IU CE Deshidrogenasa Láctica-esp - BioTécnica

DESHIDROGENASA LÁCTICA
11.004.00
‘FINALIDAD
Kit destinado a la determinación cuantitativa de la actividad de la deshidrogenasa
Láctica (LDH) en el suero y plasma.
PRINCÍPIO DEL MÉTODO
La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por NADH,
obteniéndose lactato y NAD + . La concentración catalítica es determinada a partir
de la velocidad de desaparecimiento del NADH, medido a 340nm.
LDH
Piruvato + NADH + H + L-lactato + NAD +
COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS
Tampón TRIS 50 mmol/L pH 7,5; Piruvato 0,6 mmol/L;
azida sódica 0,09% p/v.
NADH 0,18 mmol/L; azida sódica 0,09% p/v.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
• Estabilidad: Estable hasta la fecha de validez del kit que está impresa en el
rótulo del envase.
• No usar reactivos cuya fecha de validez haya expirado.
• Conservar de 2 a 8 ºC.
• Los reactivos deben permanecer fuera de la temperatura especificada solo el
tiempo necesario para la realización de los tests.
• No congelar y mantener al abrigo de la luz.
MATERIAL NECESSÁRIO NÃO FORNECIDO
Espectrofotómetro o fotómetro para lectura en 340 nm.
Baño de agua, termostatizado a 37 ºC.
Pipetas de vidrio y/o automáticas.
Reloj o Cronómetro.
• Tubos de ensayo.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES
• El kit se destina sólo para uso diagnóstico in vitro.
Las muestras a ser analizadas deben ser tratadas como material
potencialmente infectivo.
• Utilizar los EPI’s de acuerdo con las Buenas Prácticas de Laboratorio
Clínico.
• Desechar las sobras de las reacciones de acuerdo con las Buenas
Prácticas de Laboratorio Clínico (BPLC) y Programa de Gestión de
Residuos de Servicio de Salud (PGRSS).
• Las informaciones de Descarte, Seguridad y Primeros Socorros están
descritas en la Ficha Individual de Seguridad de Productos Químicos
(FISPQ) de este producto, disponible en www.biotecnica.ind.br o por el
teléfono +55 (35)-3214-4646.
• No mezclar reactivos de lotes diferentes.
• No cambiar las tapas de los frascos de los reactivos, a fin de evitar
contaminación cruzada.
• No usar el reactivo cuando éste presente característica visual en
desacuerdo con el especificado en la FISPQ del producto.
• Evitar dejar los reactivos fuera de las condiciones de almacenamiento
especificadas, cuando los mismos no estén en uso.
• Usar pipetas de vidrio y punteras desechables específicas para cada
muestra, control, patrón/calibrador y reactivo.
• El nivel de agua del baño-maría debe ser superior al de los tubos de
ensayo que contienen las reacciones.
MUESTRA - PREPARO Y ESTABILIDAD
• Suero y Plasma (heparina).
La deshidrogenasa láctica es estable por 1 día si conservada en temperatura de
2 a 8 ºC.
Obs: La demora en la separación del suero, ocasiona resultados. SEPARAR
INMEDIATAMENTE.
PROCEDIMIENTO TÉCNICO
A) PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Reactivo de Trabajo: preparar en la proporción: 4 partes de R1 + 1 parte del R2.
Agitar suavemente. Estable por 30 días de 2 a 8 ºC.
B) PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo durante tres minutos a 37 ºC.
2. Pipetar en un tubo de ensayo:
Volumen
Reactivo de Trabajo 1,0 mL
Muestra 20 µL
3. Mezclar cuidadosamente e inserir en las puerta-cubetas termostatizadas a
37ºC.
Accionar el cronómetro.
4. Tras 60 segundos, apuntar la absorbancia inicial (A0) y efectuar nuevas
lecturas a cada minuto, durante 3 minutos, (A1, A2 y A3 respectivamente).
PROCEDIMIENTO DE CALIBRACIÓN/CÁLCULOS
Usando las lecturas de las absorbancias, calcular la media de la variación de la
absorbancia por minuto (∆A/min.).
