains of Pseudomonas syringae ( ,3S 

and 48SR2) and five isolates of Trichoderma (T. atroviride P , T. harzianum T22, T. 

harzianum T67, T. resei T34 and Trichoderma spp. 8009) were tested as biological 

inducers. 

Our analyses, carried out according to the method of Porat et al. (2003), 

showed that chemical and biological products did not control the infection when 

applied with the aim of inducing resistance, while they exerted a direct antimicrobial 

activity against P. expansum. The antifungal activity of chemical inducers was also 

confirmed by in-vitro tests. 

By reverse trascription-PCR analyses, increases in mRNA levels of some 

pathogenesis-related proteins (PR , PR2, PR5 and PR8) were evident in apple fruits 

treated with BTH and P. syringae ,3S. These results indicate that the treatments can 

trigger resistance responses in apple fruits, although these responses are ineffective for 

limiting the infections. Thorough examinations directed at evaluating the presence of 

investigated PR proteins will be necessary to clarify the lack in the protective effects 

of the induced resistance. However, it must be consideredd that the chemicals defined 

as resistance inducers showed direct activities against P. expasnum. Therefore, in 

these kinds of surveys, the antimicrobial activity of chemical inducers of resistance 

should always be preliminarily verified. 

Keywords: Chemical inducer, Penicillium expansum, PR proteins, Pseudomonas 

syringae, Trichoderma spp. 

77



Funghi patogeni come Penicillium expansum e Botrytis cinerea causano gravi 

danni alle mele in post-raccolta. Nella frutta in magazzino il controllo delle malattie 

si ottiene principalmente mediante l’impiego della refrigerazione, dell’atmosfera 

controllata e dei fungicidi. Comunque, negli ultimi anni, si stanno studiando strategie 

di difesa alternative basate sull’induzione resistenza (Liu et al., 2005). 

Lo scopo del nostro lavoro è la verifica dell’efficacia del trattamento con 

induttori di resistenza chimici e biologici nell’interazione mela (Malus domestica 

L. cv Golden delicious)–P. expansum. Quali induttori chimici sono stati impiegati il 

Benzotiadiazolo (BTH), l’acido β-aminobutirrico ed il Metil-Jasmonato mentre quali 

induttori biologici 2 ceppi di Pseudomonas syringae ( ,3S e 48SR2) e 5 isolati di 

Trichoderma (T. atroviride P , T. harzianum T22, T. harzianum T67, T. resei T34 e 

Trichoderma spp. 8009). 

Le prove, eseguite in accordo con il metodo di Porat et al. (2003), hanno 

dimostrato che i prodotti chimici e biologici non erano efficaci nel contenere le 

infezioni quando applicati ai fini dell’induzione di resistenza mentre esercitavano 

un’attività antimicrobica diretta nei confronti di P. expansum. L’attività antifungina 

degli induttori chimici di resistenza veniva confermata mediante prove in vitro. 

Analisi eseguite mediante reverse trascription-PCR hanno evidenziato l’accumulo dei 

trascritti dei geni che codificano per alcune proteine di patogenesi (PR1, PR2, PR5 

e PR8) nelle mele trattate con BTH e P. syringae ,3S. Ciò farebbe presupporre 

che i trattamenti inducono nelle mele risposte di resistenza ma che queste non sono 

valide nel contenere le infezioni. Ulteriori analisi, volte a determinare la presenza 

del prodotto genico delle proteine PR indagate, sono necessarie per chiarire il 

mancato effetto protettivo dell’induzione. In ogno caso, bisogna tener presente che le 

molecole chimiche definite induttori hanno mostrato un’attività diretta nei confronti 

di P. expansum pertanto, in questo tipo di indagini, andrebbe sempre preliminarmente 

verificata l’attività antimicrobica di tali sostanze. 

Parole chiave: Induttori chimici, Penicillium expansum, Proteine PR, Pseudomonas 

syringae, Trichoderma spp. 


This work was carried out within the M.I.U.R. PRIN project “Selezione di 

microrganismi antagonisti ad elevata compatibilità per la preparazione di biofitofarmaci 

con maggiore efficacia in lotta biologica”. 

78



liu h., w. jiang, y. bi, y. luo, 2005. Postharvest BTH treatment induceds resistance 

of peach (Prunus persica L. cv. Jiubao) fruit to infection by Penicillium 

expansum and enhances activity of fruit defense machanisms. Postharvest 

Biology and Technology, 35, 263-269. 

Porat r., v. vonokur, b. weiSS, l. Cohen, a. dauS, e.e. goldSChmidt, S. droby, 

2003. Induction of resistance to Penicillium digitatum in grapefruit by βaminobutyric 

acid. European Jornal of Plant Pathology, 109, 90 -907. 

79


OZONATED WATER AS A RESISTANCE INDUCER IN PLANT 

DISEASES 


Dipartimento di Biologia e Patologia Vegetale, Università degli Studi di Bari 

Via Orabona 4, I-70 25 Bari 

E-mail: paciolla@botanica.uniba.it 

Ozone (O 3 ) is recognized as the most phytotoxic of the common air pollutants. 

The effects of ambient ozone on plant defence systems can lead the plant to induced 

resistance or can predispose the plant to increased attack by pathogens. It has been 

reported that, in general, ozone acts as an abiotic elicitor of plant defence responses 

that are known from the systemic acquired resistance and hypersensitive reaction in 

plant-pathogen interactions (Sandermann et al., 998). The toxic effects of ozone 

on vegetable tissues are caused by increases in reactive oxygen species (ROS), such 

as superoxide anion, hydroxylic radical and hydrogen peroxide (Heath and Taylor, 

997). Indeed, ozone, enters the cell through the wall and plasma membrane where 

ROS are generated. In the presence of very high ozone concentrations, cell death 

occurs; alternatively, ROS can be considered as cell molecular signals inducing the 

strengthening of the antioxidant systems of cell detoxification (Pell et al., 997; 

Bolwell, 999; Foyer and Noctor, 2005). Recently, it has been reported that ozonated 

water is used for its antiviral and antibacterial power. On these bases, by means of 

biochemical and phytopathological approaches, a preliminary investigation was 

undertaken to determine whether limited ozonated water foliar applications on melon 

(Cucumis melo L.) can improve the defence mechanisms towards phytopathogens. For 

the biochemical aspects, the activities of enzymes considered as sensors of oxidative 

stresses, such as catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), ascorbate peroxidase 

(APX) and peroxidase (POD), were studied. It is known that these enzymes regulate 

the cellular levels of hydrogen peroxide, a ROS that at high concentration is toxic for 

plant cells. Therefore, at different times after ozonated water treatments, leaf tissues 

of melon seedlings were analysed for the activities of these enzymes. In leaves of 

treated seedlings, increases in POD and SOD activities were seen, while there were 

no significant differences for CAT and APX enzymes. Simultaneously, a trial was 

carried out to determine the effect of foliar ozonated water applications in the control 

of melon powdery mildew caused by Sphaerotheca fusca. A significant reduction 

in severity of disease symptoms (about 30%) was observed, and a strengthening of 

80


defence antioxidative enzymes occurred in the treated plants. Although preliminary, 

these data indicate that controlled ozonated water treatment of melon plants can confer 

resistance to the fungal pathogen S. fusca. 

Key words: Antioxidant enzymes, Cucumis melo, Powdery mildew, Sphaerotheca 

fusca. 

Acqua ozonata come induttore di resistenza verso le malattie delle piante 

L’ozono (O 3 ) è riconosciuto come l’inquinante più fitotossico tra quelli 

comuni atmosferici. L’effetto ambientale dell’ozono sui sistemi di difesa della pianta 

può determinare la resistenza indotta o può predisporre la pianta ad un attacco maggiore 

da parte degli agenti patogeni. In generale, è stato riportato che liozono agisce come 

un elicitore abiotico inducendo nella pianta delle risposte di difesa tipiche della 

resistenza sistemica acquisita e della reazione di ipersensibilità che si hanno nelle 

interazioni pianta-patogeno (Sandermann et al., 998). L’effetto tossico dell’ozono 

sui tessuti vegetali è dovuto all’aumento delle specie reattive dell’ossigeno (ROS), 

quali l’anione superossido, il radicale idrossilico e il perossido di idrogeno (Heath e 

Taylor, 997). Effetto dovuto al fatto che l’ozono entra nella cellula attraverso la parete 

e la membrana plasmatica e genera le ROS. In presenza di alte concentrazione di O 3 

si verifica la morte cellulare; alternativamente, le ROS possono essere considerate 

segnali molecolari cellulari che inducono il potenziamento dei sistemi antiossidanti 

di detossificazione cellulare (Pell et al., 997; Bolwell, 999; Foyer e Noctor, 2005). 

