ANTI-HAV IGG - laboratorioprivitera.it

04855019001V6
Anti-HAV
Anticorpi totali (IgM ed IgG) contro il virus dell’epatite A
Reattivi – soluzioni pronte all’uso
REF 04854977 190
100 test
a) Complesso di rutenio (II) tris(2,2’-bipiridile) (Ru(bpy) 2+
3 ) scatto (CalSet Vials). Incollare le etichette fornite nella confezione sui rispettivi
• Indica gli analizzatori su cui la confezione può essere usata
M Microparticelle rivestite di streptavidina (tappo trasparente),
1 flacone, 6,5 mL:
Elecsys 2010
MODULAR
microparticelle rivestite di streptavidina 0,72 mg/mL; conservante.
cobas e 411 cobas e 601
ANALYTICS E170
R1 Ag dell’HAV (tappo grigio), 1 flacone, 10 mL:
antigene dell’HAV (umano) 40 U/mL (unità Roche); tampone
• • • •
HEPES b 50 mmol/L, pH 7,2; conservante.
R2 Anticorpi anti-HAV~biotina; anticorpi anti-HAV~Ru(bpy) 2+
3
Italiano
(tappo nero), 1 flacone, 10 mL:
anticorpo (murino) monoclonale biotinilato anti-HAV 0,25 µg/mL;
Finalità d’uso
Test immunologico per la determinazione quantitativa in vitro degli
anticorpi totali contro il virus dell’epatite A nel siero e nel plasma umani. La
anticorpo (murino) monoclonale anti-HAV marcato con
un complesso di rutenio 0,15 µg/mL; tampone HEPES
50 mmol/L, pH 7,2; conservante.
determinazione dell’anti-HAV viene impiegata come ausilio nella diagnosi Cal1 Calibratore negativo 1 (tappo bianco), 2 flaconi (liofilizzato)
di un’infezione da HAV pregressa o in corso nonché per il monitoraggio
per 1,0 mL ciascuno:
della risposta immunitaria dopo una vaccinazione contro l’HAV.
siero umano negativo per anti-HAV; conservante.
L’esecuzione dell’ImmunoAssay in ElettroChemiLuminescenza “ECLIA” è Cal2 Calibratore positivo 2 (tappo nero), 2 flaconi (liofilizzato)
destinata all’uso sugli immunoanalizzatori Elecsys e cobas e.
per 1,0 mL ciascuno:
Sommario
Il virus dell’epatite A è un virus contenente RNA privo di involucro che
anti-HAV (umano) ca. 46 IU/L, in siero umano; conservante.
b) HEPES = acido [4-(2-idrossietil)-piperazina]-etansolfonico
appartiene alla famiglia dei picornavirus. Finora sono stati descritti solo un Precauzioni e avvertenze
unico sierotipo umano e 7 genotipi. Il capside virale consiste di 3 proteine Per uso diagnostico in vitro.
(VP1–VP3) che, sulla superficie della particella virale, formano una struttura Osservare le precauzioni normalmente adottate nella manipolazione
immunodominante e altamente conservata tra tutti i genotipi, contro la quale è dei reagenti di laboratorio.
diretta la risposta immunitaria dopo vaccinazione o dopo infezione naturale. 1
Lo smaltimento di tutti i rifiuti deve avvenire secondo le direttive locali.
L’epatite A è la forma più frequente dell’epatite virale acuta. La trasmissione Scheda dati di sicurezza disponibile su richiesta per gli utilizzatori professionali.
avviene per via oro-fecale. Non è conosciuto un decorso cronico della Tutto il materiale di origine umana deve essere considerato
malattia, né si osserva la persistenza del virus nell’organismo. 2
come potenzialmente infettivo.
