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142 Hemograma: Cómo Hacer e Interpretar
leucocitos, con excepción de los basófilos.
Secuencialmente, la muestra diluida pasa
por un sistema de apertura de impedancia
simple (DC) en la cual se cuentan los basófilos.
Fundamentos de la tecnología Cobas
La tecnología Cobas consiste en un colorímetro
a 540nm, dos sistemas de abertura
de impedancia simple y un detector múltiple
que combina impedancia eléctrica y
absorción óptica para recuento diferencial.
Sistema de Apertura de impedancia
Sistema 1: sistema de recuento con apertura
de 100µm de diámetro sin foco hidrodinámico
(mismo canal donde se dosifica la
hemoglobina). Se usa para recuento de leucocitos
(y medición de sus volúmenes – para
aparatos con diferencial de tres partes).
Sistema 2: segundo canal de recuento con
abertura de 50µm de diámetro, sin foco
hidrodinámico. Se usa para conteo y determinación
del tamaño de los eritrocitos y
plaquetas. El límite de 2µm 3 se utiliza para
discriminar las plaquetas de los ruidos eléctricos.
A pesar de no utilizar el foco hidrodinámico,
la edición de pulsos se hace solo para
las señales eléctricas de trayectoria axial, de
modo de evitar que las señales eléctricas de
trayectoria no axial (de células que puedan
haber circulado en la zona de conteo) sean
eliminadas. Después de que los eritrocitos
y plaquetas son discriminados, el VCM (fL)
se obtiene como promedio y el RDW, como
desviación estándar de la amplitud de señales
que corresponden a los volúmenes, y se
expresa como porcentaje del promedio, es
decir, como coeficiente de variación (%). De
modo análogo, se determinan el VPM y el
PDW para plaquetas, donde el PDW incluye
solo una amplitud de 70% de las señales en
torno al promedio (VPM).
Sistema 3: tercer canal de recuento con
abertura de 80µm de diámetro, sin foco
hidrodinámico. Se usa para el recuento de
basófilos.
Sistema de citometría de flujo Cobas que
asocia un transductor de señal óptica con
foco hidrodinámico y abertura de impedancia:
En este canal de recuento se acoplan un
transductor de señal óptica para absorción
de luz y un detector de abertura de impedancia,
y se utiliza también un sistema de
foco hidrodinámico. En este sistema, el foco
hidrodinámico limita la zona de sensibilidad
de volúmenes, proporcionando que las células
que pasan por los detectores secuenciales,
una a una, por medio de flujo continuo,
sean contadas de modo exacto y tengan
medidos sus impulsos eléctricos de baja frecuencia
y sus caracteres ópticos. La abertura
de impedancia de 60µm de diámetro, con
foco hidrodinámico asociado, permite el recuento
y la definición de los volúmenes leucocitarios.
La transmisión óptica determina
la complejidad interna de los leucocitos.
De forma práctica, en los instrumentos
Cobas Argos 5 Diff y Cobas Argos 5000, el
recuento en el canal diferencial incluye seis
(cuatro + dos) partes (neutrófilos, eosinófilos,
monocitos, linfocitos, además de los linfocitos
atípicos o blastos pequeños, y células
grandes mal coloreadas, las LIC, que pueden
incluir granulocitos inmaduros y blastos
mayores). Este recuento diferencial de
seis partes asociado al canal para recuento
de basófilos permite que tales instrumentos
puedan realizar el recuento diferencial en
siete partes.