Recentemente, è stato riferito che l’acqua ozonata è utilizzata per le sue potenzialità 

antivirali e antibatteriche. 

Alla luce di ciò, attraverso analisi biochimiche e fitopatologiche, è stata 

effettuata una indagine preliminare per accertare se limitate applicazioni di acqua 

ozonata su foglie di melone (Cucumis melo L.) potenziano i meccanismi di difesa 

della pianta verso i fitopatogeni. L’analisi biochimica ha riguardato l’attività di enzimi 

considerati sensori dello stress ossidativo come la catalasi (CAT), la superossido 

dismutasi (SOD), l’ascorbato perossidasi (APX) e le perossidasi generiche (POD). E’ 

noto che questi enzimi regolano il livello cellulare di perossido di idrogeno, una ROS, 

che ad alta concentrazione risulta tossica per la cellula vegetale. Pertanto, a diversi 

tempi dal trattamento con acqua ozonata, sui tessuti fogliari di piante di melone è stata 

analizzata l’attività di questi enzimi. 

In foglie di piante trattate è stato osservato un aumento dell’attività di POD 

e SOD, mentre nessuna differenza significativa rispetto alle piante non trattate è stata 

trovata per gli enzimi CAT e APX. Parallelamente è stata effettuata una prova per 

studiare l’effetto dell’acqua ozonata su foglie di piante di melone precedentemente 

trattate con Sphaerotheca fusca e che manifestavano la malattia dell’oidio. In questo 

8


caso è stata osservata una riduzione significativa della gravità dei sintomi di malattia 

(circa il 30%) ed un potenziamento della difesa antiossidante degli enzimi nelle piante 

trattate. Questi dati, sebbene preliminari, indicano che il trattamento controllato con 

acqua ozonata di foglie di piante di melone sembra conferire resistenza al fungo 

patogeno S. fusca. 

Parole chiave: Cucumis melo, Enzimi antiossidanti, Oidio, Sphaerotheca fusca. 


bolwell g.P., 1999. Role of active oxygen species and nitric oxide in plant defense 

responses. Current Opinion in Plant Biology, 2, 287-294. 

foyer C.h., g. noCtor, 2005. Oxidant and antioxidant signalling in plants: a reevaluation 

of the concept of oxidative stress in a physiological context. Plant, 

Cell and Environment, 28, 056- 07 . 

heath r.l., g.e. taylor, 997. Physiological processes and plant responses to ozone 

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decline and ozone: a comparison of controlled chamber and field experiment. 

Ecological Studies. Springer, New York, 3 7-368. 

Pell e.j., C.d. SChlagnhaufer, r.n. arteCa, 997. Ozone-induced oxidative stress: 

mechanisms of action and reaction. Physiologia Plantarum, 100, 264-273. 

Sandermann h., d. ernSt, w. heller, C. langebartelS, 998. Ozone: an abiotic 

elicitor of plant defence reactions. Trends in Plant Science, 3, 47-50. 

82


TriCHODErMA KONiNGii AS A POSSIBILE ACTIVATOR OF 

SYSTEMIC INDUCED RESISTANCE AGAINST CErCOSPOrA 

BETiCOlA IN SUGAR BEET 

P.L. Burzi, S. Galletti, S. Marinello, S. Cianchetta, C. Cerato 

CRA-CIN Centro di Ricerca per le Colture Industriali 

Via di Corticella 33, I-40 29 Bologna 

E-mail: pierluigi.burzi@entecra.it 

Cercospora leaf spot (Cercospora beticola Sacc.) is the main sugar beet 

disease in the Mediterranean environment. Two main implements are available for 

disease control: appropriate agronomic practices and genetic resistance of the cv, 

which is partially and negatively correlated to productivity. Thus commercially 

available cvs are moderately resistant and fungicide applications are needed (Weiland 

and Koch, 2004). The use of microorganisms that can induce resistance in plants 

could represent a further option for disease control. Among the fungi, Trichoderma 

can induce systemic resistance in several plant species (Harman et al., 2004). 

The aim of this study was to investigate the effectiveness of the Bf2 isolate 

of T. koningii, which was previously selected for its ability to induce chitinase 

accumulation in sugar beet plants, since chitinases are considered as markers of 

induced resistance (Marinello et al., 2005). 

The study was carried out on the cv Monodoro (medium resistance) and 

Aaron (susceptible) in greenhouses. Bf2 was sprayed twice on one leaf per plant, 

as liquid culture homogenate, at seven-day intervals. The pathogen was inoculated 

on the remaining leaves two days after the last treatment. Controls were: inoculated 

plants, Bf2-treated plants, non-treated and non-inoculated plants. Peroxidase and 

chitinase activities were evaluated by isoelectrofocusing on polyacrylamide gels as 

time courses. Twenty days after inoculation (dpi) the disease severity was recorded 

as percentage of leaf-surface damaged and as number of leaves damaged with respect 

to the total number. Data were submitted to analysis of variance and means were 

separated by l.s.d. test. 

The study revealed the induction of peroxidase and chitinase activities both 

in the resistant and the susceptible cv. Regarding peroxidase, in the susceptible plants, 

a pI 4.0 isoform was induced by Bf2 treatment 2 dpi. In the cv Monodoro, this 

isoform appears to be constitutive, since it was already present in the control, although 

a significant increase was observed in Bf2-treated plants 12 dpi. Moreover, a pI 3.6 

isoform already present in all of the samples of both cvs showed an increase through the 

time course in all of the plants, except for the non-treated and non-inoculated controls. 

Chitinase isoforms of pI 3.3 and pI 3.4 accumulated in treated plants and in treated 

and inoculated plants in both cvs. Aaron showed a greater disease susceptibility in 

83


comparison to Monodoro, as expected. Bf2 treatment caused a statistically significant 

reduction in disease severity and percentages of leaves damaged, in both cvs. These 

data suggest the potential of Bf2 isolates of T. koningii as an activator of systemic 

induced resistance in sugar beet under C. beticola challenge. 

Key words: Beta vulgaris, Chitinase, Isoelectrofocusing, Peroxidase. 

Trichoderma koningii come possibile induttore di resistenza a 

Cercospora beticola in barbabietola da zucchero 

La cercosporiosi, causata da Cercospora beticola Sacc., rappresenta la 

principale malattia fungina della barbabietola da zucchero negli ambienti mediterranei. 

L’adozione di appropriate tecniche agronomiche e la scelta di varietà resistenti 

possono concorrere a contenere la malattia. I genotipi più resistenti sono però anche 

i meno produttivi, perciò si tende ad utilizzare varietà moderatamente resistenti che 

necessitano di interventi con fungicidi (Weiland e Koch, 2004). Un’alternativa all’uso 

di composti chimici è rappresentata da microrganismi capaci di elicitare meccanismi 

di resistenza. Tra i miceti, Trichoderma ha la capacità di indurre resistenza in diverse 

specie coltivate (Harman et al., 2004). 

Scopo del lavoro è stato quello di indagare l’efficacia dell’isolato Bf2 di 

T. koningii, selezionato per la capacità di incrementare, in barbabietola, la sintesi di 

chitinasi, noti marker di resistenza sistemica (Marinello et al., 2005). 

La prova è stata condotta sulle cv Monodoro (mediamente resistente) e Aaron 

(suscettibile) in serra. L’omogenato di coltura liquida di Bf2 è stato applicato due volte 

a distanza di sette giorni su una foglia per pianta. Il patogeno è stato inoculato sulle 

restanti foglie due giorni dopo il trattamento. I controlli erano piante solo inoculate, solo 

trattate con Bf2, e piante né trattate né inoculate. L’attività chitinasica e perossidasica 

è stata valutata in foglie non trattate, a diversi tempi dopo l’inoculazione, tramite 

isoelettrofocalizzazione su gel di poliacrilamide. Venti giorni dopo l’inoculazione 

(dpi) è stata valutata l’intensità della malattia in base alla percentuale di superficie 

colpita. Per ogni pianta è stato rilevato anche il numero di foglie colpite in percentuale 

sul totale. I dati sono stati sottoposti ad analisi della varianza, confrontando le medie 

tramite test d.m.s. 

