Protocollo per la gestione di un allevamento in cui si sospetti la ...
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<strong>Protocollo</strong> <strong>per</strong> <strong>la</strong> <strong>gestione</strong> <strong>di</strong> <strong>un</strong> <strong>allevamento</strong> <strong>in</strong> <strong>cui</strong> <strong>si</strong><br />
<strong>sospetti</strong> <strong>la</strong> vacc<strong>in</strong>azione non autorizzata con vacc<strong>in</strong>o RB51<br />
Fabrizio De Mas<strong>si</strong>s<br />
Sem<strong>in</strong>ario “La Brucello<strong>si</strong> tra <strong>di</strong>agnostica e ricerca”<br />
Teramo, 11 - 12 ottobre 2012
Introduzione<br />
• Deci<strong>si</strong>one del<strong>la</strong> Commis<strong>si</strong>one Europea 2002/598/CE<br />
- L’autorità competente presenta al<strong>la</strong> Commis<strong>si</strong>one e agli altri Stati membri<br />
<strong>in</strong>formazioni dettagliate re<strong>la</strong>tive al programma <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>azione, <strong>in</strong> partico<strong>la</strong>re<br />
<strong>la</strong> zona <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>azione, l’età degli animali da vacc<strong>in</strong>are e il <strong>si</strong>stema <strong>di</strong> test<br />
utilizzato <strong>per</strong> identificare gli animali vacc<strong>in</strong>ati.<br />
• In caso <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>azione <strong>in</strong> età prepubere gli anticorpi anti‐RB51<br />
scompaiono dopo circa c<strong>in</strong>que me<strong>si</strong> e mezzo<br />
• La prova <strong>di</strong> <strong>in</strong>tradermoreazione al<strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a è <strong>in</strong> grado <strong>di</strong> identificare<br />
gli animali <strong>in</strong>fetti da B. abortus ma negativi a SAR e FDC<br />
- (Sen<strong>si</strong>bilità=70%‐75% ‐ Specificità=95%‐100%)<br />
• Produzione, standar<strong>di</strong>zzazione e valutazione <strong>di</strong> <strong>un</strong>a brucell<strong>in</strong>a RB51<br />
omologa e stu<strong>di</strong>o <strong>di</strong> <strong>un</strong> <strong>si</strong>stema <strong>di</strong> test <strong>per</strong> identificare bov<strong>in</strong>i vacc<strong>in</strong>ati<br />
con RB51
Materiali e meto<strong>di</strong><br />
• 15 bov<strong>in</strong>e <strong>di</strong> razza frisona, <strong>di</strong> età compresa tra 4 e 6 me<strong>si</strong><br />
- 10 vacc<strong>in</strong>ate con 2 ml <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>o RB51 (10 x 10 9 CFU)<br />
- 5 mantenute come controlli (2 ml <strong>di</strong> soluzione sal<strong>in</strong>a sterile)<br />
• Brucell<strong>in</strong>a RB51 prodotta dall’ICT<br />
- Manuale OIE <strong>per</strong> sterilità e <strong>in</strong>no<strong>cui</strong>tà<br />
- Bercovich et al., 1998 (EU Ph. For TB) <strong>per</strong> <strong>la</strong> potenza,<br />
• Brucell<strong>in</strong>a Commerciale<br />
- Brucellergene OCB® (Synbiotics corporation, France)<br />
• SAR e FDC c<strong>la</strong>s<strong>si</strong>che (Manuale dell’OIE, 2004)<br />
• FDC‐RB51 secondo Adone et al. (1999; 2001)
Materiali e meto<strong>di</strong><br />
