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Avaliação da atividade biológica de chalconas no fungo patogênico humano
Paracoccidioides brasiliensis
Amanda Gregorim Fernandes 1 ; Sabrina Soares Chagas 2 ; Ludimila Carvalho dos S.
Marques 2 ; Cristiane Alves da Fonseca 3
1 Bolsista PBIC/UEG, graduando do Curso de Biologia, UnUCET Anápolis – UEG.
2 Voluntário PVBIC/UEG, graduandos do Curso de Farmácia, UnUCET Anápolis –
UEG.
3 Orientador IES, docente dos Cursos de Biologia e Farmácia, UnUCET Anápolis –
UEG.
RESUMO
A Paracoccidoidomicose (PCM) é uma doença causada pelo fungo
termodimórfico, Paracoccidioides brasiliensis, o qual possui uma diferenciação celular
possibilitando sua virulência e patogenicidade. Trata-se de uma doença prevalente da
América Latina, extendendo-se do México à Argentina, sendo o Brasil responsável por
80% dos casos, e Goiás possui um dos maiores índices da doença. O contágio se dá pela
forma miceliana encontrada na natureza. O indivíduo inala propágulos do fungo que ao
atingirem o epitélio pulmonar podem se espalhar pelo sistema linfático e sanguíneo, ao
serem fagocitados pelos macrófagos. Atinge principalmente pessoas
imunocomprometidas e seu tratamento é dado por drogas antifúngicas das classes
polienos, azoles e caspofunginas. Porém o fungo já apresentou resistência a diversas
drogas. Por isso, torna-se necessário a constante busca por novas drogas mais eficazes.
As chalconas são moléculas presentes na dieta humana, sendo precursoras metabólicas
de flavonóides, presentes principalmente em frutas cítricas. Sua fórmula estrutural
apresenta dois anéis aromáticos interligados por três carbonos, apresentando diversos
radicais ligados à sua estrutura principal, cada radical substituído na molécula conferelhe
uma atividade biológica diferenciada. Para testar a atividade biológica dessas
moléculas frente ao fungo cultivou-se primeiramente em meio Sabouraud e transferiu
para um meio quimicamente definido (MVM) sólido para que as concentrações não
interfiram nos resultados. Foi crescido durante sete dias e em seguida, colocou-se em
MVM líquido juntamente com as moléculas de chalconas em diferentes concentrações.
Assim, foi analisado durante sete dias subseqüentes a inibição do crescimento do fungo
pelas moléculas de chalconas em diferentes concentrações, essa análise foi realizada em
espectrofotômetro interpretando a transmitância do meio.
Introdução
Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico, agente etiológico da
Paracoccidioidomicose (PCM) (ALMEIDA, 1930). A PCM é a oitava causa de
mortalidade entre as doenças infecciosas parasitárias, apresentando a maior taxa de
mortalidade entre as micoses sistêmicas no Brasil (COUTINHO et al., 2002). A PCM é
1

uma micose sistêmica com alta prevalência na América Latina, O Brasil é responsável
por 80% dos casos descritos na literatura (BRUMMER et al., 1993), sendo que Goiás
está entre os estados que apresentam os maiores índices de casos, (WANKE &
LONDERO, 1994).
Muitas limitações terapêuticas de drogas antifúngicas usadas no combate às
doenças fúngicas têm sido encontradas, além de apresentarem alta toxicidade, um
limitado espectro de eficácia, e o aumento da incidência de infecções fúngicas
ameaçadoras, associado com imunodepressão, bem como o surgimento de isolados
clínicos resistentes a drogas tem se tornado preocupante. (GEORGOPAPADAKOU &
TKACZ, 1995).
A chalcona ou 1,3-difenil-2-propen-1-ones têm um grande número de atividades
biológicas diferentes. Esses compostos ocorrem naturalmente ou podem ser facilmente
sintetizados (DIMMOCK et al., 1999). São obtidas a partir de uma reação de
condensação aldólica em meio básico entre acetofenona e benzaldeídos (CESARIN-
SOBRINHO et al., 2002). As chalconas são um grupo dentro dos flavonóides e
possuem atividades antimicrobiana, antiviral, antiinflamatória, antitumoral (DEVIA et
al., 1998). Sua fórmula química consiste de dois anéis aromáticos ligados por uma
ponte de três carbonos α,β-insaturados (ACHANTA et al., 2006). Sua estrutura genérica
pode ser visualizada na figura 1.
5'
4'
3'
6'
2'
1'
O
H
Figura 1- Fórmula estrutural genérica de chalconas.
Em estudos realizados com Candida albicans, moléculas de chalconas inibiram
o crescimento do fungo quando na presença de um ou mais grupos hidróxi nos anéis
aromáticos e um adicional radical metil, nas concentrações de 100µg/mL (DIMMOCK
et al., 1999). Essas substituições podem ativar ou desativar as propriedades dessas
moléculas. Com a variedade de radicais e de posições substituíveis podemos sintetizar
muitas moléculas derivadas e, dependendo das substituições, podemos obter compostos
semelhantes ou com as mesmas características. Com isso, várias moléculas podem
exercer a mesma função, só que em potenciais diferenciados, sendo mais ou menos
ativas para determinados fins.
H
2
1
3
6
4
5
2