La prova ha evidenziato effetti di induzione di perossidasi e chitinasi. Riguardo 

le prime, nella cv suscettibile è stata indotta l’isoforma pI 4,0 a 2 dpi nelle piante 

trattate con Bf2. Nella cv Monodoro la stessa isoforma sembra essere costitutiva, 

essendo presente nel testimone. Tale isoforma si è accumulata nel tempo in tutti 

campioni, in particolare nelle piante trattate con Bf2 a 2 dpi. Inoltre in Monodoro 

è stata evidenziata un’altra isoforma (pI 4,2) a 2 dpi nelle piante trattate con Bf2 e 

inoculate. Una terza isoforma (pI 3,6) presente in tutti i campioni, si è accumulata 

84


nel tempo in tutte le tesi, ad esclusione del testimone non trattato e non inoculato, 

in entrambe le cv. Per le chitinasi due isoforme (pI 3,3 e pI 3,4) si sono accumulate in 

piante trattate e in piante trattate e inoculate in entrambe le cv. I rilievi sintomatologici a 

20 dpi hanno evidenziato, come atteso, la maggior sensibilità alla malattia della cv Aaron, 

come percentuale di foglie colpite. Il trattamento con Bf2 ha però causato una riduzione 

statisticamente significativa della percentuale di foglie colpite e dell’intensità di malattia 

in entrambe le cv. I dati suggeriscono la potenzialità dell’isolato Bf2 di T. koningii quale 

induttore di resistenza in barbabietola verso C. beticola. 

Parole chiave: Beta vulgaris, Chitinasi, Isoelettrofocalizzazione, Perossidasi. 

References /Lavori citati 

harman g.e., C.r. howell, a. viterbo, i. Chet, m. lorito, 2004. Trichoderma species 

– opportunistic, avirulent plant symbionts. Nature Reviews Microbiology, 2, 

43-55. 

marinello S., P. l. burzi, S. galletti, C. Cerato, 2005. Screening for identification 

of Trichoderma strains as possible inducers of systemic resistance. Journal of 

Plant Pathology, 87 (4), 297. 

weiland j., g. koCh, 2004. Sugar beet leaf spot disease (Cercospora beticola Sacc.). 

Molecular Plant Pathology, 5, 57- 66. 

85


EFFECTS OF CHITOSAN AND PHOSPHITE TREATMENTS 

ON TOTAL POLYPHENOL CONTENT AND ANTIOXIDANT 

POWER OF DIFFERENT GRAPE BERRY TISSUES AND 

WINES 

S. Vitalini 1,5 , F. Faoro 1 , G. Di Tommaso 2 , D. Di Tommaso 2 , M. . Borgo 3 , 

A. Piaggesi 2 , G. Fico 4,5 , F. Tomé 4 , M. Iriti 1 

Dipartimento di Produzione Vegetale 

Università degli Studi di Milano, Milano, 

2 Valagro SpA, Piazzano di Atessa (CH), 

3 CRA, Centro di Ricerca per la Viticultura, Conegliano Veneto (TV), 

4 Dipartimento di Biologia, Università degli Studi di Milano, Milano, 

5 Orto Botanico G.E.Ghirardi, Dipartimento di Biologia, Università degli Studi di 

Milano, Toscolano Maderno (BS), 

E-mail: marcello.iriti@unimi.it 

Induced resistance by plant activators represents a promising perspective 

in crop protection (Gozzo, 2004). As elicitors, these products are able to boost the 

plant own defences against a broad spectrum of pathogens, a phenomenon known as 

systemic acquired resistance (SAR). Among plant activators, benzothiadiazole (BTH) 

and chitosan proved to be effective in controlling grapevine fungal disease (Iriti et 

al., 2004; Dagostin et al., 2006; Trotel-Aziz et al., 2006), meanwhile improving the 

content of grape antioxidant compounds, i.e. anthocyanis, proanthocyanidins, stilbenes 

and melatonin (Iriti et al., 2004, 2005, 2006, 2008). In this work, we assayed the total 

polyphenol (TP) content and antioxidant power of two different grapevine (Vitis vinifera 

L.) cultivars, Montepulciano d’Abruzzo and Merlot, treated with kendal-COPS ® (kC ® 

Valagro, a formulation based on chitosan and Cu and Mn as microelements) and with 

phosphite (potassium phosphonate), respectively. Furthermore, we determined the TP 

content and antioxidant power of the experimental wines produced by microvinification 

of Montepulciano d’Abruzzo treated and untreated grapes. 

Our results showed that the TP content, measured by Folin-Ciocalteau 

colorimetric assay, was higher in all kC ® - and phosphite-treated grape berry tissues 

of both cultivars, compared with either untreated controls or conventional fungicidetreated 

plants. A similar trend was observed with regard to the antioxidant power 

of the grapes, assessed by DPPH (2,2-diphenyl- -pycryl hydrazyl) free radical 

scavenging test. However, the results obtained from the analysis of Montepulciano 

d’Abruzzo wine revealed a different pattern, with a higher TP content and antioxidant 

power in the sample produced from control grapes in respect to those obtained from 

both kC ® - and fungicide-treated grapes. This discrepancy could be due to the skin 

tissue thickening induced by kC ® , a typical plant defence response, which could 

86


reduce the polyphenol extraction during microvinification, but would hardly occur in 

a conventional winemaking process. 

Though this aspect needs further investigation, it can be concluded that open 

field treatments with plant resistance activators deserve particular attention, not only 

as a low-environmental impact strategy in the management of grapevine fungal 

diseases, but also because they contribute to improve the bioactive phytochemicals 

content of grape. 

Keywords: Fungal diseases, Grapevine phytoalexins, Induced resistance, Phytochemicals. 

I trattamenti con chitosano e fosfito influiscono sul contenuto di polifenoli totali 

e sul potere antiossidante dell’uva e del vino 

L’induzione di resistenza mediante composti naturali e di sintesi costituisce 

una promettente strategia nella protezione delle colture (Gozzo, 2004). Agendo da 

elicitori, tali composti sono in grado di attivare i meccanismi di difesa della pianta 

contro un vasto spettro di patogeni, un fenomeno conosciuto come resistenza sistemica 

acquisita (SAR). Tra gli induttori di resistenza, il benzotiadiazolo (BTH) e il chitosano 

si sono rivelati efficaci nel controllo delle malattie fungine della vite (Iriti et al., 2005; 

Dagostin et al., 2006; Trotel-Aziz et al., 2006), aumentando nel contempo il contenuto 

di composti antiossidanti dell’uva, quali le antocianine, le proantocianidine, gli 

stilbeni e la melatonina (Iriti et al., 2004, 2005, 2006, 2008). In questo lavoro è stato 

analizzato il contenuto di polifenoli totali (TP) e il potere antiossidante dell’uva di 

due diverse cultivar di vite, Montepulciano d’Abruzzo e Merlot, trattate in campo con 

kendal-COP ® S (kC ® Valagro, un formulato a base di chitosano, Cu e Mn) o con fosfito 

(potassio fosfonato), rispettivamente. Il contenuto di TP e il potere antiossidante sono 

stati inoltre determinati in microvinificati ottenuti dalle uve della cv. Montepulciano 

d’Abruzzo. 

Le analisi effettuate hanno dimostrato che il contenuto di TP, determinato con 

il metodo colorimetrico di Folin-Ciocalteu, era più elevato in tutti i tessuti delle bacche 

provenienti da viti trattate con kC ® o fosfito, rispetto a quelli delle bacche da viti non 

trattate, o trattate con fungicidi convenzionali. Lo stesso è stato osservato anche per 

il potere antiossidante dell’uva, misurato come capacità di “scavenging” dei radicali 

liberi da parte del 2,2-diphenyl- -pycryl hydrazyl (DPPH test). Tuttavia, le analisi dei 

microvinificati di Montepulciano d’Abruzzo hanno dato un risultato diverso, poichè il 

TP e il potere antiossidante erano più elevati nei vini da viti non trattate, rispetto a quelli 

da viti trattate con kC ® o con i fungicidi. Questa discrepanza potrebbe essere dovuta 

all’aumentato spessore delle bucce che è stato osservato in seguito al trattamento con 

87


kC ® . L’ispessimento delle pareti cellulari è infatti un tipica risposta di difesa della 

pianta e potrebbe ritardare l’estrazione dei polifenoli, fenomeno probabilmente non 

rilevabile in una normale vinificazione, ma verosimilmente significativo nel caso di 

microvinificazioni brevi, come quelle attuate in questo lavoro. 

In conclusione, sebbene l’influenza dei trattamenti sul contenuto di TP nel vino 

necessiti di ulteriore approfondimento, si può affermare che l’applicazione in pieno 

campo di induttori di resistenza costituisce una valida strategia a basso impatto 

ambientale per il controllo delle malattie fungine con l’importante risvolto di 

aumentare il contenuto in antiossidanti e fitonutrienti delle uve. 