• Inocu<strong>la</strong>zione <strong>in</strong>tradermica: 414 gg dal<strong>la</strong> vacc<strong>in</strong>azione<br />
- 0,1 ml <strong>di</strong> Brucell<strong>in</strong>a RB51 e 0,1 ml <strong>di</strong> Brucellergene OCB®
Materiali e meto<strong>di</strong><br />
• SAR e FDC c<strong>la</strong>s<strong>si</strong>che, FDC e FDC‐RB51:<br />
- Giorni 6, 9, 13, 16, 20, 28 e 34 dal<strong>la</strong> <strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione<br />
delle brucell<strong>in</strong>e<br />
• Os<strong>si</strong>a:<br />
- Giorni 420, 423, 427, 430, 434, 442, e 448 dal<strong>la</strong><br />
<strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione delle brucell<strong>in</strong>e
Risultati: <strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione Brucell<strong>in</strong>e<br />
Sen<strong>si</strong>bilità, specificità delle brucell<strong>in</strong>e, e <strong>in</strong>tervalli <strong>di</strong> cre<strong>di</strong>bilità al 95%<br />
<strong>in</strong> re<strong>la</strong>zione all’aumento <strong>di</strong> spessore del<strong>la</strong> cute al <strong>si</strong>to d’<strong>in</strong>oculo (72h)<br />
Soglia <strong>di</strong> po<strong>si</strong>tività Allergene Sen<strong>si</strong>bilità Specificità<br />
>0 mm<br />
≥0,5 mm<br />
≥1 mm<br />
≥1,5 mm<br />
≥2 mm<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 70% (39‐89,1%) 80% (35,9‐95,7%)<br />
Brucellergene OCB ® 50% (23,4‐76,6%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 70% (39‐89,1%) 80% (35,9‐95,7%)<br />
Brucellergene OCB ® 50% (23,4‐76,6%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 60% (30,8‐83,3%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucellergene OCB ® 40% (16,7‐69,2%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 40% (16,7‐69,2%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucellergene OCB ® 30% (10,9‐61%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 40% (16,7‐69,2%) 100% (41,8‐100%)<br />
Brucellergene OCB ® 10% (2,3‐41,3%) 100% (41,8‐100%)
• SAR e FDC c<strong>la</strong>s<strong>si</strong>che: entrambe negative<br />
• Titoli FDC‐RB51 nelle bov<strong>in</strong>e vacc<strong>in</strong>ate:<br />
Risultati: <strong>si</strong>erologia
Risultati: FDC‐RB51<br />
• Distribuzione <strong>per</strong>centuale degli animali saggiati e<br />
correttamente identificati come vacc<strong>in</strong>ati con RB51
Discus<strong>si</strong>one<br />
• Se <strong>si</strong> pone <strong>la</strong> soglia d’ispes<strong>si</strong>mento = ≥ 1 mm<br />
- Se = 60% ; Sp = 100% <strong>per</strong> <strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a RB51<br />
- Se = 40% ; Sp = 100% <strong>per</strong> Brucellergene OCB®<br />
• La <strong>di</strong>fferenza non è risultata <strong>si</strong>gnificativa<br />
• La prova <strong>di</strong> <strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione <strong>in</strong>tradermica ha <strong>un</strong>a<br />
bassa sen<strong>si</strong>bilità = il suo uso è limitato a test <strong>di</strong><br />
screen<strong>in</strong>g
Discus<strong>si</strong>one<br />
• Pos<strong>si</strong>bilità <strong>di</strong> compensare <strong>la</strong> bassa sen<strong>si</strong>bilità del<strong>la</strong> prova<br />
