DECISCAN® HCV PLUS 24 tests 72310

DECISCAN ® HCV PLUS
24 tests 72310
English p. 3
Français p. 11
Español p. 21
Deutsch p. 29
Italiano p. 37
Português p. 45
Svenska p. 53
Dansk p. 61
"
Bio-Rad."

DECISCAN ® HCV PLUS
24 tests 72310
IMMUNOBLOT FOR THE DETECTION OF ANTI-HCV ANTIBODIES
IN HUMAN SERUM OR PLASMA
IVD For In Vitro Diagnostic Use
Manufacturer Quality Control
All manufactured and commercialised reagents are under complete quality system starting from
reception of raw material to the final commercialisation of the product.
Each lot is submitted to a quality control and only is released on the market when conforming to the
acceptance criteria.
The records relating to production and control of each single lot are kept within our company.
3

4
1 - CLINICAL INTEREST
2 - PRINCIPLE OF THE TEST
3 - KIT CONTENTS
TABLE OF CONTENTS
4 - MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
5 - HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS
6 - PRECAUTIONS
7 - SAMPLES
8 - RECONSTITUTION OF THE REAGENTS - VALIDITY - STORAGE
9 - ASSAY PROCEDURE
10 - READING AND INTERPRETATION OF RESULTS
11 - PERFORMANCES
12 - LIMITS OF THE TEST
13 - REFERENCES

1 - CLINICAL INTEREST
DECISCAN ® HCV PLUS is a membrane test using an immunoenzymatic technique for the identification of
antibodies associated with infection caused by the hepatitis C virus in human serum or plasma.
The characterization of these antibodies is an essential supplemental step for a better understanding of HCV
serology allowing follow-up of the sera antibody evolution.
2 - PRINCIPLE OF THE TEST
DECISCAN ® HCV PLUS uses, as a solid support, a membrane fixed on a plastic strip with the following sequential
coating scheme :
1) Anti-human IgG control
This control allows simultaneously :
the validation of sample dispensing,
the control of the reagents (conjugate, substrate),
the reading of the results according to the intensity of the control signal.
2) Fusion protein : GST
Genes coding for NS3 and NS4 proteins are fused to the Glutathione S transferase gene.
GST protein control for the presence of anti GST antibodies which can induce false positive reactions.
3) HCV antigens
• Recombinant proteins produced by E.coli from clones selected :
in the non structural area : NS3 and NS4
• Peptides selected for their high immunogenicity :
in the structural area : C1 and C2
in the non structural area : NS4
Antihuman
IgG
control
GST
fusion
protein
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
The assay procedure includes the following reaction steps :
1) The serum to be tested is incubated with the strip. HCV antibodies, if any, bind to the antigens fixed on the solid
phase.
2) The alkaline phosphatase labelled anti-human IgG antibodies, added after washing, bind to the specific
antibodies captured on the solid phase.
3) The unbound enzymatic conjugate is removed by washing, and the antigen/antibody complex is revealed by
substrate addition.
4) After stopping the reaction, the coloured bands are read and the results interpreted.
5

3 - KIT CONTENTS
All reactive are exclusively for in vitro diagnostic use.
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LABEL REAGENTS PRESENTATION
R1 COATED STRIP with recombinant HCV Ag and HCV peptides from Capsid,
NS3 & NS4 regions
24 strips
R2 CONCENTRATED WASHING SOLUTION/DILUENT (5 x) 1 vial
100 ml
R3 NEGATIVE CONTROL SERUM 1 vial
Human serum without anti-HCV antibodies, negative for Ag HBs,
anti-HIV1 and HIV2 antibodies.
Preservative : < 0.1 % sodium azide
0.2 ml
R4 POSITIVE CONTROL SERUM 1 vial
Human serum positive for anti-HCV antibodies negative for Ag HBs,
anti-HIV1 and HIV2 antibodies, photochemically inactivated
Preservative : < 0.1 % sodium azide
0.2 ml
R5 SAMPLE DILUENT 1 vial
Tris/NaCl buffer with milk, phenol red
Preservative : 0.25 % Kathon
90 ml
R6 CONJUGATE 1 vial
Anti-human IgG antibodies (goat) labelled with Alkaline phosphatase
Tris NaCl buffer with green colorant
Preservative : < 0.1 % sodium azide
90 ml
R8 COLOUR DEVELOPMENT SOLUTION 1 vial
BCIP/NBT 5-Bromo-4-Chloro-Indolyl Phosphate (BCIP)
and Nitroblue Tetrazolium (NBT)
Preservative : < 0.1 % sodium azide
90 ml
R9 STOPPING SOLUTION 50 mM citric acid 1 vial
Preservative : 0.01 % Merthiolate 90 ml
6-COMPARTMENTS RACKS 4
4 - MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED
• Distilled or deionized water
• Bleach and sodium bicarbonate
• Absorbent paper
• Disposable gloves
• Protective glasses
• Automatic or semiautomatic adjustable or preset pipettes to dispense 10 µl
• Graduated pipettes with 3 ml capacity
• Graduated cylinders with 100 ml, 250 ml and 500 ml capacity
• Two dimensional, three-dimensional or rotative shaker (slow shaking)
• Container for biohazardous waste
• Vacuum pump with safety plug
• Shaker-incubator-distributor Systems*
(*) Consult us for detailed information about the equipment recommended by our technical department.
5 - HEALTH AND SAFETY INSTRUCTIONS
All reagents included in the kit are intended for "in vitro" diagnostic use.
• Wear disposable gloves when handling kit reagents and wash hands thoroughly afterwards.
• Do not pipette by mouth.
• The human serum used in positive control has been photochemically inactivated, however, no known test
method can offer complete assurance that HIV, HBV, HCV or other infectious agents are absent. Consider these
reagents and all patient samples as potentially infectious and handle them with the required precautions.

• Consider any material directly in contact with specimens and reagents of human origin as contaminated, hence
infectious materials.
• Avoid splashing samples or the solutions containing them.
• Spills should be rinsed with bleach diluted at 10%. If the contaminating fluid is an acid, spilled surfaces shall
be previously neutralized with sodium bicarbonate, then rinsed with bleach and dried with absorbent paper.
The material used for cleaning shall be discarded in a special container for contaminated residues.
• Samples, reagents of human origin as well as contaminated material and products shall be discarded after
decontamination :
- either by immersion in bleach at a final concentration of 5% of sodium hypochlorite (1 volume of bleach for
10 volumes of contaminated fluid or water) for 30 minutes,
- or by autoclaving at 121°C for 2 hours minimum.
CAUTION : do not introduce solutions containing sodium hypochlorite into the autoclave.
• Some reagents contain sodium azide as a preservative. Sodium azide may react with laboratory plumbing to
form copper or lead azides. Such azides are explosive. To prevent azide build-up, flush the pipes with a large
quantity of water if solutions containing azide are disposed of in the sink after inactivation.
6 - PRECAUTIONS
The quality of results is dependent on following good laboratory practices :
• Do not use expired reagents.
• Do not mix nor combine reagents from kits having different batch numbers during the same procedure.
• Before use, wait for 30 minutes for the reagents to stabilize at room temperature.
• Carefully reconstitute the reagents avoiding any contamination.
• Do not perform the test in the presence of reactive vapors (acids, alkalines, aldehydes) or dust liable to alter
the conjugate enzymatic activity.
• Use glassware perfectly washed and rinsed with distilled water or, preferably, disposable material.
• Use a new distribution tip for each serum.
• Strip washing is a critical step : respect the recommended number of washing cycles and check that the rack
compartments are entirely filled, then emptied. Poor washing may lead to incorrect results.
• Never use the same container or pipette to distribute different reagents.
7 - SAMPLES
Collect a blood sample according to current procedures. Serum or plasma may be used for the test. If serum is
used : extract it as soon as possible to avoid hemolysis. Hemolysis may seriously alter test performance. Samples
containing aggregates must be clarified by centrifugation before testing. Particles or suspended fibrin aggregates
may lead to false positive results.
The specimens can be stored at +2-8°C if screening is performed within 7 days or they may be deep-frozen at
–20°C.
Avoid repetitive freezing and thawing. Samples that have been frozen and defrozen more than 3 times cannot be
used.
If samples are to be transported, pack them according to the regulations for the transport of etiologic agents.
DO NOT USE CONTAMINATED, HYPERLIPEMIC OR HEMOLYZED SAMPLES.
NOTE : Samples containing up to 90 g/l albumin, 100 mg/l bilirubin, lipemic samples containing up to the
equivalent of 36 g/l trioleine, and hemolyzed samples containing up to 10 g/l hemoglobin do not affect the test
results.
8 - RECONSTITUTION OF THE REAGENTS - VALIDITY STORAGE
NOTE : Before use, allow the reagents to reach room temperature (18-30°C)
Concentrated Washing solution/ Diluent (5x)
Dilute washing solution 1:5 in distilled water and mix thoroughly.
20 ml are necessary per strip.
The reconstituted washing solution is stable for one month when stored at +2- 8°C.
All other reagents, when stored at + 2-8°C, are stable until the expiry date indicated on the labels.
Mix the sample diluent, the conjugate and the development solution, by turning upside down, before use.
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9 - ASSAY PROCEDURE
8
Preliminary comments
• Strictly follow the proposed procedure.
• Include the negative control and the positive control supplied in the kit in all assays performed during the same
day and when a new kit batch number is used.
• Record the numbers on the strips to correspond with patient identification or positive and negative controls.
• Prepare the washing solution (part 8).
• Remove the required number of strips from the cartridge. Take them by their plastic frame to avoid any direct
contact with the membrane. Place them in the rack compartments with the membrane upwards.
Protocol
1) Dispense 3 ml of sample diluent into each compartment.
Allow the strips to rehydrate for 5 minutes at room temperature while shaking.
2) Add 10 µl of sample or control to separate compartment and rinse the pipette tip 3 times in the dispensed
diluent.
3) Incubate for 2 hours while shaking at room temperature.
4) Aspirate the entire contents of each compartment using a vacuum pump equipped with a trap filled with bleach.
Carefully rinse the pipette between aspirations.
Add 3 ml of washing solution per compartment and shake for 2 minutes.
5) Repeat step 4 twice, for a total of 3 washings, then remove the last washing solution.
6) Add 3 ml of conjugate to each compartment.
Incubate for 30 minutes while shaking at room temperature.
7) Aspirate the liquid in each compartment.
Wash each strip 3 times, as indicated in step 4 and remove the last wash solution.
8) Add 3 ml of development solution to each compartment.
Incubate for 6 minutes while shaking at room temperature.
9) Aspirate the liquid in each compartment.
10) Add 3 ml of stopping solution to each compartment.
Incubate for 5 minutes while shaking at room temperature.
11) Aspirate the liquid in each compartment and rinse the strips 3 times with distilled water.
12) Remove the strips from each compartment and dry carefully between two absorbent paper sheets. Keep the
strips out of light to avoid background appearance.
10 - READING AND INTERPRETATION OF RESULTS
1) READING OF RESULTS
The location and identification of control bands and HCV antigen bands on each strip corresponds to the diagram
below. The location of antigens on the strip will be validated using positive control serum.
The anti-human IgG control is located on the strip extremity (opposite of plastic support) and GST - C1 - C2 - NS3
- NS4 are coated respectively.
Antihuman
IgG
control
GST
fusion
protein
Reading must be performed on dry strips.
Strips are dry when the background is white.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 Plastic support
Reading
The signal intensity of each antigen band is determined by comparing with the signal intensity of the anti-human
IgG control band for each strip.

Band intensity Mark
Any range of signal intensities greater than the anti-IgG control signal 3 +
Any signal intensity equal to the anti-IgG control signal 2 +
Any range of signal intensities less than the anti-IgG control band 1 +
but greater than a trace signal
Weak signal appearing only as a slight trace 0.5 +
No signal 0
Validation
The control band must be clearly visible to the naked eye which validates the sample addition, conjugate addition
and development steps.
No interpretation is possible if the control band is not validated.
Negative control serum : Only the anti-IgG control band is visible, no signal is observed on any other bands.
Positive control serum : The anti-IgG control band and the 4 HCV antigen bands are clearly visible. No signal is
observed on the GST band (fusion protein)
2) INTERPRETATION OF RESULTS
READING INTERPRETATION
No antigen HCV band visible NEGATIVE
1 HCV antigen band visible INDETERMINATE*
or
2 capsid bands alone (C1, C2)
2 HCV antigen bands from 2 different gene PROBABLE POSITIVE*
products (capsid gene, NS3 gene, NS4 gene)
with intensity equal to 0.5+
At least 2 HCV antigen bands from 2 different POSITIVE
gene products (capsid gene, NS3 gene, NS4 gene)
having an intensity greater than 0.5+
NOTE : if the GST band is visible, only the HCV C1 and C2 antigen bands can be interpreted (synthetic peptides)
(*) It is recommended with today's knowledge of HCV serology, that another blood sample be taken at a later
time.
Examples of Interpretation of Results
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRETATION
A 1+ 2+ 0 0 Indeterminate
B 0 0.5+ 0.5+ 0 Probable Positive
C 0 0 0 0 Negative
D 0 2+ 1+ 0.5+ Positive
E 0 0 0.5+ 0 Indeterminate
F 0 0.5+ 1+ 0 Probable positive
G 0 0 1+ 1+ Positive
11 - PERFORMANCES CHARACTERISTICS
Specificity
A total of 474 blood donors, found negative by an EIA screening assay were used to test the specificity of the
DECISCAN ® HCV PLUS. No one sample has been found positive, 22 samples showed an indeterminate profile.
A total of 240 clinical samples, found negative by an EIA screening assay were also used to test the specificity of
the DECISCAN ® HCV PLUS. No one sample has been found positive, 21 samples showed an indeterminate profile
and 2 samples showed a probable positive profile with low intensity bands 0.5+
Sensitivity
Sensitivity studies have been performed on 492 positive samples from chronic HCV infected patients. 488 samples
were found positive with DECISCAN ® HCV PLUS, 4 samples showed an indeterminate profile. Among these 4
indeterminate samples, 2 have also shown an indeterminate profile and the two other samples were found positive
with a competitor assay.
21 seroconversion panels were studied and compared to a competitor assay.
9

The results are as follow : for 7 seroconversions, the same samples were found positive with DECISCAN ® HCV
PLUS and the competitor assay, for 5 seroconversions, DECISCAN ® HCV PLUS is late of one sample and 2 samples
for one seroconversion, for 6 seroconversions DECISCAN ® HCV PLUS is in advance for one sample and in
advance for 2 samples for
2 seroconversions compared to the competitor assay.
A total of 365 positive samples for antibodies anti-HCV were studied, representing genotypes 1 to 5, including
57 of genotype 1-a, 136 of genotype 1-b, 24 of genotype 2-a, 15 of genotype 3-a, 23 of genotype 4-a, 5 of
genotype 4-non a and 3 of genotype 5. All these samples showed a positive profile except 3 samples of genotype
4-a which presented an indeterminate profile.
Cross Reactivity
91 samples from patients showing different pathologies such as EBV, HSV, EBV, HSV, VZV, HAV, HBV,
Toxoplasmosis, Rubella, mumps, HTLV, Rhumatoïd Factor, ANA and also patients suffering from myeloma and
pregnant women were studied.
One sample from patients suffering from myeloma showed probable positive profile with DECISCAN ® HCV PLUS
and indeterminate profile with a competitor assay.
One sample from positive VZF sample showed an indeterminate profile with DECISCAN ® HCV PLUS and negative
profile with a competitor assay.
Accuracy
Inter assay and intra assay studies has been conducted on 7 samples : one negative, one low positive, 2 positive
and 3 indeterminate that have been tested 5 times in the same batch and 5 days.
Results shows excellent reproducibility with identical relatives intensities.
12 - LIMITS OF THE TEST
This test does not constitute a test for confirmation of an infection by the hepatitis C virus. This is a supplemental
test that permits the characterisation of antibodies directed against different regions of the virus.
Low reactions could be observed on Desciscan various proteins in case of a lack of positive screening reaction
by ELISA assay. Such profiles must be indicated by clinical data and by a serologic follow-up in time about one
or more later taking and possibly a search for circulating viral ARN.
13 - REFERENCES
See french version
10

DECISCAN ® HCV PLUS
24 tests 72310
IMMUNOBLOT POUR LA DÉTECTION DES ANTICORPS ANTI-HCV
DANS LE SÉRUM HUMAIN OU LE PLASMA HUMAIN
IVD
Contrôle de qualité du fabriquant
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société BIO-RAD sont placés sous un système
d'assurance qualité de la réception des matières premières jusqu'à la commercialisation des
produits finis.
Chaque lot du produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité et n'est commercialisé que s'il est
conforme aux critères d'acceptation.
La documentation relative à la production et au contrôle de chaque lot est conservée par notre
société

12
1 - INTÉRÊT CLINIQUE
2 - PRINCIPE DU TEST
3 - COMPOSITION DE LA TROUSSE
TABLE DES MATIÈRES
4 - MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
5 - CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ
6 - PRÉCAUTIONS
7 - ÉCHANTILLONS
8 - RECONSTITUTION DES RÉACTIFS - VALIDITÉ - CONSERVATION
9 - MODE OPÉRATOIRE
10 - LECTURE ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
11 - PERFORMANCES
12 - LIMITES DU TEST
13 - RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES

1 - INTÉRÊT CLINIQUE
DECISCAN ® HCV PLUS est un test unitaire sur membrane utilisant une technique immuno-enzymatique permettant
l'individualisation d'anticorps associés à une infection par le virus de l'hépatite C, dans le sérum ou le plasma
humain.
La caractérisation de ces anticorps détectés est une étape supplémentaire indispensable pour une meilleure
compréhension de la sérologie HCV et permet ainsi un suivi de la cinétique d'évolution des anticorps.
2 - PRINCIPE DU TEST
DECISCAN ® HCV PLUS utilise comme support solide une membrane fixée sur une bandelette plastique, où sont
coatés successivement :
1) Témoin Anti-IgG humaines
Ce témoin permet simultanément :
la validation de l'addition de l'échantillon,
le contrôle des réactifs (conjugué, substrat),
la lecture des résultats au regard de l'intensité du signal.
2) Protéine de fusion : GST
Les gènes codant pour les protéines de NS3 et de NS4 ont été fusionnés au gène de la Glutathion S
Transférase. La protéine de fusion (GST) permet ainsi de contrôler la présence d'anticorps anti-GST pouvant être
à l'origine de réactions faussement positives.
3) Antigènes HCV
• Des protéines recombinantes produites par E.coli à partir de clones sélectionnés :
- dans la région non structurale : NS3 et NS4
• Des peptides sélectionnés pour leur haute immunogénicité :
- dans la région structurale : C1 et C2
- dans la région non structurale : NS4
Anti GST C1 C2 NS3 NS4
IgG protéine
humaines de
Témoin fusion
DECISCAN ® HCV PLUS
La mise en œuvre du test comprend les étapes réactionnelles suivantes :
1) Le sérum à étudier est incubé avec la bandelette. Si des anticorps anti-HCV sont présents, ils se lient aux
antigènes fixés sur la phase solide.
2) Les anticorps anti-IgG humaines marqués à la phosphatase alcaline sont ajoutés après lavage. Ils se fixent à
leur tour aux anticorps spécifiques retenus sur la phase solide.
3) Après élimination du conjugué enzymatique non lié, le complexe antigène-anticorps est révélé par addition du
substrat.
4) Après arrêt de la réaction, lecture des bandes révélées et interprétation des résultats.
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3 - COMPOSITION DE LA TROUSSE
Tous les réactifs sont exclusivement à usage de diagnostic in vitro.
ÉTIQUETAGE NATURE DES RÉACTIFS PRÉSENTATION
R1 BANDELETTE SENSIBILISÉE par des protéines recombinantes et des peptides
synthétiques des régions Capside, NS3 et NS4
24 bandelettes
R2 SOLUTION DE LAVAGE CONCENTRÉE 5 FOIS 1 flacon
100 ml
R3 SÉRUM DE CONTRÔLE NÉGATIF 1 flacon
Sérum humain ne contenant pas d'anticorps anti-HCV, négatif pour l'Ag HBs
et les anticorps anti-HIV1 et anti-HIV2
Conservateur : azide de sodium : < 0,1 %˙
0,2 ml
R4 SÉRUM DE CONTRÔLE POSITIF 1 flacon
Sérum humain contenant des anticorps anti-HCV, négatif pour l'Ag HBs
et les anticorps anti-HIV1et anti-HIV2 inactivé photochimiquement
Conservateur : azide de sodium : < 0,1%
0,2 ml
R5 DILUANT POUR ÉCHANTILLONS 1 flacon
Tampon TRIS, NaCl, lait, rouge de phénol,
Conservateur : Kathon 0,25 %
90 ml
R6 CONJUGUÉ 1 flacon
Tampon TRIS, NaCl, vert alimentaire contenant les anticorps de chèvre anti-IgG
humaines marqués à la phosphatase alcaline
Conservateur : azide de sodium < 0,1 %
90 ml
R8 SOLUTION DE RÉVÉLATION BCIP/NBT 1 flacon
5-Bromo-4-Chloro-Indolyl Phosphate (BCIP) et Nitroblue Tétrazolium (NBT)
Conservateur : azide de sodium < 0,1 %
90 ml
R9 SOLUTION D'ARRÊT 1 flacon
Acide citrique 50 mM
Conservateur : Merthiolate 0,01 %
90 ml
RACK DE 6 COMPARTIMENTS 4
4 - MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI
• Eau distillée ou complètement déminéralisée.
• Eau de javel et bicarbonate de soude.
• Papier absorbant.
• Gants à usage unique.
• Lunettes de protection.
• Pipettes automatiques ou semi-automatiques, réglables ou fixes, pouvant distribuer 10 µl.
• Pipettes graduées de 3 ml.
• Eprouvettes graduées de 100 ml, 250 ml et 500 ml.
• Agitateur bidimensionnel, tridimensionnel ou rotatif (agitation lente).
• Conteneur de déchets contaminés.
• Trompe à vide avec fiche de sécurité.
• Systèmes (Agitateur-incubateur-distributeur)*.
(*) Nous consulter pour une information précise concernant les appareils validés par nos services techniques.
5 - CONSIGNES D'HYGIÈNE ET DE SÉCURITÉ
Tous les réactifs de la trousse sont destinés à l'usage du diagnostic "in vitro".
• Porter des gants à usage unique lors de la manipulation des réactifs et des échantillons et se laver les mains
soigneusement après leur manipulation.
• Ne pas "pipeter à la bouche".
14

• Le sérum humain utilisé pour le contrôle positif a été inactivé photochimiquement, toutefois aucune méthode ne
peut garantir de façon absolue l'absence des virus HIV, HBV, HCV ou d'autres agents infectieux. Considérer les
réactifs d'origine humaine, ainsi que les échantillons de patients, comme potentiellement infectieux et les
manipuler avec les précautions d'usage.
• Considérer le matériel directement en contact avec les échantillons et les réactifs d'origine humaine, ainsi que
les solutions de lavage, comme des produits contaminés.
• Eviter les éclaboussures d'échantillons ou de solutions les contenant.
• Les surfaces souillées seront nettoyées à l'eau de javel diluée à 10 %.
Si le liquide contaminant est un acide, les surfaces souillées seront neutralisées au préalable avec du
bicarbonate de soude, puis nettoyées à l'aide de l'eau de javel et séchées avec du papier absorbant. Le
matériel utilisé pour le nettoyage devra être jeté dans un conteneur spécial pour déchets contaminés.
• Les échantillons, les réactifs d'origine humaine ainsi que le matériel et les produits contaminés seront éliminés
après décontamination
- soit par trempage dans de l'eau de javel à la concentration finale de 5 % d'hypochlorite de sodium (1 volume
d'eau de javel pour 10 volumes de liquide contaminé ou d'eau) pendant 30 minutes,
- soit par autoclavage à 121°C pendant 2 heures minimum.
ATTENTION : ne pas introduire dans l'autoclave des solutions contenant de l'hypochlorite de sodium.
• Certains réactifs contiennent de l'azoture de sodium comme conservateur. L'azoture de sodium peut former des
azotures de plomb ou de cuivre dans les canalisations du laboratoire. Ces azotures sont explosifs. Pour éviter
toute accumulation d'azotures, rincer à grande eau les canalisations si les solutions contenant de l'azoture sont
éliminées par l'évier après leur inactivation.
6 - PRÉCAUTIONS
La qualité des résultats dépend des bonnes pratiques de laboratoire suivantes :
• Ne pas utiliser des réactifs dont la validité est expirée.
• Ne pas mélanger, ni associer des réactifs provenant de trousses portant des numéros de lots différents au cours
d'une même manipulation.
• Avant utilisation, attendre 30 minutes que les réactifs s'équilibrent à la température ambiante.
• Reconstituer soigneusement les réactifs en évitant toute contamination.
• Ne pas réaliser le test en présence de vapeurs réactives (acides, alcalines, aldéhydes) ou de poussières qui
pourraient altérer l'activité enzymatique du conjugué.
• Utiliser une verrerie parfaitement lavée et rincée à l'eau distillée ou de préférence du matériel à usage unique.
• Utiliser un cône de distribution neuf pour chaque sérum.
• Le lavage des bandelettes est une étape essentielle de la manipulation: respecter le nombre de cycles de
lavages prescrits, et s'assurer que les compartiments de racks sont complètement remplis, puis complètement
vidés. Un mauvais lavage peut entraîner des résultats incorrects.
• Ne jamais utiliser le même récipient ou pipette pour distribuer des réactifs différents.
7 - ÉCHANTILLONS
Prélever un échantillon de sang selon les pratiques en usage. Du sérum ou du plasma peut être utilisé pour le test.
Si du sérum est utilisé : l'extraire dès que possible pour éviter toute hémolyse. Une sévère hémolyse peut altérer
la réalisation du test.
Les échantillons présentant des agrégats doivent être clarifiés par centrifugation avant le test. Les particules ou
agrégats de fibrine en suspension peuvent donner des résultats faussement positifs.
Les échantillons seront conservés à + 2 - 8°C si le dépistage est effectué dans les 7 jours ou peuvent être conservés
congelés à - 20°C.
Eviter les congélations/décongélations répétées. Les échantillons congelés/décongelés plus que 3 fois ne seront
plus utilisés.
Si les échantillons doivent voyager, les emballer selon la réglementation en usage pour le transport des agents
étiologiques.
NE PAS UTILISER DES SÉRUMS CONTAMINÉS, HYPERLIPÉMIQUES OU HÉMOLYSES.
REMARQUE : Aucune interférence n’a été mise en évidence sur des échantillons contenant jusqu’à 90 g/l
d’albumine, et 100 mg/l de bilirubine, ainsi que sur des échantillons lipémiques contenant jusqu’à 36 g/l de
trioleïne et sur des échantillons hémolysés contenant jusqu’à 10 g/l d’hémoglobine.
15

8 - RECONSTITUTION DES RÉACTIFS - VALIDITÉ - CONSERVATION
NOTE : Avant l’utilisation des réactifs, les laisser équilibrer à température ambiante (18-30°C)
Solution de lavage 5 X - concentrée 5 fois.
Diluer au 1/5è la solution de lavage dans de l'eau distillée et agiter jusqu'à complète homogénéisation.
20 ml sont nécessaires par bandelette.
La solution de lavage ainsi reconstituée est stable 1 mois conservée à +2-8°C.
Tous les autres réactifs, conservés à +2-8°C, sont stables après ouverture jusqu'à la date de péremption indiquée
sur les étiquettes respectives.
Homogénéiser par retournement, le diluant pour échantillons, le conjugué et la solution de révélation avant
utilisation.
9 - MODE OPÉRATOIRE
Remarques préliminaires
• Suivre strictement le protocole
• Inclure le contrôle négatif et le contrôle positif fournis dans la trousse pour l'ensemble des tests effectués dans
la même journée et lorsqu'un nouveau numéro de lot est utilisé.
• Enregistrer le numéro de la bandelette correspondant à chaque patient ainsi qu'aux contrôles négatif et positif.
• Préparer la solution de lavage (voir chapitre 8).
• Sortir de la cartouche le nombre de bandelettes nécessaires en les prenant par le support plastique afin d'éviter
tout contact direct avec la membrane. Les déposer dans les compartiments des racks côté membrane vers le
haut.
Protocole
1) Distribuer 3 ml de diluant pour échantillons par compartiment.
Laisser les bandelettes se réhydrater 5 mn à température ambiante sous agitation.
2) Ajouter 10 µl d'échantillon ou contrôle par compartiment en rinçant 3 fois le cône de la pipette dans le diluant.
3) Incuber 2 heures sous agitation à température ambiante.
4) Aspirer entièrement le contenu de chaque compartiment à l'aide d'une trompe à vide munie d'un piège
contenant de l'eau de javel, en prenant soin de rincer soigneusement la pipette entre chaque aspiration.
Ajouter 3 ml de solution de lavage par compartiment et agiter pendant 2 mn.
5) Répéter l'étape 4 deux fois, soit 3 lavages puis éliminer la solution du dernier lavage.
6) Ajouter 3 ml de conjugué par compartiment.
Incuber 30 mn sous agitation à température ambiante.
7) Aspirer le liquide dans chaque compartiment.
Laver 3 fois chaque bandelette comme indiqué à l'étape 4 et éliminer la solution du dernier lavage.
8) Ajouter 3 ml de solution de révélation par compartiment.
Incuber 6 mn sous agitation à température ambiante.
9) Aspirer le liquide dans chaque compartiment.
10) Ajouter 3 ml de solution d'arrêt par compartiment.
Incuber 5 mn sous agitation à température ambiante.
11) Aspirer le liquide dans chaque compartiment et rincer 3 fois les bandelettes en utilisant de l'eau déminéralisée.
12) Retirer les bandelettes de chaque compartiment et les sécher soigneusement entre deux feuilles de papier
absorbant.
Conserver les bandelettes à l'abri de la lumière pour éviter l'apparition de bruit de fond.
16

10 - LECTURE ET INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
1) LECTURE DES RÉSULTATS
La localisation et l'identification des bandes de contrôles et des bandes antigènes HCV présentes sur chaque
bandelette correspond au schéma suivant et sera validé par le sérum de contrôle positif.
Le témoin (anti-IgG humaines) se situe à l'extrémité de la bandelette (opposée au support plastique) ; GST - C1 -
C2 - NS3 - NS4 - support plastique (n° d'identification) sont ensuite coatés successivement :
La lecture doit être réalisée impérativement sur bandelettes sèches.
Les bandelettes sont sèches quand le bruit de fond est blanc.
DECISCAN ® HCV PLUS
Anti GST C1 C2 NS3 NS4 Support plastique
IgG protéine
humaines de
Témoin fusion
Lecture
L'intensité du signal obtenu sur chaque bande est évaluée par comparaison avec l'intensité du signal de la bande
témoin (anti-IgG humaines) présente sur chaque bandelette.
Intensité de la bande Note
Intensités supérieures à l’intensité du signal du témoin anti-IgG 3 +
Intensité égale à l’intensité du signal témoin anti-IgG 2 +
Intensités inférieures à l’intensité du signal du témoin anti-IgG mais supérieures à l’état de trace 1 +
Intensité du signal juste visible (trace) 0,5 +
Aucune trace 0
Validation
La bande témoin doit être visible à l'œil nu sans ambiguïté. Elle valide les étapes de dépôt d'échantillon, de
conjugué et de révélation.
Aucune interprétation n'est possible si la bande témoin n'est pas validée.
Sérum de contrôle négatif : seule la bande témoin anti-IgG est visible, aucun signal n'est observé sur les autres
bandes.
Sérum de contrôle positif : la bande témoin anti-IgG est visible, aucun signal n'est observé sur la bande GST
(protéine de fusion), et les 4 bandes HCV antigènes sont clairement visibles.
2) INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
LECTURE INTERPRÉTATION
Aucune bande antigène HCV visualisée NÉGATIF
1 bande antigène HCV visualisée ou INDÉTERMINÉ*
2 bandes antigènes HCV visualisées sur le gène
de la capside (C1, C2)
2 bandes antigènes HCV visualisées provenant POSITIF PROBABLE*
de 2 gènes différents (gène de la capside, gène NS3,
gène NS4) et avec une intensité de 0.5+
Au moins 2 bandes antigènes HCV visualisées POSITIF
provenant de 2 gènes différents
(gène de la capside, gène NS3, gène NS4)
et avec une intensité supérieure à 0.5+
NB : si la bande GST est visualisée, seules seront interprétées les bandes antigènes HCV C1 et C2 (peptides
synthétiques).
* Dans l'état actuel des connaissances de la sérologie HCV, un contrôle sur un prélèvement ultérieur doit être
effectué.
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Exemples d'interprétation des Résultats
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRÉTATION
A 1+ 2+ 0 0 Indéterminé
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Positif probable
C 0 0 0 0 Négatif
D 0 2+ 1+ 0.5+ Positif
E 0 0 0,5+ 0 Indéterminé
F 0 0,5+ 1+ 0 Positif probable
G 0 0 1+ 1+ Positif
11 - PERFORMANCES
Spécificité
Sur une population de 474 donneurs de sang dont le test anti-HCV EIA était négatif. Aucun échantillon n’a été
trouvé positif, 22 ont présentés un profil indéterminé.
Sur une population de 240 échantillons provenant de services hospitaliers dont le test Anti-HCV EIA était négatif.
Aucun échantillon n’a été trouvé positif avec le test DECISCAN ® HCV PLUS, 21 échantillons ont présenté un profil
indéterminé et deux échantillons ont présenté un profil positif probable avec des bandes de faibles intensités 0,5+.
Sensibilité
La sensibilité a été étudiée sur 492 échantillons porteurs chroniques d’Hépatite, 488 ont été trouvés positifs avec
DECISCAN ® HCV PLUS et 4 indéterminés. Parmi les 4 indéterminés, 2 présentaient également un profil
indéterminé et les 2 autres étaient positifs dans une technique concurrente.
21 séroconversions ont été testées et comparées à une technique concurrente. Les résultats sont les suivants :
Sur 7 séroconversions, les mêmes échantillons ont été trouvés positifs avec DECISCAN ® HCV PLUS et avec la
technique concurrente. Dans 5 séroconversions, DECISCAN ® HCV PLUS est en retard d'un prélèvement, et de
deux prélèvements sur une séroconversion. Dans 6 séroconversions, DECISCAN ® HCV PLUS est en avance d'un
prélèvement et de 2 prélèvements sur 2 séroconversions par rapport à la technique concurrente.
Un total de 365 échantillons positifs en anticorps anti-HCV ont été étudiés, représentant les génotypes 1 à 5, dont
57 de génotype 1-a, 136 de génotype 1-b, 24 de génotype 2-a, 15 de génotype 3-a, 23 de génotype 4-a, 5 de
génotype 4-non a, et 3 de génotype 5. Tous ces échantillons ont présenté un profil positif à l’exception de
3 échantillons de génotype 4-a qui ont présenté un profil indéterminé.
Réactions croisées
91 échantillons provenant de patients atteint d’autres pathologies telles que : EBV, HSV, VZV, HAV, HBV,
Toxoplasmose, Rubéole, oreillons, HTLV, Facteur Rhumatoïde, ANA ainsi que des patients atteint de myélomes et
des femmes enceintes ont été testés.
1 échantillon provenant d’un patient atteint de myélome a présenté un profil positif probable avec DECISCAN ®
HCV PLUS et un profil indéterminé avec un test concurrent.
1 échantillon provenant d’un patient VZV positif a présenté un profil indéterminé avec DECISCAN ® HCV PLUS et
un profil négatif avec un test concurrent.
Reproductibilité
La reproductibilité a été étudiée sur 7 échantillons, 1 négatif, 1 faiblement positif, 2 positifs et 3 indéterminés testés
5 fois dans la même série et 5 jours différents.
L’analyse des profils montre une excellente reproductibilité avec des intensités relatives identiques.
12 - LIMITES DU TEST
Ce test ne constitue pas un test de confirmation d’une infection par le virus de l’hépatite C. Il s’agit d’un test
supplémentaire permettant la caractérisation d’anticorps dirigés contre différentes régions virales.
De faibles réactions peuvent être observées sur les différentes protéines de DECISCAN en l’absence d’une réaction
positive de dépistage en technique ELISA. De tels profils doivent être renseignés par des données cliniques et par
un suivi sérologique dans le temps sur un ou plusieurs prélèvements ultérieurs et éventuellement une recherche de
l’ARN viral circulant.