Parole chiave:. Malattie fungine, Resistenza indotta, Fitoalessine, Farmaconutrienti. 


dagoStin S., a. ferrari, i. Pertot, 2006. Efficacy evaluation of biocontrol agents 

against downy mildew for copper replacement in organic grapevine 

production in Europe. Bulletin OILB/SROP, 29( ), 5-2 . 

gozzo f., 2003. Systemic acquired resistance in crop protection: from nature to a 

chemical approach. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 51, 4487- 

4503. 

iriti m., m. roSSoni, m. borgo, f. faoro, 2004. Benzothiadiazole enhances 

resveratrol and anthocyanin biosynthesis in grapevine meanwhile inducing 

resistance to Botrytis cinerea. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 

52, 4406-44 3. 

iriti m., m. roSSoni, m. borgo, l. ferrara, f. faoro, 2005. Induction of resistance to 

gray mold with benzothiadiazole modifies amino acids profile and increases 

proanthocyanidins in grape: primary versus secondary metabolism. Journal 

of Agricultural and Food Chemistry, 53, 9 33–9 39. 

iriti m., m. roSSoni, f. faoro, 2006. Melatonin content in grape: myth or panacea? 

Journal of the Science of Food and Agriculture, 86, 432– 438. 

iriti m., g. di tommaSo, S. d’amiCo, v. PiCChi, f. faoro, 2008. Inducible defences 

elicited by a new chitosan formulation prevent powdery mildew infection in 

grapevine and melon. Journal of Plant Pathology, 90, 332. 

trotel-aziz P., m. CouderChet, g. vernet, a. aziz, 2006. Chitosan stimulates defense 

reactions in grapevine leaves and inhibits development of Botrytis cinerea. 

European Journal of Plant Pathology, 114, 405-4 3. 

88


ANTAGONIST ACTIVITY OF SELECTED BACTERIA AND 

THEIR BIOMOLECULES AGAINST FUNGAL PATHOGEN 

AND POSSIBLE INDUCTION OF RESISTANCE IN 

HORTICULTURAL PLANTS 

D.Vitullo, G. Lima, F. De Curtis, V. De Cicco 

Department of Animal, Vegetal and Environmental Sciences, University of Molise, 

via F. De Sanctis, I-86 00 Campobasso 

Email: lima@unimol.it 

Non-pathogenic soil-borne microorganisms can promote plant growth, as 

well as suppress disease or reduce disease severity. Disease reduction/ suppression 

can occur through microbial antagonism and/or induction of resistance in the plant. 

Non-pathogenic rhizobacteria can stimulate plant defence mechanisms that render 

the host more resistant to subsequent infection by a pathogen; this phenomenon is 

known as induced systemic resistance (ISR). In particular, bacterial species belonging 

to Bacillus and Pseudomonas can both directly suppress pathogen infections and 

stimulate host defences (Ongena and Jacques, 2007; van Loon, 2007). In these 

mechanisms of action, some bacterial biomolecules belonging to a lipopeptides class 

(surfactins, iturins and fengycins) can have key roles as repressive and/or stimulator 

factors. These compounds can be involved in rhizosphere competence (biofilm and 

biosurfactant production), direct inhibition of phytopathogens (antagonism) and 

induced resistance in the host plant (Ongena et al., 2007). Moreover, lipopeptides 

can also act synergically (Maget-Dana et al., 992; Ongena et al., 2007; Romero et 

al., 2007). Recently, our studies have been aimed at the effects of selected antagonist 

rhizobacteria and their purified and characterized bioactive molecules on both plants 

and pathogens. Preliminary results show that some bacterial strains can inhibit in 

vitro different fungal pathogens, as well as reduce the severity of symptoms caused 

by Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici on tomato and by Podosphaera xanthii on 

zucchini plants. Investigations are also in progress to determine whether bacterial 

biomolecules are involved in mechanisms of induced resistance in the host plant. 

Key words: Fusarium oxysporum, Lipopeptides, Podosphaera xanthii, Rhizobacteria. 

89


Attività di batteri antagonisti e loro biomolecole contro patogeni fungini e 

possibile induzione di resistenza in piante ortive 

E’ noto come i microrganismi non patogeni ad habitat terricolo siano in grado 

sia di stimolare la crescita della pianta sia di ridurre o inibire le infezioni di fitopatogeni. 

La riduzione della malattia può espletarsi mediante antagonismo microbico diretto sul 

patogeno e/o induzione di resistenza nella pianta ospite. I rizobatteri non patogeni 

possono stimolare i meccanismi di difesa della pianta rendendola più resistente 

a successivi attacchi del patogeno; questo fenomeno è conosciuto come resistenza 

sistemica indotta (Induced Systemic Resistance, ISR). In particolare, specie di 

batteri appartenenti ai generi Bacillus e Pseudomonas sono in grado sia di reprimere 

direttamente l’infezione fungina sia di stimolare le difese della pianta ospite (Ongena 

e Jacques, 2007; van Loon, 2007). In questi meccanismi d’azione possono fungere da 

elicitori anche molecole bioattive prodotte dagli stessi microrganismi e appartenenti 

alla classe dei lipopeptidi; tra queste, in particolare, vi sono surfattine, fengicine e 

iturine, coinvolte nei meccanismi di sopravvivenza-colonizzazione (formazione di 

biofilm e biosurfattanti), di diretta inibizione dei fitopatogeni (antagonismo) e di 

induzione di resistenza (Ongena et al., 2007) e spesso in grado di agire sinergicamente 

tra loro (Maget-Dana et al., 992; Ongena et al., 2007; Romero et al., 2007). Nostre 

recenti ricerche hanno avuto lo scopo di studiare gli effetti sul patogeno e sulla 

pianta di ceppi batterici antagonisti selezionati da matrici naturali organiche e di loro 

biomolecole attive purificate e chimicamente caratterizzate. Risultati preliminari 

hanno evidenziato come alcuni ceppi batterici antagonisti siano in grado di inibire 

diversi patogeni fungini in vitro e di ridurre l’incidenza dei sintomi da Fusarium 

oxysporum f.sp. lycopersici in piante di pomodoro e di Podosphaera xanthii su piante 

zucchino. Specifiche indagini sono state avviate per chiarire se alcune biomolecole 

prodotte dai ceppi batterici più attivi siano coinvolte nei meccanismi di induzione di 

resistenza nell’ospite. 

Parole chiave: Fusarium oxysporum, Lipopeptidi, Podosphaera xanthii, Rizobatteri. 


maget-dana r., l. thimon, f. PeyPoux, m. Ptak, 992. Surfactin/Iturin A interaction 

may explain the synergistic effect of surfactin on the biological properties of 

iturin A. Biochimie, 74, 047- 05 . 

ongena m., P. jaCqueS, 2007. Bacillus lipopeptides: versatile weapons for plant 

disease biocontrol. Trends in Microbiology, 16, 5- 25. 

90


ongena m., e. jourdan, a. adam, m. Paquot, a. branS, b. joriS, j.l. arPigny, P. 

thonart, 2007. Surfactin and fengycin lipopeptides of Bacillus subtilis as 

elicitor of induced systemic resistance in plants. Environmental Microbiology, 

9, 084- 090. 

romero d., a. de viCente, r.h. rakotoaly, S.e. dufour, j.w. veening, e. arreSola, 

m.f. Cazorla, o.P. kuiPerS, m. Paquot, a. Pérez-garCía, 2007. The iturin 

and fengycin families of lipopeptides are the key factors in antagonism 

of Bacillus subtilis toward Podosphaera fusca. Molecular Plant Microbe 

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van loon l.C., 2007. Plant responses to plant growth-promoting rhizobacteria. 

European Journal of Plant Pathology, 119, 243-254. 