<strong>in</strong>tradermica tramite l’associazione con <strong>la</strong> FDC‐RB51<br />
- Tutte le bov<strong>in</strong>e <strong>di</strong> controllo hanno dato risultato negativo al<strong>la</strong> FDC‐RB51<br />
- Tutte le bov<strong>in</strong>e vacc<strong>in</strong>ate hanno dato risultato po<strong>si</strong>tivo al<strong>la</strong> prova FDC‐RB51 aI<br />
giorno 9 e aI giorno 16 dall’<strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione del<strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a<br />
- Almeno 9 bov<strong>in</strong>e su 10 (Se=90%) hanno dato risultato po<strong>si</strong>tivo al<strong>la</strong> FDC‐RB51<br />
tra il giorno 9 e il giorno 20 dall’<strong>in</strong>ocu<strong>la</strong>zione del<strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a<br />
- Le due bov<strong>in</strong>e vacc<strong>in</strong>ate che sono risultate negative al<strong>la</strong> FDC‐RB51 al giorno 13<br />
e al giorno 20 rispettivamente, sono risultate po<strong>si</strong>tive al<strong>la</strong> <strong>in</strong>tradermoreazione<br />
al<strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a RB51<br />
• L’uso del<strong>la</strong> <strong>in</strong>tradermoreazione al<strong>la</strong> brucell<strong>in</strong>a RB51 e del<strong>la</strong><br />
FDC‐RB51 <strong>in</strong> parallelo ha identificato tutti gli animali vacc<strong>in</strong>ati<br />
s<strong>per</strong>imentalmente con vacc<strong>in</strong>o RB‐51
Conclu<strong>si</strong>oni<br />
• La prova <strong>in</strong>tradermica può essere usata <strong>per</strong> identificare gli<br />
allevamenti dove èstato fatto uso <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>o RB51<br />
• Entrambi gli antigeni (RB51 and Brucellergene) possono essere<br />
usati, purché <strong>si</strong> abbia <strong>in</strong> con<strong>si</strong>derazione <strong>la</strong> loro <strong>di</strong>fferente<br />
sen<strong>si</strong>bilità<br />
• La brucell<strong>in</strong>a RB51 produce <strong>un</strong>a risposta umorale anamnestica<br />
rilevabile con <strong>la</strong> FDC‐ RB51<br />
• I risultati dello stu<strong>di</strong>o suggeriscono che l’ associazione tra<br />
Brucell<strong>in</strong>a RB51 e FDC‐RB51 possa rappresentare <strong>un</strong> <strong>si</strong>stema<br />
<strong>di</strong>agnostico affidabile ai f<strong>in</strong>i dell’identificazione degli animali<br />
vacc<strong>in</strong>ati con RB51
• F. De Mas<strong>si</strong>s, A. Giovann<strong>in</strong>i,<br />
G.F. Ronchi, M. Tittarelli, M.<br />
Di Ventura, D. Nann<strong>in</strong>i & V.<br />
Caporale<br />
- Uso del<strong>la</strong> fissazione del<br />
complemento e del test<br />
d’<strong>in</strong>tradermoreazione al<strong>la</strong><br />
brucell<strong>in</strong>a <strong>per</strong> identificare<br />
bov<strong>in</strong>i vacc<strong>in</strong>ati con Brucel<strong>la</strong><br />
abortus ceppo RB51<br />
- Use of complement fixation<br />
and brucell<strong>in</strong> sk<strong>in</strong> tests to<br />
identify cattle vacc<strong>in</strong>ated with<br />
Brucel<strong>la</strong> abortus stra<strong>in</strong> RB51<br />
Approfon<strong>di</strong>menti<br />