Il virus dell’epatite A è una delle cause più frequenti (10–20 %) del
Per la preparazione dei calibratori (Cal1 e Cal2) viene utilizzato solo sangue
decorso fulminante di un’epatite virale. 3
di donatori che sono stati testati individualmente e risultati negativi per
L’anti-HAV (IgM) totale è positivo già all’inizio dell’epatite A. Dopo
la ricerca di HBsAg e di anticorpi anti-HCV e anti-HIV.
un’infezione naturale, gli anticorpi IgG anti-HAV, di solito, sono rilevabili I metodi di dosaggio impiegati sono stati approvati dall’FDA o rilasciati in
per tutta la vita e hanno come effetto la protezione dall’infezione
conformità con la Direttiva Europea 98/79/CE, Allegato II, Lista A.
anche in caso di una reinfezione. 4
Il siero contenente anti-HAV (Cal2) e l’antigene dell’HAV (umano; R1) sono
Oggi sono disponibili vaccini contro l’epatite A nonché vaccini combinati stati inattivati impiegando β-propiolattone e raggi ultravioletti.
contro l’epatite A e l’epatite B. 5 In seguito ad una vaccinazione contro Poiché non è comunque possibile escludere con sicurezza il pericolo di
l’epatite A, gli anticorpi IgG anti-HAV sono rilevabili dopo 2 settimane. infezione con nessuna inattivazione o con nessun metodo di dosaggio,
In caso di un’immunizzazione completa sussiste, normalmente, una
è necessario manipolare il materiale con le stesse precauzioni adottate
protezione pluriennale. 6 Non è stato definito un valore limite per l’immunità, per i campioni prelevati dai pazienti. Nel caso di una esposizione, si deve
ma valori di anti-HAV superiori a 10–20 IU/L vengono generalmente
procedere secondo le specifiche indicazioni sanitarie. 7,8
considerati come protettivi contro un’infezione.
I reattivi non devono essere impiegati dopo la data di scadenza indicata.
I test per la rilevazione degli anticorpi anti-HAV vengono impiegati per la Evitare la formazione di schiuma con tutti i reattivi e tipi di campione
diagnosi di un’epatite A pregressa o in corso. Inoltre servono a monitorare (campioni, calibratori e controlli).
la risposta immunitaria in seguito ad una vaccinazione contro l’HAV.
Utilizzo dei reattivi
Principio del test
I reattivi della confezione, forniti in flaconi compatibili con il sistema,
Principio di competizione. Durata complessiva del test: 18 minuti.
sono pronti all’uso (tranne Cal1 e Cal2).
• 1 a incubazione: 50 µL di campione; l’anti-HAV del campione
si lega all’antigene dell’HAV aggiunto.
Anti-HAV Elecsys Cal1 e Cal2: sciogliere con cautela il contenuto
• 2 a incubazione: dopo l’aggiunta di anticorpi biotinilati e di anticorpi marcati
di un flacone aggiungendo esattamente 1,0 mL di acqua distillata
con un complesso di rutenio a specifici contro l’antigene dell’HAV nonché
o deionizzata, e lasciar riposare il flacone chiuso 15 minuti per la
di microparticelle rivestite di streptavidina, vengono occupati i siti di
ricostituzione. Mescolare accuratamente, evitando la formazione di
legame ancora liberi degli antigeni dell’HAV, ed il complesso totale si
schiuma. Versare il calibratore ricostituito nei flaconi vuoti ed etichettati
lega alla fase solida mediante l’interazione biotina-streptavidina.
con chiusura a scatto forniti nella confezione.
• La miscela di reazione viene aspirata nella cella di misura
dove le microparticelle vengono attratte magneticamente alla
superficie dell’elettrodo. Successivamente si eliminano le sostanze
non legate impiegando ProCell. Applicando una tensione
all’elettrodo, si induce l’emissione chemiluminescente che viene
misurata mediante il fotomoltiplicatore.
Analizzatori Elecsys 2010 e cobas e 411: i calibratori Cal1 e Cal2 ricostituiti
devono essere lasciati sull’analizzatore a 20–25 °C solo durante la
calibrazione. Dopo l’uso, richiuderli quanto prima e conservarli a 2–8 °C.
Evitare l’adesione del liquido di calibrazione nel tappo con chiusura a
scatto quando aperto. Per evitare un’eventuale evaporazione, non eseguire
più di 5 calibrazioni per set di flaconi di calibratori.
