FISH en el diagnostico diferencial de las lesiones melanociticas

FISH en el diagnosticodiferencial de las lesionesmelanociticasMaria GarridoHopital Universitario 12 de Octubre1

- La mayoría de los melanomas se pueden distinguir fácilmente de losnevus en el examen histopatológico.- Sin embargo, hay muchos tipos de nevus melanocíticos quehistopatológicamente simulan melanomas y variantes de melanomasque se asemejan a los nevus.2

Tumor Spitzoide atipico 3

ANTECEDENTE: FISH PARA EL DIAGNÓSTICO DE LESIONES MELANOCÍTICASLos nevus y los melanomas se diferencian en la presencia o ausencia deaberraciones cromosómicas:‣ los melanomas muestran patrones recurrentes de aberraciones con pérdidas del6q, 8p, 9p, and 10q y ganancias en 1q, 6p, 7, 8q, 17q, and 20q‣ los nevus no suelen tener alteraciones detectables por CGH, excepto un 20% denevus de Spitz con un incremento aislado del cromosoma 11p.Bastian BC et al. Am J Pathol 2003;163: 1765-1770Esta observación ha permitido el desarrollo de técnicas basadas en FISH aplicables a tejido enparafina para el DD entre nevus y melanomas.4

SELECCION DE SONDAS DE FISHLos cambios en los números de copias de ADN (CGH) fueron analizadas para determinar lacombinación de aberraciones cromosómicas que proporcionaba la más alta sensibilidad yespecificidad para distinguir entre nevus y melanoma.Las 14 bandas cromosómicas con mayor sensibilidad se seleccionaron para ser evaluados porFISH. Siempre que sea posible las sondas se dirigen a los genes con relevancia en el cáncer.Am J Surg Pathol2009;33:1146-11565

COMBINACION DE SONDAS DE FISHLas combinaciones de sondas con los más altos valores de AUC fueron 3 sondasdirigidas cromosoma 6 en el brazo corto (6p25), centrómero (CEP6), y el brazo largo(6q23) en combinación con una sonda para el cromosoma 11q13.Receiver Operator Characteristic (ROC) CurveAm J Surg Pathol2009;33:1146-11566

CRITERIOS POSITIVOS DE FISH6p25 en rojo (RREB), 6q23 en oro (MYB), 11q13 en verde (CCND1) y control de la sonda CEP6 en aqua.Criterios positivos:>29% núcleos con>2 señales 6p25>38% núcleos con>2 señales 11q13>55% núcleos con mas señales 6p25>CEP6>40% núcleos con señales 6q23

Ejemplo de un caso positivo de FISHcon el 1 conjunto de sondas:- ganancia de 11q13 (señal verde)31.1% (criterio negativo).- la ganancia de las señales para6p25 (señal roja) 88.9% (criteriopositivo).- Perdida relativa del 38% para 6q23(oro) (criterio negativo)8

NEVUS GANGLIONAR VS MELANOMA METASTASICO* No todos los melanocitos en los ganglios linfáticos indican metástasis incluso si seencuentran en la cuenca de drenaje de un paciente con melanoma.* El diagnóstico de la metástasis de melanoma es inequívoca en casos con:-borramiento de la arquitectura de los ganglios-Afectación masiva del parénquima-células con pleomorfismo y con mitosis.* Cuando la participación se limita a pequeños grupos de células, que no expresanalteraciones citológicas marcadas, el diagnóstico se convierte en un reto.9

Caso 1, varon de 64 años de edad, con afectacion de ganglios linfáticos (A, B) procedente de unmelanoma primario de 1 mm de espesor (C, D). Aumento de número de copias de 11q13 (CCND1)por FISH

Caso 30: Mujer de 69 años con un melanoma primario 0,9 mm en el dorso del piederecho (D) y ganglio linfático centinela femoral (C).El FISH muestra alto número de copias de 11q13 (señales verdes) y 6p25 (señalesrojas).

NEOPLASIAS MELANOCITICAS CON MELANOCITOSIS PAGETOIDEMelanocitosis Pagetoide también puede ser una característica en nevus de Spitz,acrales, traumatizados, o después de la exposición al sol, además de en melanomas.

Caso 21 carecía de consenso de los jueces(A). Existe una irregular de melanocitosgrandes suprabasales.B. Fue FISH +:aumento de copias (11q13).C, Re-escisión mostró un melanoma in situ6

FISH EN EL PRONOSTICO DEL MELANOMAASSESSMENT OF COPY NUMBER STATUS OF CHROMOSOMES 6 AND 11 INPRIMARY MELANOMAS BY FISH PROVIDES INDEPENDENT PROGNOSTICINFORMATIONJeffrey P. North, MD 1,3 , John T. Vetto, MD 2 , Kevin P. White, MD 1 , Clifton R. WhiteJr., MD 1 , Boris C. Bastian, MD 3 .Los pacientes cuyo melanoma fue FISH+ tenían un riesgo significativamente mayorde desarrollar metástasis (OR 4,11, p = 0,02) o morir de melanoma (OR 7,0, p =0,04) en comparación con los FISH-Disease Specific Survival p=0.02 Disease free survival, p=0.04 14

Estudiar los casos ambiguos de lesionesmelanocíticas con la sonda de FISH comercialde melanoma Diseñar una nueva combinación de sondas deFISH para intentar mejorar la sensibilidad deltest15

2 COMBINACION DE SONDAS DE FISH• El 1 panel de sondas FISH ha demostrado una sensibilidad del 75% -86% yuna especificidad del 94% -96%.• La heterogeneidad en las aberraciones cromosómicas entre los diferentessubtipos de melanomas es responsable de la mayor parte de los casos de falsosnegativos• Estos resultados llevan al desarrollo de una nueva combinación de sondas quedetecta cuatro loci en cuatro cromosomas diferentes, 6p25 (RREB), 11q13(CCND1), 9p21 (p16) y 8q24 (MYC) para mejorar el rendimiento de la 1 pruebaFISH.17

ABCEDFEjemplo de un caso positivode FISH con el 2 conjunto desondas:Aumento del número deseñales verdes (11q13)(81.7%) y azul (8q24) (38.3%)La sonda del cromosoma9p21 (oro) muestra deleciónhomocigota en la mayoría delas células del melanoma(86.7%).Señales para 6p25 (señalroja) con ganancia en 16.7%18

CRITERIOS POSITIVOS DE FISH PARA EL 2˚ CONJUNTO DE SONDASCriterios:% núcleos con>2 señales RREB >29%% núcleos con>2 señales CCND1 >29%% núcleos con>2 señales MYC >29%% núcleos con29%219 casos analizados con la combinación 2:Sensibilidad 83.5%Especificidad 94,2%244 analizados con la combinación 1 y/o 2:Sensibilidad 90.2%Especificidad 91,4%19

La información de supervivencia fueobtenida en 130 de los 133 pacientes conmelanoma, y la media de tiempo deseguimiento fue de 52,2 meses.La información de recaída fue obtenida en124 de los pacientes durante una media deseguimiento de 27,3 meses.20

1. La técnica de FISH con el Kit comercial de Abbott para distinguir melanoma denevus tiene una sensibilidad del 86.7% y una especificidad del 95.4% y puederesultar de gran ayuda en los casos ambiguos2. El desarrollo de un segundo grupo de sondas diseñadas por nosotros encombinación con el kit comercial ya existente en el mercado aumenta lasensibilidad del 81.9% al 90.2%21