13 - RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1. STEVENS C.E., AACH R.D., HOLLINGER F.B. et al, MOSLEY J.W., SZMUNESS W., KAHN R., WERCH J.,
EDWARDS V. Hepatitis B virus antibody in blood donors and the occurence of Non-A Non- B hepatitis in
transfusion recipients : an analysis of the transfusion transmitted virus study. Ann. Int. Med. 1984 ; 101 : 733-
738.
2. ALTER H.J., PRINCE A.M.. Transfusion associated Non-A Non-B hepatitis : An assesment of the causative agent
and its clinical impact. Transfusion Med. Rev. 1988 ; 2 : 288-293.
3. BRADLEY D.W., MAYNARD J.E., POPPER H., COOK E.H., EBERT J.W., Mc CANSTLAND K.A., SCHABLE C.A.,
FIELDS H.A. Post transfusion Non-A Non-B hepatitis : physiochemical properties of two distinct agents. J. Infect
Dis. 1983 ; 148 : 254 - 265.
4. CHOO K.L., WEINER A.J., OVERBY L.R., KUO G., HOUGHTON M., BRADLEY D.. Hepatitis C virus : the major
causative agent of viral Non- Non-B hepatitis. In : Viral Hepatitis. Editor : AJ. ZUCKERMAN.CHURCHILL
LIVINSTONE British Medical Bulletin. 1990, vol. 46 : 423 - 441.
5. KUO G., CHOO Q.L., ALTER H.J., et al. An assay for circulating antibodies to a major etiologic virus of human
Non-A Non- B hepatitis. Science 1989 ; 244 : 362-364.
6. TAKEUCHI K., KUBO Y., BOOMAR S., WATANABE Y., KATAYAMA T., CHOO Q.L., KUO G., HOUGHTON
M., SAITO I., MIYAMURA T. Nucleotide sequence of core and enveloppe genes of the hepatitis C virus genome
derived directly from humans healthy carriers. Nucleic acid research. 1990 ; 18 - 15.
7. VAN DER POEL C.L., REESINK H.W., LELIE P.N., LEENTVARR-KUYPERS A., CHOO Q.J., KUO G., HOUGHTON
M. Anti-Hepatitis C antibodies and Non-A, Non-B post transfusion hepatitis in the Netherlands. Lancet, 1989,
297-299.
8. CHOO Q.L., RICHMAN K.H., HAN J.H., BERGER K., LEE C., DONG C., GALLEGOS C., COIT D., MEDINA-
SELBY A., BARR P.J., WEINER A.J., BRADLEY D.W., KUO G. and HOUGHTON M. Genetic organization and
diversity of the hepatitis C virus. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1991 ; vol. 88 : 2451-2455.
19

DECISCAN ® HCV PLUS
24 pruebas 72310
INMUNOTRANSFERENCIA PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
ANTI-VHC EN EL SUERO O EL PLASMA HUMANOS
IVD
Control de calidad del fabricante
Todos los reactivos fabricados y comercializados se someten a un sistema de calidad completo que
va desde la recepción de las materias primas hasta la comercialización final del producto.
Cada lote se somete a un control de calidad y sale al mercado sólo cuando está de acuerdo con
los criterios de aceptación.
Los registros relativos a la producción y al control de cada lote se conservan en nuestra compañía.

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1 - INTERÉS CLÍNICO
2 - PRINCIPIO DE LA PRUEBA
3 - CONTENIDO DEL EQUIPO
ÍNDICE
4 - MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO
5 - INSTRUCCIONES DE SALUD Y SEGURIDAD
6 - PRECAUCIONES
7 - MUESTRAS
8 - RECONSTITUCIÓN DE LOS REACTIVOS – VALIDEZ - CONSERVACIÓN
9 - PROCEDIMIENTO DE VALORACIÓN
10 - LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
11 - RENDIMIENTOS
12 - LÍMITES DE LA PRUEBA
13 - BIBLIOGRAFÍA

1 - INTERÉS CLÍNICO
DECISCAN ® HCV PLUS es una prueba de membrana en la que se usa una técnica inmunoenzimática para la
identificación de anticuerpos asociados a infección producida por el virus de la hepatitis C en el suero o el
plasma humanos.
La caracterización de estos anticuerpos es un paso suplementario esencial para conocer mejor la serología del
VHC, permitiendo el seguimiento de la evolución de los anticuerpos séricos.
2 - PRINCIPIO DE LA PRUEBA
DECISCAN ® HCV PLUS utiliza, como soporte sólido, una membrana fijada sobre una tira de plástico con el
siguiente esquema de revestimiento secuencial :
1) Control de IgG anti-humano
Este control permite simultáneamente :
la validación de la dispensación de la muestra,
el control de los reactivos (conjugado, sustrato),
la lectura de los resultados sobre la intensidad de la señal de control.
2) Proteína de fusión : GST
Los genes que codifican las proteínas NS3 y NS4 se fusionan con el gen de la glutatión S transferasa.
La proteína GST controla la presencia de anticuerpos anti-GST, lo que puede inducir reacciones falsas positivas.
3) Antígenos del VHC
• Proteínas recombinantes producidas por E. coli de los clones seleccionados :
en el área no estructural : NS3 y NS4
• Péptidos seleccionados por su alta inmunogenicidad :
en el área estructural : C1 y C2
en el área no estructural : NS4
Anti- GST
humano proteína
IgG de
Control fusión
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
El procedimiento de valoración incluye los siguientes pasos de la reacción :
1) Se incuba el suero a estudiar con la tira. Los anticuerpos frente a VHC, si los hay, se unen a los antígenos
fijados sobre la fase sólida.
2) Los anticuerpos IgG anti-humanos marcados con fosfatasa alcalina, añadidos después del lavado, se unen a
anticuerpos específicos capturados en la fase sólida.
3) El conjugado enzimático no unido se retira mediante lavado y se revela el complejo antígeno / anticuerpo
mediante la adición de sustrato.
4) Después de detener la reacción, se leen las bandas coloreadas y se interpretan los resultados.
23

3 - CONTENIDO DEL EQUIPO
Todos los reactivos son exclusivamente para uso diagnóstico in vitro.
ETIQUETA REACTIVOS PRESENTACIÓN
R1 TIRA REVESTIDA con Ag VHC recombinantes y con péptidos 24 tiras
de las regiones de la cápside, NS3 y NS4
R2 SOLUCIÓN/DILUYENTE DE LAVADO CONCENTRADO (5 X) 1 frasco
100 ml
R3 SUERO DE CONTROL NEGATIVO 1 frasco
Suero humano sin anticuerpos anti-VHC negativo para Ag HBs,
anticuerpos anti-VIH1 y VIH2.
Conservante : acida sódica < 0,1%
0,2 ml
R4 SUERO DE CONTROL POSITIVO 1 frasco
Suero humano positivo para anticuerpos anti-VHC, negativo para Ag HBs,
anticuerpos anti-VIH1 y VIH2, inactivado fotoquímicamente
Conservante : acida sódica < 0,1%
0,2 ml
R5 DILUYENTE DE LA MUESTRA 1 frasco
tampón Tris/NaCl con leche, rojo fenol
Conservante : Kathon 0,25%
90 ml
R6 CONJUGADO 1 frasco
Anticuerpos IgG anti-humanos (carnero) marcados con fosfatasa alcalina
tampón Tris/NaCl con colorante verde
Conservante : acida sódica < 0,1%
90 ml
R8 SOLUCIÓN DE DESARROLLO DEL COLOR BCIP/NBT 1 frasco
5-Bromo-4-Cloro-Indolil fosfato (BCIP) y tetrazolio nitroazul (NBT)
Conservante : acida sódica < 0,1%
90 ml
R9 SOLUCIÓN DE PARADA 1 frasco
ácido cítrico 50 mM
Conservante : Mertiolato al 0,01%
90 ml
SOPORTES DE 6 COMPARTIMENTOS 4
4 - MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO
• Agua destilada o desionizada
• Lejía y bicarbonato sódico
• Papel absorbente
• Guantes desechables
• Gafas protectoras
• Pipetas automáticas o semiautomáticas ajustables o prestablecidas para dispensar 10 µl
• Pipetas graduadas con capacidad de 3 ml
• Probetas graduadas de 100 ml, 250 ml y 500 ml
• Agitador bidimensional, tridimensional o rotatorio (agitación lenta)
• Recipiente para residuos biopeligrosos
• Bomba de vacío con tapón de seguridad
• Sistemas agitador-incubador-distribuidor*
(*) Consúltenos para información más detallada sobre el equipamiento recomendado por nuestro departamento
técnico.
5 - INSTRUCCIONES DE SALUD Y SEGURIDAD
Todos los reactivos incluidos en el equipo están previstos para uso diagnóstico “in vitro”.
• Lleve guantes desechables cuando maneje reactivos de prueba y lávese las manos cuidadosamente después.
• No pipetee con la boca.
• El suero humano empleado en el control positivo ha sido inactivado fotoquímicamente, sin embargo, no hay
ningún método conocido que pueda ofrecer una garantía completa de que el VIH, el VHB, el VHC u otros
agentes infecciosos estén ausentes. Considere estos reactivos y todas las muestras de pacientes como
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potencialmente infecciosos y manéjelos con las debidas precauciones.
• Considere cualquier material directamente en contacto con las muestras y reactivos de origen humano como
materiales contaminados y, por tanto, infecciosos.
• Evite salpicar las muestras o las soluciones que las contienen.
• Los vertidos deben limpiarse con lejía diluida al 10%. Si el líquido contaminante es un ácido, las superficies
contaminadas se deben neutralizar antes con bicarbonato sódico, luego se deben limpiar con lejía y se deben
secar con papel absorbente. El material usado para la limpieza debe desecharse en un recipiente especial
para residuos contaminados.
• Deben desecharse las muestras, los reactivos de origen humano, así como el material y los productos
contaminados después de descontaminarlos :
- por inmersión en lejía a una concentración final de hipoclorito sódico al 5% (1 volumen de lejía por
10 volúmenes de líquido contaminado o agua) durante 30 minutos,
- o mediante autoclave a 121°C durante un mínimo de 2 horas.
PRECAUCIÓN : no introducir en el autoclave soluciones con hipoclorito sódico.
• Algunos reactivos contienen acida sódica como conservante. La acida sódica puede reaccionar con las
tuberías del laboratorio formando acidas de cobre o plomo. Dichas acidas son explosivas. Para impedir la
acumulación de acidas, irrigue las tuberías con una gran cantidad de agua si se eliminan las soluciones con
acidas por el sumidero después de su inactivación.
6 - PRECAUCIONES
La calidad de los resultados depende de las siguientes buenas prácticas de laboratorio :
• No usar reactivos caducados.
• No mezclar ni combinar reactivos de los equipos con diferentes números de lote durante el mismo procedimiento.
• Antes de usar, esperar 30 minutos a que los reactivos se estabilicen a temperatura ambiente.
• Reconstituir cuidadosamente los reactivos evitando cualquier contaminación.
• No realizar la prueba en presencia de vapores reactivos (ácidos, alcalinos, aldehídos) o polvo que pueda
alterar la actividad enzimática conjugada.
• Usar material de vidrio lavado y aclarado concienzudamente con agua destilada o, preferiblemente, material
desechable.
• Usar una nueva punta de dispensación para cada suero.
• El lavado de las tiras es un paso crítico : hay que respetar el número recomendado de ciclos de lavado y
comprobar que los compartimentos del soporte están completamente llenos y luego vacíos. Un lavado
incorrecto puede conducir a resultados incorrectos.
• No utilizar nunca el mismo recipiente o pipeta para distribuir reactivos diferentes.
7 - MUESTRAS
Recoja una muestra de sangre según las prácticas actuales. Pueden usarse el suero o el plasma para la prueba.
Si se usa suero: extraiga cuanto antes para evitar la hemólisis. La hemólisis puede alterar gravemente el
rendimiento de la prueba. Las muestras con agregados deben aclararse mediante centrifugación antes de realizar
la prueba. Las partículas o los agregados de fibrina suspendidos pueden llevar a resultados falsos positivos.
Las muestras pueden conservarse a +2-8°C si la prueba se realiza en 7 días o se pueden congelar profundamente
a –20°C.
Evite la congelación y descongelación repetidas. No deben usarse las muestras que se hayan congelado y
descongelado más de 3 veces.
Si las muestras se van a transportar, enváselas de acuerdo con las normas para el transporte de agentes
etiológicos.
NO USAR MUESTRAS CONTAMINADAS, HIPERLIPIDÉMICAS O HEMOLIZADAS.
NOTA : Las muestras con hasta 90 g/l de albúmina, 100 mg/l de bilirrubina, las muestras lipidémicas con hasta
el equivalente a 36 g/l de trioleína y las muestras hemolizadas con hasta 10 g/l de hemoglobina no afectan a
los resultados de la prueba.
8 - RECONSTITUCIÓN DE LOS REACTIVOS - VALIDEZ - CONSERVACIÓN
NOTA : Antes de usar, permita que los reactivos alcancen temperatura ambiente (18-30°C).
Solución/diluyente de lavado concentrado (5x)
Diluya la solución de lavado 1:5 en agua destilada y mezcle cuidadosamente.
Se necesitan 20 ml por tira.
La solución de lavado reconstituida es estable durante un mes cuando se conserva a +2-8°C.
25

Todos los demás reactivos, cuando se conservan a + 2-8°C, son estables hasta la fecha de caducidad indicada
en las etiquetas.
Mezcle el diluyente de la muestra, el conjugado y la solución de desarrollo, invirtiéndola antes de su uso.
9 - PROCEDIMIENTO DE VALORACIÓN
Comentarios preliminares
• Siga estrictamente el procedimiento propuesto.
• Incluya el control negativo y el control positivo suministrado en el equipo en todas las valoraciones realizadas
durante el mismo día y cuando se usa un nuevo número de lote de equipos.
• Registre los números de las tiras para que correspondan con la identificación del paciente o los controles
positivos o negativos.
• Prepare la solución de lavado (parte 8).
• Retire el número necesario de tiras del cartucho. Cójalos por su marco de plástico para evitar el contacto
directo con la membrana. Colóquelos en los compartimentos del soporte con la membrana hacia arriba.
Protocolo
1) Dispense 3 ml del diluyente de la muestra en cada compartimento.
Deje que las tiras se rehidraten durante 5 minutos a temperatura ambiente mientras las agita.
2) Añada 10 µl de la muestra o control a un compartimento separado y enjuague la punta de la pipeta 3 veces
en el diluyente dispensado.
3) Incube durante 2 horas mientras se agita a temperatura ambiente.
4) Aspire todo el contenido de cada compartimento usando una bomba de vacío equipada con una trampa llena
de lejía. Enjuague cuidadosamente la pipeta entre las aspiraciones.
Añada 3 ml de solución de lavado por compartimento y agite durante 2 minutos.
5) Repita dos veces el paso 4, para un total de 3 lavados y luego retire la última solución de lavado.
6) Añada 3 ml de conjugado a cada compartimento.
Incube durante 30 minutos mientras se agita a temperatura ambiente.
7) Aspire el líquido de cada compartimento.
Lave cada tira 3 veces, como se indica en el paso 4 y retire la última solución de lavado.
8) Añada 3 ml de solución de desarrollo a cada compartimento.
Incube durante 6 minutos mientras se agita a temperatura ambiente.
9) Aspire el líquido de cada compartimento.
10) Añada 3 ml de solución de parada a cada compartimento.
Incube durante 5 minutos mientras se agita a temperatura ambiente.
11) Aspire el líquido de cada compartimento y enjuague las tiras 3 veces con agua destilada.
12) Retire las tiras de cada compartimento y seque cuidadosamente entre dos hojas de papel absorbente.
Mantenga las tiras fuera de la luz para evitar la aparición de fondo.
10 - LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
1) LECTURA DE LOS RESULTADOS
La localización e identificación de las bandas de control y de las bandas de antígeno del VHC corresponden a
las del diagrama siguiente: La localización de los antígenos en la tira se validará usando suero de control
positivo.
El control de IgG antihumana se encuentra en el extremo de la tira (en la parte opuesta al soporte de plástico) y
se disponen, respectivamente, GST – C1 – C2 – NS3 – NS4.
26
Anti- GST
humano proteína
IgG de
Control fusión
La lectura debe realizarse en tiras secas.
Las tiras están secas cuando el fondo es blanco.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 Soporte de plástico

Lectura
La intensidad de señal de cada banda de antígeno se determina comparando con la intensidad de señal de la
banda control de IgG antihumana para cada tira.
Intensidad de la banda Marca
Cualquier rango de intensidades de señal mayores que la señal control de anti-IgG 3 +
Cualquier intensidad de señal igual a la señal de control anti-IgG 2 +
Cualquier rango de intensidades de señal menores que la banda de control anti-IgG 1 +
pero mayores que una señal traza
Señal débil que aparece sólo como una traza leve 0,5 +
Ninguna señal 0
Validación
La banda de control debe ser claramente visible a simple vista, lo que valida la adición de la muestra, la adición
de conjugado y los pasos de desarrollo.
No es posible ninguna interpretación si la banda control no está validada.
Suero de control negativo : Sólo es visible la banda de control anti-IgG, no se observa señal en ninguna otra
banda.
Suero de control positivo : La banda de control anti-IgG y las 4 bandas de antígenos del VHC son claramente
visibles. No se observa señal en la banda de GST (proteína de fusión).
2) INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
LECTURA INTERPRETACIÓN
No hay ninguna banda de VHC visible NEGATIVO
1 banda visible de antígeno de VHC INDETERMINADO*
o
2 bandas de cápside, sólo (C1, C2)
2 bandas de antígeno de VHC de 2 productos génicos PROBABLE POSITIVO*
diferentes (gen de la cápside, gen NS3, gen NS4)
con intensidad igual a 0,5+
Al menos 2 bandas de antígeno de VHC de 2 productos POSITIVA
génicos diferentes (gen de la cápside, gen NS3,
gen NS4) con una intensidad mayor de 0,5+
NOTA : si la banda GST es visible, sólo pueden interpretarse las bandas de antígenos C1 y C2 del VHC (péptidos
sintéticos)
(*) Se recomienda con el conocimiento actual de la serología del VHC, que se tome otra muestra posteriormente.
Ejemplos de interpretación de los resultados
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRETACIÓN
A 1+ 2+ 0 0 Indeterminado
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Probable positivo
C 0 0 0 0 Negativo
D 0 2+ 1+ 0,5+ Positivo
E 0 0 0,5+ 0 Indeterminado
F 0 0,5+ 1+ 0 Probable positivo
G 0 0 1+ 1+ Positivo
11- CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Especificidad
Se usó un total de 474 donantes de sangre, que resultaron negativos por una valoración de cribado de EIA para
estudiar la especificidad de DECISCAN ® HCV PLUS. Ninguna muestra ha resultado positiva, 22 muestras
mostraron un perfil indeterminado.
Se usó también un total de 240 muestras clínicas, que resultaron negativas por una valoración de cribado de EIA
para estudiar la especificidad de DECISCAN ® HCV PLUS. Ninguna muestra ha resultado positiva, 21 muestras
mostraron un perfil indeterminado y dos muestras presentaron un perfil probable positivo con bandas de bajas
intensidades 0,5+.
27

Sensibilidad
Se han realizado estudios de sensibilidad sobre 492 muestras positivas de pacientes con infección crónica por
VHC. Cuatrocientas ochenta y ocho muestras fueron positivas con DECISCAN ® HCV PLUS, 4 muestras mostraron
un perfil indeterminado. Entre estas 4 muestras indeterminadas, 2 han mostrado también un perfil indeterminado
y las otras dos muestras resultaron positivas con una valoración con competidor. Se ensayaron y compararon 21
seroconversiones frente a una técnica de la competencia. Los resultados son los siguientes : en 7
seroconversiones, las muestras han resultado positivas tanto con DECISCAN ® HCV PLUS como con la técnica de
la competencia. En 5 seroconversiones DECISCAN ® HCV PLUS presenta un retraso de una muestra, y de dos
muestras en una seroconversión. En 6 seroconversiones DECISCAN ® HCV PLUS se adelanta una muestra, y en 2
seroconversiones se adelanta 2 muestras respecto a la técnica de la competencia.
Se estudió un total de 365 muestras positivas en anticuerpos anti-HCV, que representan el genotipo 1 a 5,
incluidas 57 de genotipo 1-a, 136 de genotipo 1-b, 24 de genotipo 2-a, 15 de genotipo 3-a, 23 de genotipo
4-a, 5 de genotipo 4 –noA y 3 del genotipo 5. Todas estas muestras mostraron un perfil positivo excepto 3
muestras del genotipo 4-a que presentaron un perfil indeterminado.
Reactividad Cruzada
Se estudiaron 91 muestras de pacientes que mostraban diferentes patologías, como EBV, HSV, VZV, VHA, VHB,
toxoplasmosis, rubéola, paperas, HTLV, factor reumatoide, ANA y también pacientes que padecían mieloma y
mujeres embarazadas.
Una muestra de pacientes que padecían mieloma mostró un perfil positivo probable con DECISCAN ® HCV PLUS
y un perfil indeterminado con una valoración con competidor.
Una muestra de pacientes que padecían mieloma mostró un perfil positivo probable con DECISCAN ® HCV PLUS
y un perfil indeterminado con una valoración con competidor.
Exactitud
Se han realizado estudios inter e intravaloración sobre 7 muestras: una negativa, una positiva baja, dos positivas
y 3 indeterminadas que se han estudiado 5 veces en el mismo lote y 5 días.
Los resultados muestran una excelente reproducibilidad con intensidades relativas idénticas.
12 - LÍMITES DE LA PRUEBA
Esta prueba no constituye una prueba para la confirmación de una infección por el virus de la hepatitis C. Esta
es una prueba complementaria que permite la caracterización de los anticuerpos dirigidos contra diferentes
regiones del virus.
Pudieron observarse reacciones bajas sobre diversas proteínas de Desciscan en caso de una falta de reacción
de cribado positiva mediante valoración ELISA. Dichos perfiles deben indicarse por los datos clínicos y por un
seguimiento serológico en el tiempo aproximadamente uno o más tarde y posiblemente una búsqueda de ARN
vírico circulante.
13 - BIBLIOGRAFÍA
Véase la versión francesa
28

DECISCAN ® HCV PLUS
24 tests 72310
IMMUNOBLOT ZUM NACHWEIS VON HCV-ANTIKÖRPERN
IN HUMANSERUM ODER -PLASMA
IVD
Qualitätskontrolle des Herstellers
Alle hergestellten und in den Verkehr gebrachten Reagenzien unterliegen einem
Qualitätssicherungssystem, das sich vom Eingang der Rohmaterialien bis zum Vertrieb der Produkte
erstreckt.
Jede Charge unterliegt der Qualitätskontrolle und wird nur bei Konformität mit den Freigabekriterien
in den Verkehr gebracht.
Die Aufzeichnungen zu Produktion und Qualitätskontrolle einer jeden Charge befinden sich in
unserer Firma.

