LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POMŮCKY

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POMŮCKYChem. Listy 91, 369 - 372 (1997)VYUŽITÍ KAPILÁRNÍ ZÓNOVÉELEKTROFORÉZY PRO ANALYTICKÉHODNOCENÍ VYBRANÝCH DERIVÁTŮAKRIDINUIVA KOŠŤÁLOVÁ 3 , IVAN JELÍNEK 8 ,NAĎA ZIMOVÁ 3 a JACQUES BARBE b"Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta, UniverzitaKarlova, Albertov 2030, 128 40 Praha 2, h GerctopVra CNRS1411, Facultéde Pharmacie, 27, bdJean-Moulin,133 85 Marseille Cedex 5metod, zejména kapilární zónové elektroforézy (CZE).Tato moderní technika se v současnosti velmi dobře uplatňujejako alternativní metoda při analýzách farmaceutickyvýznamných látek 5 - 6 . Přes množství publikovaných aplikacíCZE s farmaceutickým zaměřením se v literatuře konkrétníodkaz na analýzu akridinu a jeho derivátů doposudneobjevil.Předmětem tohoto sdělení je optimalizace separace nověsyntetizovaných derivátů akridinu pomocí kapilárníelek

Tabulka ISložení roztoků nosných elektrolytů (koncentrace všechsložek byla 30 mmol.r )Složka 1 Složka 2 pHAsparagová kyselina (i-alanin 3,73Octová kyselina 6-aminokapronová kyselina 4,524-Morfolinoethansul- Histidin 6,15fonová kyselinaN[tris(hydroxymethyl)- Tris(hydroxymethyl)- 8,24methyl]glycinaminomethanZpracovánívýsledkůPro hodnocení čistoty sledovaných substancí byly zezískaných elektroforeorogramů odečteny hodnoty migračníchčasů a plochy píku.Pro objektivní hodnocení kvality separace sledovanýchlátek byly vypočteny hodnoty chromatografické optimalizačnífunkce 7 tvaru:Strukturní vzorce a kódová označení čtyř analyzovanýchderivátů akridinu, syntetizovaných na farmaceutickéfakultě v Marseille (Francie), jsou uvedeny na obr. 1.Zásobní roztoky vzorků analyzovaných látek o koncentraci0,5 mg.ml" 1 byly připraveny rozpuštěním 1 mg odpovídajícísubstance ve 300 |xl 0,1 M-HC1 a doplněním deionizovanouvodou na výsledný objem 2 ml. Kalibrační roztokyo koncentracích 0,001; 0,005; 0,025 a 0,125 mg.ml- 1 bylypřipraveny naředěním zásobních roztoků deionizovanouvodou. Modelový vzorek, připravený smísením 0,5 mlzásobních roztoků, obsahoval jednotlivé substance v koncentracích0,125 mg.ml" 1 .Pro určování rychlosti elektroosmotického toku byl použitvodný roztok thiomočoviny (p.a. Lachema, Česká republika)o koncentraci 30 mmol.l" 1 .Obr. 2. Závislost vypočtených hodnot procentuálního obsahulátek (C) BG 4 O, BG 30 ©, BG 51A a BG 474 V v substancíchna pH použitého nosného elektrolytuPodmínkyměřeníMěření v jednotlivých systémech byla prováděna zapodmínek uvedených v tabulce II.Tabulka IIPodmínky měřeníKapiláraTeplota termostatu 30 °CDávkováníNapětíDetekceKřemenná 75 um x 60 cmTlakové 1000 Pa/3s25 kVUV, X = 256 nm aaAbsorpční maximum pro všechny sledované derivátyObr. 3. Závislost hodnot chromatografické optimalizačnífunkce (COF) pro látky BG 4, BG 30, BG 51 a BG 474 na pHpoužitého nosného elektrolytu370

