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Transferência de Embrião Muar para Mulas Acíclicas
E A Ribeiro, M O Mello
Resumo
Mulas, híbridos do cruzamento de Jumento (E. asinus, 2n=62) com Égua (Equus
caballus, 2n=64) são quase sempre inférteis. Sete embriões muar (E. asinus x E caballus)
foram transferidos pelo método não cirúrgico para 5 mulas acíclicas . As doadoras foram
sincronizadas com D-clorprostenol e hCG e inseminadas com Jumento (E. asinus). As mulas
acíclicas receberam uma aplicação de ciprionato de estradiol no dia da ovulação da
doadora. Dois dias após, estes animais receberam Progesterona LA. A coleta de embrião
ocorreu no dia 8 pós ovulação com solução de Ringer Lactato de Sódio, sendo o embrião
transplantado para as mulas receptoras por via trans cervical. Estas receberam P4 LA no dia
da transferência. O diagnóstico de gestação foi feito com ultra-som no dia 14 pós ovulação e
repetidos semanalmente. As mulas que se tornaram prenhes, receberam semanalmente
uma aplicação de P4 LA até atingirem 100 dias de gestação. Os animais vazios eram
reencaminhados para nova transferência. Dos 7 embriões transplantados 3 foram
diagnosticados como positivos aos 14 dias, sendo que um animal teve perda embrionária
no intervalo entre o 1º e 2º exames de ultrasom. As mulas pariram após 358 e 344 dias de
gestação. Portanto é viável o uso de mulas acíclicas (E. mulus mulus) como receptoras de
embrião híbrido (E. mulus mulus) .
Introdução
Eqüídeos possuem a habilidade de se cruzarem entre espécies fenotipico e
cariotipicamente diferentes. O cruzamento de ♂ E. asinus (2n=62) com ♀Equus caballus
(2n=64) produz E. mulus mulus(2n=63)., embora este cruzamento tenha alta taxa de
prenhes e com produtos viáveis, estes são normalmente inférteis. Wodsedalek (1916) foi o
primeiro a propor que espermatozoides não são produzidos nos testículos dos burros por
uma incompatibilidade cromossônica entre as espécies progenitoras, ocorrendo um
bloqueio da meiose.Taylor and Short (1973) demonstraram que na ♀E. mulus mulus (2n=
63) haveria um bloqueamento parcial da meiose dos cromossomos sexuais femininos,
produzindo um baixo estoque de ovócitos ao nascimento. Entretanto, existem várias
descrições na literatura de mulas férteis, sendo alguns casos confirmadas com cariotipagem
da matriz e do produto, (Pinheiro, L. E. L. ; Henry, M. ; Roca, M. L. C. ; Gastal, E. L. ; Guimarães, S.
E. F. 1989; Chandley and Clarke 1985; Rong and al. 1985).
A transferência de embriões em equinos possibilita aumento do número de animais
nascidos das melhores éguas e nascimento de produtos oriundos de éguas sub férteis. Para
obter taxas aceitáveis de gestação na TE em equinos, a receptora deve ovular 0 a 3 dias após
a doadora, sendo necessária em média, uma relação de 3 receptoras para cada doadora. A
aplicação de progesterona tem sido usada em éguas receptoras acíclicas ou em anestro
estacional (Langneaux and Palmer 1993) melhorando este aproveitamento . A transferência
inter espécies se mostrou viável entre Eqüinos e Asininos (Allen 1995). Entretanto, uma alta

taxa de perda embrionária ocorre quando se transfere embrião asinino para éguas. Neste
caso quase não ocorre a invasão das células trofoblásticas do embrião no endométrio da
égua , comprometendo a formação dos cálices endometriais, com conseqüente ausência de
produção de eCG. Uma resposta citotóxica violenta da égua em toda área de contato com o
trofoblasto asinino provoca a morte de 70% dos embriões entre 80 e 95 dias de gestação
(Allen 1997). O uso de progesterona e eCG exógeno não se mostraram eficazes na
prevenção deste tipo de aborto (Allen et al. 1987). Em contraste, o uso de mulas cíclicas
como receptoras de eqüinos e asininos se comprovaram viáveis, nascendo produtos
normais tanto com método cirúrgico ( Davis et al 1985), quanto pelo método não cirúrgico (
Camillo et al 2003 ). Ambos pesquisadores observaram a dificuldade de sincronização
Doadora / receptoras como limitante da técnica. Já o resultado com o uso de mula acíclica
com protocolo hormonal foi negativo ( Camillo et al 2003).
O objetivo do presente estudo foi tentar obter gestação de embrião muar ( E. asinus
x Equus caballus), usando como receptora mula acíclica e tratamento hormonal.
Material e Métodos
Animais
Durante os meses de Outubro a Dezembro de 2006, 6 mulas de 3 a 6 anos da
fazenda Santa Edwiges, de propriedade de Tarcísio Resende em Lagoa Dourada MG, foram
usadas como receptoras de embrião. Apenas um animal foi descartado por
subdesenvolvimento do sistema genital. Quatro jumentos jovens da raça Pêga foram
usados na coleta de sêmem e éguas paridas com os melhores burrinhos ao pé foram usadas
como doadoras de embrião.
Exame ultra-sonográfico
As mulas e éguas foram examinadas por ultra-sonografia transretal, para verificar
desenvolvimento folicular e viabilidade uterina. Uma mula foi descartada por possuir útero
e cérvix subdesenvolvidos. As confirmações de ovulação das doadoras foram feitas nos
dois dias seguintes à inseminação. As receptoras foram examinadas no dia da inseminação
das doadoras e após a ovulação destas. Os diagnósticos de gestação foram feitos
semanalmente nos primeiros 60 dias
Indução de cio
As doadoras receberam injeçãode D-Cloprostenol 3 dias antes da primeira visita para
acompanhamento folicular. 6 horas antes da inseminação, as éguas receberam hCG (
Vetecor 5000) por via endo venosa.