30
1 - KLINISCHE BEDEUTUNG
2 - TESTPRINZIP
3 - INHALT DES KITS
4 - ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL
5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN
6 - VORSICHTSMASSNAHMEN
7 - PROBEN
INHALTSVERZEICHNIS
8 - AUFLÖSUNG DER REAGENZIEN - HALTBARKEIT - LAGERUNG
9 - TESTDURCHFÜHRUNG
10 - ABLESEN UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
11 - LEISTUNGSMERKMALE
12 - GRENZEN DES TESTS
13 - LITERATUR

1 - KLINISCHE BEDEUTUNG
DECISCAN ® HCV PLUS ist ein Immunodotblot zum Nachweis von Antikörpern in Humanserum oder -plasma, die
im Zusammenhang mit einer Hepatitis-C-Infektion stehen.
Der Nachweis dieser Antikörper ist ein wesentlicher zusätzlicher Schritt für ein besseres Verständnis der HCV-
Serologie und ermöglicht eine Nachuntersuchung der Entwicklung der Antikörper im Serum.
2 - TESTPRINZIP
DECISCAN ® HCV PLUS verwendet eine an einen Kunststoffstreifen gebundene Membran als Festphase mit dem
folgenden Beschichtungsschema:
1) Anti-human-IgG-Kontrolle
Diese Kontrolle ermöglicht gleichzeitig :
Validierung der Probenzugabe ,
Kontrolle der Reagenzienzugabe (Konjugat, Substrat),
Interpretation der Ergebnisse gemäß der Intensität des Signals der Kontrollbande.
2) Fusionsprotein : GST
Für die Proteine NS3 und NS4 kodierende Gene werden an das Glutathion S-Transferase-Gen gebunden.
Durch das GST-Fusionsprotein kann das Vorliegen von GST-Antikörpern, die falsch positive Reaktionen
hervorrufen können, kontrolliert werden.
3) HCV-Antigene
• In E. coli exprimierte rekombinante Proteine :
im Nicht-Strukturbereich : NS3 und NS4
• Peptide, die aufgrund ihrer hohen Immunogenität ausgewählt wurden:
im Strukturbereich : C1 und C2
im Nicht-Strukturbereich : NS4
Antihuman-
IgG-
Kontrolle
GST
Fusions
protein
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
Das Testverfahren besteht aus folgenden Reaktionsschritten :
1) Das zu testende Serum wird mit dem Streifen inkubiert. Sind HCV-Antikörper vorhanden, binden diese an die
in der Festphase gebundenen Antigene.
2) Die an anti-human-IgG gekoppelte alkalische Phosphatase wird nach einem Waschschritt zugegeben und bindet
an die von der Festphase gebundenen spezifischen Antikörper des Patientenserums.
3) Das ungebundene Enzymkonjugat wird durch einen Waschschritt entfernt und der Antigen-Antikörper-Komplex
durch Zugabe von Substrat sichtbar gemacht.
4) Nach Stoppen der Reaktion werden die Banden abgelesen und die Ergebnisse interpretiert.
31

3 - INHALT DES KITS
Alle Reagenzien sind ausschließlich für die in-vitro-Diagnostik bestimmt.
ETIKETT REAGENZIEN DARREICHUNGS-FORM
R1 BESCHICHTETER STREIFEN mit rekombinantem HCV Ag und HCV-Peptiden 24 Streifen
der Regionen Core , NS3 & NS4
R2 KONZENTRIERTE WASCHLÖSUNG/VERDÜNNUNGSMITTEL (5 x) 1 Fläschchen
100 ml
R3 NEGATIVES KONTROLLSERUM 1 Fläschchen
Humanserum ohne HCV-Antikörper, negativ für HBs Ag,
HIV1- und HIV2-Antikörper.
Konservierungsmittel : < 0,1% Natriumazid
0,2 ml
R4 POSITIVES KONTROLLSERUM 1 Fläschchen
Humanserum, positiv für HCV-Antikörper und negativ für HBsAg,
HIV1- und HIV2-Antikörper, photochemisch hitzeinaktiviert
Konservierungsmittel : < 0,1% Natriumazid
0,2 ml
R5 PROBENVERDÜNNUNGSMITTEL 1 Fläschchen
Tris/NaCl-Puffer mit Milch, Phenolrot
Konservierungsmittel : 0,25% Kathon
90 ml
R6 KONJUGAT 1 Fläschchen
Anti-human-IgG-Antikörper (Ziege), mit alkalischer Phosphatase markiert
Tris/NaCl-Puffer mit grünem Farbstoff
Konservierungsmittel : < 0,1% Natriumazid
90 ml
R8 FARBENTWICKLUNGSLÖSUNG BCIP/NBT 1 Fläschchen
5 Brom-4 Chlor-3-Indolylphosphat (BCIP) und Nitroblau-Tetrazolium (NBT)
Konservierungsmittel : < 0,1% Natriumazid
90 ml
R9 STOPPLÖSUNG 50 mM Zitronensäure 1 Fläschchen
Konservierungsmittel : 0,01% Merthiolat 90 ml
EINWEGSCHALEN MIT 6 VERTIEFUNGEN 4
4 - ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL
• Destilliertes oder entionisiertes Wasser.
• Natriumhypochlorit und Natriumbicarbonat.
• Saugfähige Papiertücher.
• Einweghandschuhe.
• Schutzbrille.
• Automatische oder halbautomatische, einstellbare oder fest eingestellte Pipetten zum Pipettieren von 10 µl.
• Pipetten mit Maßeinteilung für 3 ml.
• Zylinder mit Maßeinteilung für 100 ml, 250 ml und 500 ml.
• Zwei-, drei-dimensionale oder Rotationsschüttler (für langsames Schütteln).
• Behälter für infektiösen Abfall.
• Vakuumpumpe mit Sicherheitsstecker.
• Schüttler-Inkubator-Verteiler-Systeme*
(*) Weitere Informationen zu den von unsempfohlenen Geräten erhalten Sie beim technischen Support .
5 - SICHERHEITSVORSCHRIFTEN
Alle Reagenzien in diesem Kit sind für die in-vitro-Diagnostik bestimmt.
• Beim Umgang mit Reagenzien und Proben Einweghandschuhe tragen und Hände danach gründlich waschen.
• Nicht mit dem Mund pipettieren.
• Das in der positiven Kontrolle verwendete Humanserum wurde photochemisch inaktiviert. Es kann jedoch mit
keiner heute bekannten Testmethode mit absoluter Sicherheit ausgeschlossen werden, dass kein HIV-, HBV-, HCV-
Virus oder anderer Erreger vorhanden ist. Diese Reagenzien und Patientenproben müssen als potentiell infektiös
angesehen und gemäß den üblichen Sicherheitsvorschriften gehandhabt werden.
32

• Alle Materialien, die mit Proben und Reagenzien, die Humanmaterial enthalten, in Berührung kommen, sollten
als kontaminiert und somit potentiell infektiös betrachtet werden.
• Verschütten von Proben oder probenhaltigen Lösungen vermeiden.
• Verschüttete Proben müssen mit auf 10% verdünnter Natriumhypochloritlösung gespült werden. Wenn es sich
bei der Flüssigkeit um eine Säure handelt, muss die verschüttete Menge zunächst mit Natriumbicarbonat
neutralisiert und dann mit Natriumhypochloritlösung gereinigt und mit Papiertüchern getrocknet werden. Das
zum Reinigen verwendete Material muss in einen Behälter für infektiösen Abfall entsorgt werden.
• Proben und Reagenzien, die Humanmaterial enthalten, sowie kontaminierte Materialien und Produkte sollten
nach einer Dekontaminierung entsorgt werden, und zwar
- entweder durch Eintauchen in Natriumhypochloritlösung mit einer Natriumhypochlorit-Endkonzentration von
5% (1 Teil Natriumhypochlorit-lösung auf 10 Teile kontaminierte Flüssigkeit oder Wasser) für die Dauer von
30 Minuten
- oder durch Autoklavieren bei 121°C über mindestens 2 Stunden.
VORSICHT : Natriumhypochlorithaltige Lösungen nicht in den Autoklaven stellen.
• Einige Reagenzien enthalten Natriumazid als Konservierungsmittel. Natriumazid kann zur Bildung von Bleioder
Kupferaziden in Rohrleitungen führen. Solche Azide können explosiv sein. Um die Azidbildung zu
vermeiden, Leitungen mit reichlich Wasser nachspülen, wenn die azidhaltigen Lösungen nach Inaktivierung über
den Abfluss entsorgt werden.
6 - VORSICHTSMASSNAHMEN
Die Qualität der Ergebnisse hängt von der Einhaltung folgender GLP-Richtlinien ab :
• Die Reagenzien nicht über das Verfallsdatum hinaus verwenden.
• Keine Reagenzien aus Kits unterschiedlicher Chargen innerhalb einer Messreihe vermischen oder miteinander
verwenden.
• Vor der Verwendung 30 Minuten warten, damit sich die Reagenzien bei Raumtemperatur stabilisieren.
• Reagenzien vorsichtig auflösen und jegliche Kontamination vermeiden.
• Den Test nicht durchführen, wenn Staub oder reaktive Dämpfe (saure, alkalische, Aldehyd-Dämpfe) vorhanden
sind, die zu Veränderungen der Enzymaktivität des Konjugats führen können.
• Sorgfältig gewaschene und mit destilliertem Wasser gespülte Glasgefäße oder vorzugsweise Einwegmaterial
verwenden.
• Für jedes Serum eine neue Pipettenspitze verwenden.
• Das Waschen der Streifen ist ein entscheidender Schritt des Verfahrens: Die empfohlene Anzahl an
Waschzyklen ist zu beachten, und es ist sicherzustellen, dass alle Vertiefungen der Schale vollständig befüllt und
anschließend vollständig geleert werden. Nicht korrekt durchgeführte Waschschritte können zu falschen
Ergebnissen führen.
• Niemals das gleiche Gefäß zum Pipettieren der verschiedenen Reagenzien verwenden.
7 - PROBEN
Die Gewinnung der Blutproben erfolgt gemäß der üblichen Vorgehensweise. Für die Analyse können Serum- oder
Plasmaproben verwendet werden. Bei der Verwendung von Serum sollte das Serum so bald wie möglich extrahiert
werden, um Hämolyse zu vermeiden. Eine starke Hämolyse kann die Testleistung beeinträchtigen. Proben, die
Gerinnsel enthalten, müssen vor dem Test durch Zentrifugation geklärt werden. Aufgeschwemmte Fibrinaggregate
oder -partikel können zu falsch positiven Ergebnissen führen.
Die Proben sollten bei +2-8°C gelagert werden, sofern die Analyse innerhalb von 7 Tagen erfolgt, andernfalls
sollten sie bei -20°C tiefgefroren aufbewahrt werden.
Wiederholtes Einfrieren/Auftauen vermeiden. Proben, die mehr als dreimal eingefroren und wieder aufgetaut
wurden, können nicht verwendet werden.
Zum Transport sind die Proben gemäß den Bestimmungen für den Transport ätiologischer Mittel zu verpacken.
KEINE KONTAMINIERTEN, HYPERLIPÄMISCHEN ODER STARK HÄMOLYTISCHEN PROBEN VERWENDEN.
ANMERKUNG : Bei Proben, die bis zu 90 g/l Albumin und 100 mg/l Bilirubin enthalten, bei lipämischen Proben
mit bis zu 36 g/l Triolein und bei hämolysierten Proben mit bis zu 10 g/l Hämoglobin wurde keine Interferenz
nachgewiesen.
8 - AUFLÖSUNG DER REAGENZIEN - HALTBARKEIT - LAGERUNG
ANMERKUNG : Die Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur (18-30°C) bringen.
Konzentrierte Waschlösung/Verdünnungsmittel (5x)
Die Waschlösung im Verhältnis 1:5 mit destilliertem Wasser verdünnen und gründlich mischen.
20 ml werden für jeden Streifen benötigt.
33

Die rekonstituierte Waschlösung ist bei einer Lagerung bei +2-8°C einen Monat haltbar.
Alle anderen Reagenzien sind bei einer Lagerung bei +2-8°C bis zu dem auf den Etiketten angegebenen
Verfallsdatum haltbar.
Das Probenverdünnungsmittel, das Konjugat und die Entwicklungslösung vor der Verwendung durch Umdrehen
mischen.
9 - TESTDURCHFÜHRUNG
Voranmerkungen
• Bitte das Testverfahren strikt befolgen.
• Bei allen Tests, die an einem Tag durchgeführt werden und bei der Verwendung einer neuen Chargennummer
eines Kits die im Kit mitgelieferte negative und positive Kontrolle mitführen.
• Die Nummern auf den Streifen gemäß Patienten-ID bzw. positiver und negativer Kontrolle notieren.
• Die Waschlösung vorbereiten (Abschnitt 8).
• Die erforderliche Anzahl an Streifen aus dem Röhrchen entnehmen. Halten Sie sie am Kunststoff, um einen
direkten Kontakt mit der Membran zu vermeiden. Legen Sie die Streifen mit der Membran nach oben in die
Vertiefungen der Blotwanne.
Protokoll
1) 3 ml Probenverdünnungsmittel in jede Vertiefung pipettieren.
Die Steifen unter Schütteln 5 Minuten bei Raumtemperatur rehydrieren lassen.
2) 10 µl Probe bzw. Kontrolle in separate Vertiefungen geben und die Pipettenspitze 3mal mit Verdünnungsmittel
spülen.
3) Unter Schütteln 2 Stunden bei Raumtemperatur inkubieren.
4) Den Inhalt jeder Vertiefung mit einer Vakuumpumpe, die mit einer mit Natriumhypochloritlösung gefüllten
Auffangvorrichtung ausgestattetet ist, vollständig absaugen. Zwischen den Ansaugvorgängen die Pipetten
sorgfältig spülen.
3 ml Waschlösung in jede Vertiefung geben und 2 Minuten lang schütteln.
5) Schritt 4 zweimal wiederholen, d. h. insgesamt 3 Waschschritte vornehmen, anschließend die übrige
Waschlösung entfernen.
6) 3 ml Konjugat in jede Vertiefung geben.
Unter Schütteln 30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
7) Die Flüssigkeit aus allen Vertiefungen absaugen.
Jeden Streifen dreimal, wie in Schritt 4 beschrieben, waschen und die übrige Waschlösung entfernen.
8) 3 ml Entwicklungslösung in jede Vertiefung geben.
Unter Schütteln 6 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
9) Die Flüssigkeit aus allen Vertiefungen absaugen.
10) 3 ml Stopplösung in jede Vertiefung geben.
Unter Schütteln 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.
11) Die Flüssigkeit aus allen Vertiefungen absaugen und die Streifen dreimal mit destilliertem Wasser spülen.
12) Die Streifen aus allen Vertiefungen entfernen und vorsichtig zwischen saugfähigen Papiertüchern trocknen. Die
Streifen lichtgeschützt aufbewahren, um eine Hintergrundfärbung zu vermeiden.
10 - ABLESEN UND INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
1) ABLESEN DER ERGEBNISSE
Die Anordnung und die Identifizierung der Kontrollbanden und der HCV-Antigen-Banden auf jedem Streifen
entsprechen dem unten stehenden Diagramm. Durch das positive Kontrollserum wird die Anordnung der Antigene
auf dem Streifen validiert.
Die anti-human-IgG-Kontrolle befindet sich am Ende des Streifens (gegenüber dem Kunststoffende) gefolgt von GST
- C1 - C2 - NS3 und NS4.
34
Antihuman-
IgG-
Kontrolle
GST
Fusions
protein
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 Kunststoffende

Zum Ablesen der Ergebnisse muss der Streifen trocken sein.
Die Streifen sind trocken, wenn der Hintergrund weiß ist.
Ablesen der Ergebnisse
Die Intensität des Signals jeder Antigenbande wird durch den Vergleich mit der Signalintensität der Bande der
Anti-human-IgG-Kontrolle jedes Streifens bestimmt.
Intensität der Banden Markierung
Alle Signalintensitäten, die stärker sind als die des Signals der Anti-human-IgG-Kontrolle 3 +
Alle Signalintensitäten, die dem Signal der Anti-IgG-Kontrolle entsprechen 2 +
Alle Signalintensitäten, die schwächer als die der Kontrollbande sind, jedoch deutlich erkennbar sind 1 +
Schwaches Signal, gerade eben noch gut erkennbar 0,5 +
Kein Signal 0
Validierung
Die Kontrollbande, durch die die Zugabe von Probe und Konjugat sowie die Entwicklungsschritte validiert werden,
muss mit dem bloßen Auge deutlich sichtbar sein.
Wird die Kontrollbande nicht validiert, ist keine Interpretation möglich.
Negatives Kontrollserum : Lediglich die Bande der Anti-IgG-Kontrolle ist sichtbar.
Positives Kontrollserum : Die Bande der Anti-IgG-Kontrolle und die 4 HCV-Antigen-Banden sind deutlich sichtbar.
Die GST-Bande (Fusionsprotein) ist nicht gefärbt .
2) INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
ABLESEN DER ERGEBNISSE INTERPRETATION
Keine HCV-Antigen-Bande sichtbar. NEGATIV
1 HCV-Antigen-Bande sichtbar UNBESTIMMT*
oder
lediglich 2 Capsid-Banden (C1, C2)
2 HCV-Antigen-Banden von 2 verschiedenen Genorten WAHRSCHEINLICH POSITIV*
(Capsidgen, NS3-Gen, NS4-Gen).
mit einer Intensität = 0,5+
Mindestens 2 HCV-Antigen-Banden von 2 verschiedenen POSITIV
Genorten (Capsidgen, NS3-Gen, NS4-Gen)
mit einer Intensität über 0,5+.
ANMERKUNG : Ist die GST-Bande sichtbar, können nur die HCV-C1- und C2-Antigenbanden interpretiert werden
(synthetische Peptide). Das Ergebnis ist damit lediglich UNBESTIMMT.
(*) Nach dem heutigen Wissensstand über die HCV-Serologie wird empfohlen, zu einem späteren Zeitpunkt eine
weitere Blutprobe zu entnehmen.
Beispiele zur Interpretation der Ergebnisse
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRETATION
A 1+ 2+ 0 0 Unbestimmt
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Wahrscheinlich positiv
C 0 0 0 0 Negativ
D 0 2+ 1+ 0,5+ Positiv
E 0 0 0,5+ 0 Unbestimmt
F 0 0,5+ 1+ 0 Wahrscheinlich positiv
G 0 0 1+ 1+ Positiv
11- LEISTUNGSMERKMALE
Spezifität
Zur Bestimmung der Spezifität von DECISCAN
35
® HCV PLUS wurden 474 Proben von Blutspendern, die in einem
EIA negativ waren, getestet. Keine dieser Proben wurde als positiv bestätigt, 22 Proben wiesen ein nicht
eindeutiges Profil auf.
Darüber hinaus wurden zur Bestimmung der Spezifität von DECISCAN ® HCV PLUS 240 klinische Proben, die in
einem EIA negativ waren, getestet. Keine dieser Proben wurde als positiv bestätigt, 21 Proben wiesen ein
unbestimmtes Profil auf und 2 Proben waren wahrscheinlich positiv mit geringen Intensitätsbanden von 0,5+.