• Volume 41 (4) October‐<br />
December 2005 281‐299<br />
• http://www.izs.it/vet_italian<br />
a/2005/summ4/291.htm
Aspetti <strong>di</strong> Sanità Pubblica<br />
• RB51 ère<strong>si</strong>stente al<strong>la</strong> rifampic<strong>in</strong>a<br />
- il pr<strong>in</strong>cipale antibiotico utilizzato nel<strong>la</strong> terapia<br />
dell'<strong>in</strong>fezione umana da Brucel<strong>la</strong> spp., <strong>in</strong> partico<strong>la</strong>re nei<br />
pazienti che non possono essere trattati con<br />
streptomic<strong>in</strong>a<br />
• donne <strong>in</strong> gravidanza<br />
• bamb<strong>in</strong>i<br />
• ca<strong>si</strong> <strong>di</strong> endocar<strong>di</strong>te brucel<strong>la</strong>re<br />
• neurobrucello<strong>si</strong><br />
• Sierologia negativa nell'uomo<br />
- l'<strong>in</strong>fezione nell’uomo non è rilevabile a meno <strong>di</strong> <strong>un</strong>o<br />
specifico sospetto,
Aspetti <strong>di</strong> Sanità Pubblica<br />
• Il ceppo vacc<strong>in</strong>ale viene elim<strong>in</strong>ato con il <strong>la</strong>tte<br />
- quando <strong>la</strong> vacc<strong>in</strong>azione èeseguita durante <strong>la</strong> <strong>la</strong>ttazione<br />
- <strong>per</strong> <strong>per</strong>io<strong>di</strong> <strong>di</strong> tempo anche prol<strong>un</strong>gati<br />
- <strong>in</strong> maniera <strong>in</strong>termittente e non cont<strong>in</strong>ua nel tempo<br />
• RB51 somm<strong>in</strong>istrato a bov<strong>in</strong>e gravide può e<strong>si</strong>tare<br />
<strong>in</strong> aborto<br />
- Rischio <strong>di</strong> <strong>di</strong>s<strong>per</strong><strong>si</strong>one del ceppo vacc<strong>in</strong>ale nell’ambiente<br />
attraverso gli <strong>in</strong>vogli e liqui<strong>di</strong> fetali
Aspetti <strong>di</strong> Sanità Pubblica<br />
• L’utilizzo del vacc<strong>in</strong>o vivo RB51, <strong>per</strong>tanto, può<br />
essere autorizzato <strong>un</strong>icamente dal M<strong>in</strong>istero<br />
del<strong>la</strong> Salute, nell’ambito <strong>di</strong> <strong>un</strong>o specifico<br />
protocollo sanitario che ne preveda l’utilizzo<br />
sotto lo stretto controllo dei servizi veter<strong>in</strong>ari<br />
ufficiali, con l’applicazione <strong>di</strong> tutte le misure<br />
atte a ridurre i pos<strong>si</strong>bili rischi <strong>per</strong> <strong>la</strong> salute<br />
animale e pubblica.
<strong>Protocollo</strong><br />
• Per confermare il sospetto <strong>di</strong> utilizzo non<br />
autorizzato <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>o vivo RB51 è pos<strong>si</strong>bile<br />
sottoporre gli animali al seguente protocollo<br />
<strong>di</strong>agnostico:<br />
- prelievo <strong>di</strong> sangue da sottoporre FDC‐RB51<br />
(prelievo tempo zero),<br />
- prova brucell<strong>in</strong>ica RB51 su tutti i capi presenti <strong>in</strong><br />
azienda, <strong>di</strong> età su<strong>per</strong>iore all’anno,<br />
- ulteriore prelievo <strong>di</strong> sangue a <strong>di</strong>stanza <strong>di</strong> 9‐16<br />
giorni da sottoporre al<strong>la</strong> prova <strong>di</strong> FDC‐RB51.