9


RESISTANCE INDUCTION IN OLIVE SEEDLINGS AGAINST 

THE ROOT ROT BY MYCORRHIZATION 

A. Carlucci 1 , F. Lops 1 , G. Romanazzi 2 , E. Santilli 3 , G. Tataranni 4 , S. Frisullo 1 

Dipartimento di Scienze Agro-ambientali, Chimica e Difesa Vegetale, 

Università degli Studi di Foggia 

Via Napoli, 25, I-7 00 Foggia 

2 Dipartimento di Scienze Ambientali e delle Produzioni Vegetali, 

Università Politecnica delle Marche 


3 CRA-, Istituto Sperimentale per l’Olivicoltura, 

C.da Li Rocchi, Rende, I-87036 Cosenza 

4 Dipartimento di Produzione Vegetale, Università della Basilicata 

Via Macchia Romana, I-85 00 Potenza 

E-mail:s.frisullo@unifg.it 

Mycorrhizas are mutualistic associations between plant roots and soil-borne 

fungi that are known for their biological fertilizing role (Aguilera-Gomez et al., 999; 

Treseder et al., 2002); they can also provide a protective effect against plant pathogen 

fungi of the genera Pythium, Phytophthora and Verticillium. The vescicular arbuscular 

endomycorrhizas (VAM) presence in olive roots is known and their positive influences 

on vegetative and radical growth has been shown in a number of studies. Moreover, 

they can elicit defence mechanisms from plants, inducing resistance or reducing 

susceptibility, and act directly on fungal pathogens, by inhibition of their germination 

and penetration into the plant host. 

Therefore, the focus of this study was the influence of mycorhiza on olive 

plants obtained by cutting. Olive plants of cvs. ‘Carolea’, ‘Coratina’, ‘Maiatica of 

Ferrandina’ and ‘Roggianella’ were mycorrhizised with Endorize mix (Glomus spp.), 

Micosat F (Gigaspora margarita and bacteria) from Biorize, and Aegis (Glomus 

intraradices) from Italpollina (Landi et al., 2009) to determine the resistance acquired 

against root rot caused by Rosellinia necatrix and Armillaria mellea. During November 

2008, the mycorrhizised plants were inoculated with the fungi causal agents of root 

rot. After the inoculations, the plants were grown in non-conditioned greenhouses, 

providing normal agronomical management. The first disease symptoms appeared in 

February 2009. Olive plants of cv ‘Maiatica’ that were treated with Endorize mix and 

inoculated with R. necatrix, showed symtoms 20 days later than olive plants of other 

cultivars. In March 2009, all of the plants of all of the cultivars inoculated with R. 

necatrix died, and their root surfaces were covered with white mycelium. However, in 

March and April 2009, the same olive plants inoculated with A. mellea did not show 

any disease syptoms. 

92


In conclusion, we believe that mycorrhisation with these commercial products 

is not effective in the control of R. necatrix attacks. To date, plants micorrhizised 

and inoculated with A. mellea are symptomless, and this can be ascribed to the 

known low colonization speed of the fungal pathogen, or to acquired resistance from 

mycorrhizised olive seedlings following treatment with commercial VAM inocula. 

Key words: Armillaria mellea, Endomycorrhiza, Olive, Rosellinia necatrix. 

Induzione di resistenza in piante di olivo contro i marciumi radicali mediante 

micorrizzazione 

Le micorrize, associazioni mutualistiche tra radici di piante e funghi del 

terreno, note per il loro ruolo di fertilizzanti biologici (Treseder et al., 2002; Aguilera- 

Gomez et al., 999), possono esercitare un effetto deterrente nei confronti di funghi 

fitopatogeni dei generi Pythium, Phytophthora e Verticillium. La presenza di funghi 

endomicorrizici vescicolo arbuscolari (VAM) nelle radici di olivo è nota e prove 

sperimentali hanno dimostrato una influenza benefica sulla crescita vegetativa e 

radicale nella pianta micorrizata. Inoltre, possono intervenire sulla pianta-ospite 

con azione elicitante dei meccanismi di difesa inducendo maggiore resistenza o 

minore suscettibilità, e direttamente sul patogeno, inibendone la germinazione e la 

penetrazione all’interno della pianta. 

Pertanto, lo scopo della ricerca è stato quello di studiare l’influenza della 

simbiosi micorrizica indotta su piantine di olivo ottenute per talea delle varietà 

Carolea, Coratina, Maiatica di Ferrandina e Roggianella con Endorize mix (Glomus 

spp.), Micosat F (Gigaspora margarita e batteri) della ditta Biorize e Aegis (Glomus 

intraradices) della ditta Italpollina (Landi et al., 2009), per valutare la resistenza ai 

marciumi radicali causati da Rosellinia necatrix e Armillaria mellea. Le piantine di 

olivo micorrizate sono state inoculate con gli agenti dei marciumi radicali nel mese 

di novembre 2008. Le piante dopo l’inoculazione sono state poste in una serra fredda 

dove hanno ricevuto le normali cure agronomiche. I primi sintomi della malattia 

sono apparsi nel mese di febbraio 2009. Le piante di olivo della cv Maiatica trattate 

con Endorize mix ed inoculate con R. necatrix hanno mostrato i sintomi 20 giorni 

dopo rispetto a quelli manifestati dalle altre cultivar. Nel mese di marzo 2009 tutte 

le piante di tutte le cultivar inoculate con R. necatrix sono morte con un abbondante 

feltro micelico sull’apparato radicale. Le stesse cultivar di olivo quando inoculate 

con A. mellea al rilievo di marzo e di aprile 2009 non hanno manifestato sintomi 

di malattia. In conclusione si può ritenere che la micorrizzazione con i formulati 

commerciali utilizzati non è risultata efficace nel proteggere la pianta dagli attacchi 

di R. necatrix. A tutt’oggi, l’assenza di sintomi sulle piante micorrizzate ed inoculate 

con A. mellea potrebbe essere imputata alla nota ridotta velocità di colonizzazione 

93


da parte del patogeno, oppure alla resistenza acquisita dalle piantine in seguito alla 

micorrizazione. 

Parole chiave: Armillaria mellea, Endomicorrize, Olivo, Rosellinia necatrix. 


This work was conducted within the framework of “Progetto interregionale 

OLVIVA” funded by Programma Interregionale - “Sviluppo rurale” sottoprogramma 

“Innovazione e ricerca” D.M. n. 25279 del 23/ 2/03”. 


aguilera-gomez l., f.t. davieS, v. olalde-Portugal, S.a. duray, l. PhavaPhutanon, 

1999. Influence of phosphoros and endomycorrhiza (Glomus intraradices) 

on gas exchange and plant growth of chile ancho pepper (Capsicum annuum 

L. cv. San Luis). Photosynthetica, 36, 44 -449. 

landi l., S. murolo, g. romanazzi, 2009. Verifica microscopica e molecolare 

dell’efficienza di micorrizazione di inoculi commerciali su varietà di olivo 

allevate in vivaio. Proc. I Convegno Nazionale dell’Olivo ed Olio, Portici 

(NA), Italy. Italus Hortus (in press). 

treSeder k.k., m.f. allen, 2002. Direct nitrogen and phosphorus limitation of 

arbuscular mycorrhizal fungi: a model and field test. New Phytologist, 155, 

507–5 5. 

94


Indice per autori/Conferences Autors index 

Aleandri M.P. 63 

Antonelli M. 63 

Barba M. 5 

Berta G. 40 

Bianco P. A. 47 

Borgo M.. 86 

Bosco D. 40 

Brunelli A. 60 

Brusetti L. 47 

Bulgari D 47 

Buonario R. 8 

Burzi P. L. 83 

Campanile F. 3 

Campus L. 5 

Carlucci A. 92 

Casati P. 47 

Cavallo P. 70 

Cerato C. 83 

Chilosi G. 63 

Cianchetta S. 83 

Ciccarese F. 80 

Collina M. 60 

Conte L. 5 

D’Amelio R. 40 

Daffonchio D. 47 

D’Ascenzo D. 36 

De Cicco V. 89 

De Curtis F. 89 

De Leonardis S. 80 

De Miccolis angelici R. M. 57 

Di Nicola-negri E. 2- 9 

Di Tommaso D. 86 

Di Tommaso G. 86 

Ederli L. 67-77 

Fabrizi M. 67-77 

Faoro F. 22-86 

Faretra F. 57 

Feliziani E. 73 

Ferretti L. 5 

Fico G. 86 

Frisullo S. 92 

95 

Fumarola C. 80 

Galletti S. 83 

Gamalero E. 40 

Garau R. 36 

Grisan S. 43 

Iacobellis N. S. 28 

Ilardi V. 2- 9 

Iriti M. 22-86 

Landi L. 5 -73 

Lima G. 89 

Lo Cantore P. 28 

Lops F. 92 

Lorito M. 70 

Magro P. 63 

Marinello S. 83 

Marra R. 70 

Martignoni D. 63 

Martini M. 43 

Marucchini C. 67 

Marzachi C. 40 

Masciulli A. 36 

Massa N. 40 

Murolo S. 36-73 

Musetti R. 43 

Osler R. 43 

Paciolla C. 80 

Paduano C. 43 

Pasqualini S. 77 

Pasquini G. 5 

Piaggesi A. 86 

Polizzotto R. 43 

Pollastro S. 57 

Portillo I. 60 

Prota V. A. 36 

Quaglia M. 67-77 

Quaglino F. 47 

Reda R. 63 

Roberti R. 60 

Romanazzi G. 36-5 -73-92 

Ruocco M. 70 

Sampò S. 40


Salandri L. 9 

Santilli E. 92 

Santini M. 73 

Scala F. 70 

Shanmugaiah V. 28 

Tardani R. 63 

Tataranni G. 92 

Tavladoraki P. 9 

Tomé F. 86 

Varvaro L. 63 

96 

Verde I. 5 

Veronesi A.R. 60 

Vinale F. 70 

Vitalini S. 86 

Vitullo D. 89 

Volpe D. 67 

Woo S.L. 70 

Zaccardelli M. 3 

Zandra C. 67 

Zazzerini A. 67-77


Elenco dei partecipanti al Convegno/Meeting participans 

abate giovanni 

Centro agrometeo loCale di 

anCona, aSSam, regione marChe 

via ronCaglia, 20, jeSi (an) 