Sensitivität
Die Sensitivitätsstudien wurden mit 492 positiven Proben von Patienten mit chronischer HCV-Infektion durchgeführt.
488 Proben waren mit DECISCAN ® HCV PLUS positiv, 4 Proben wiesen ein unbestimmtes Profil auf. Unter diesen
4 unbestimmten Proben waren 2 Proben mit einem Test eines anderen Herstellers unbestimmt und die beiden
anderen Proben positiv.
Darüber hinaus wurden 21 Serokonversionspanels untersucht und mit einem Test eines anderen Herstellers
verglichen. Es wurden folgende Ergebnisse erzielt : bei 7 Serokonversionen wurden die gleichen Proben mit
DECISCAN ® HCV PLUS und dem Vergleichstest als positiv bestimmt, bei 5 Serokonversionen war DECISCAN ®
HCV PLUS 1 Probe später und bei einer Serokonversion 2 Proben später, bei 6 Serokonversionen war DECISCAN ®
HCV PLUS 1 Probe früher und bei 2 Serokonversionen 2 Proben früher als der Vergleichstest.
Insgesamt wurden 365 für HCV-Antikörper positive Proben der Genotypen 1 bis 5, einschließlich 57 1-a, 136 1b,
24 2-a, 15 3-a, 23 4-a, 5 4-nicht a und 3 Genotyp 5 untersucht. Alle diese Proben wiesen ein positives Profil
auf, außer 3 Proben des Genotyps 4-a, die ein unbestimmtes Profil zeigten.
Kreuzreaktivität
91 Proben von Patienten mit verschiedenen pathologischen Befunden, wie z.B. EBV, HSV, EBV, HSV, VZV, HAV,
HBV, Toxoplasmose, Röteln, Mumps, HTLV, Rheumafaktor, ANA sowie von Patienten mit Myelom und von
schwangeren Frauen wurden untersucht.
Eine Probe eines Patienten mit Myelom wies mit DECISCAN ® HCV PLUS ein wahrscheinlich positives Profil und mit
einem Test eines anderen Herstellers ein unbestimmtes Profil auf.
Eine Probe eines VZV-positiven Patienten wies mit DECISCAN ® HCV PLUS ein unbestimmtes Profil und mit einem
Test eines anderen Herstellers ein negatives Profil auf.
Präzision
Studien zur Präzision innerhalb der Messreihe und zwischen den Messreihen wurden mit 7 Proben durchgeführt:
1 negative, 1 schwach positive, 2 positive und 3 unbestimmte Proben, die fünffach in den gleichen Messreihen
an 5 Tagen getestet wurden.
Die Ergebnisse zeigten eine hervorragende Reproduzierbarkeit mit identischen relativen Intensitäten.
12 - GRENZEN DES TESTS
Dieser Test ist nicht zur Bestätigung einer Infektion durch das Hepatitis-C-Virus vorgesehen. Er ist lediglich ein
Ergänzungstest, mit dem gegen verschiedene Regionen des Virus gerichtete Antikörper identifiziert werden
können.
Bei den verschiedenen Proteinen von DECISCAN können schwache Reaktionen bei einer fehlenden positiven
Reaktion mittels ELISA beobachtet werden. Solche Profile müssen durch klinische Befunde und durch eine oder
mehrere serologische Nachuntersuchungen und möglicherweise durch den direkten Nachweis von Virus über
virale RNA nachgewiesen werden.
13 - LITERATUR
Siehe französische Version.
36

DECISCAN ® HCV PLUS
24 test 72310
IMMUNOBLOTTING PER LA RIVELAZIONE DEGLI ANTICORPI
ANTI-HCV NEL SIERO O NEL PLASMA UMANO
IVD
Controllo di qualità del produttore
Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di
assicurazione di qualità dal ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei
prodotti finiti.
Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un controllo di qualità e viene messo in commercio
soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione.
La documentazione relativa alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata negli archivi
della nostra società.

38
1 - INTERESSE CLINICO
2 - PRINCIPIO DEL TEST
3 - COMPOSIZIONE DEL KIT
SOMMARIO
4 - MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO
5 - ISTRUZIONI PER L'IGIENE E LA SICUREZZA
6 - PRECAUZIONI
7 - CAMPIONI
8 - RICOSTITUZIONE DEI REAGENTI – VALIDITÀ - CONSERVAZIONE
9 - PROCEDURA OPERATIVA
10 - LETTURA ED INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
11 - PRESTAZIONI
12 - LIMITI DEL TEST
13 - BIBLIOGRAFIA

1 - INTERESSE CLINICO
DECISCAN ® HCV PLUS è un test unitario su membrana che utilizza una tecnica immunoenzimatica che consente
l’identificazione degli anticorpi associati a un'infezione da virus dell'Epatite C nel siero o nel plasma umano.
La caratterizzazione di tali anticorpi rivelati costituisce una fase supplementare indispensabile per una migliore
comprensione della sierologia HCV e consente quindi il follow up della cinetica di evoluzione degli anticorpi.
2 - PRINCIPIO DEL TEST
DECISCAN ® HCV PLUS si serve come supporto solido di una membrana fissata su una strip di plastica, su cui
vengono sensibilizzati in successione:
1) Controllo Anti-IgG umane
Questo controllo permette contemporaneamente:
la validazione dell’aggiunta di campione,
il controllo dei reagenti (coniugato, substrato),
la lettura dei risultati rispetto all’intensità del segnale.
2) Proteina di fusione : GST
I geni che codificano per le proteine di NS3 e di NS4 sono stati fusi con il gene della glutatione S trasferasi.
La proteina di fusione (GST) permette così di controllare la presenza di anticorpi anti-GST eventualmente
all’origine di reazioni false positive.
3) Antigeni HCV
• Proteine ricombinanti prodotte da E. coli a partire da cloni selezionati :
- nella regione non strutturale : NS3 e NS4
• Peptidi selezionati per l’alto livello di immunogenicità :
- nella regione strutturale : C1 e C2
- nella regione non strutturale : NS4
Controllo
Anti-IgG
umane
GST
Proteina
di
fusione
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
Il test va eseguito attenendosi alle fasi di reazione seguenti :
1) Il siero da esaminare viene incubato con la strip. Gli anticorpi anti-HCV, se presenti, si legano agli antigeni
fissati sulla fase solida.
2) Dopo il lavaggio, vengono aggiunti gli anticorpi anti-IgG umane marcati con fosfatasi alcalina. Questi si
fissano a loro volta agli anticorpi specifici trattenuti sulla fase solida.
3) Dopo l'eliminazione del coniugato enzimatico non legato, il complesso antigene-anticorpo viene rivelato
mediante aggiunta del substrato.
4) Dopo il blocco della reazione, lettura delle strip rivelate e interpretazione dei risultati.
39

3 - COMPOSIZIONE DEL KIT
Tutti i reagenti sono destinati esclusivamente all'uso diagnostico in vitro.
ETICHETTATURA NATURA DEI REAGENTI PRESENTAZIONE
R1 STRIP SENSIBILIZZATE con proteine ricombinanti e peptidi sintetici provenienti 24 strip
dalle regioni Capside, NS3 e NS4
R2 SOLUZIONE DI LAVAGGIO CONCENTRATA 5 volte 1 flacone
100 ml
R3 SIERO DI CONTROLLO NEGATIVO 1 flacone
Siero umano privo di anticorpi anti-HCV, negativo all’Ag HBs
e agli anticorpi anti-HIV1 e anti-HIV2
Conservante: sodio azide: < 0,1 %˙
0,2 ml
R4 SIERO DI CONTROLLO POSITIVO 1 flacone
Siero umano contenente gli anticorpi anti-HCV, non reattivo per l’Ag HBs
e gli anticorpi anti-HIV1, anti-HIV2, inattivato fotochimicamente
Conservante: sodio azide: < 0,1%
0,2 ml
R5 DILUENTE PER CAMPIONI 1 flacone
Tampone TRIS NaCl, latte, rosso fenolo
Conservante: Kathon 0,25 %
90 ml
R6 CONIUGATO 1 flacone
Tampone TRIS-NaCI, verde alimentare contenente anticorpi di capra anti-IgG
umane marcati con fosfatasi alcalina
Conservante : sodio azide < 0,1 %
90 ml
R8 SOLUZIONE DI RIVELAZIONE BCIP/NBT 1 flacone
5-Bromo-4-Cloro-Indolil fosfato (BCIP) e Nitroblu Tetrazolio (NBT)
Conservante : sodio azide < 0,1 %
90 ml
R9 SOLUZIONE BLOCCANTE 1 flacone
Acido citrico 50 mM
Conservante : Mertiolato 0,01%
90 ml
VASSOI DA 6 SCOMPARTI 4
4 - MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO
• Acqua distillata o completamente demineralizzata.
• Candeggina e bicarbonato di sodio.
• Carta assorbente.
• Guanti monouso.
• Occhiali di protezione.
• Pipette automatiche o semi-automatiche regolabili o fisse atte a dispensare 10 µl.
• Pipette graduate da 3 ml.
• Provette graduate da 100 ml, 250 ml e 500 ml.
• Agitatore bidimensionale, tridimensionale o a rotazione (agitazione lenta).
• Contenitore per rifiuti contaminati.
• Pompa per vuoto dotata di spina di sicurezza.
• Sistemi (agitatore-incubatore-distributore)*
(*) Consultateci per informazioni precise riguardo agli apparecchi approvati dai nostri servizi tecnici.
5 - ISTRUZIONI PER L'IGIENE E LA SICUREZZA
Tutti i reagenti del kit sono destinati all'uso diagnostico "in vitro".
• Indossare guanti mono-uso per maneggiare i reagenti e i campioni e lavarsi le mani con cura dopo la
manipolazione.
• Non "pipettare con la bocca".
• Il siero umano utilizzato per il controllo positivo è stato inattivato fotochimicamente, tuttavia nessun metodo può
garantire in maniera assoluta l’assenza dei virus HIV, ABV, HCV o di altri agenti infettivi. Considerare sia i
reagenti di origine umana sia i campioni dei pazienti come potenzialmente infettivi e maneggiarli con le
40
precauzioni d'uso.

• Considerare sia il materiale a diretto contatto con i campioni sia i reagenti di origine umana sia le soluzioni
di lavaggio come prodotti contaminati.
• Evitare schizzi di campioni o di soluzioni che li contengono.
• Le superfici sporche devono essere pulite con candeggina diluita al 10 %.
Se il liquido contaminante è un acido, le superfici sporche devono essere neutralizzate precedentemente con
bicarbonato di sodio, poi lavate con candeggina e asciugate con carta assorbente. Il materiale utilizzato per
pulire dovrà essere gettato in un contenitore speciale per residui contaminati.
• I campioni, i reagenti di origine umana come pure il materiale e i prodotti contaminati devono essere eliminati
dopo essere stati decontaminati
- o immergendoli in candeggina a concentrazione finale del 5 % di ipoclorito di sodio (1 volume di
candeggina per 10 volumi di liquido contaminato o acqua) per 30 minuti,
- oppure mediante autoclavaggio a 121°C per almeno 2 ore.
ATTENZIONE : non introdurre nell'autoclave soluzioni contenenti ipoclorito di sodio.
• Certi reagenti contengono sodio azide come conservante. La sodio azide può formare azoturi di piombo o
rame nelle tubature di scarico del laboratorio. Detti azoturi sono esplosivi. Per evitare accumuli di azoturi,
risciacquare con abbondante acqua le tubature di scarico qualora le soluzioni contenenti azoturo vengano
eliminate nel lavandino una volta inattivate.
6 - PRECAUZIONI
La qualità dei risultati dipende dal rispetto delle buone pratiche di laboratorio di seguito riportate :
• Non utilizzare reagenti scaduti.
• Non mescolare, né associare, durante uno stesso test, reagenti prelevati da kit con numeri di lotto diversi.
• Prima dell'utilizzo, attendere 30 minuti affinché i reagenti si riportino alla temperatura ambiente.
• Ricostituire con cura i reagenti evitando qualunque contaminazione.
• Non eseguire il test in presenza di vapori reattivi (acidi, alcalini, aldeidi) o di polveri che potrebbero alterare
l'attività enzimatica del coniugato.
• Utilizzare recipienti di vetro perfettamente lavati e risciacquati con acqua distillata o preferire materiale monouso.
• Utilizzare un puntale di distribuzione nuovo per ciascun siero.
• Il lavaggio delle strip costituisce una fase essenziale della manipolazione : rispettare il numero di cicli di
lavaggio prescritti e assicurarsi che tutti gli scomparti del vassoio siano completamente riempiti, poi svuotarli
del tutto. Un lavaggio eseguito male può produrre risultati errati.
• Non utilizzare mai lo stesso recipiente o la stessa pipetta per distribuire reagenti diversi.
7 - CAMPIONI
Prelevare un campione di sangue secondo le pratiche d'uso. Per il test può essere utilizzato siero o plasma. Se si
utilizza il siero: estrarlo appena possibile per evitare emolisi. Un'emolisi grave può alterare l'esecuzione del test.
I campioni che presentano grumi devono essere chiarificati prima del test mediante centrifugazione. Le particelle
o aggregati di fibrina in sospensione possono produrre risultati falsi positivi.
Se il monitoraggio è eseguito entro 7 giorni i campioni vanno conservati a +2 - 8°C oppure possono essere
congelati a - 20°C.
Evitare cicli di congelamento/scongelamento ripetuti. I campioni sottoposti a più di tre cicli di congelamento/
scongelamento non devono più essere utilizzati.
Se i campioni devono essere trasportati, imballarli secondo le normative vigenti in materia di trasporto di agenti
eziologici.
NON UTILIZZARE SIERI CONTAMINATI, IPERLIPEMICI O EMOLIZZATI.
NOTA : Non sono state messe in evidenza interferenze sia nei campioni contenenti fino a 90 g/l di albumina e
100 mg/l di bilirubina, sia nei campioni lipemici contenenti fino a 36 g/l di trioleina e in campioni emolizzati
contenenti fino a 10 g/l di emoglobina.
8 - RICOSTITUZIONE DEI REAGENTI - VALIDITÀ - CONSERVAZIONE
NOTA : Prima di utilizzare i reagenti, attendere che raggiungano la temperatura ambiente (18-30°C)
Soluzione di lavaggio 5 X - concentrata 5 volte.
Diluire la soluzione di lavaggio a 1/5 in acqua distillata e agitare fino a ottenere un’omogeneizzazione
completa.
Per ciascuna strip sono necessari 20 ml.
La soluzione di lavaggio così ricostituita rimane stabile per 1 mese a +2-8°C.
41

Una volta aperti tutti gli altri reagenti rimangono stabili fino alla data di scadenza indicata sulla confezione se
conservati ad una temperatura pari a 2-8°C.
Prima dell’uso, omogeneizzare, rivoltandoli, il diluente per campioni, il coniugato e la soluzione di rivelazione.
9 - PROCEDURA OPERATIVA
Note preliminari
• Attenersi rigorosamente al protocollo.
• Considerare il controllo negativo e il controllo positivo forniti nel kit per tutti i test eseguiti nello stesso giorno e
qualora venga utilizzato un nuovo numero di lotto.
• Registrare il numero della strip corrispondente a ciascun paziente e a ciascun controllo positivo e negativo.
• Preparare la soluzione di lavaggio (cfr. capitolo 8).
• Estrarre dalla cartuccia il numero di strip necessarie prendendole dal supporto in plastica al fine di evitare
qualunque contatto diretto con la membrana. Depositarle negli scomparti dei vassoi con la membrana rivolta
verso l’alto.
Protocollo
1) Dispensare 3 ml di diluente per campioni in ogni scomparto.
Lasciare che le strip si reidratino per 5 min a temperatura ambiente mediante agitazione.
2) Aggiungere 10 µl di campione o controllo per scomparto immergendo 3 volte il puntale della pipetta nel
diluente.
3) Incubare per 2 ore a temperatura ambiente agitando.
4) Aspirare completamente il contenuto di ciascuno scomparto mediante una pompa a vuoto dotata di una
trappola contenente candeggina, facendo attenzione a risciacquare con cura la pipetta a ogni aspirazione.
Aggiungere 3 ml di soluzione di lavaggio per scomparto e agitare per 2 min.
5) Ripetere la fase 4 per due volte, vale a dire 3 lavaggi, poi eliminare la soluzione dell’ultimo lavaggio.
6) Aggiungere 3 ml di coniugato per scomparto.
Incubare per 30 min a temperatura ambiente agitando.
7) Aspirare il liquido in ciascuno scomparto.
Lavare 3 volte ciascuna strip come indicato nella fase 4 e eliminare la soluzione dell’ultimo lavaggio.
8) Aggiungere 3 ml di soluzione di rivelazione in ciascuno scomparto.
Incubare per 6 min a temperatura ambiente agitando.
9) Aspirare il liquido in ciascuno scomparto.
10) Aggiungere 3 ml di soluzione bloccante in ciascuno scomparto.
Incubare per 5 min a temperatura ambiente agitando.
11) Aspirare il liquido in ciascuno scomparto e lavare 3 volte le strip utilizzando acqua demineralizzata.
12) Togliere le strip da ciascuno scomparto e asciugarle con cura tra due fogli di carta assorbente.
Conservare le strip al riparo dalla luce per evitare la formazione di rumori di fondo.
10 - LETTURA E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
1) LETTURA DEI RISULTATI
La localizzazione e identificazione delle bande di controllo e delle bande antigene HCV presenti su ciascuna strip
corrispondono allo schema seguente e saranno validate mediante il siero di controllo positivo.
Il controllo (anti-IgG umane) si trova all’estremità della strip (opposta al supporto di plastica); GST - C1 - C2 - NS3
- NS4 - supporto di plastica (n. di identificazione) vengono successivamente sensibilizzati :
42
Controllo
Anti-IgG
umane
GST
proteina
di
fusione
La lettura deve essere eseguita obbligatoriamente su strip asciutte.
Le strip sono asciutte quando il rumore di fondo è bianco.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 Supporto in plastica