• I risultati vengono calcolati in base ad una curva di calibrazione, che viene
generata in modo specifico per lo strumento con una calibrazione a 2 punti
e con una curva master fornita insieme al codice a barre del reattivo.
Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170 e cobas e 601: se, per la
calibrazione sull’analizzatore, non è necessario l’intero volume, trasferire
aliquote del calibratore appena ricostituito in flaconi vuoti con chiusura a
flaconi. Conservare le aliquote per impegni successivi a 2–8 °C.
Ogni aliquota può essere utilizzata solo per una calibrazione.
Tutte le informazioni necessarie per l’utilizzo corretto vengono lette nello
strumento con i codici a barre dei rispettivi reattivi.
2009-08, V 6 Italiano 1 / 4 Analizzatori Elecsys e cobas e

Anti-HAV
Anticorpi totali (IgM ed IgG) contro il virus dell’epatite A
Conservazione e stabilità
Conservare a 2–8 °C.
Conservare la confezione di reattivi Anti-HAV Elecsys (M, R1, R2) in
posizione verticale in modo da garantire la completa disponibilità delle
microparticelle durante il mescolamento automatico prima dell’uso.
Stabilità:
prima dell’apertura a 2–8 °C
fino alla data di scadenza indicata
M, R1, R2 dopo l’apertura a 2–8 °C 8 settimane
su MODULAR ANALYTICS E170
e cobas e 601 a 20–25 °C
8 settimane
su Elecsys 2010 e cobas e 411 a 20–25 °C 8 settimane
calibratori liofilizzati
fino alla data di scadenza indicata
calibratori ricostituiti a 2–8 °C
6 settimane
su Elecsys 2010 e cobas e 411 a 20–25 °C fino a 5 ore
su MODULAR ANALYTICS E170
e cobas e 601
per 1 impiego unico
Conservare i calibratori in posizione verticale. Evitare l’adesione del liquido
di calibrazione nel tappo con chiusura a scatto quando aperto.
Prelievo e preparazione dei campioni
Solo i tipi di campione elencati di seguito sono stati testati e risultano accettabili.
Siero, prelevato con provette standard per prelievi di campioni o
con provette contenenti gel di separazione.
Plasma con litio/sodio eparina, K 3 -EDTA e citrato di sodio.
Valutazione: recupero 90–110 % del valore nel siero o slope 0,9–1,1 + intercetta
< ±2 x limite di sensibilità analitica + coefficiente di correlazione > 0,95.
Stabilità: 7 giorni a 2–8 °C, 3 mesi a –20 °C. I campioni possono
essere congelati 6 volte.
I tipi di campione elencati sono stati testati impiegando una selezione di
provette per il prelievo di campioni disponibili in commercio al momento
dell’analisi; non sono, quindi, state testate tutte le provette disponibili di tutte
le case produttrici. Alcuni sistemi per il prelievo di campioni di vari produttori
possono contenere diversi materiali e in alcuni casi possono interferire sui
risultati del test. Quando si trattano i campioni in provette primarie (sistemi per
il prelievo di campioni), seguire le istruzioni del produttore delle provette.
I campioni contenenti precipitati e quelli congelati devono essere centrifugati
prima dell’esecuzione del test. Non impiegare campioni inattivati a caldo.
Non impiegare campioni e controlli stabilizzati con azide.
Assicurarsi che i campioni prelevati dai pazienti, i calibratori ed i controlli al
momento della misura siano a temperatura ambiente (20–25 °C).
Per evitare un’eventuale evaporazione, misurare i campioni, calibratori
e controlli che si trovano sugli strumenti entro 2 ore.
Materiali a disposizione
Per i reattivi, vedere la sezione “Reattivi – soluzioni pronte all’uso”.