∆A/min. = (A0 - A1) + (A1 - A2) + (A2 - A3)
3
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Varginha MG BRASIL CEP: 37026-470 Tel/fax: +55 35 3214 4646
www.biotecnica.ind.br
La actividad de la LDH en la muestra es calculada por la multiplicación del
∆A/minuto por el factor correspondiente:
Ejemplo:
A0 = 1,310 A1 = 1,265
A2 = 1,220 A3 = 1,175
Deshidrogenasa Láctica (U/L) = ∆A/min x 8095
∆A/min.= (1,310 - 1,265) + (1,265 - 1,220) + (1,220 - 1,175)
3
∆A/min.= 0,045
LDH (U/L) = 0,045 x 8095 = 364 U/L
OBS: Para cálculo de Factor en las adaptaciones en analizadores automáticos
utilizar coeficiente de absortividad do NADH = 6,3.
SENSIBILIDAD Y LINEALIDAD
- Sensibilidad: 8 U/L.
- Linealidad: 2000 U/L.
Para valores superiores, diluir la muestra con NaCl 150 mM (0,9%), realizar
nueva dosificación y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilución.
LIMITACIONES DE LA TÉCNICA
• Anticoagulantes
Citrato, EDTA, Fluoruro y Oxalato no deben ser usados, pues interfieren en la
dosificación.
• Hemólisis, Ictericia y Lipemia
Bilirrubina > 20 mg/dL
Triglicéridos > 1000 mg/dL
CONTROL DE LA CALIDAD
Todo laboratorio clínico debe mantener un programa de control interno de la
calidad que defina claramente los objetivos, procedimientos, normas y criterios
para límites de tolerancia, acciones correctivas y registro de las actividades. Al
mismo tiempo, debe ser mantenido un sistema definido para monitorear la
variabilidad analítica que ocurre en todo sistema de medición.
El uso de controles para avaluar la imprecisión de las determinaciones debe ser
práctica rutinera en el laboratorio. Se sugiere usar un control en la faja de
referencia o en el nivel de decisión y otro control con valor en otra faja de
significado clínico. La aplicación del sistema de reglas múltiplas de Westgard
para avaluación del estado de control también es recomendable.
El laboratorio debe participar de programas de control externo de calidad a fin de
verificar la exactitud de sus resultados. Se tiene como ejemplo los programas
ofrecidos por la SBAC (Sociedade Brasileira de Análises Clínicas) y SBPC
(Sociedade Brasileira de Patologia Clínica).
Para Calibración y Control Interno de Calidad de Laboratorio se recomienda el
uso del suero calibrador y de los sueros control abajo:
Suero Calibrador - Autocal H
Suero Control Normal - Quantinorm
Suero Control Patológico - Quantialt
VALORES DE REFERENCIA
37 ºC
Adulto 225 - 450 U/L
Niños hasta 12 meses hasta 500 U/L
13.002.00
13.003.00
13.004.00
Estos valores son únicamente para orientación siendo recomendable que cada
laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.
Conversión para Unidad del Sistema Internacional (SI): µKat/L
LDH (U/L) x 0,017 = LDH (µKat/L)
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO
Repetibilidad
La realización de 20 determinaciones de una misma muestra en un mismo día,
con valores dentro de la faja de referencia mostró un Coeficiente de Variación de
2,96%.
Reproducibilidad
La realización de 10 determinaciones de una misma muestra, analizada en días
diferentes mostró un Coeficiente de Variación de 0,52%.
Especificidad Analítica
La comparación con un método similar, ya validado, mostró un coeficiente de
correlación, r, igual a 0,999 a partir de muestras obtenidas de pacientes de
ambulatorio. La ecuación de regresión obtenida fue Y = 0,9947 X + 4,794.
SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
La deshidrogenasa láctica (LDH) es la enzima responsable por la conversión de
lactato a piruvato y posee amplia distribución en los órganos y tejidos. Está
localizada en el citoplasma e las mayores concentraciones son encontradas en el
hígado, corazón, riñón, músculo esquelético, eritrocitos, pulmón, bazo, plaquetas,
leucocitos y cerebro.
Revisión: 01 - JULIO/2011

Las concentraciones de LDH dentro de las células son cerca de 500 veces
mayores que en la sangre, siendo que cualquier aumento en la actividad de la
LDH en el suero sugiere lesión tisular.
Su dosificación es especialmente indicada en las neoplasias, miocarditis, infarto
del miocardio, distrofia muscular, mononucleosis infecciosa, hepatopatias,
pneumopatias, etilismo, pancreatitis y falencia renal.
Debido a su alta concentración intraeritrocitaria cualquier hemólisis puede llevar a
resultados falsamente elevados.
OBSERVACIONES
1. La limpieza y secado adecuados del material usado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de resultados
correctos.
