Imunofluorescence, imunohistochemie
Imunofluorescence, imunohistochemie
Imunofluorescence, imunohistochemie
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
<strong>Imunofluorescence</strong>, <strong>imunohistochemie</strong><br />
Miroslav Průcha
<strong>Imunofluorescence</strong><br />
Reakce antigen – protilátka<br />
Přímá a nepřímá<br />
Přímá - specifická protilátka označená fluoresceinem<br />
Nepřímá - k řezu tkáně nebo suspenze se přidá vyšetřovaný<br />
vzorek , následně specifická protilátka se vizualizuje druhou<br />
protilátkou konjugovanou vhodným fluorochromem<br />
Diagnostika autoprotilátek<br />
Substráty<br />
Protilátky
<strong>Imunofluorescence</strong> – orgánově nespecifické<br />
Hep 2 – (buněčná lidie lidského nazofaryngeálního karcinomu<br />
ANA , cílová struktura – jádro<br />
Typy fluorescence – homogenní - anti-dsDNA, periferní a zrnitá<br />
–ENA<br />
Critidium lucilliae – prvok s kinetoplastem, kinetoplast<br />
Lidské neutrofilní leukocyty – ANCA – cytoplazma, granula<br />
neutrofilů<br />
c- ANCA (cytoplazmatický typ, proteináza 3), pANCA (periferní<br />
typ, myeloperoxidáza) a A-ANCA (atypická fluorescence)
Orgánově nespecifické autoprotilátky<br />
Opičí jícen – antiendomysiální protilátky (EMA) cílový antigen –<br />
tkáňová transglutamináza<br />
Krysí ledviny – AMA antimitochondriální, ledvinné tubuly ,<br />
dehydrogenázy 2-oxo kyselin<br />
Krysí žaludek – pariet. bb(GPCA) cílový antigen – K+/H+ATPáza a<br />
vnitřní faktor, hladký sval (ASMA)<br />
Opičí ledviny – bazální membrána glomerulů (anti GBM), antigen –<br />
kolagen IV<br />
Krysí játra a ledviny – autoprotilátky proti mikrosomům (LKM),<br />
hepatocyty a tubulární buňky ledviny, cílový antigen – cytochrom<br />
P450
Fluorescence<br />
Fluorochromy – fluoresceinizothiokyanát (FITC), 490 nm, zelené<br />
světlo 517 nm<br />
Tetrametylrhodamin – červené světlo (absorbce 550 nm, excitace<br />
580 nm)<br />
Subjektivní hodnocení<br />
Přístrojové vybavení – fluorescenční mikroskop
Imunohistochemické metody<br />
Vizualizace konkrétní molekuly v buňkách a tkáních<br />
Princip vazby antigenu a protilátky – polyklonální,<br />
monoklonální<br />
Přímá a nepřímá<br />
Příprava buněk a tkání , parafín, zmrazené tkáně<br />
Fixace (paraformaldehyd, aceton, metanol)) nebo<br />
permeabilizace buněčné membrány (Triton X-100)
Imunohistochemie<br />
Imunohistochemická reakce – nespecifická (hydrofobní nebo<br />
iontová interakce), proto blokace<br />
Hovězí albumin nebo neimunní imunoglobuliny(ředěné sérum<br />
zvířete)<br />
Ředění<br />
Značení protilátek – alkalická fosfatáza nebo peroxidáza<br />
Metoda vícenásobného značení – protilátky od různých<br />
zvířecích druhů –myšía králičí/kozí<br />
Subjektivní hodnocení – preparát vs. pozadí
Imunohistochemie<br />
Využití<br />
Složení buněčného infitrátu u autoimunitních chorob, detekce<br />
imunokomplexů a složek komplementu v tkáních, typizace<br />
lymfomů<br />
Vybavení – mikroskop , mikrotom, lednice -80C
Change language