• 2 x 6 etichette per flaconi
• 4 flaconi vuoti ed etichettati con chiusura a scatto
Materiali necessari (ma non forniti)
• REF 04855043190, PreciControl Anti-HAV, per 2 x 4 mL ciascuno
di PreciControl Anti-HAV 1 e 2
• REF 11361252122, Diluent Hepatitis A, 2 x 15 mL di diluente
• REF 11776576322, CalSet Vials, 2 x 56 flaconi vuoti con chiusura a scatto
• Normale attrezzatura da laboratorio
• Analizzatore Elecsys 2010, MODULAR ANALYTICS E170 o cobas e
• Acqua distillata o deionizzata
Accessori per gli analizzatori Elecsys 2010 e cobas e 411:
• REF 11662988122, ProCell, 6 x 380 mL di tampone del sistema
• REF 11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL di soluzione di lavaggio
per celle di misura
• REF 11930346122, SysWash Elecsys, 1 x 500 mL di additivo
per l’acqua di lavaggio
• REF 11933159001, adapter per SysClean
• REF 11706802001, AssayCup Elecsys 2010, 60 x 60 coppette di reazione
• REF 11706799001, AssayTip Elecsys 2010, 30 x 120 puntali di pipettaggio
Accessori per gli analizzatori MODULAR ANALYTICS E170 e cobas e 601:
• REF 04880340190, ProCell M, 2 x 2 L di tampone del sistema
• REF 04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L di soluzione di lavaggio
per celle di misura
• REF 03023141001, PC/CC-Cups, 12 coppette per il preriscaldamento
di ProCell M e di CleanCell M prima dell’uso
• REF 03005712190, ProbeWash M, 12 x 70 mL di soluzione di lavaggio
per la conclusione del run ed il lavaggio al cambio di reattivi
• REF 12102137001, AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 supporti
da 84 coppette di reazione e 84 puntali di pipettaggio, sacchetti per rifiuti
• REF 03023150001, WasteLiner, sacchetti per rifiuti
• REF 03027651001, SysClean Adapter M
Accessori per tutti gli analizzatori:
• REF 11298500316, SysClean Elecsys, 5 x 100 mL di soluzione
di lavaggio per il sistema
Esecuzione
Per una performance ottimale del test, attenersi alle indicazioni
riportate nel presente documento per l’analizzatore in questione. Per
le istruzioni specifiche dell’analizzatore relative all’esecuzione del test,
consultare il manuale d’uso dello strumento.
La risospensione delle microparticelle prima dell’uso avrà luogo
automaticamente. Leggere i parametri test-specifici nello strumento dal
codice a barre del reattivo. Nel caso eccezionale che non sia possibile
leggere il codice a barre, digitare la sequenza di 15 cifre.
Analizzatori MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 e cobas e: portare
i reattivi conservati al fresco alla temperatura di ca. 20 °C e collocarli
nel rotore portareattivi (20 °C) dell’analizzatore. Evitare la formazione di
schiuma. La regolazione della temperatura esatta, l’apertura e la chiusura
dei flaconi avranno luogo automaticamente nello strumento.
Collocare i calibratori Cal1 e Cal2 ricostituiti nelle posizioni per i campioni degli
strumenti. Lasciarli aperti solo durante la calibrazione. Tutti i dati necessari
per la calibrazione del test sono contenuti nel codice a barre dell’etichetta
sui flaconi dei calibratori e vengono letti nello strumento automaticamente.
Dopo l’esecuzione della calibrazione, conservare Cal1 e Cal2 a 2–8 °C oppure
eliminarli (analizzatori MODULAR ANALYTICS E170 e cobas e 601).
Calibrazione
Tracciabilità: questo metodo è stato standardizzato contro il
“Second International Standard for Anti-Hepatitis A, Immunoglobulin,
Human, NIBSC code: 97/646” dell’NIBSC (National Institute for
Biological Standards and Control).