tel: 0731-200961 

fax: 0731-200961 

e-mail: calan@regione.marche.it 

aCCorSi enriCo 

CoSmoonda, via bianColina, 48 

i-40017 S. giovanni in PerSiCeto (bo) 

tel: 380-3255506 

e-mail: enrico.a@oasiculturabio.info 

agnolon fabio 

SiCit 2000 SPa 

tel: 0444-450946 

fax: 0444-677180 

e-mail: sicit2000@sicit2000.it 

agoStinelli Simone 

univerSità PoliteCniCa delle 

marChe, faColtà di agraria 

via breCCe bianChe, i-60131 (an) 

e-mail: s-agostinelli@libero.it 

aiello marCo 

aiello agroServizi 

via gran bretagna, 5 

i-63015 monte urano (aP) 

tel: 339-3241693 

e-mail: aiello@marcoaiello.com 

albertini alberto 

iSagro riCerCa 

tel: 051-6672434 

fax: 051-6672428 

e-mail: aalbertini@isagroricerca.it 

97 

amadei Paolo 

ConSorzio agrario ravenna 

via madonna di genova, 39 

i-48010 Cotignola (ra) 

e-mail: amadei@consorzioagrarioravenna.it 

babbo gianCarlo 

l’iSola dei fiori SaS diviSione 

ConSulenza agroalimentare 

via v. veneto, 31 

i-30027 San donà di Piave (ve) 

tel: 335-6352894 

fax: 0421-221462 

e-mail: giancarlo.babbo@alice.it 

ballarini Stefano 




e-mail: astsb@libero.it 

barba marina 

Cra- Centro di riCerCa Per la 

Patologia vegetale 

via C.g. bertero, 22 

i-00156 roma 

tel: 06-82070244 

fax: 06-82070243 

e-mail: marina.barba@entecra.it 

bartoluCCi Stefano 

aSSoCiazione marChigiana 

agriColtura biologiCa (amab), 

via fratelli bandiera, 61 

i-60019 Senigallia (an) 

e-mail: assistenzatecnica@amabmarche.it


belleggia Severino 

agro.bio.teC. 

via bolzetta, 20 

i-63024 grottazzolina (aP) 

tel: 0734-631280 

fax: 0734-631280 

e-mail: agrobiotec@tin.it 

bianCo Piero attilio 

diPartimento di Produzione 

vegetale, Sezione Patologia 

vegetale, univerSità degli Studi, 

via Celoria, 2 

i-20133 milano 

tel: 02-50316794 

e-mail: piero.bianco@unimi.it 

bigaran franCeSCo 




e-mail: franzabig@hotmail.com 

biondi Silvia 

oaSi Studio aSSoCiato 

via S. giuSePPe, 18/2 

i-44045 Cento (fe) 

tel: 051-900521 

e-mail: silvia.biondi@unibo.it 

biondini Pierluigi 

azienda agriCola 

Santa CaSa loreto 

e-mail: biondini.aziendaagraria@ 

delegazioneloreto.it 

bonanomi giuliano 

diPartimento di arboriColtura, 

botaniCa e Patologia vegetale, 

98 

univerSità degli Studi di naPoli 

“federiCo ii”, via univerSità, 100, 

i-80055 PortiCi (na) 

tel: 081-2539379 

e-mail: giuliano.bonanomi@unina.it 

brunelli agoStino 

diPartimento di Protezione e 

valorizzazione agroalimentare, 

univerSità di bologna 

viale g. fanin, 46 

i-40127 bologna 

tel: 051-2096546 

fax: 051-2096547 

e-mail: brunelli@agrsci.unibo.it 

bruni roberto 

iStituto di iStruzione SuPeriore 

“ulPiani”, via valle CuPa, 72 

i-63100 (aP) 

tel: 389-9791437 

fax: 0736-342762 

e-mail: roberto.bruni@tele2.it 

bugiani araldo 

SoCoa trading Srl, 

via larga, 34/2, i-40138 bologna 

tel/fax: 05 -538767 

e-mail: socoa@libero.it 

bulgari daniela 


vegetale, Sezione Patologia 

vegetale, univerSità degli Studi, 

via Celoria, 2 


tel: 02-50316788 

e-mail: daniela.bulgari@unimi.it


buonaurio roberto 

diPartimento di SCienze agrarie e 

ambientali, univerSità di Perugia, 

via borgo xx giugno, 74 

i- 06121 (Pg) 

tel: 075-5856465 

e-mail: buonaurio@unipg.it 

burzi Pier luigi 

Cra-Cin Centro di riCerCa Per le 

Colture induStriali 

via di CortiCella 133 


tel: 051-6316838 

fax: 051-374857 

e-mail: pierluigi.burzi@entecra.it 

Caberlotto davide 

diPartimento territorio e SiStemi 

agro foreStali, univerSità di 

Padova, Sez. Patologia vegetale, 

agriPoliS, viale dell’univerSità16 

i-35020 legnaro (Pd) 

tel: 049-8272887 

fax: 049-8272890 

e-mail: davide.caberlotto@unipd.it 

CamPuS lina 

Cra-Pav Centro di riCerCa Per la 



i-00156 roma 

tel: 06-82070223 

e-mail: lina.campus@entecra.it 

CaPuto armando 

agriSyStem, 

via dei bizantini, 216 

i-88046 lamezia terme (Cz) 

tel: 0968-46 2 

fax: 0968-464455 

e-mail: a.caputo@agrisystem.net 

99 

CarluCCi antonia 

diPartimento di SCienze agroambientali, 

ChimiCa e difeSa 

vegetale, univerSità di foggia, 

via naPoli, 25, i-71100 (fg) 

tel: 088 -589322 

fax: 088 -589324 

e-mail: a.carlucci@unifg.it 

CeCiliani franCeSCo 




e-mail: uomociecio@libero.it 

ChiloSi gabriele 

diPartimento di Protezione delle 

Piante, univerSità degli Studi della 

tuSCia, via S. Camillo de lelliS 

i-01100 (vt) 

tel: 076-1357479 

e-mail: chilosi@unitus.it 

Collina marina 




viale g. fanin 46, i-40127 (bo) 

tel: 051-2096566 

fax: 051-2096547 

e-mail: mcollina@agrsci.unibo.it 

CoPPa danilo 

CooPerativa terre CorteSi monCaro, 

direttiSSima del Conero, 47 

i-60021 Camerano (an) 

e-mail: d.coppa@moncaro.com 

Cravero Sergio 

regione Piemonte, Settore 

fitoSanitario 

e-mail: sergio.cravero@regione.piemonte.it


d’angelo giovanni 

SoC. italPollina SPa, 

i-63030 aCquaviva PiCena (aP) 

tel: 0735-764509 

e-mail: dangelotecno@libero.it 

d’aSCenzo domeniCo 

arSSa Servizio fitoSanitario 

regionale, regione abruzzo 

via nazionale, 38, i-65010 

villanova di CePagatti (Pe) 

e-mail: d.dascenzo@arssa-mail.it 

de CreSCenzo raffaello 




e-mail: raff.decrescenzo@libero.it 

de CurtiS filiPPo 

univerSità degli Studi del moliSe, 

diPartimento SAVA 

via f. de SanCtiS 

i-86100 (Cb) 

e-mail: decurtis@unimol.it 

de leonardiS Silvana 

diPartimento di biologia e Patologia 

vegetale, univerSità di bari 

via orabona 4, i-70125 (ba) 

tel: 080-5443470 

e-mail: deleonardis@botanica.uniba.it 

de miCColiS angelini rita milvia 


Piante e miCrobiologia aPPliCata, 

univerSità di bari, 

via amendola, 165/a, i-70126 (ba) 