a, (3 - koeficienty významnosti = 1řeom - elektroosmotická mobilita thiomočovinyíefmp - elektroforetická mobilita nejpomalejší komponentysměsiVýsledky a diskusePro určení procentuálního obsahu sledovaných derivátůakridinu v substancích z ploch detegovaných píku bylapoužita metoda vnitřní normalizace. Hodnoty procentuálníchobsahů, vynesené v závislosti na pH nosného elektrolytu,jsou uvedeny na obr. 2. Za optimální je možno považovatnosný elektrolyt zajišťující oddělení maximálníhopočtu doprovodných nečistot a tím poskytující nejnižšívýsledky pro stanovovanou látku. Z průběhu závislostí naObr. 4. Závislost elektroforetických pohyblivostí u. ei (10'mm 2 /Vs) látek BG 4 O, BG 30 ©, BG 51 A a BG 474 V na pHpoužitého nosného elektrolytuobr. 2 je zřejmé, že jediný nosný elektrolyt nemůže současnězajistit uspokojivou separaci nečistot ve všech sledovanýchsubstancích. Pro hodnocení čistoty látek BG 4,BG 30 a BG 51 se jako nejvhodnější jeví nosný elektrolyto pH 6,15, separace nečistot látky BG 474 je optimálnív nejkyselejším použitém elektrolytovém systému o pH3,73. Zjištěné hodnoty minimálního procentuálního obsahustanovované látky se pro jednotlivé substance dosti liší.Z hlediska čistoty se jako nejproblematičtější jeví látka BG474 obsahující 24 % procent doprovodných látek.Kriteriem pro posouzení kvality vzájemné separaceanalyzovaných derivátů akridinu v jednotlivých nosnýchelektrolytech byl průběh závislosti hodnot COF na pHelektrolytového systému (obr. 3). Křivka proložená experimentálnímibody vykazuje nevýrazné maximum pro pH6,15 a velmi výrazně roste pro hodnoty pH < 4,52. Průběhzávislosti je v souladu s předpokládanou slabě bazickoupovahou sledovaných látek. Zhoršující se kvalitu separacev alkalické oblasti je možno vysvětlit rychle klesajícímihodnotami elektroforetických pohyblivostí pro pH > 7 (obr. 4).Lokální maximum pro pH 6 dobře koresponduje s optimálníhodnotou pH pro hodnocení čistoty substancí BG4, BG 30 a BG 51. Elektroforeogram dokumentující uspokojivouseparaci všech čtyř sledovaných derivátů akridinupři pH 3,73 je uveden na obr. 5.Parametry kalibračních závislostí analyzovaných látek(koncentrační rozsah 0,001-0,5 mg.ml" 1 , nosný elektrolyt- pH 3,73) jsou uvedeny v tabulce III. Z hodnotkoeficientů determinace je zřejmé, že získané závislostijsou ve sledovaném koncentračním rozsahu lineární. Statistickynevýznamné úseky na osách pořadnic potvrzují, žestanovení není zatíženo systematickou chybou. Hodnotypoměru signál/šum pro nejnižší měřené koncentrace ukazujína velmi dobrou citlivost metody. Pro všechny čtyřilátky je možno předpokládat, že mez stanovitelnosti budenižší než 1 mg.I" 1 .Tabulka IIIParametry kalibračních závislostí analyzovaných látek(N = 5, oc = 0,05)Obr. 5. Záznam separace čtyř derivátů akridinu v elektrolytovémsystému o pH 3,75./- BG 4 (ř m= 6,3 min); 2 - BG 51 (ř m= 6,7 min); 3 - BG 30 (í m= 7,4 min); 4 - BG 474 (f m= 8,0 min)ÚsekfmA.U.] 0,7+0,9 1,11±1,3 0,3±0,6 0,9±l,lSměrnice 277±6 191±8 412+12 375+14[mA.U. s mg ml]Koef. determinace 0,998 0,996 0,999 0,998s/n a (c=lmg.r 1 ) 8,2 5,3 12,7 6,0aPoměr signál/šum371

Závěr 4. Jurlina J. L., Paxton J. W.: J. Chromatogr. BA, 342,431 (1985).5 Altria KPráce popisuje metodu stanovení čtyř farmaceuticky - - D - : J - Chromatogr. A, 735, 43 (1996).6 Llovýznamných derivátů akridinu metodou kapilární elektro- - Y d D - K - : J- Chromatogr. A, 735, 29 (1996).forézy. Byly nalezeny experimentální podmínky měření7- Churáček J. a kol.: Analytická separace látek. SNTL,zajišťující dobrou separaci vlastních látek a jejich dopro- Praha 1990.vodných nečistot. Navržené stanovení je dostatečně citlivé,Lvhodné pro identifikaci i hodnocení čistoty analyzovaných Košťálová 3 ,1. Jelínek 3 , N. Zimová 3 and J. Barbe bsubstancí ("Department of Analytical Chemistry, Faculty of Science,Charles University, Prague, b Gerctop Ura CNRS 1411,Tato práce byla podpořena finančními prostředky GAUK j4jLITERATURAFaculté de Pharmacie, Marseille, France): Utilization ofCapillary Zone Electrophoresis for the Analytical Evaluationof Some Acridine DerivativesThe P r °po se d simple method is based on the utilizationof capillary zone electrophoresis and is suitable for the1 Modr Z • Remedia 2 821(1994) analytical evaluation of acridine derivatives. Optimum2. Barbe J.: Bulletin Ist Acrival Meeting on Chemothe- experimental conditions were found ensuring satisfactoryrapy of Trypanosomatidae, pp. 63. Marseille, France resolution of the studied compounds and their impurities.j 992 The described assay proved to be sufficiently sensitive and3. Kováč J., Kováč Š.: Organická chemia. SNTL, Praha suitable for the rapid identification of analyzed substancesj 977 and evaluation of their purity.372