El agua utilizada en la limpieza del material debe ser reciente y exenta de
agentes contaminantes. La limpieza de la vidriaría debe ser hecha con
detergente neutro. El enjagüe debe ser exhaustivo siendo los últimos con agua
destilada o deionizada.
2. El agua utilizada en el laboratorio debe tener la calidad adecuada a cada
aplicación. Así, para preparar reactivos y usar en las mediciones, el agua debe
ser del Tipo II, con resistividad > 1 megaohms o conductividad < 1 micro
siemens y concentración de silicatos < 0,1 mg/L. Para el enjagüe inicial de la
vidriaría, el agua puede ser del Tipo III, con resistividad > 0,1 megahoms o
conductividad < 10 micro siemens. En el enjagüe final, utilizar agua del Tipo II.
Columna deionizadora con su capacidad saturada libera agua alcalina, varios
iones y también substancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o mismo horas, alterando de manera
imprevisible los resultados. Así, es fundamental establecer un programa de
control de la calidad del agua.
PRESENTACIONES
Presentación 1
Presentación 2
Presentación 3
R1
R2
R1
R2
R1
R2
1 x 40 mL
1 x 10 mL
2 x 40 mL
2 x 10 mL
4 x 40 mL
4 x 10 mL
50 tests
de 1 mL
100 tests
de 1 mL
200 tests
de 1 mL
GARANTIA DE CALIDAD
Antes de ser liberados para el consumo, todos los reactivos Biotécnica son
testados por el Departamento de Control de Calidad. La calidad de los reactivos
es asegurada hasta la fecha de validez mencionada en el envase de
presentación, desde que almacenados y transportados en las condiciones
especificadas. Los datos relativos al Control de Calidad de este producto (lote
impreso en las etiquetas de los frascos de reactivos) pueden ser solicitados en:
sac@biotecnicaltda.com.br
AUTOMACIÓN
Este procedimiento es automatizado en la mayoría de los analizadores.
Los protocolos están disponibles en www.biotecnica.ind.br
SAC - SERVICIO DE ASISTENCIA AL CLIENTE
Cualquier duda en la utilización de este kit, entrar en contacto con la Asesoría
Científica de la Biotécnica Ltda, a través del teléfono +55 35 3214 4646 o por el
e mail sac@biotecnicaltda.com.br
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• SCIENTIFIC DIVISION, WORKING GROUP ON ENZYMES. International
Federation of Clinical Chemistry IFCC methods for measurement of
catalytic concentration of enzymes. Clin. Chim. Acta. v. 281, v.1-2, p.S5-
S39, 1999.
• KREUTZER, H. H.; FENNIS, W. H. S. Lactic dehydrogenase isoenzymes in
blood serum after storage at different temperatures. Clin. Chim. Acta v.9,
p.64-68, 1964.
• YOUNG, D.S. Effects of drugs on clinical laboratory tests - vol. 2, 5 ed.
Washington DC: AACC Press, 2000.
• WESTGARD, J. O. et al. A multi-rule shewhart chart quality control in
clinical chemistry. Clin. Chem. v.27 p.493-501, 1981.
RESPONSABILIDAD TÉCNICA
Dr. Gilson Sério Pizzo - CRF MG - 5310
MS
80027310191
TABLA DE SÍMBOLOS INTERNACIONALES
SÍMBOLO IDIOMA DEFINICIÓN
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Consultar Instruções de Uso
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Consultar la metódica
Código
Code
Código
Número de lote
Batch code
Denominación de lote
Para uso diagnóstico in vitro
For in vitro diagnostic medical device
Para uso en diagnostico in vitro
Conteúdo do kit
Contents of kit
Contenido del estuche
Conteúdo suficiente para testes
Contains sufficient for tests
Contenido suficiente para ensayos
Calibrador
Calibrator
Calibrador
Controle
Control
Control
Padrão
Standard
Patrón
Reagente e seu número/abreviação
Reagent and its number/abbreviation
Reactivo y su número/abreviación
Limite de temperatura
Temperature limitation
Temperatura límite
Data limite de utilização (último dia do mês)
Use by (last day of the month)
Estable hasta (ultimo día del mes)
Fabricado por
Manufactured by
Elaborado por
Risco biológico
Biological risk
Riesgo biológico
Corrosivo
Corrosive
Corrosivo
Tóxico
Toxic
Tóxico
Inflamável
Flammable
Inflamable
Nocivo / Irritante
Harmful / Irritant
Nocivo / Irritante
Material reciclável
Recyclable material
Material reciclable
Não descartar diretamente no ambiente
Dispose properly
Desechar adecuadamente