Esse trabalho tem como objetivo analisar a ação das chalconas no
desenvolvimento do fungo Paracoccidioides brasiliensis
Materiais e métodos
As diferentes moléculas de chalconas para o teste em fungos da espécie
Paracoccidioides brasiliensis foram obtidas através de síntese das mesmas, a partir de
uma reação envolvendo uma cetona e um aldeído, ambos contendo anéis aromáticos,
seguindo o método Claisen–Schmidt de condensação protocolado.
O fungo foi colocado em meio quimicamente definido, através de repiques, ou
seja, transferindo-os do meio Sabouraud para o MVM (Restrepo & Jiminez, 1980)
contendo concentrações variadas de 100, 50, 25, 12,5, 6,25 µg/mL de uma mesma
molécula de chalcona solubilizadas em DMSO (dimetil-sulfóxido) (Charris et al., 2005),
durante os sete dias subseqüentes, foi feita a contagem de células leveduriformes através
de espectrofotômetria, analisado a transmitância do meio. Ao final determinou-se a
Concentração Inibitória Mínima (MIC). As MIC´s foram obtidas utilizando o mesmo
método descrito por Opletalová et al. (2001). Os resultados foram submetidos a uma
análise estatística feita de acordo com o teste do X 2 para proporções bicaudal, tendo um
nível de significância: α=β=0,5.
.
Resultados e discussões
Após crescimento das células leveduriformes por sete dias em meio MVM
sólido, um inócuo contendo 5x10 6 células/mL de P. brasiliensis foi adicionado ao meio
MVM líquido na ausência (controle) e presença de chalconas (tratado) na concentração
de 200, 100, 50 e 25 µg/mL. Os tubos foram mantidos a 37° C, sob agitação a 120 rpm,
por 10 dias. Durante este período foi lida, diariamente, a transmitância do meio em
espectrofotômetro a 530nm. Foram utilizadas para a leitura tanto os controles quanto os
tratamentos. Todos os tratamentos foram feitos em duplicatas. As moléculas utilizadas
para os testes estão dispostas a seguir:
3

Chalcona 1 -
Chalcona 3 -
O
O
O
O
OCH3 Chalcona
OCH 3 Chalcona 2 - OH
O 2N NO 2
A figura 2 mostra o efeito das moléculas de chalconas 2 e 4 no crescimento de
células leveduriformes de P. brasiliensis avaliado através da leitura das culturas em
espectrofotômetro. Os valores obtidos mostraram que as concentrações utilizadas
inibiram totalmente o crescimento das células leveduriformes de P. brasiliensis.
Concluindo, assim, que deveríamos diminuir as concentrações para a possível
determinação daquela capaz de inibir 50% do crescimento fungicida.
absorbância (530 nm)
16
14
12
10
8
6
4
2
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
dias
controle
200
100
50
25
absorbância (530 nm)
16
14
12
10
8
6
4
2
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
dias
(a) (b)
O
O
controle
Figura 2 – Curva de crescimento de células leveduriformes de P. brasiliensis na
presença de chalcona 2 (a) e chalcona 4 (b). A leitura de absorbância foi realizada
diariamente a um comprimento de onda de 530 nm. As células foram cultivadas a 37° C
por 10 dias na presença das moléculas.
A Figuras 3 mostra que os valores da porcentagem de absorbância obtidos para as
células leveduriformes cultivadas na presença de chalconas, agora usando as moléculas
1 e 3 nas concentrações iguais a 20, 10 e 5 µg/mL, inibiram o crescimento dessas
células, porém não chegaram à inibição de 50% quando comparados ao controle.
Verificou-se uma porcentagem máxima de inibição para a molécula 3 de 45%, por isso
torna-se necessário o teste de novas concentrações para que possamos alcançar um
índice igual a 50% de inibição do crescimento desse fungo.
50
25
4

ABSORBÂNCIA (530nm)
35
30
25
20
15
10
5
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
DIAS
CONTROLE
20 µg/mL
10 µg/mL
5 µg/mL
35,0
30,0
25,0
20,0
15,0
10,0
5,0
0,0
1 2 3 4 5 6 7 8 9
DIAS
(a) (b)
A B S OR B Â N C IA (530nm)
CONTROLE
Figura 3 - Curva da porcentagem de absorbância de células leveduriformes de
P. brasiliensis na presença das chalcona 1(a) e 3(b). Leitura feita diariamente a um
comprimento de onda de 530 nm. As células foram cultivadas a 37° C por 10 dias na
presença das moléculas.
Conclusão
Apesar da existência de potentes antibióticos e agentes antifúngicos, isoladas
resistentes ou multirresistentes continuam aparecendo, dessa forma, estudos tornam-se
sempre necessários na busca por novos fármacos capazes de inibir o desenvolvimento
desses fungos. As chalconas tem se mostrado um bom candidato no combate a
paracoccidioidomicose.
Referências
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synthetic trihydroxilated chalcones. Rev. Microbiol. São Paulo. 29(4), 1998.
20 µg/mL
10 µg/mL
5 µg/mL
5

DIMMOCK, J. R.; ELIAS, D. W.; BEAZELY, M. A.; KANDEPU, N. M. Bioactivities of Chalcones.
Current Medicinal Chemistry. 6, 1125-1149, 1999.
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