Lettura
L’intensità del segnale ottenuto per ciascuna banda è valutata in confronto all’intensità del segnale della banda
di controllo (anti-IgG umane) presente su ciascuna strip.
Intensità della banda Punteggio
Intensità superiori all’intensità del segnale del controllo anti-IgG 3 +
Intensità uguale all’intensità del segnale di controllo anti-IgG 2 +
Intensità inferiori all’intensità del segnale del controllo anti-IgG ma superiori allo stato di traccia 1 +
Intensità del segnale appena visibile (traccia) 0,5 +
Nessuna traccia 0
Convalida
La banda di controllo deve essere visibile a occhio nudo senza ambiguità. Questa convalida le fasi di deposito
del campione, di coniugato e di rivelazione
Se la banda di controllo non è convalidata non è possibile interpretare il test.
Siero di controllo negativo : Soltanto la banda di controllo anti-IgG è visibile, non si osservano segnali sulle altre
bande.
Siero di controllo positivo : la banda di controllo anti-IgG è visibile, non si osservano segnali sulla banda GST
(proteina di fusione) e le 4 bande antigene HCV sono chiaramente visibili.
2) INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
LETTURA INTERPRETAZIONE
Nessuna banda antigene HCV visualizzata NEGATIVO
1 banda antigene HCV visualizzata oppure INDETERMINATO*
2 bande antigene HCV visualizzate sul gene della capside
(C1, C2)
2 bande antigene HCV visualizzate provenienti da 2 geni POSITIVO PROBABILE*
diversi (gene del capside, gene NS3, gene NS4)
e con un’intensità pari a 0,5+
Almeno 2 bande antigene HCV visualizzate provenienti POSITIVO
da 2 geni diversi (gene del capside, gene NS3,
gene NS4) e con un’intensità superiore a 0,5+
N.B.: se la banda GST viene visualizzata, saranno interpretate soltanto le bande antigene HCV, C1 e C2 (peptidi
sintetici).
*Allo stato attuale delle conoscenze di sierologia dell’HCV, è necessario effettuare un controllo su un altro
prelievo.
Esempi di interpretazione dei risultati
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRETAZIONE
A 1+ 2+ 0 0 Indeterminato
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Positivo probabile
C 0 0 0 0 Negativo
D 0 2+ 1+ 0,5+ Positivo
E 0 0 0,5+ 0 Indeterminato
F 0 0,5+ 1+ 0 Positivo probabile
G 0 0 1+ 1+ Positivo
11 - PRESTAZIONI
Specificità
Su una popolazione di 474 donatori di sangue il cui test anti-HCV in tecnica EIA è risultato negativo: nessun
campione è risultato positivo, 22 hanno presentato un profilo indeterminato.
Su una popolazione di 240 campioni provenienti da servizi ospedalieri il cui test anti-HCV in tecnica EIA è
risultato negativo : nessun campione è risultato positivo con il test DECISCAN ® HCV PLUS, 21 campioni hanno
presentato un profilo indeterminato e due campioni hanno presentato un profilo positivo probabile con bande di
scarsa intensità 0,5.
43

Sensibilità
La sensibilità è stata studiata su 492 campioni portatori cronici di epatite, 488 sono risultati positivi con
DECISCAN ® HCV PLUS e 4 indeterminati. Tra i 4 indeterminati, 2 presentavano anche un profilo indeterminato
con una tecnica concorrente mentre gli altri 2 sono risultati positivi.
I test su 21 campioni di sieroconversione, messi a confronto con una tecnica concorrente, hanno dato i risultati
seguenti : su 7 sieroconversioni, gli stessi campioni sono risultati positivi con DECISCAN ® HCV PLUS e con la
tecnica concorrente. In 5 casi di sieroconversioni, DECISCAN ® HCV PLUS evidenzia un ritardo pari a un prelievo,
e in una sieroconversione il ritardo è pari a due prelievi. In 6 sieroconversioni, DECISCAN ® HCV PLUS registra
un anticipo di un prelievo e in 2 casi di 2 prelievi rispetto alla tecnica concorrente.
In totale sono stati esaminati 365 campioni positivi agli anticorpi anti-HCV rappresentanti i genotipi da 1 a 5, di
cui 57 con genotipo 1-a, 136 con genotipo 1-b, 24 con genotipo 2-a, 15 con genotipo 3-a, 23 con genotipo 4a,
5 con genotipo 4-non a, e 3 con genotipo 5. Tutti questi campioni hanno mostrato un profilo positivo ad
eccezione di 3 campioni con genotipo 4-a che hanno evidenziato un profilo indeterminato.
Reazioni crociate
Sono stati esaminati 91 campioni prelevati da pazienti affetti da altre patologie, come: EBV, HSV, VZV, HAV, HBV,
Toxoplasmosi, Rosolia, Parotite, HTLV, Fattore Reumatoide, ANA oltre che da pazienti affetti da mieloma e donne
in gravidanza.
1 campione proveniente da un paziente affetto da mieloma ha presentato un profilo positivo probabile con il test
DECISCAN ® HCV PLUS e un profilo indeterminato con un test concorrente.
1 campione proveniente da un paziente VZV positivo ha presentato un profilo indeterminato con il test
DECISCAN ® HCV PLUS e un profilo negativo con un test concorrente.
Riproducibilità
La riproducibilità è stata studiata su 7 campioni, di cui 1 negativo, 1 basso positivo, 2 positivi e 3 indeterminati
testati 5 volte nel corso della stessa manipolazione e in 5 giorni diversi.
L’analisi dei profili mostra un'ottima riproducibilità con intensità relative identiche.
12 - LIMITI DEL TEST
Il presente test non costituisce un test di conferma di un’infezione da virus dell'epatite C. Si tratta di un test
supplementare che consente la caratterizzazione degli anticorpi diretti contro varie regioni virali.
Reazioni deboli possono essere osservate sulle diverse proteine del DECISCAN in assenza di reazione positiva
di monitoraggio in tecnica ELISA. Tali profili devono essere confortati da dati clinici e da un follow up sierologico
nel tempo mediante uno o più ulteriori prelievi e eventualmente una ricerca dell’RNA virale in circolo.
13 - BIBLIOGRAFIA
Vedere versione francese
44

DECISCAN ® HCV PLUS
24 testes 72310
IMMUNOBLOT PARA DETECÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-HCV
NO SORO OU PLASMA HUMANO
IVD
Controlo da qualidade de fabrico
Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um
sistema de garantia de qualidade, desde a recepção das matérias primas até à comercialização
do produto final.
Cada lote de produto final é objecto de um controlo de qualidade, sendo comercializado apenas
quando em conformidade com os critérios de aceitação.
A documentação relativa à produção e ao controlo de cada lote é arquivada pela nossa empresa.

46
1 - INTERESSE CLÍNICO
2 - PRINCÍPIO DO TESTE
3 - COMPOSIÇÃO DO DISPOSITIVO
ÍNDICE
4 - MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
5 - INSTRUÇÕES DE HIGIENE E SEGURANÇA
6 - PRECAUÇÕES
7 - AMOSTRAS
8 - RECONSTITUIÇÃO DOS REAGENTES – VALIDADE – CONSERVAÇÃO
9 - MODO DE FUNCIONAMENTO
10 - LEITURA E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
11 - DESEMPENHOS
12 - LIMITES DO TESTE
13 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1 - INTERESSE CLÍNICO
DECISCAN ® HCV PLUS é um teste unitário em membrana, utilizando uma técnica imunoenzimática que permite
a individualização de anticorpos associados a uma infecção pelo vírus da hepatite C no soro ou no plasma
humano.
A caracterização destes anticorpos detectados é uma etapa suplementar indispensável para uma melhor
compreensão da serologia HVC, permitindo, assim, um acompanhamento da cinética da evolução dos
anticorpos.
2 - PRINCÍPIO DO TESTE
DECISCAN ® HCV PLUS utiliza como suporte sólido uma membrana fixada numa tira plástica, onde são aplicados
sucessivamente :
1) Controlo Anti-IgG humanos
Este controlo permite simultaneamente :
a validação da adição da amostra,
o controlo dos reagentes (conjugado, substrato),
a leitura dos resultados em função da intensidade do sinal.
2) Proteína de fusão : GST
Os genes codificados para as proteínas de NS3 e de NS4 foram fundidos com o gene da Glutatião S
Transferase. A proteína de fusão (GST) permite, assim, controlar a presença de anticorpos anti-GST que podem
estar na origem de reacções falsamente positivas.
3) Antigénios HCV
• Proteínas recombinantes produzidas por E.coli a partir de clones seleccionados :
na zona não estrutural : NS3 e NS4
• Peptidos seleccionados pela sua elevada imunogenicidade :
na zona estrutural : C1 e C2
na zona não estrutural : NS4
Controlo
Anti-IgG
humanos
GST
proteína
de
fusão
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
A realização do teste compreende as etapas reaccionais seguintes :
1) O soro a estudar é incubado com a tira. Se houver anticorpos anti-HCV presentes, estes ligam-se aos antigénios
fixados na fase sólida.
2) Os anticorpos anti-IgG humanos, marcados com fosfatase alcalina, são adicionados após lavagem. Estes
fixam-se, por sua vez, aos anticorpos específicos retidos na fase sólida.
3) Após eliminação do conjugado enzimático não ligado, o complexo antigénio/anticorpo é revelado por adição
do substrato.
4) Após paragem da reacção, procede-se então à leitura das tiras reveladas e à interpretação dos resultados.
47

3 - COMPOSIÇÃO DO DISPOSITIVO
Todos os reagentes são exclusivamente destinados à utilização no diagnóstico in vitro.
ETIQUETAGEM NATUREZA DOS REAGENTES APRESENTAÇÃO
R1 TIRAS SENSIBILIZADAS por proteínas recombinantes e peptidos sintéticos
das zonas Cápside, NS3 e NS4
24 tiras
R2 SOLUÇÃO DE LAVAGEM CONCENTRADA 5 vezes 1 frasco
100 ml
R3 SORO DE CONTROLO NEGATIVO 1 frasco
Soro humano não contendo anticorpos anti-HCV, negativo para o Ag HBs
e os anticorpos anti-HIV1 e anti-HIV2
Conservante : azida sódica < 0,1%˙
0,2 ml
R4 SORO DE CONTROLO POSITIVO 1 frasco
Soro humano contendo anticorpos anti-HCV, negativo para o Ag HBs
e os anticorpos anti-HIV1e anti-HIV2, fotoquimicamente inactivado
Conservante : azida sódica < 0,1%
0,2 ml
R5 DILUENTE PARA AMOSTRAS 1 frasco
Tampão TRIS, NaCl, leite, vermelho de fenol,
Conservante : Kathon 0,25%
90 ml
R6 CONJUGADO 1 frasco
Tampão TRIS, NaCl, verde alimentar contendo os anticorpos de cabra
anti-IgG humanos, marcados com fosfatase alcalina
Conservante : azida sódica < 0,1%
90 ml
R8 SOLUÇÃO DE REVELAÇÃO BCIP/NBT 1 frasco
5-Bromo-4-Cloro-Indolil Fosfato (BCIP) e Nitroblue Tetrazólio (NBT)
Conservante : azida de sódio < 0,1%
90 ml
R9 SOLUÇÃO DE PARAGEM 1 frasco
Ácido cítrico 50 mM
Conservante : Mertiolato 0,01%
90 ml
SUPORTE DE 6 COMPARTIMENTOS 4
4 - MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
• Água destilada ou completamente desmineralizada.
• Lixívia e bicarbonato de sódio.
• Papel absorvente.
• Luvas descartáveis.
• Óculos de protecção.
• Pipetas automáticas ou semi-automáticas, reguláveis ou fixas, com 10 µl de capacidade.
• Pipetas graduadas de 3 ml.
• Provetas graduadas de 100 ml, 250 ml e 500 ml.
• Agitador bidimensional, tridimensional ou rotativo (agitação lenta)
• Contentor de resíduos contaminados.
• Bomba de vácuo com ficha de segurança.
• Sistemas (Agitador - incubadora - distribuidor) *
(*) Para informações mais precisas acerca dos aparelhos validados pelos nossos serviços técnicos é favor
contactar-nos.
5 - INSTRUÇÕES DE HIGIENE E SEGURANÇA
Todos os reagentes do dispositivo são destinados a utilização no diagnóstico "in vitro".
• Usar luvas descartáveis durante a manipulação dos reagentes e das amostras e lavar cuidadosamente as mãos
após a sua manipulação.
• Não "pipetar com a boca".
• O soro humano utilizado para o controlo positivo foi inactivado fotoquimicamente; no entanto, nenhum método
pode garantir, de forma absoluta, a ausência dos vírus HIV, HBV, HCV ou outros agentes infecciosos.
48

Os reagentes de origem humana, bem como as amostras dos doentes, devem ser considerados como
potencialmente infecciosos e, neste sentido, manipulados com as precauções habituais.
• Considerar o material directamente em contacto com as amostras e os reagentes de origem humana, bem
como as soluções de lavagem, como produtos contaminados.
• Evitar o derramamento das amostras ou de soluções que as contenham.
• As superfícies contaminadas deverão ser lavadas com lixívia diluída a 10%.
Se o líquido contaminante for um ácido, as superfícies afectadas deverão ser previamente neutralizadas por
meio de bicarbonato de sódio e, em seguida, lavadas com lixívia e secas com papel absorvente. O material
utilizado para a limpeza deverá ser eliminado num contentor especialmente destinado a resíduos
contaminados.
• As amostras, os reagentes de origem humana, bem como o material e os produtos contaminados, devem ser
eliminados após descontaminação
- por imersão em lixívia, à concentração final de 5% de hipocloreto de sódio (1 volume de lixívia para
10 volumes de líquido contaminado ou de água), durante 30 minutos, ou
- por esterilização em autoclave, à temperatura de 121°C, durante um mínimo de duas horas.
ATENÇÃO : não introduzir na autoclave soluções contendo hipocloreto de sódio.
• Certos reagentes contêm azida sódica como conservante. A azida sódica pode formar azotetos de chumbo
ou de cobre nas canalizações do laboratório. Estes azotetos são explosivos. A fim de evitar qualquer
acumulação de azotetos, lavar as canalizações com água abundante, caso as soluções contendo o azoteto
sejam eliminadas através da canalização de despejo, após a sua inactivação.
6 - PRECAUÇÕES
A qualidade dos resultados está dependente das boas práticas de laboratório seguintes :
• Não utilizar reagentes cujo prazo de validade tenha expirado.
• Não misturar nem associar reagentes provenientes de dispositivos com números de lote diferentes, no decorrer
de uma mesma manipulação.
• Antes de utilizar, aguardar 30 minutos para que os reagentes estabilizem à temperatura ambiente.
• Reconstituir cuidadosamente os reagentes, evitando qualquer contaminação.
• Não realizar o teste em presença de vapores reactivos (ácidos, alcalinos, aldeídos) ou poeiras que possam
alterar a actividade enzimática do conjugado.
• Utilizar recipientes em vidro perfeitamente lavados e enxaguados com água destilada ou, de preferência, usar
material descartável.
• Utilizar uma ponta de distribuição nova para cada soro.
• A lavagem das tiras constitui uma etapa essencial da manipulação : respeitar o número de ciclos de lavagem
prescritos e assegurar que os compartimentos dos suportes são completamente cheios e, depois, completamente
esvaziados. Uma lavagem deficiente pode dar origem a resultados incorrectos.
• Nunca utilizar o mesmo recipiente ou pipeta para distribuir reagentes diferentes.
7 - AMOSTRAS
Recolher uma amostra de sangue segundo a prática habitual. O teste pode utilizar soro ou plasma. Se for
utilizado soro: extraí-lo o mais rapidamente possível para evitar qualquer hemólise. Uma hemólise intensa pode
alterar a realização do teste.
As amostras que apresentem agregados devem ser clarificadas por centrifugação antes do teste. As partículas
ou agregados de fibrina em suspensão podem dar origem a resultados falsamente positivos.
As amostras devem ser conservadas a + 2 - 8°C, se a despistagem for efectuada nos 7 dias seguintes, ou podem
ser conservadas congeladas a - 20°C.
Evitar as congelações/descongelações repetidas. Não deverão ser utilizadas amostras submetidas a mais de
3 processos de congelação/descongelação.
Se for necessário transportar as amostras, estas deverão ser acondicionadas em conformidade com a
regulamentação em vigor para transporte de agentes etiológicos.
NÃO UTILIZAR SOROS CONTAMINADOS, HIPERLIPÉMICOS OU HEMOLIZADOS.
NOTA : Não foi revelada qualquer interferência em amostras contendo até 90 g/l de albumina, e 100 mg/l de
bilirrubina, bem como em amostras lipémicas contendo até 36 g/l de trioleína e em amostras hemolizadas
contendo até 10 g/l de hemoglobina.
49