<strong>Protocollo</strong><br />
• È altresì utile poter <strong>di</strong>sporre <strong>di</strong> <strong>un</strong> f<strong>la</strong>cone del vacc<strong>in</strong>o<br />
sequestrato al f<strong>in</strong>e<br />
- tipizzare il ceppo con <strong>cui</strong> èstato prodotto,<br />
- verificarne <strong>la</strong> purezza,<br />
- verificare <strong>la</strong> carica batterica <strong>in</strong> CFU/ml,<br />
- escludere <strong>la</strong> presenza <strong>di</strong> germi contam<strong>in</strong>anti.<br />
• Se ritenuto opport<strong>un</strong>o, potranno essere prelevati<br />
campioni biologici <strong>per</strong> <strong>un</strong>a identificazione genetica<br />
degli animali presenti <strong>in</strong> <strong>allevamento</strong>
Misure sanitarie<br />
• Misure sanitarie da applicare <strong>in</strong> caso <strong>di</strong> utilizzo non<br />
autorizzato <strong>di</strong> vacc<strong>in</strong>o vivo RB51<br />
• <strong>la</strong> vacc<strong>in</strong>azione non esclude <strong>la</strong> pos<strong>si</strong>bilità che gli animali <strong>si</strong><br />
<strong>in</strong>fett<strong>in</strong>o con il ceppo selvaggio <strong>di</strong> Brucel<strong>la</strong> abortus,<br />
• <strong>la</strong> presenza <strong>di</strong> animali po<strong>si</strong>tivi alle prove ufficiali <strong>per</strong> brucello<strong>si</strong><br />
non può essere dovuta a reazione <strong>di</strong> orig<strong>in</strong>e vacc<strong>in</strong>ale, ma è<br />
evidenza del<strong>la</strong> presenza dell'<strong>in</strong>fezione brucel<strong>la</strong>re all'<strong>in</strong>terno<br />
dell'<strong>allevamento</strong>.<br />
• Il risanamento dell'<strong>allevamento</strong> deve <strong>si</strong>curamente <strong>in</strong>iziare<br />
utilizzando le prove ufficiali <strong>per</strong> <strong>in</strong><strong>di</strong>viduare i capi <strong>in</strong>fetti da<br />
Brucel<strong>la</strong> abortus, abbattendo i capi risultati po<strong>si</strong>tivi.
Abbattimento<br />
STOP<br />
ANIMALI ADULTI<br />
Esami <strong>per</strong> Brucel<strong>la</strong><br />
abortus ceppo selvaggio<br />
po<strong>si</strong>tivo negativo<br />
<strong>Protocollo</strong><br />
Controllo<br />
brucello<strong>si</strong><br />
normale con<br />
antigene<br />
ufficiale
Misure sanitarie<br />
• In caso <strong>di</strong> somm<strong>in</strong>istrazione non autorizzata <strong>di</strong> RB51,<br />
non possono essere note:<br />
- le do<strong>si</strong> e le modalità <strong>di</strong> somm<strong>in</strong>istrazione,<br />
- <strong>la</strong> durata dell'elim<strong>in</strong>azione del ceppo vacc<strong>in</strong>ale con il <strong>la</strong>tte,<br />
- il titolo batterico al quale questo viene elim<strong>in</strong>ato.<br />
• Non èpos<strong>si</strong>bile basar<strong>si</strong> sui dati riportati nel<strong>la</strong><br />
letteratura scientifica, che <strong>si</strong> basano su<br />
somm<strong>in</strong>istrazioni <strong>in</strong> con<strong>di</strong>zioni control<strong>la</strong>te<br />
• Sono <strong>per</strong>tanto necessarie misure supplementari <strong>di</strong><br />
tute<strong>la</strong> del<strong>la</strong> salute pubblica
Misure sanitarie<br />
• iso<strong>la</strong>mento <strong>di</strong> tutti gli animali <strong>per</strong> i quali è pos<strong>si</strong>bile accertare<br />
l'avvenuta somm<strong>in</strong>istrazione del vacc<strong>in</strong>o,<br />
• <strong>di</strong>vieto <strong>di</strong> utilizzo <strong>per</strong> alimentazione umana del <strong>la</strong>tte<br />
- proveniente dagli animali <strong>in</strong>fetti (ceppo selvaggio),<br />
- proveniente da tutti quegli animali <strong>per</strong> i quali non possa essere esclusa<br />
l'avvenuta vacc<strong>in</strong>azione.<br />
• parto <strong>in</strong> con<strong>di</strong>zioni <strong>di</strong> iso<strong>la</strong>mento,<br />
• esami <strong>di</strong>retti <strong>per</strong> <strong>la</strong> ricerca <strong>di</strong> Brucel<strong>la</strong> abortus ceppo RB51<br />
- su liqui<strong>di</strong> vag<strong>in</strong>ali e <strong>la</strong>tte,<br />
- al momento del parto succes<strong>si</strong>vo degli animali <strong>per</strong> i quali non possa<br />
essere esclusa l'avvenuta vacc<strong>in</strong>azione,<br />
• controlli sugli animali che non hanno ancora raggi<strong>un</strong>to <strong>la</strong><br />
pubertà<br />
- allo scopo <strong>di</strong> escludere <strong>la</strong> <strong>per</strong><strong>si</strong>stenza dell'<strong>in</strong>fezione da RB51.
