(VRBD) Agar (Merck 1.10275) - mikrobiyoloji.org

Violet Red Bile Dextrose (VRBD) Agar (Merck 1.10275)
ISO 5552, ISO 7402 ve ISO 21528'e uygundur. In vitro (canlı hücre dışında) yapılan standart
mikrobiyolojik analizlerde Enterobacteriaceae üyelerinin belirlenmesi ve sayımı için selektif katı
besiyeri olarak kullanılır. Violet Red Bile Glucose (VRBG) olarak da bilinir.
VRBD Agar güvenlik sertifikası için burayı tıklayın.
Bileşim
Peptone 7,0 g/L; Yeast extract 3,0 g/L; D(+) Glucose 10,0 g/L; NaCl 5 g/L; Ox bile (Bile salt mixture)
1,5 g/L; Neutral red 0,03 g/L; Crystal violet 0,002 g/L; Agar-agar 13,0 g/L
Etki şekli
Besiyeri bileşiminde bulunan safra tuzları ve kristal viyole başta Gram pozitifler olmak üzere refakatçi
floranın gelişimini inhibe ederken, glikoz pozitif bakterilerin varlığı pH indikatörü ile koloni renginin
kırmızıya dönüşmesi ve safra asitlerinin koloni etrafında çökelti oluşturması ile belirlenir. Dolayısıyla
30-32 ya da 35-37 o C'da 18-24 saat süren inkübasyondan sonra 1-2 mm çapında kırmızımsı bir
presipitat zonu ile çevrili kırmızı koloniler Enterobacteriaceae familyası üyeleri olarak sayılır.
Aeromonas gibi Enterobacteriaceae üyesi olmayan bazı refakatçi bakteriler de benzer reaksiyon verir.
Buna bağlı olarak rasgele seçilmiş 5 tipik koloninin oksidaz testi ile (Merck 1.13300) doğrulanması
önerilir. Enterobacteriaceae familyası üyeleri oksidaz negatiftirler.
Hazırlanması
Dehidre besiyeri, 39,5 g/L olacak şekilde damıtık su içinde karıştırılarak kaynatılır ve kaynama
başladıktan sonra en çok 2 dakika daha kaynama sıcaklığında tutulup, 45-50 o C'a soğuyunca steril
Petri kutularına 12,5'er mL dökülür. Bu besiyeri otoklavlanmaz. Sterilizasyon, kaynar su banyosunda
besiyerini eritirken yapılmış olur. VRBD Agar besiyerinin aşırı ısıtılmasından kaçınılmalıdır. Aşırı
ısıtma selektiviteyi azaltır. Kaynar su banyosundaki ısıl işlem etkinliğinin sağlanması için besiyerinin
250 mL'den fazla hacimlerde hazırlanmaması önerilir. Önceden 0,5 litre erlen içine 250 mL damıtık su
konulup ağzı kapatılarak otoklavda sterilize edilmesi ve besiyerinin bu erlende hazırlanıp eritilmesi
önerilir. Hazırlanmış besiyeri parlak ve koyu kırmızı-kahve renklidir, pH'sı 25 o C'da 7,3±0,2'dir.
Genel olarak ekimden sonra 15 dakika oda sıcaklığında kendi halinde bekletilen Petri kutularına ikinci
kat olarak yine VRBD besiyerinden 5-6 mL kadar dökülüp, katılaştıktan sonra inkübasyon
önerilmektedir.
Dehidre besiyerinin depolanması
15-25 o C'da ve besiyeri kutusu sıkıca kapalı tutulmak üzere, kutu açılmış olsa dahi son kullanma
tarihine kadar güvenle kullanılabilir.
1 kutu ile hazırlanacak besiyeri miktarı
500 g olan 1 kutu dehidre besiyerinden, 12,6 L besiyeri (1012 adet Petri kutusu/12,5 mL) hazırlanır.
Kalite Kontrol (spiral plater yöntemi)
Test Mikroorganizmaları
Ekim
(kob/mL)
% Geri
kazanım
Koloni
rengi Çökelti
Escherichia coli ATCC 8739 10 3 -10 5 ≥ 30 kırmızı +
Salmonella gallinarum NCTC 9240 10 3 -10 5 ≥ 30 kırmızı +
Salmonella typhimurium ATCC 14028 10 3 -10 5 ≥ 30 kırmızı +

Test Mikroorganizmaları
Ekim
(kob/mL)
% Geri
kazanım
Koloni
rengi Çökelti
Shigella flexneri ATCC 29903 10 3 -10 5 ≥ 30 kırmızı +
Yersinia enterocolitica ATCC 9610 10 3 -10 5 ≥ 30 kırmızı +
Staphylococcus aureus ATCC 6538 > 10 5 ≤ 0,01
Micrococcus luteus ATCC 9341 > 10 5 ≤ 0,01
Lactococcus lactis spp. Lactis ATCC 19435 > 10 5 ≤ 0,01
Bacillus cereus ATCC 11778 > 10 5 ≤ 0,01
Ürün Bilgileri
Ürün Adı Merck Kat. No Ambalaj
VRBD (Violet Red Bile Dextrose)
Agar acc. to MOSSEL
Kaynaklar
1.10275.0500 500
Bundesminister für das Gesundheiswesen: "Allgemeine Verwaltungsvorschrift für das Verfahren bei
der amtlichen Untersuchung von vorbehan-delten Eierprodukten". - Bundesanzeiger, 96; 2-3 (1967) [s.
auch Dtsch. Lebensmitt.-Rdsch., 63; 245-249 (1967)].
Bundesgesundheitsamt: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach § 35 LMBG. - Beuth
Verlag Berlin, Köln.
European Pharmacopeia II, Chapter VIII, 10.
Hechelmann, H.; Rossmanith, E., Peric, M., u. Leistner, L.: Untersuchung zur Ermittlung der
Enterobacteriaceae-Zahl bei Schlachtgeflügel. - Fleischwirtsch., 53; 107-113 (1973).
International Organization for Standardization: Meat and meat products - detection and enumeration of
Enterobacteriaceae (Reference methods). - Draft International Standard ISO/DIS 5552 (1977).
Mossel, D.A.A., Mengerink, W. HJ., a. Scholts, H.H.A.: Use of a modified MacConkey agar medium
for the selective growth and enumeration of all Enterobacteriaceae. - J. Bact., 84; 381 (1962).
Mossel, D.A.A., a. Cornelissen, A.M.R.: The examination of foods for Enterobacteriaceae using a test
of the type generally adopted for the detection of Salmonellae. - J. Appl. Bact., 26; 444-452 (1963).
Escherichia coli ATCC 8739 Shigella flexneri ATCC 29903