8 - RECONSTITUIÇÃO DOS REAGENTES - VALIDADE - CONSERVAÇÃO
NOTA : Antes de utilizar os reagentes, aguardar que estabilizem à temperatura ambiente (18-30°C).
Solução de lavagem 5 X – concentrada 5 vezes.
Diluir a 1/5 a solução de lavagem em água destilada e agitar até à sua completa homogeneização.
São necessários 20 ml por tira.
A solução de lavagem assim reconstituída mantém-se estável durante 1 mês, quando conservada a +2-8°C.
Todos os outros reagentes, conservados a +2-8°C, mantêm-se estáveis após abertura, até ao termo do prazo
de validade indicado nas respectivas etiquetas.
Antes da utilização, homogeneizar por inversão o diluente para amostras, o conjugado e a solução de revelação.
9 - MODO DE FUNCIONAMENTO
Observações preliminares
• Seguir estritamente o protocolo.
• Incluir o controlo negativo e o controlo positivo, fornecidos com o dispositivo, no conjunto dos testes efectuados
num mesmo dia e sempre que se utilize um novo número de lote.
• Registar o número da tira correspondente a cada doente, bem como aos controlos negativo e positivo.
• Preparar a solução de lavagem (ver a secção 8).
• Retirar da embalagem o número de tiras necessárias, segurando-as pelo suporte plástico, a fim de evitar
qualquer contacto directo com a membrana. Depositá-las nos compartimentos dos suportes, com o lado da
membrana voltado para cima.
Protocolo
1) Distribuir 3 ml de diluente para amostras em cada compartimento.
Aguardar 5 minutos para que as tiras re-hidratem à temperatura ambiente sob agitação.
2) Adicionar 10 µl de amostras ou de controlo por compartimento, enxaguando 3 vezes a ponta da pipeta no
diluente.
3) Incubar 2 horas sob agitação à temperatura ambiente.
4) Aspirar inteiramente o conteúdo de cada compartimento por meio de uma bomba de vácuo, equipada de um
espaço contendo lixívia, tendo o cuidado de enxaguar cuidadosamente a pipeta entre cada aspiração.
Adicionar 3 ml de solução de lavagem por compartimento e agitar durante 2 minutos.
5) Repetir a etapa 4 duas vezes, num total de 3 lavagens, e eliminar a solução da última lavagem.
6) Adicionar 3 ml de conjugado por compartimento.
Incubar 30 minutos sob agitação à temperatura ambiente.
7) Aspirar o líquido em cada compartimento.
Lavar 3 vezes cada tira, como indicado na etapa 4, e eliminar a solução da última lavagem.
8) Adicionar 3 ml de solução de revelação por compartimento.
Incubar 6 minutos sob agitação à temperatura ambiente.
9) Aspirar o líquido em cada compartimento.
10) Adicionar 3 ml de solução de paragem por compartimento.
Incubar 5 minutos sob agitação à temperatura ambiente.
11) Aspirar o líquido em cada compartimento e enxaguar 3 vezes as tiras utilizando água desmineralizada.
12) Retirar as tiras de cada compartimento e secá-las, cuidadosamente, entre duas folhas de papel absorvente.
Conservar as tiras ao abrigo da luz para evitar o aparecimento de ruído de fundo.
10 - LEITURA E INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
1) LEITURA DOS RESULTADOS
A localização e a identificação das bandas de controlos e das bandas de antigénio HCV presentes em cada tira,
corresponde ao esquema seguinte e será validada pelo soro de controlo positivo.
50

O controlo (anti-IgG humanos) situa-se na extremidade da tira (do lado oposto ao suporte de plástico); GST - C1
C2 - NS3 - NS4 - suporte de plástico (n° de identificação) são, em seguida, aplicados sucessivamente :
Controlo
Anti-IgG
humanos
GST
proteína
de
fusão
A leitura deve ser imperativamente realizada em tiras secas.
As tiras estão secas quando o ruído de fundo for branco.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 Suporte de plástico
Leitura
A intensidade do sinal obtido em cada tira é avaliada por comparação com a intensidade do sinal da banda
de controlo (anti-IgG humanos) presente em cada tira.
Intensidade da banda Nota
Intensidades superiores à intensidade do sinal do controlo anti-IgG 3 +
Intensidade igual à intensidade do sinal do controlo anti-IgG 2 +
Intensidades inferiores à intensidade do sinal do controlo anti-IgG, mas superiores ao estado de vestígio 1 +
Intensidade do sinal apenas visível (vestígio) 0,5 +
Nenhum vestígio 0
Validação
A banda de controlo deve ser visível a olho nu, sem ambiguidade. Ela valida as etapas de deposição da amostra,
de conjugado e de revelação.
Não é possível qualquer interpretação se a banda de controlo não for validada.
Soro de controlo negativo : apenas a banda de controlo anti-IgG é visível, não se observando qualquer sinal nas
outras bandas.
Soro de controlo positivo : a banda de controlo anti-IgG é visível, não se observa qualquer sinal na banda GST
(proteína de fusão), e as 4 bandas HCV antigénios são claramente visíveis.
2) INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
LEITURA INTERPRETAÇÃO
Nenhuma banda antigénio HCV visualizada NEGATIVO
1 banda antigénio HCV visualizada ou INDETERMINADO*
2 bandas antigénios HCV visualizadas no gene da cápside (C1, C2)
2 bandas antigénios HCV visualizadas provenientes POSITIVO PROVÁVEL*
de 2 genes diferentes (gene da cápside, gene NS3,
gene NS4) e com uma intensidade de 0.5+
Pelo menos 2 bandas antigénios HCV visualizadas, POSITIVO
provenientes de 2 genes diferentes (gene da cápside, gene NS3,
gene NS4) e com uma intensidade superior a 0.5+
NOTA : se a banda GST for visualizada, apenas serão interpretadas as bandas de antigénios HCV C1 e C2
(peptidos sintéticos).
* No estado actual dos conhecimentos sobre a serologia HCV, deverá ser efectuado um controlo numa colheita
posterior.
Exemplos de interpretação dos Resultados
C1 C2 NS3 NS4 INTERPRETAÇÃO
A 1+ 2+ 0 0 Indeterminado
B 0 0.5+ 0.5+ 0 Positivo provável
C 0 0 0 0 Negativo
D 0 2+ 1+ 0.5+ Positivo
E 0 0 0.5+ 0 Indeterminado
F 0 0.5+ 1+ 0 Positivo provável
G 0 0 1+ 1+ Positivo
51

11 - DESEMPENHOS
Especificidade
Numa população de 474 dadores de sangue cujo teste anti-HCV EIA era negativo. Não se verificou qualquer
amostra positiva, 22 apresentaram um perfil indeterminado.
Numa população de 240 amostras provenientes de serviços hospitalares cujo teste Anti-HCV EIA era negativo.
Nenhuma amostra positiva com o teste DECISCAN ® HCV PLUS, 21 amostras apresentaram um perfil
indeterminado e duas amostras apresentaram um perfil positivo provável com tiras de fraca intensidade, 0.5+.
Sensibilidade
A sensibilidade foi estudada em 492 amostras de portadores crónicos de Hepatite, 488 foram positivos com
DECISCAN ® HCV PLUS e 4 indeterminados. Entre os 4 indeterminados, 2 apresentavam igualmente um perfil
indeterminado e os outros 2 eram positivos, segundo uma técnica concorrente.
21 seroconversões foram testadas e comparadas a uma técnica concorrente. Os resultados são os seguintes : em
7 seroconversões, as mesmas amostras foram comprovadas como positivas com DECISCAN ® HCV PLUS e com
a técnica concorrente. Em 5 seroconversões, DECISCAN ® HCV PLUS tem uma amostra em atraso e duas
amostras numa seroconversão. Em 6 seroconversões, DECISCAN ® HCV PLUS tem uma amostra em avanço e 2
amostras em 2 seroconversões, comparativamente com a técnica concorrente.
Um total de 365 amostras positivas em anticorpos anti-HCV foram estudadas, representando os genotipos 1 a 5,
dos quais 57 de genotipo 1-a, 136 de genotipo 1-b, 24 2-a, 15 de genotipo 3-a, 23 de genotipo 4-a, 5 de
genotipo 4-não a, e 3 de genotipo 5. Todas estas amostras apresentaram um perfil positivo, à excepção de 3
amostras do genotipo 4-a, que apresentaram um perfil indeterminado.
Reacções cruzadas
Foram testadas 91 amostras provenientes de doentes com outras patologias, tais como : EBV, HSV, VZV, HAV,
HBV, Toxoplasmose, Rubéola, papeira, HTLV, Factor Reumatóide, ANA, bem como doentes apresentando
mielomas e mulheres grávidas.
1 amostra proveniente de um doente com mieloma apresentou um perfil positivo provável com DECISCAN ® HCV
PLUS e um perfil indeterminado com um teste concorrente.
1 amostra proveniente de um doente VZV positivo apresentou um perfil indeterminado com DECISCAN ® HCV
PLUS e um perfil negativo com um teste concorrente.
Reprodutibilidade
A reprodutibilidade foi estudada em 7 amostras, 1 negativa, 1 fracamente positiva, 2 positivas e 3 indeterminadas,
testadas 5 vezes na mesma série e em 5 dias diferentes.
A análise dos perfis mostra uma excelente reprodutibilidade com intensidades relativas idênticas.
12 - LIMITES DO TESTE
Este teste não constitui um teste de confirmação de uma infecção pelo vírus da hepatite C. Trata-se de um teste
suplementar que permite caracterizar anticorpos dirigidos contra diferentes regiões virais.
Podem observar-se fracas reacções nas diferentes proteínas de Deciscan na ausência de uma reacção positiva
de despistagem, pela técnica ELISA. Tais perfis devem ser comprovados por dados clínicos e por um
acompanhamento serológico no tempo, em uma ou mais colheitas posteriores e, eventualmente, por meio de uma
análise do ARN viral circulante.
13 - REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Ver a versão francesa
52

DECISCAN ® HCV PLUS
24 tests 72310
IMMUNOBLOT-TEST FÖR DETEKTION AV HCV-ANTIKROPPAR
I HUMANT SERUM ELLER PLASMA
IVD
Tillverkarens kvalitetskontroll
Alla reagens tillverkas och marknadsförs i enlighet med ett fullständigt kvalitetssystem, från
mottagandet av råmaterial till slutlig marknadsföring av produkt.
Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det
överensstämmer med acceptanskriterierna.
Handlingar som hör samman med produktion och kontroll av varje enskilt parti sparas inom
företaget.

54
1 - KLINISK BETYDELSE
2 - TESTPRINCIP
3 - INNEHÅLL
INNEHÅLLSFÖRTECKNING
4 - NÖDVÄNDIG MEN EJ BIFOGAD MATERIAL
5 - HÄLSO- OCH SÄKERHETSANVISNINGAR
6 - FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
7 - PROVER
8 - REKONSTITUERING AV REAGENS - VALIDITET - FÖRVARING
9 - TESTFÖRFARANDE
10 - AVLÄSNING OCH UTVÄRDERING AV RESULTAT
11 - TESTRESULTAT
12 - TESTETS BEGRÄNSNINGAR
13 - REFERENSER

1 - KLINISK BETYDELSE
DECISCAN ® HCV PLUS är ett membrantest, som använder en immunoenzymatisk teknik för identifiering av
antikroppar associerade med infektion orsakad av hepatit C-virus i humant serum eller plasma.
Karakteriseringen av dessa antikroppar är ett mycket viktigt kompletterande steg för att bättre kunna förstå HCVserologi
genom att möjliggöra uppföljning av utvecklingen av antikroppar i serum.
2 - TESTPRINCIP
DECISCAN ® HCV PLUS använder som fast support ett membran, fäst på en plastremsa,med följande sekventiella
coatningsschema :
1) Anti-human IgG-kontroll
Denna kontroll möjliggör följande samtidigt :
validering av provtillsats,
kontroll av reagens (konjugat, substrat),
avläsning av resultat enligt kontrollsignalens intensitet.
2) Fusionsprotein : GST
Gener som kodar för NS3- och NS4-protein fuserat med glutation S-transferasgen.
GST-proteinkontroll för förekomst av GST-antikroppar som kan inducera falsk positiv reaktion.
3) HCV-antigen
• Rekombinanta protein producerade av E.coli, från valda kloner
i det icke-strukturella området : NS3 och NS4
• Peptider valda för sin höga immunogenicitet :
i det strukturella området : C1 och C2
i det icke-strukturella området : NS4
Anti
human
IgG
kontrol
GST
fusions
protein
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
Testförfarandet omfattar följande steg :
1) Det serum som ska testas inkuberas med remsan. Om HCV-antikroppar finns binds de till antigen, fixerade till
den fasta fasen.
2) Antihuman-IgG antikroppar märkta med alkalisk fosfatas, tillsatta efter tvätt, binds till de specifika antikroppar
som bundit till den fasta fasen.
3) Obundet enzymkonjugat tas bort genom tvätt, och antigen-/antikroppkomplex påvisas genom tillsats av
substrat.
4) Efter att reaktionen stoppats avläses de färgade banden och resultaten tolkas.
55

3 - INNEHÅLL
Alla reagens som ingår i testet är enbart avsedda för in vitro-diagnostiskt bruk.
MÄRKNING REAGENS INNEHÅLL
R1 REMSOR COATADE med rekombinant HCV Ag och HCV-peptider från kapsid,
regionerna NS3 & NS4.
24 remsor
R2 KONCENTRERAD TVÄTT-/SPÄDNINGSLÖSNING (5 x) 1 flaska
100 mL
R3 NEGATIVT KONTROLLSERUM 1 flaska
Humant serum utan HCV-antikroppar, negativt för HBsAg-,
anti-HIV1- och HIV2- antikroppar.
Konserveringsmedel :

• Betrakta material i direkt kontakt med prover och reagens av humant ursprung som kontaminerat och därmed
smittfarligt material.
• Undvik stänk från prover och lösningar som innehåller provvätska.
• Spill måste sköljas med blekmedel som spätts till 10 %. Om den smittfarliga lösningen är en syra måste spill
först neutraliseras med natriumbikarbonat och därefter rengöras med blekmedel och torkas upp med
absorberande papper. Materialet som används för rengöring ska kastas i en särskild behållare för smittfarligt
avfall.
• Prover, reagens av humant ursprung, liksom smittfarligt material och smittfarliga produkter ska omhändertas
efter sanering enligt följande :
- antingen sänkas ned i blekmedel vid en slutkoncentration på 5 % natriumhypoklorit (1 del blekmedel till
10 delar smittfarlig vätska) i 30 minuter
- eller autoklaveras vid 121°C i minst 2 timmar.
VARNING ! Ställ ej lösningar innehållande natriumhypoklorit i autoklaven.
• Vissa reagens innehåller natriumazid som konserveringsmedel. Natriumazid kan reagera med rörledningar och
bilda explosiva koppar- eller blyazider. För att undvika azidbildning ska ledningarna spolas med rikligt med
vatten om lösningar slås ut i avloppet efter inaktivering.
6 - FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
Resultatens kvalitet är beroende av att följande krav på god laboratoriesed uppfylls :
• Använd ej reagens efter passerat bäst före-datum.
• Blanda eller kombinera ej reagens från kit med olika partinummer under samma procedur.
• Innan reagenserna används ska de stabiliseras i rumstemperatur i 30 minuter.
• Rekonstituera noggrant reagenserna och undvik kontaminering.
• Utför ej testet i närvaro av reaktiva ångor (syraångor, alkaliska ångor, aldehydångor) eller damm som skulle
kunna ändra konjugatets enzymatiska aktivitet.
• Använd glasvaror som har tvättats grundligt och sköljts i destillerat vatten eller använd helst engångsmaterial.
• Använd en ny pipettspets för varje serum.
• Tvätt av remsor är ett viktigt steg : följ det rekommenderade antalet tvättcykler och kontrollera att racken först
är helt fyllda och därefter helt tömda. Otillräcklig tvätt kan leda till felaktiga resultat.
• Använd aldrig samma behållare eller pipett för fördelning av olika reagens.
7 - PROVER
Ta blodprov enligt sedvanligt förfarande. Serum eller plasma kan användas för testet. Om serum används:
extrahera så fort som möjligt för att undvika hemolys. Hemolys kan förändra testresultatet. Prover som innehåller
aggregat måste klaras genom centrifugering innan testet utförs. Partiklar eller suspenderade fibrinaggregat kan
ge falskt positiva resultat.
Proverna kan förvaras vid +2–8°C om screening utförs inom 7 dagar eller förvaras frysta vid –20°C.
Undvik upprepad nedfrysning och upptining. Prover som har fryst/tinats fler än 3 gånger ska inte användas.
Om proverna ska transporteras bör de förpackas i enlighet med föreskrifter om transport av etiologiska agens.
ANVÄND EJ KONTAMINERADE, HYPERLIPEMISKA ELLER HEMOLYSERADE PROVER.
Obs! Ingen påverkan på resultat har uppmärksammats på prover innehållande upp till 90 g/l albumin, 100 mg/l
bilirubin, lipemiska prover innehållande upp till 36 g/l triolein eller hemolyserade prover innehållande upp till
10 g/l hemoglobin.
8 - REKONSTITUERING AV REAGENS - VALIDITET, FÖRVARING
OBS ! Låt alla reagens uppnå rumstemperatur (18–30°C) före användning.
Koncentrerad tvätt-/spädningslösning (5x)
Späd tvättlösningen 1:5 med destillerat vatten och blanda väl.
20 mL behövs per remsa.
Den rekonstituerade tvättlösningen håller i en månad om den förvaras vid +2- 8°C.
Övriga reagens är, om de förvaras vid +2–8°C hållbara till det sista förbrukningsdatum som finns angivet på
etiketten.
Blanda spädningsvätska, konjugat och framkallningslösning genom att vända flaskorna före användning.
9 - TESTFÖRFARANDE
Inledande kommentarer
• Följ noggrant angivet förfarande.
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• Inkludera den positiva resp negativa kontroll som ingår i kitet i alla analyser som utförs under samma dag och
när ett nytt partinummer används.
• Anteckna numren på remsorna så att de motsvarar patient-ID eller positiva och negativa kontroller.
• Bered tvättlösningen (del 8).
• Ta ut det antal remsor som behövs ur förpackningen. Fatta dem i plastdelen för att undvika direkt kontakt med
membranet. Placera dem i racken med membranet uppåt.
Protokoll
1) Fördela 3 mL prov-spädningsvätska i varje fack.
Låt remsorna rehydrera i 5 minuter i rumstemperatur under skakning.
2) Tillsätt 10 µL av prov eller kontroll till separata fack och skölj pipettspetsen 3 gånger i den fördelade vätskan.
3) Inkubera i 2 timmar under skakning i rumstemperatur.
4) Sug upp innehållet i varje fack med hjälp av en vakuumpump utrustad med en behållare fylld med blekmedel.
Skölj pipetten noga mellan uppdragningarna.
Tillsätt 3 mL tvättlösning per fack och skaka i 2 minuter.
5) Upprepa steg 4 två gånger så att det blir totalt 3 tvättar och ta sedan bort den sista tvättlösningen.
6) Tillsätt 3 mL konjugat till varje fack.
Inkubera i 30 minuter under skakning i rumstemperatur.
7) Sug upp vätskan i varje fack.
Tvätta varje remsa 3 gånger enligt steg 4 och ta bort den sista tvättlösningen.
8) Tillsätt 3 mL framkallningslösning till varje fack.
Inkubera i 6 minuter under skakning i rumstemperatur.
9) Sug upp vätskan i varje fack.
10) Tillsätt 3 mL stopplösning till varje fack.
Inkubera i 5 minuter under skakning i rumstemperatur.
11) Sug upp vätskan i varje fack och skölj remsorna 3 gånger med destillerat vatten.
12) Ta bort remsorna från facken och torka noga mellan två absorberande pappersark. Håll remsorna borta från
ljus för att undvika framträdande bakgrund.
10 - AVLÄSNING OCH UTVÄRDERING AV RESULTAT
1) AVLÄSNING AV RESULTAT
Position och identifiering av kontrollband och HCV-antigenband på varje remsa motsvarar diagrammet nedan.
Position av antigen på remsorna valideras med hjälp av positivt kontrollserum.
Antihuman IgG-kontroll är placerad på remsans yttersta del (längst ifrån plastdelen) och GST - C1 - C2 - NS3 -
NS4 är coatade efter varandra in mot plast-supporten.
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Anti
human
IgG
kontrol
GST
fusions
protein
Avläsning måste utföras på torra remsor.
Remsorna är torra när bakgrunden är vit.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 plast-supporten
Avläsning
Signalintensiteten hos varje antigenband bestäms genom att jämföra med signalintensiteten hos antihuman-IgGkontrollbandet
på varje remsa.
Bandintensitet Markering
Signalintensitet som är större än anti-IgG- kontrollsignal 3 +
Signalintensitet som är lika med anti-IgG-kontrollsignal 2 +
Signalintensitet som är mindre än anti-IgG-kontrollband men större än en spårsignal 1 +
Svag signal som framträder endast som ett spår 0,5 +
Ingen signal 0