e-mail: milvia.demiccolis@agr.uniba.it 

00 

d’erCole alfredo 

agriSyStem 

via S. roCCo, 10, villafonSina (Ch) 

tel: 338-9501793 

fax: 0873-921015 

e-mail: a.dercole@agrisystem.net 

d’erCole giamPaolo 




e-mail: Giampy_ 983@libero.it 

d’erColi moreno 

eoS grouP Srl 

via terraCini, 20, i-63035 offida (aP) 

tel: 328-6407195 

fax: 0736-889273 

e-mail: morenodercoli@alice.it 

di domeniCo marCo 

libero ProfeSSioniSta 

via Po, 21, i-64018 tortoreto (te) 

tel: 338-7332799 

e-mail: atmarco@tiscali.it 

di donato yader 

induStrie rolli alim. SPa 

via nazionale, 544, roSeto degli 

abruzzi (te) 

di marCo Stefano 

Cnr – ibimet, bologna 

e-mail: s.dimarco@ibimet.cnr.it 

di nella niCola 

diPartimento di SCienze ambientali 

e delle Produzioni vegetali, 


marChe 


e-mail: nicola.dinella@gmail.com


di Pietro daniele 

libero ProfeSSioniSta 

via giuSePPe SaCConi, 59 

i-63040 maltigliano (aP) 

tel: 333-8937340 

fax: 0736-324003 

e-mail: dandip@tin.it 

faoro franCo 


vegetale, univerSità di milano 

e Cnr, iStituto di virologia 

vegetale, via Celoria 2 


tel: 02-50316786 

fax: 02-50316781 

e-mail: franco.faoro@unimi.it 

faretra franCo 




via amendola, 165/a, i-70126 bari 

tel: 080-5443052 

e-mail: faretra@agr.uniba.it 

feliziani eriCa 




e-mail: ericafelix@tiscali.it 

fenuCCi maria beatriCe 




e-mail: baciviola@yahoo.it 

ferretti luCa 



via C.g. bertero, 22, i-00156 (rm) 

tel: 06-82070223 

0 

fax: 06-82070246 

e-mail: luca.ferretti@entecra.it 

ferrigo davide 




agriPoliS, viale dell’univerSità, 16 


tel: 049-8272887 

fax: 049-8272890 

e-mail: davide.ferrigo@unipd.it 

franCeSChetti Sofia 




e-mail: sofia.franceschetti@libero.it 

frega natale giuSePPe 




e-mail: n.g.frega@univpm.it 

friSullo Salvatore 

diPartimento di SCienze agroambientali, 

ChimiCa e difeSa 

vegetale, univerSità di foggia 

via naPoli, 25, i-71100 (fg) 

e-mail: s.frisullo@unifg.it 

galletti Stefania 

Cra-Cin Centro di riCerCa Per le 

Colture induStriali 

via di CortiCella 133, i-40129 (bo) 

tel: 051-6316836 

fax: 051-374857 

e-mail: stefania.galletti@entecra.it 

gammino vinCenza 


marChe, faColtà di agraria



e-mail: vincygammino@hotmail.it 

garau raimondo 


Piante, univerSità di SaSSari 

via e. de niCola, 1 i-07100 (SS) 

e-mail: garau@uniss.it 

garofalo CriStiana 

diPartimento di SCienze alimentari, 

agro-ingegneriStiChe, fiSiChe, 

eConomiCo-agrarie e del territorio, 


marChe, via breCCe bianChe 

i-60131 (an) 

tel: 071-2204782 

fax: 071-2204988 

e-mail: c.garofalo@univpm.it 

gatti Carlo 


via nazionale, 544 

roSeto degli abruzzi (te) 

tel: 335-8330389 

ghermandi guido 

agriteS Srl 

tel: 338-2537693 

fax: 051-6067043 

e-mail: guido.ghermandi@agrites.it 

griSan Simone 

diPartimento di biologia aPPliCata 

alla difeSa delle Piante, univerSità 

di udine 

via delle SCienze, 208 

i-33100 (ud) 

tel: 0432-550521 

fax: 0432-558501 

e-mail: Simone.Grisan@uniud.it 

02 

iaCobelliS niCola Sante 

diPartimento di biologia, difeSa 

e bioteCnologie agro foreStali, 

univerSità della baSiliCata 

viale dell’ateneo luCano, 10 

i-85100 (Pz) 

tel: 0971-205498 

fax: 0971-205702 

e-mail: iacobellis@unibas.it 

ianni nereo 




e-mail: nereo.ianni@hotmail.it 

ilardi vinCenza 

Cra- Centro di riCerCa Per la 



i-00156 (rm) 

tel: 06-82070371 

fax: 06-82070372 

e-mail: vincenza.ilardi@entecra.it 

innella Carmine 

regione Piemonte, Settore fitoSanitario 

tel: 338-5954730 

e-mail: carmineinnella@hotmail.it 

iriti marCello 


vegetale, univerSità di milano e 

Cnr, iStituto di 

virologia vegetale 

via Celoria 2, i-20133 milano 

tel: 02-50316766 

fax: 02-50316782 

e-mail: marcello.iriti@unimi.it


landi luCia 





i-60131 (an) 

tel: 071-2204871 

fax: 071-2204856 

e-mail: l.landi@univpm.it 

lima giuSePPe 



via f. de SanCtiS, CamPobaSSo 

tel: 0874-404659 

fax: 0874-404855 

e-mail: lima@unimol.it 

linSer arnold 

bluline, via nazionale, 206/b 

i-40051 altedo (bo) 

tel: 051-6601172 

fax: 051-870162 

e-mail: a.linser@kwizda.it 

lorito matteo 

diPartimento di arboriColtura, 

botaniCa e Patologia vegetale, 

univerSità di naPoli “federiCo ii”, 


tel: 081-2539376 

fax: 081-2539372 

e-mail: lorito@unina.it 

maini Paolo 

Studio alboran 

tel: 054-2674223 

e-mail: alboran@fastmail.it 

martelli giovanni Paolo 




03 

via amendola, 165/a, 

i-70126 (ba) 

tel: 080-5442914 

e-mail: martelli@agr.uniba.it 

maruCCi andrea 

aSSam, via vargo 7 

i- 63030 (aP) 

tel: 347-5442914 

e-mail: sonno@inwind.it 

marzaChì CriStina 

iStituto di virologia vegetale, Cnr, 

Strada delle CaCCe, 73 

i-10135 (to) 

tel: 011-3977926 

fax: 011-343809 

e-mail: c.marzachi@ivv.cnr.it 

maSCiulli aleSSio 

faColtà di agraria, univerSità 

PoliteCniCa delle marChe 

via breCCe bianChe 

i-60131 (an) 

e-mail: bruno.masciulli@virgilio.it 

merCadante luCa 





i-60131 (an) 

e-mail: lucamercadante@alice.it 

miazzi moniCa 




via amendola, 165/a 

i-70126 (ba) 

e-mail: m.miazzi@gr.uniba.it


miotti luigi 

Cra-vit Centro di riCerCa Per la 

vitiColtura 

viale xviii aPrile, 26 

i-31015 Conegliano veneto (tv) 

tel: 0438-456711 

fax: 0438-450773 

e-mail: luigi.miotti@uniud.it 

moretti antonio 


via nazionale, 544 

roSeto degli abruzzi (te) 

tel: 333-5466443 

e-mail: antonio.moretti@rolli.it 

moretti ChiaraluCe 



via borgo xx giugno, 74, 

i- 06121 (Pg) 

tel: 075-5856467 

fax: 075-5856482 

e-mail: chiaraluce.moretti@unipg.it 

murolo Sergio 





i-60131 (an) 

tel: 071-2204697 

fax: 071-2204856 

e-mail: s.murolo@univpm.it 

murri giorgio 





i-60131 (an) 

e-mail: g.murri@univpm.it 

04 

muSetti rita 



di udine, via delle SCienze, 208 

i-33100 (ud) 

tel: 0432-558521 

fax: 0432-558501 

e-mail: rita.musetti@uniud.it 

mutto aCCordi Sergio 




agriPoliS, viale dell’univerSità, 16, 


tel: 049-8272877 

fax: 049-8272890 

e-mail: sergio.muttoaccordi@unipd.it 

nardi Sandro 

aSSam, Servizio fitoSanitario, 

regione marChe, via alPi, 21 

i-60131 (an) 

e-mail: nardi_sandro@assam.marche.it 

neri davide 





i-60131 (an) 

