Kohlenhydrate und Kohlenhydrat-Stoffwechsel - Online Media Server

Grundpraktikum Humanbiologie I – Kohlenhydrate
Gefäß-Nr. 1 2 3 4 5 6
Glucose [ml] 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
H2O [ml] 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0
DNSA-Lsg. [ml] 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Danach werden alle Proben 5 min bei 95 °C inkubiert. Nach dem Abkühlen werden
jeweils 0.1 ml der Reaktionslösungen (1-6) zu je 0.9 ml H2O in Halbmikroküvetten
geben und die Absorption bei 546 nm gegen H2O gemessen.
Auswertung
Glucose-Eichkurve
� Tragen Sie auf Millimeterpapier die gemessenen Absorptionen ∆A (Y-Achse)
gegen die millimolaren Glucosekonzentrationen (X-Achse) auf.
Saure Hydrolyse
� Tragen Sie die Absorptionen ∆A (Y-Achse) gegen die Zeit ∆t (X-Achse) auf.
Die Kurve zeigt ein Plateau. Entnehmen Sie dort die Werte mit der höchsten
Absorption (evtl. Mittelwert). Über die Eichkurve wird die bei der Hydrolyse
gebildete Menge Reduktionsäquivalente (z.B: Glucose) bestimmt.
Enzymatische Hydrolyse
� Tragen Sie die Absorption ∆A gegen die Zeit ∆t in das obige Schaubild ein.
Bestimmung des Polymerisationsgrades
Ein Maß für die Anzahl der Monomere in einem Poly- oder Oligosaccharid ist der sogenannte
Polymerisationsgrad (DP = degree of polymerization). Die Glucosegesamtkonzentration
dividiert durch die Glucosekonzentration zu den einzelnen Zeiten
ergibt den jeweiligen Polymerisationsgrad (DP). Um den Polymerisationsgrad zu
bestimmen, entnehmen Sie aus der Kurve für die saure Spaltung (saure Totalhydrolyse)
den Maximalwert Amax und bestimmen aus der Glucose-Eichgerade die dazugehörige
Glucosekonzentration. Für die enzymatische Spaltung bestimmen Sie aus
den Absorptionen ∆A zu den einzelnen Messzeiten (t = 0, 3, 6, etc. [min]) die den
reduzierenden Gruppen entsprechenden Konzentrationen und bestimmen daraus
den jeweiligen Polymerisationsgrad.
� Tragen Sie DP [%] gegen die Zeit [min] auf. Diskutieren Sie die Ergebnisse!
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