Frequenza di calibrazione: effettuare una calibrazione per ogni lotto di
reattivo con le soluzioni Anti-HAV Elecsys Cal1 e Cal2 e con reattivo fresco
(al massimo 24 ore dopo l’identificazione della confezione di reattivo sullo
strumento). Si consiglia di ripetere la calibrazione come segue:
• dopo 1 mese (28 giorni) se si impiega lo stesso lotto di reattivo
• dopo 7 giorni (se si impiega la stessa confezione di reattivo sullo strumento)
• all’occorrenza: ad es. se un controllo di qualità con i reattivi PreciControl
Anti-HAV Elecsys si trova al di fuori dei limiti indicati
• più spesso se richiesto dalle leggi vigenti.
Controllo di qualità
Per il controllo di qualità, impiegare PreciControl Anti-HAV Elecsys.
I controlli 1 e 2 devono essere eseguiti con determinazione in singolo almeno
1 volta ogni 24 ore quando il test è in uso, al cambio di ogni confezione di
reattivi e dopo ogni calibrazione. Gli intervalli e limiti del controllo dovranno
essere conformi alle esigenze individuali di ogni laboratorio. I valori ottenuti
devono rientrare nei limiti definiti. Ogni laboratorio deve definire delle misure
correttive da attuare nel caso che alcuni valori siano al di fuori dei limiti.
Eventualmente va ripetuta la misura dei corrispondenti campioni.
Per il controllo di qualità, attenersi alle normative vigenti e alle linee guida locali.
Nota
Considerare sempre il foglietto relativo ai valori teorici contenuto nella
confezione del test/PreciControl e assicurarsi se i valori teorici per specifiche
combinazioni test/PreciControl devono essere introdotti manualmente.
Analizzatori Elecsys e cobas e 2 / 4 2009-08, V 6 Italiano

04855019001V6
Anti-HAV
Anticorpi totali (IgM ed IgG) contro il virus dell’epatite A
Calcolo
L’analizzatore effettua il calcolo automatico della concentrazione
dell’analita di ogni campione (in IU/L).
Interpretazione dei risultati
I campioni con concentrazioni < 20 IU/L sono non reattivi
nel test Anti-HAV Elecsys.
I campioni con concentrazioni ≥ 20 IU/L sono reattivi nel test Anti-HAV Elecsys.
Concentrazioni > 20 IU/L indicano un’infezione da epatite A pregressa
o in corso oppure la presenza di anticorpi anti-HAV in seguito ad
una vaccinazione contro l’epatite A.
Importante! I valori di anti-HAV misurati possono differire a seconda
del procedimento di test impiegato. I risultati ottenuti con un singolo
campione possono, quindi, deviare l’uno dall’altro se si impiegano
test di differenti produttori. Se durante il monitoraggio dei vaccinati
avviene un cambio del metodo di determinazione, i valori di anti-HAV
ottenuti durante la fase di passaggio vanno confermati mediante
misurazioni parallele con entrambi i metodi.
Limiti del metodo – interferenze
L’ittero (bilirubina < 855 µmol/L oppure < 50 mg/dL), l’emolisi
(Hb < 0,745 mmol/L oppure < 1,2 g/dL), la lipemia (Intralipid < 1000 mg/dL) e
la biotina < 205 nmol/L oppure < 50 ng/mL non interferiscono sul test.
Valutazione: recupero entro ±10 % del valore iniziale.
Ai pazienti sottoposti a terapia con alti dosaggi di biotina (>5 mg/die), il campione
dovrà essere prelevato almeno 8 ore dopo l’ultima somministrazione di biotina.
Non sono state osservate interferenze da fattori reumatoidi fino
ad una concentrazione di 1600 IU/mL.
Tra 18 farmaci di frequente impiego, testati in vitro, non si è osservata
alcuna interferenza nel test.
In casi rari possono riscontrarsi interferenze causate da titoli estremamente
alti di anticorpi diretti contro anticorpi specifici anti-analita, di anticorpi
anti-streptavidina o di anticorpi anti-rutenio. Tali effetti sono ridotti al
minimo attraverso un procedimento appropriato del test.
Importante!
Ai fini diagnostici, i risultati devono sempre essere valutati congiuntamente con
la storia clinica del paziente, con gli esami clinici e con altre evidenze cliniche.