tel: 071-2204431 

fax: 071-2204856 

e-mail: d.neri@univpm.it 

oCChionero donato 




e-mail: ragazzofortunato@gmail.com


orfei maurizio 



borgo xx giugno, 74 

i-06121 (Pg) 

tel: 075-5856463 

fax: 075-5856482 

e-mail: mauorfei@alice.it 

oSler ruggero 




i-33100 (ud) 

tel: 0432-558500 

fax: 0432-558501 

e-mail: Osler@uniud.it 

PaCe edoardo 




e-mail: pacedo_it@yahoo.it 

PaCetti marCo 


marChe, Piazza roma, 22 

i-60121 (an) 

e-mail: rettore@univpm.it 

PaCi fabio 

xeda italia Srl 

via f. guarini, 13/a 

i-47100 forlì (fC) 

e-mail: fabio@xeda.it 

PaCiolla CoStantino 

diPartimento di biologia e Patologia 

vegetale, univerSità degli Studi di 

bari, via orabona 4 

i-70125 (ba) 

tel: 080-5443557 

fax: 080-5443557 

e-mail: paciolla@botanica.uniba.it 

05 

PaCioni Pierangelo 



via breCCe bianChe 

i-60131 (an) 

e-mail: pieranglopacioni@virgilio.it 

Paduano Chiara 




i-33100 (ud) 

tel: 0432-558503 

e-mail: chiara.paduano@uniud.it 

PanebianCo Salvina 

diPartimento di SCienze e teCnologie 

fitoSanitarie, univerSità di Catania, 

via S. Sofia, 100 

i-95123 (Ct) 

tel: 095-7147399 

e-mail: salvina.panebianco@unict.it 

PaSquini graziella 




i- 00156 (rm) 

tel: 06-82070221 

fax: 06-82070246 

e-mail: graziella.pasquini@entecra.it 

PaStore mariella 

Cra-unità di riCerCa Per la 

fruttiColtura 

via torrino, 3 

i-81100 (Ce) 

tel: 0823-256240 

fax: 0823-493381 

e-mail: pastore2000@entecra.it


Patrizio federiCo 




e-mail: fedepatri@virgilio.it 

PelliConi fabio 

CdS Ca ravenna 

via bendandi, 11 

i-48018 faenza (ra) 

tel: 348-3960002 

fax: 0546-30265 

e-mail: pelliconi@consorzioagrarioravenna.it 

PeCa amedeo 




e-mail: pppkk89@hotmail.it 

Perilli aleSSandra 


PoliteCniCa delle marChe, 


e-mail: alessandra2209 986@hotmail.it 

Piattoni federiCa 




viale g. fanin 46 

i-40127 (bo) 

e-mail: federica.piattoni@unibo.it 

Pierleoni davide 

iStituto mediterraneo di 

CertifiCazione,, via PiSaCane, 32, 

i-60019 Senigallia (an) 

e-mail: d.pierleoni@imcert.it 

Poggi Pollini Carlo 

diPartimento di SCienze e teCnologie 

agrarie, univerSità di bologna, 

06 


i-40127 (bo) 

tel: 051-2096725 

e-mail: carlo.poggipollini@unibo.it 

Polizzotto raChele 




i-33100 (ud) 

tel: 0432-558530 

fax: 0432-558501 

e-mail: rachele.polizzotto@uniud.it 

PiSCiCelli marCo 

valagro SPa, z.i, 

i-66040 ateSSa (Ch) 

tel: 335-7776678 

e-mail: m.piscicelli@valagro.com 

Piunti alfredo 

Pbe Srl, 

via bore teatino, 4 

i-63013 grottammare (aP) 

tel: 0735-631227 

fax: 0735-632150 

e-mail: info@pbesrl.it 

PomPi valter 




i- 00156 roma 

tel: 06-82070303 

e-mail: valter.pompi@entecra.it 

Portillo ivan 




viale g. fanin 46 


tel: 051-2096566


fax: 051-2096547 

e-mail: ivanportillo785@hotmail.com 

Prota vanda 


Piante, univerSità di SaSSari 

via e. de niCola, 1 

i-07100 (SS) 

e-mail: vprota@uniss.it 

quaglia mara 




i-06121 (Pg) 

tel: 075-5856461 

fax: 075-5856482 

e-mail: mara.quaglia@unipg.it 

ramazzotti Paolo 




e-mail: paolorama@libero.it 

ranieri renzo 


regione marChe 

via alPi, 21, i-60131 (an) 

tel: 071-8081 

fax: 071-85979 

e-mail: ranieri_renzo@assam.marche.it 

reCChiuti bruno 

brunorecchiuti@hotmail.it 

roberti roberta 





i-40127 (bo) 

tel: 051-2096568 

07 

fax: 051-2096537 

e-mail: roberta.roberti@unibo.it 

romanazzi gianfranCo 





i-60131 (an) 

tel: 071-2204336 

fax: 071-2204856 

e-mail: g.romanazzi@univpm.it 

roSSi andrea 




e-mail: rossi.andrea84@gmail.com 

roSSini elena 


regione marChe 

via alPi, 21, i-60131 (an) 

tel: 071-808231 

fax: 071-85979 

e-mail: elena_rossini@assam.marche.it 

ruoCCo miChelina 

iPP-Cnr iStituto Per la Protezione 

delle Piante Sez. PortiCi 


tel: 081-2539337 

fax: 081-2539339 

e-mail: ruocco@ipp.cnr.it 

Salerno PaSquale 

SoCietà Prodotti agoChimiCi 

SPagro 

e-mail: info@spagro.it


Salvi Selene 

diPartimento di SCienze alimentari, 

agro-ingegneriStiChe, fiSiChe, 

eConomiCo-agrarie e del territorio, 



i-60131 (an) 

e-mail: s.salvi@univpm.it 

Salvati niCole 




e-mail: salvati.nicole@libero.it 

SantiloCChi rodolfo 

diPartimento di SCienze ambientali e 

delle Produzioni vegetali, faColtà 

di agraria, univerSità PoliteCniCa 

delle marChe, via breCCe bianChe, 

i-60131 (an) 

e-mail: r.santilocchi@univpm.it 

Santini marilla 





i-60131 (an) 

tel: 071-2204697 

fax: 071-2204856 

e-mail: marilla8 @libero.it 

SCala aniello 

univerSità di firenze, 

Piazza delle CaSCine, 28 

i-50044 (fi) 

tel: 055-4573227 

fax: 055-4573232 

e-mail: aniello.scala@unifi.it 

08 

Severini CriStina 




e-mail zucchetta@hotmail.it 

Silletti maria roSaria 

Centro di riCerCa e SPerimentazione 

in agriColtura “baSile Caramia”, 

via CiSternino, 281 

i-70011 loCorotondo (ba) 

tel: 080-4313071 

fax: 080-43 0007 

e-mail: mrsilletti@libero.it 

tarraCioni aleSSandro 




tilli Pier Carmine 




e-mail: tillipier@yahoo.it 

ulPiani Paolo 

univerSità di torino 

e-mail: paoloulpiani@virgilio.it 

virgili Settimio 

aSSam, regione marChe 

via alPi, 21, i-60131 (an) 

e-mail: virgili_settimio@assam.marche.it 

vitullo domeniCo 



via f. de SanCtiS, CamPobaSSo 

e-mail: domenico.vitullo@unimol.it 

volPe daniela 

diPartimento di SCienze agrarie e




i-06121 (Pg) 

tel: 075-5856241 

fax: 075-5856239 

e-mail: daniela.volpe@agr.unipg.it 

zaCCardelli maSSimo 

Cra-Centro di riCerCa Per 

l’ortiColtura, Struttura di 

battiPaglia, 

Strada Statale 18 

i-84091 battiPaglia (Sa) 

tel: 0828-305917 

fax: 0828-340169 

e-mail: massimo.zaccardelli@entecra.it 

zadra Claudia 




i-06121 (Pg) 

tel: 075-5856242 

fax: 075-5856239 

e-mail: zadra@unipg.it 

09 

zazzerini antonio 




i-06121 (Pg) 

e-mail: patveg@unipg.it 

zeChini d’aulerio aldo 



univerSità di bologna, viale g. 

fanin, 46, i-40127 (bo) 

tel: 051-2096552 

fax: 051-2096565

Stampa eseguita da: 

Tipografia CSR s.r.l – Via di Pietralata, 157 – 00158 Roma – tel. 06 4182113 

Chiuso in redazione 12 Giugno 2009 

Finito di stampare nel mese di Giugno 2009

Atti convegno - Phytoplasmarecovery.net

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