CINtec® Histology Kit - Roche mtm laboratories!

Recommendations

Info

omend i forskellige mængder og med forskellige ekspressionsmønstre. Histologiske vævspræparater har intakt vævsmorfologi, når de anvendes som en hjælp til fortolkning af den cervikale læsions p16 INK4a -positivitet. Det er blevet foreslået, at man bedømmer et diffust farvningsmønster, dvs. en jævn farvning af celler i de basale og parabasale cellelag, med eller uden farvning af celler i de overfladiske cellelag, som et positivt testresultat for overekspression af p16 INK4a . Dette farvningsmønster har vist sig at give det højeste niveau af både sensitivitet og specificitet for svær CIN [1, 4, 5]. Modsat anses et fokalt farvningsmønster (farvning af enkelte celler eller små celleklynger, dvs. ujævn farvning, især ikke af de basale og parabasale celler) og mangel på immunreaktivitet for at være et negativt testresultat for overekspression af P16 INK4a [1, 4, 5]. Fortolkningen af objektglas, der er farvet til p16 INK4a ved brug af CINtec ® Histology Kit, skal udføres sammen med H&E-farvede objektglas, der er klargjort fra de samme cervixvævsprøver. De yderligere oplysninger, der opnås fra de CINtec ® - farvede objektglas, skal kombineres med de foreløbige morfologibaserede diagnoser, der er stillet på de H&E-farvede objektglas, for at kunne stille en endelig diagnose. Klinisk signifikans Den samlede aflæsning af H&E-farvede objektglas, der består af cervixbiopsisnit sammen med på hinanden følgende objektglas fra den samme vævsprøve og immunfarvet til p16 INK4a , har vist sig at forbedre den diagnostiske nøjagtighed og interobservatøreroverensstemmelsen ved diagnosticering af svær cervikal intraepithelial neoplasi (CIN2+). Den patologiske diagnose på baggrund af de H&E-farvede cevixvævssnit etablerer grundlaget for beslutningen om yderligere behandling. Virkningen af en unøjagtig diagnose er derfor signifikant. Unøjagtig diagnosticering kan føre til forkert behandling af patienten, dvs. overbehandling af hovedsageligt sunde kvinder, eller underbehandling af kvinder med etablerede svære dysplastiske læsioner. Den diagnostiske fortolkning af histologiske, H&E-farvede vævssnit er genstand for en høj grad af uenighed blandt patologer. Der er rapporteret om mindre grader af inter- og intraobservatøroverensstememlse i cervixhistologi i forskellige udgivelser [17-20]. I et stort multicenterforsøg i USA vurderedes flere veluddannede patologers fortolkning af histologiske cervixprøveundersøgelser (2237 kolposkopiske biopsier og 535 LEEP-keglebiopsiprøver). Reproducerbaren af den histopatologiske fortolkning var kun moderat (kappa=0,46 for stansebiopsier og kappa=0,49 for LEEP-biopsiprøver) [17]. Under anvendelse af WHO's og et ændret Bethesdaklassificeringssystem har interobservatøreroverensstemmelsen i seks histopatologiske vurderinger af 125 kolposkopiske biopsiprøver vist sig at være dårlig for begge klassificeringssystemer [18]. En undersøgelse i Storbritannien har ligeledes vist ringe interobservatøreroverensstemmelse blandt otte histopatologiske eksperter, der undersøgte 100 kolposkopiske biopsiprøver (uvægtet kappa-værdi på 0,358) [19]. Ved at føje objektglas, der er farvet med CINtec ® Histology Kit, til de traditionelle, H&E-farvede objektglas, der anvendes til diagnosticering, er den samlede nøjagtighed af denne histomorfologiske diagnoseprocedure blevet forbedret. REF: 9511 3 / 29 2007-9511-001DA Rev 2.4
Procedureprincip CINtec ® Histology Kit indeholder et sæt reagenser til immucytokemisk påvisning af p16 INK4a -antigenet. Sættet er beregnet til udførelse af en immunhistokemisk farvningsprocedure i to trin af formalinfikserede, paraffinindstøbte vævsprøver fra cervixbiopsier. Til påvisning af antigenet anvendes en primær, monoklonal museantistofklon E6H4 ® , der er rettet mod humant p16 INK4a -protein. Der anvendes et visualiseringsreagens, der er klar til brug, bestående af polymerreagens, der er konjugeret med peberrodsperoxydase og gede-anti-mus Fab'-antistoffragmenter. Visualization ReagentVisualiseringsreagenserne har undergået en fast-fasebinding for at eliminere krydsreaktivitet med humane immunglobuliner. Kromogenreaktionen er baseret på peberrodsperoxidasemedieret konvertering af et DAB-kromogen til et synligt reaktionsprodukt på antigenstedet. Efter kontrastfarvning kan prøven dækkes med dækglas og resultaterne kan evalueres ved hjælp af lysmikroskopi. IV. Reagenser Medfølgende materialer De nedenfor angivne materialer medfølger i alle sæt og er tilstrækkelige til at udføre 50 prøver og 50 negative kontrolreaktioner. Antallet af prøver er baseret på brug af 200 µL reagens pr. objektglas. 1 Peroxidase Blocking Reagent Peroxidase Blocking Reagent 2 x 11,5 mL, klar til brug 3 % hydrogenperoxid, tilsat 15 mmol/L natriumazid (NaN3). Materialesikkerhedsdatablad fremsendes på anmodning. 2 Mouse anti-Human p16 INK4a Antibody Mouse anti-Human p16 INK4a Antibody 11,5 mL, klar til brug Monoclonal mouse anti-Human p16 INK4a antibody, Clone E6H4 ® , supplied in 50 mmol/L Tris buffer pH 7.2, containing 15 mmol/L sodium azide (NaN3) and stabilizing protein. REF: 9511 4 / 29 2007-9511-001DA Rev 2.4
Page 1 and 2: Brugervejledning CINtec ® Histolog
Page 3: I. Produktnavn CINtec ® Histology
Page 7 and 8: Opbevaring Opbevares ved 2-8 °C. O
Page 9 and 10: 8. Hvis der observeres uventet farv
Page 11 and 12: 1.4 Kontrastfarvning DAB-farvningsr
Page 13 and 14: Trin 3: Autostainerprocedure • Ov
Page 15 and 16: 3. Farvningsprocedure til manuel br
Page 17 and 18: Trin 5: Substrate-Chromogen Solutio
Page 19 and 20: Fortolkningen af objektglas, der er
Page 21 and 22: Tabel 1 Forbedring af diagnostisk n
Page 23 and 24: Reproducerbarheden inden for samme
Page 25 and 26: 3. Overdreven baggrundsfarv ning af
Page 27 and 28: XII. Symboler Symbol: Forklaring: X
Page 29 and 30: 11. Kong CS, Balzer BL, Troxell ML,

CINtec® Histology Kit - Roche mtm laboratories!

Create successful ePaper yourself

Delete template?

Save as template?