Tratamento hormonal das mulas
As mulas receptoras que não possuíam folículos maior que 29mm receberam, no dia da
ovulação da doadora, uma dose intramuscular de ciprionado de estradiol. Dois dias após,
estes animais receberam Progesterona LA intra muscular. Uma segunda dose de P4 foi dada
no dia da TE. Semanalmente foram feitas reaplicações de P4 nas mulas prenhes até a
gestação completar 100 dias, quando cessaram-se as aplicações hormonais.
Inseminação artificial
As éguas doadoras foram inseminadas quando possuíam folículos maior que 33 mm e
receberam hCG endovenoso. O sêmen foi coletado e diluído em diluente a base de leite
em pó desnatado e glicose e a dose inseminante usada acima de 500 milhões de
espermatozóides com motilidade progressiva.
Coleta e Transferência de embrião
As coletas foram feitas no dia 8 após a ovulação. O útero da égua foi lavado com solução de
Ringer Lactato de Sódio, o embrião identificado e avaliado morfologicamente. Após ser
lavado 10 vezes em solução estéril de Ham , O embrião foi acondicionado em pipeta
protegida por uma bainha sanitária e transferido via trans cervical.
Resultados
Os 7 embriões classificados morfologicamente como bons e excelentes, coletados em 3
períodos diferentes, foram transferidos para 5 mulas acíclicas tratadas com ciprionato de
estradiol e Progesterona LA injetável. 3 mulas apresentaram diagnóstico de gestação
positivo aos 14 dias e em uma ocorreu a perda embrionária precoce. Os 2 embriões foram
acompanhados por ultra som semanalmente durante os primeiros 60 dias e mensalmente
após isto. O desenvolvimento dos fetos ocorreu dentro da normalidade e o parto natural
ocorreu com 358 e com 344 dias de gestação.
Discussão
O estudo demonstrou que pode-se usar mulas acíclicas como receptoras para embriões
muares (E. mulus mulus).
Tanto Davies et al.(1985) , quanto Camillo et al. (2003) reportaram que a grande dificuldade
de se transferir embrião eqüino para mulas cíclicas é a sincronização de ovulação entre
doadora e receptora.
Em tentativas anteriores na utilização de mulas acíclicas, Davies et al. (1985), usando
progesterona oral Altrenogest, conseguiu uma gestação em 4 transferências de embrião
eqüino em receptoras mulas acíclicas, mas este animal abortou após 55 dias de gestação. Já
Camillo et al.(2003), usando protocolo hormonal por via IM, não alcançou sucesso na

transferência de embrião equino em mulas acíclicas, embora tenham sido transferidos 3
embriões em duas ocasiões diferentes
Agradecimentos
Este trabalho não poderia ser feito sem o apoio do criador Tarcísio Resende, que além de
acreditar e assumir financeiramente o projeto, gentilmente cedeu as suas melhores mulas e
éguas para o experimento.
Referências
Allen WR, Kydd JH, Boyle MS,and Antezak DF,1987. Extra- specific donkey-in-horse
pregnancy as a model of early fetal death. J Reprod Fert (suppl 35) 197- 209
Allen WR and Short RV, 1997 Interspecific and Extraspecific Pregnancies In Equids: Anything
Goes. Journal of Heredity ;88; 384-392
Camillo F, Vannozzi I, Rota A, Luzio B Di, Romagnoli S, Ária G and Allen WR, 2003. Successful
Non-Sugical Transfer of Horse Embryos to Mule Recipients. Reprod Dom Anim; 38, 380- 385
Chandley AC, Clarke CA, 1985: Cum Mula Peperit. J R Soc Med 78, 800- 801
Davies CJ, Antezak DF, Allen WR, 1985: Reproduction in mules: embryo transfer using sterile
recipients. Equine Vet J Suppl. 3, 63- 67
Lagneaux D, Palmer E, 1993: Embryo transfer in anoestrous recipient mares: attempts to
reduce altrenogest administrationperiod by treatment with pituitary extract. Equine Vet J
Suppl. 15, 107- 110
Pinheiro LEL , Henry M. , Roca MLC, Gastal EL and Guimarães SEF. Caracterização
Cromossômica de Uma Mula Fértil e de Sua Progênie.. Revista Brasileira de Reprodução
Animal, Belo Horizonte, MG, v. 1, p. 110, 1989.
Rong R, Cai H, Wei J, 1985: Fertile mule in China and her unusual foal. J R Soc Med 78, 821-
825
Wodsedalek JE 1916. Causes of Sterility In the Mule. Biol Bull Mar Biol Lab Woods Hole 30; 1-
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