In caso di dubbio, particolarmente se nel test si ottengono risultati
vicini al cutoff (20 IU/L), si deve prendere in considerazione una
vaccinazione contro l’epatite A.
Intervallo di misura
3,00–60 IU/L (definito dal limite di sensibilità inferiore e dal massimo valore
della curva master). I valori al di sotto del limite di sensibilità vengono
indicati come 60 IU/L o i campioni vanno diluiti.
I campioni contenenti IgM anti-HAV possono, in alcuni casi singoli,
mostrare un comportamento di diluizione non lineare.
Diluizione
I campioni con concentrazioni di anti-HAV al di sopra dell’intervallo
di misura possono essere diluiti con Diluent Hepatitis A Elecsys. La
concentrazione del campione diluito deve essere superiore a 20 IU/L.
Moltiplicare i risultati per il fattore di diluizione.
Dati specifici sulla performance del test
Qui di seguito sono riportati i dati rappresentativi delle prestazioni sugli
analizzatori. I risultati dei singoli laboratori possono differire da questi.
Precisione
La precisione è stata determinata impiegando reattivi Elecsys, sieri
umani e controlli (ripetibilità: n = 21, precisione intermedia: n = 10); la
precisione intermedia sull’analizzatore MODULAR ANALYTICS E170
è stata determinata in base ad un protocollo modificato (EP5-A) del CLSI
(Clinical and Laboratory Standards Institute): 6 volte al giorno per 10 giorni
(n = 60). Sono stati ottenuti i seguenti risultati:
Analizzatori Elecsys 2010 e cobas e 411
Ripetibilità c Precisione intermedia
Campione Media DS CV Media DS CV
IU/L IU/L % IU/L IU/L %
SU d , negativo

Anti-HAV
Anticorpi totali (IgM ed IgG) contro il virus dell’epatite A
Letteratura
1. Robertson BH, Nainan OV. Genetic and antigenetic variants of hepatitis A
virus. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. Eds: Rizzeto M, Purcell RH,
Gerin JL, Verme G, Edizioni Minerva Medica, Torino 1997;14–18.
2. Koff RS. Hepatitis A. Lancet 1998;341:1643–1649.
3. Lemon ML, Days SL. Type A hepatitis. In: Gorbach S, Bartlett JG,
Blacklown NL (eds). Infectious Diseases. Saunders WB,
Philadelphia, 1992;705–708.
4. Stapleton JT. Host Immune Response to Hepatitis A Virus.
JID 1995;171(Suppl 1):9–14.
5. Ambrosch F, Wiedermann G, André FE, Delem A, Gregor H, Hofmann H
et al. Clinical and Immunological Investigation of a New Combined
Hepatitis A and Hepatitis B Vaccine. J Med Virol 1994;44:452–456.
6. Dobler G, Nitschko H, Frösner GG, Langer BCA. Hepatitis A:
Medizinische Bedeutung, Klinik, Diagnostik, Aussagewert diagnostischer
Verfahren. In: Frösner G (ed.). Moderne Hepatitisdiagnostik,
Kilian Verlag 2001;19–30, 2 a edizione.
7. Occupational Safety and Health Standards: bloodborne pathogens.
(29 CFR Part 1910.1030). Fed. Register. July 1, 2001;17:260–273.
8. Direttiva del Consiglio (2000/54/CE). Gazzetta Ufficiale delle
Comunità Europee N. L262 del 17 ott. 2000.
Per ulteriori informazioni, consultare il manuale d’uso appropriato per il
relativo analizzatore, i rispettivi fogli di applicazione, la Product Information
ed i foglietti illustrativi di tutti i componenti necessari.
Le aggiunte o modifiche significative sono indicate mediante una linea verticale posizionata al margine.
Le modifiche riguardanti i parametri test-specifici del codice a barre del reattivo già letti nello strumento
vanno introdotte manualmente.
© 2009, Roche Diagnostics
Roche Diagnostics GmbH, D-68298 Mannheim
Analizzatori Elecsys e cobas e 4 / 4 2009-08, V 6 Italiano