Riacqui<strong>si</strong>zione qualifica<br />
• macel<strong>la</strong>re tutti i capi che hanno reagito po<strong>si</strong>tivamente<br />
- al<strong>la</strong> prova brucell<strong>in</strong>ica o<br />
- al<strong>la</strong> FDC‐ RB51;<br />
• mandare pos<strong>si</strong>bilmente <strong>in</strong> asciutta i capi negativi rimanenti<br />
• effettuare rego<strong>la</strong>rmente <strong>la</strong> fecondazione e portare avanti <strong>la</strong><br />
gravidanza <strong>di</strong> questi animali<br />
- pos<strong>si</strong>bilmente s<strong>in</strong>cronizzando le fecondazioni <strong>in</strong> maniera da facilitare<br />
l'iso<strong>la</strong>mento <strong>in</strong><strong>di</strong>viduale o almeno <strong>per</strong> piccoli gruppi <strong>di</strong> animali al<br />
momento del parto;<br />
• ripetere settimanalmente <strong>per</strong> almeno 3 volte il prelievo e gli<br />
esami sul <strong>la</strong>tte dopo il parto<br />
• abbattere i capi risultati po<strong>si</strong>tivi agli esami <strong>di</strong>retti;<br />
• liberalizzare i capi risultati negativi a tutti gli esami;
Riacqui<strong>si</strong>zione qualifica<br />
• l'<strong>allevamento</strong> rimarrà con qualifica sanitaria<br />
sospesa s<strong>in</strong>o a che:<br />
- non <strong>si</strong>ano elim<strong>in</strong>ati tutti gli animali <strong>per</strong> i quali sarà<br />
stata accertata l’utilizzo non autorizzato del<br />
vacc<strong>in</strong>o vivo RB51<br />
- non saranno state effettuate tutte le prove<br />
necessarie <strong>per</strong> riacqui<strong>si</strong>re <strong>la</strong> qualifica <strong>di</strong><br />
ufficialmente <strong>in</strong>denne da brucello<strong>si</strong> previste dal<strong>la</strong><br />
legis<strong>la</strong>zione vigente
(Asciutta), monta,<br />
gravidanza, parto <strong>in</strong><br />
iso<strong>la</strong>mento<br />
Prova FdC <strong>per</strong> RB51<br />
Prelievo al parto <strong>di</strong> liqui<strong>di</strong> vag<strong>in</strong>ali, prelievo <strong>di</strong> <strong>la</strong>tte da<br />
ripetere f<strong>in</strong>o a 3 volte <strong>per</strong> esami <strong>di</strong>retti<br />
E<strong>si</strong>to<br />
negativo po<strong>si</strong>tivo<br />
Liberalizzazione del<br />
capo<br />
STOP<br />
Animali impuberi<br />
presenti <strong>in</strong> <strong>allevamento</strong><br />
negativa po<strong>si</strong>tiva<br />
Abbattimento<br />
STOP<br />
Prova brucell<strong>in</strong>ica <strong>per</strong> RB51<br />
negativa po<strong>si</strong>tiva<br />
<strong>Protocollo</strong><br />
Abbattimento<br />
STOP
Grazie <strong>per</strong><br />
l’attenzione
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