TARTU ÜLIKOOL LOODUS- JA TEHNOLOOGIA TEADUSKOND ...

2. EKSPERIMENTAALNE OSA
2.1 Töö eesmärgid
Uurida trans-rasvhappe kolesteriididega rikastatud dieedi mõju lipiidide
varundamisele mudelorganismis C. elegans. Võrrelda N2 metsik tüüpi loomas ja fat-3
(ok1126) mutandis elaidiin trans-rasvhappe kolesterüül estri ja selle cis-isomeeri oleiini
kolesterüül estri mõju ussi elueale ja rasvavarudele,. Võrrelda erinevaid põlvkondi varurasva
hulga osas.
2.2 Materjalid ja metoodika
Laboris hoitakse C. elegansi NGM-il (nematode growth medium – nematoodi
kasvukeskkond) Petri tassidel. NGM-il on kindel koostis – 3g NaCl, 17g agarit, 2,5g
baktopeptooni, 1ml 1M MgSO4, 25ml 1M K(PO4)3, 1ml 1M CaCl2 ja 1ml koleterooli lahust
(5g kolesterooli 1l etanoolis) ühe liitri vee kohta. Toiduna kasutatakse Escherichia coli OP50
liini, mis on auksotroofne uratsiili suhtes. See võimaldab piirata bakterikasvu NGM-plaatidel.
Kasutasin kolme tüüpi kasvukeskkonda: tavaline NGM, 75 µM elaidiinkolesterüülestriga
NGM ja 75 µM oleiin kolesterüül ester, kuhu Kolesteriidide lisamiseks tuleb need
eelnevalt sulatada. Kasvatasin N2 metsiktüüpi ja fat-3 (ok1126) mutant liini 20ºC juures.
2.2.2 Vanuse sünkroniseerimine
Viies läbi katseid C. elegans'iga on tihti tarvis tagada usside grupi ühtne vanus, sellel
puhul kasutatakse sünkroniseerimist. Ühel Petri tassil kasvavat populatsiooni kasvatatakse
staadiumini, kus munemine on jõudnud maksimumini. Seejärel viiakse vaid munad üle teisele
plaadile. See tagab järgneva põlvkonna küllaltki ühtse vanuse.
17