DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO, ISOLAMENTO E ...

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Laboratório de Parasitologia Molecular- UFPR Departemanto: Patologia Básica LPM-Centro Politécnico-UFPR / Programa de Doutorado em Biotecnologia e Bioprocessos Procedimento Operacional (POP) – Instrução de Trabalho Setor: Parasitologia Título: Coleta e Armazenamento de Líquido Amniótico Versão: 1.0 Indexação: Parasito 000/01 Página: 6 de 6 7.0 – Modelo de resultado: (amostra de LA submetida a PCR) Resultado Positivo indica a presença do DNA do T.gondii na amostra pesquisada Resultado Negativo indica a ausência do DNA do Tgondii na amostra pesquisada 8.0 – Interferentes: Amostras Excessivamente Hemolisadas Amostras Estocadas fora do prazo de validade e condições de refrigeração inadequadas Resultados Falso-Negativos: resíduos de reagentes durante procedimento de extração de DNA. Resultados Falso-Positivos: contaminação por aerossóis (amplicons). 9.0 – Biossegurança: Utilizar proteção individual: óculos acrílicos de proteção, avental de mangas longas e luvas de procedimentos após o manuseio das amostras, retirar as luvas e lavar as mãos com água e sabão. Desprezar material descartável em recipiente adequado (lixo hospitalar/descartex) 10.0 – Arquivamento: Livro de Registro /Prontuário para posterior transferência de dados em sistema informatizado (LPM-UFPR – Estatística) 11.0 – Confidencialidade: Dados pertinentes as pacientes serão mantidos em sigilo, conforme normas de conduta ética (vide CEP-HC). 12.0 – Anexos: (Incluir “Documento de Consentimento”) 211
1 RESUMO GERAL O objetivo geral deste estudo foi comparar metodologias diversas de diagnóstico da toxoplasmose em gestantes residentes em Curitiba. O trabalho foi desenvolvido em três etapas. Na primeira foram realizados exames imunoenzimáticos (ELISA) para definição da soroprevalência de anticorpos (IgM, IgG) anti-Toxoplasma gondii em gestantes do programa “Mãe Curitibana” visando conhecer o perfil sorológico destas gestantes. Na segunda foi feito isolamento in vivo e in vitro de Toxoplasma gondii e análise histopatológica a partir de amostras biológicas (liquido amniótico, sangue e placenta) obtidas das gestantes cujo perfil imunológico foi compatível com infecção recente. Na terceira etapa foram avaliadas as técnicas de reação em cadeia da polimerase (PCR) como método diagnóstico e a de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição (RFLP) para determinar o(s) genótipo(s) do parasito. No estudo sorológico de 16.479 pacientes, em que foi possível avaliar as duas imunoglobulinas (IgG e IgM) 8740 apresentaram IgG+ e IgM-; 7203 apresentaram IgG- e IgM-; 24 apresentaram IgG- e IgM+ e 512 gestantes com sorologia positiva para ambas. Treze gestantes com sorologia positiva (IgM+) foram submetidas a amniocentese para isolamento do protozoário. Parasitos provenientes de liquido amniótico e de sangue foram isolados in vivo (inoculação intraperitoneal em camundongos) e in vitro (cultivo celular). A PCR, padronizada no presente trabalho foi eficiente para demonstrar a presença do DNA de Toxoplasma gondii nas 13 amostras de líquido amniótico examinadas. A caracterização molecular do protozoário, por RFLP, indicou que todas as cepas isoladas pertenciam ao genótipo do tipo-I, o que condiz com dados de literatura. Implementações de técnicas de diagnóstico a serem adotadas para o monitoramento da toxoplasmose gestacional são discutidas no presente trabalho.
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