Validering
Kontrollbandet måste vara klart synligt för blotta ögat för validering av provtillsats, konjugattillsats och
framkallningssteg.
Ingen utvärdering kan göras om kontrollbandet inte validerats.
Negativt kontrollserum : Endast anti-IgG-kontrollbandet är synligt, inga signaler observerade på övriga band.
Positivt kontrollserum : Anti-IgG-kontrollbandet och de 4 HCV-antigen-banden är klart synliga. Ingen signal
observerad på GST-bandet (fusionsprotein)
2) UTVÄRDERING AV RESULTAT
AVLÄSNING TOLKNING
Inget HCV- antigen-band synligt NEGATIVT
1 HCV-antigen-band synligt
eller
enbart 2 kapsidband (C1, C2)
OBESTÄMBART*
2 HCV-antigen-band från 2 olika genprodukter
(kapsidgen, NS3-gen, NS4-gen)
med en intensitet lika med 0,5+
FÖRMODAT POSITIVT*
Minst 2 HCV-antigen-band från 2 olika
genprodukter (kapsidgen, NS3-gen, NS4-gen)
med en intensitet större än 0,5+
POSITIVT
OBS ! Om GST-bandet är synligt kan endast HCV C1- och C2-antigen-band tolkas (syntetiska peptider)
(*) Med dagens kunskap om HCV-serologi rekommenderas att ytterligare ett blodprov tas vid ett senare tillfälle.
Exempel på utvärdering av resultat
C1 C2 NS3 NS4 TOLKNING
A 1+ 2+ 0 0 Obestämbart
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Förmodat positivt
C 0 0 0 0 Negativt
D 0 2+ 1+ 0,5+ Positivt
E 0 0 0,5+ 0 Obestämbart
F 0 0,5+ 1+ 0 Förmodat positivt
G 0 0 1+ 1+ Positivt
11 - TESTRESULTAT
Specificitet
Totalt 474 blodgivare som befunnits negativa med ett EIA-screeningtest användes för att testa specificiteten hos
DECISCAN ® HCV PLUS. Inget prov befanns vara positivt, 22 prover visade en obestämbar profil.
Totalt 240 kliniska prover som befunnits negativa med ett EIA-screeningtest användes också för att testa
specificiteten hos DECISCAN ® HCV PLUS. Inget prov befanns vara positivt, 21 prover visade en obestämbar profil
och 2 prover visade en förmodat positiv profil med låg bandintensitet 0,5+.
Känslighet
Känslighetsstudier har utförts på 492 positiva prover från patienter med kronisk HCV-infektion. 488 prover
befanns vara positiva med DECISCAN ® HCV PLUS, 4 prover visade en obestämbar profil. Bland de 4
obestämbara proverna visade 2 även en obestämbar profil med ett konkurrerande test och de 2 övriga proverna
befanns vara positiva.
21 serokonversionspaneler studerades och jämfördes med ett konkurrerande test. Följande resultat framkom : för
7 serokonversioner var samma prover positiva med DECISCAN ® HCV PLUS och det konkurrerande testet, för
5 serokonversioner låg DECISCAN ® HCV PLUS ett prov efter och för 1 serokonversion två prover efter, för
6 serokonversioner låg DECISCAN ® HCV PLUS ett prov före och för 2 serokonversioner två prover före jämfört
med det konkurrerande testet.
Totalt 365 positiva prover för antikropp-anti-HCV undersöktes, med genotyp 1 till 5, omfattande 57 av genotyp
1-a, 136 av genotyp 1-b, 24 av genotyp 2-a, 15 av genotyp 3-a, 23 av genotyp 4-a, 5 av genotyp 4-non a och
3 av genotyp 5. Alla proverna visade en positiv profil förutom 3 prover av genotyp 4-a som visade en obestämbar
profil.
59

Korsreaktivitet
91 prover från patienter som uppvisar olika patologier såsom EBV, HSV, VZV, HAV, HBV, toxoplasmos, rubella,
påssjuka, HTLV, reumafaktor och ANA, och även patienter med myelom samt gravida kvinnor har undersökts.
Ett prov från patient med myelom visade förmodad positiv profil med DECISCAN ® HCV PLUS och obestämbar
profil med ett konkurrerande test.
Ett prov från positivt VZV-prov visade obestämbar profil med DECISCAN ® HCV PLUS och negativ profil med ett
konkurrerande test.
Precision
Studier mellan test och inom test har utförts på 7 prover: ett negativt, ett lågt positivt, 2 positiva och 3
obestämbara,har testats 5 gånger i samma parti och under 5 dagar.
Resultaten visar utmärkt reproducerbarhet med identiska relativa intensiteter.
12 - TESTETS BEGRÄNSNINGAR
Detta test utgör inget konfirmationstest för infektion med hepatit C-virus. Det är ett kompletterande test som
möjliggör karakterisering av antikroppar riktade mot olika regioner av viruset.
Svaga reaktioner på olika proteiner kan observeras med Desciscan vid avsaknad av en positiv screeningreaktion
med ELISA-test. Sådana profiler ska anges med kliniska data och med en serologisk uppföljning efteråt, baserat
på en eller flera senare provtagningar samt möjligen en sökning efter cirkulerande viral ARN.
13 - REFERENSER
Se fransk version.
60

DECISCAN ® HCV PLUS
24 test 72310
IMMUNOBLOTKIT TIL BESTEMMELSE AF HCV-ANTISTOFFER
I HUMANT SERUM ELLER PLASMA
IVD
Producentens kvalitetskontrol
Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem lige fra
modtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet.
Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun til markedet, hvis det opfylder de fastsatte
godkendelseskriterier.
Dokumentationen i forbindelse med produktion og kontrol af hvert parti opbevares i virksomheden.

62
1 - KLINISK INTERESSE
2 - ANALYSEPRINCIP
3 - INDHOLDET AF KITTET
INDHOLDSFORTEGNELSE
4 - NØDVENDIGT MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER
5 - SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER
6 - FORHOLDSREGLER
7 - PRØVER
8 - REAGENSOPLØSNING - HOLDBARHED - OPBEVARING
9 - ANALYSEPROCEDURE
10 - AFLÆSNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER
11 - YDEEVNE
12 - TESTENS BEGRÆNSNINGER
13 - REFERENCER

1 - KLINISK INTERESSE
DECISCAN ® HCV PLUS er en membrantest, der bruger en immunenzymatisk teknik til identifikation af antistoffer,
der er forbundet med infektion, der er forårsaget af hepatitis C-virus i humant serum eller plasma.
Karakteriseringen af disse antistoffer er et essentielt supplerende trin til en bedre forståelse af HCV-serologi, som
muliggør opfølgning på udviklingen af serumantistoffer.
2 - ANALYSEPRINCIP
DECISCAN ® HCV PLUS bruger som fast underlag en membran, der er fastgjort på en plastikstrimmel, og er belagt
med følgende i nævnte rækkefølge :
1) Anti-human IgG-kontrol
Denne kontrol muliggør på samme tid :
Validering af prøvefordelingen,
kontrol af reagenserne (konjugat, substrat) og
aflæsning af resultaterne i forhold til kontrolsignalets intensitet.
2) Fusionsprotein : GST
Generne for NS3- og NS4-proteiner fusioneret med Glutathion S-transferasegenet.
Fusionsproteinet GST-NS-protein bruges til kontrol af forekomst af GST-antistoffer, som kan fremkalde falske
positive reaktioner.
3) HCV-antigener
• Rekombinante proteiner, der er dannet af E.coli fra kloner, der er udvalgt
i det ikke-strukturelle område : NS3 og NS4
• Peptider, der er udvalgt efter deres høje immunogenesitet :
i det strukturelle område : C1 og C2
i det ikke-strukturelle område : NS4
Anti
human
IgG
kontrol
GST
fusions
protein
C1 C2 NS3 NS4
DECISCAN ® HCV PLUS
Analyseproceduren omfatter følgende trin i reaktionsforløbet :
1) Det serum, der skal testes, inkuberes med strimmelen. Eventuelle HCV-antistoffer binder sig til de antigener, den
faste fase er belagt med.
2) De alkaliske fosfatasemærkede anti-humane IgG-antistoffer, der er tilsat efter vask, binder sig til de specifikke
antistoffer, der er fæstnet til den faste fase.
3) Det ubundne enzymkonjugat fjernes ved vask og antigen/antistof-komplekset afsløres ved hjælp af tilsætning af
substrat.
4) Når reaktionen er stoppet, aflæses de farvede bånd, og resultaterne fortolkes.
3 - INDHOLDET AF KITTET
Alle reagenser er udelukkende til in vitro-diagnosticering.
ETIKET REAGENSER PRÆSENTATION
R1 STRIMMEL belagt med rekombinant HCV Ag- og HCV-peptider fra kapsid-, 24 strimler
NS3- & NS4-områder
R2 KONCENTRERET VASKEOPLØSNING/FORTYNDER (5 x) 1 flaske
100 ml
R3 NEGATIVT KONTROLSERUM Humant serum 1 flaske
uden HCV-antistoffer, negative for Ag HBs-, HIV1- og HIV2-antistoffer.
Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid
0,2 ml
R4 POSITIVT KONTROLSERUM Humant serum, 1 flaske
der er positivt for HCV-antistoffer, som er fotokemisk
inaktiverede.Negativt for Ag HBs-, HIV1- og HIV2-antistoffer,
Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid
0,2 ml
63

64
R5 PRØVEFORTYNDER 1 flaske
Tris/NaCl-buffer med mælk og fenolrød.
Konserveringsmiddel : 0,25 % kathon
90 ml
R6 KONJUGAT Anti-humane IgG-antistoffer 1 flaske
fra ged, der er mærket med alkalisk fosfatase.
Tris NaCl-buffer med grønt farvestof
Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid
90 ml
R8 FARVEUDVIKLINGSOPLØSNING BCIP/NBT 1 flaske
5-brom-4-klor-indolylfosfat (BCIP) og nitroblåt tetrazolium (NBT)
Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid
90 ml
R9 STOPOPLØSNING 50 mM citronsyre 1 flaske
Konserveringsmiddel : 0,01 % merthiolat 90 ml
STATIV MED 6 RUM 4
4 - NØDVENDIGT MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER
• Destilleret eller demineraliseret vand
• Natriumhypoklorit og natriumbikarbonat
• Sugende papir
• Engangshandsker
• Beskyttelsesbriller
• Automatisk eller halvautomatisk justerbare eller forudindstillede pipetter til fordeling af 10 µl
• Graduerede pipetter med kapacitet på 3 ml
• Graduerede cylinderglas med en kapacitet på 100 ml, 250 ml og 500 ml.
• Todimensionel, tredimensionel eller roterende rystebord (langsom omrystning).
• Beholder til farligt biologisk affald
• Vakuumpumpe med sikkerhedsflaske
• Automatiske ryste-inkubator-fordelingssystemer*
(*) Kontakt os, hvis detaljerede oplysninger om det udstyr, der anbefales af vores tekniske afdeling ønskes.
5 - SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER
Alle reagenser i kittet er beregnet til "in vitro"-diagnosticering.
• Brug engangshandsker, når kittets reagenser håndteres, og vask hænderne grundigt bagefter.
• Undgå at pipettere med munden.
• Det humane serum, der anvendes i den positive kontrol, er inaktiveret fotokemisk. Ingen kendt metode kan
imidlertid give fuld sikkerhed for, at der ikke forefindes HIV, HBV, HCV eller andre smitsomme stoffer. Betragt disse
reagenser og alle patientprøver som potentielt smitsomme, og træf de krævede forholdsregler, når de håndteres.
• Betragt alt materiale, der har været i direkte kontakt med prøvemateriale og reagenser af human oprindelige som
kontamineret, dvs. smitsomme materialer.
• Undgå at spilde prøvemateriale eller opløsninger, der indeholder prøvemateriale.
• Hvis materiale spildes, renses efter med natriumhypoklorit i en opløsning på 10 %. Hvis den kontaminerende
væske er en syre, skal de flader, der har været i kontakt med det spildte materiale, først neutraliseres med
natriumbikarbonat, derefter skylles med natriumhypoklorit og tørres med sugende papir. Det materiale, der
anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i en særlig beholder til kontamineret affald.
• Prøver, reagenser af human oprindelse og kontamineret materiale og produkter skal kasseres efter desinficeringen:
- enten ved nedsænkning i natriumhypoklorit med en slutkoncentration på 10 % natriumhypoklorit (1 del
natriumhypoklorit til 10 dele kontamineret væske eller vand) i 30 minutter
- eller ved autoklavering ved 121°C i mindst 2 timer.
ADVARSEL : Placer ikke opløsninger, der indeholder natriumhypoklorit, i autoklaven.
• Nogle reagenser indeholder natriumazid som konserveringsmiddel. Natriumazid kan reagere med laboratoriets
rørføring og dermed danne kobber- og blyazider. Disse azider er eksplosive. Undgå dannelse af azider ved at
skylle rørene med store mængder vand, hvis opløsninger med azid hældes i afløbet efter inaktivering.
6 - FORHOLDSREGLER
Kvaliteten af resultaterne afhænger af følgende regler for god laboratoriepraksis :
• Undgå at anvende forældede reagenser.

• Undgå at blande eller kombinere reagenser fra kit med forskellige partinumre i den samme procedure.
• Vent 30 minutter, før reagenserne tages i brug, så de kan stabilisere sig ved stuetemperatur.
• Rekonstituer reagenserne forsigtigt for at undgå kontamination.
• Undgå at udføre testen i nærheden af reaktive dampe (syrer, baser aldehyder) eller støv, der kan påvirke
konjugatets enzymaktivitet.
• Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og skyllet med
destilleret vand.
• Brug en ny pipettespids for hvert serum.
• Vask af strimmelen er et afgørende trin : Udfør det anbefalede antal vaske, og sørg for, at rummene bliver helt
fyldte, før de tømmes. Dårlig vask kan medføre forkerte resultater.
• Brug aldrig den samme beholder eller pipette til at fordele forskellige reagenser.
7 - PRØVER
Tag en blodprøve i overensstemmelse med gældende praksis. Der kan anvendes serum eller plasma til testen. Hvis
der anvendes serum : Adskil serumet så hurtigt som muligt for at undgå hæmolyse. Hæmolyse kan ændre testens
ydeevne betragteligt. Prøver med aggregater skal renses ved centrifugering forud for testen. Partikler eller opløste
fibrinaggregater kan føre til falske positive resultater.
Prøvematerialet kan opbevares ved 2 - 8°C, hvis screeningen udføres inden for syv dage, eller det kan dybfryses
ved -20°C.
Undgå gentagen nedfrysning og optøning. Prøver, der har været nedfrosset og optøet mere end tre gange, kan ikke
anvendes.
Hvis prøverne skal transporteres, skal de pakkes ned ifølge bestemmelserne for transport af etiologiske stoffer.
UNDGÅ AT ANVENDE KONTAMINEREDE, HYPERLIPÆMISKE ELLER HYPERHÆMOLYSEREDE PRØVER.
BEMÆRK ! Testresultaterne påvirkes ikke af prøver, der indeholder op til 90 g/l albumin, 100 mg/l bilirubin,
lipæmiske prøver, der indeholder mængder op til det, der svarer til 36 g/l triolein, og hæmolyserede prøver, der
indeholder op til 10 g/l hæmoglobin.
8 - REAGENSOPLØSNING - HOLDBARHED - OPBEVARING
Bemærk! Lad reagenserne få stuetemperatur (18 - 30°C), før de anvendes.
Koncentreret vaskeopløsning/fortynder (5 x)
Fortynd vaskeopløsningen i forholdet 1:5 i destilleret vand, og bland grundigt.
Der kræves 20 ml pr. strimmel.
Den rekonstituerede vaskeopløsning er holdbar i en måned, når den opbevares ved 2 - 8°C.
Alle andre reagenser er holdbare indtil udløbsdatoen på etiketten, hvis de opbevares ved 2 - 8°C.
Bland prøvefortynderen, konjugatet og udviklingsopløsningen ved at vende dem på hovedet før brug.
9 - ANALYSEPROCEDURE
Indledende bemærkninger
• Følg den angivne procedure nøje.
• Medtag den negative kontrol og den positive kontrol, der indgår i kittet, i alle analyser, der udføres i løbet af den
samme dag, og når et nyt partinummer tages i brug.
• Angiv numrene på strimlerne, så de svarer til patientidentifikationen eller de postive og negative kontroller.
• Forbered vaskeopløsningen (del 8).
• Udtag det nødvendige antal strimler fra kassetten. Tag fat om plastikrammen for at undgå direkte kontakt med
membranen. Placer dem i stativets rum med membranen opad.
Protokol
1) Fordel 3 ml prøvefortynder i hvert rum.
Lad strimlerne rehydrere i 5 minutter ved stuetemperatur, mens de omrystes.
2) Tilsæt 10 µl prøvemateriale eller kontrol til de enkelte rum, og skyl pipettespidsen tre gange i den fordelte
fortynder.
3) Inkuber i to timer ved stuetemperatur og under omrystning.
4) Sug hele indholdet op af hvert rum ved hjælp af en vakuumpumpe, der er udstyret med en vandlås, der er fyldt
med natriumhypoklorit. Skyl pipetten omhyggeligt mellem opsugningerne.
Tilsæt 3 ml vaskeopløsning pr. rum, og ryst i to minutter.
5) Gentag trin 4 to gange for tre afvaskninger i alt. Fjern derefter den sidste vaskeopløsning.
6) Tilsæt 3 ml konjugat til hvert rum.
Inkuber i 30 minutter ved stuetemperatur og under omrystning.
7) Sug væsken i hvert rum op.
65

Vask hver strimmel tre gange, sådan som det er angivet i trin 4, og fjern den sidste vaskeopløsning.
8) Tilsæt 3 ml farveudviklingsopløsning til hvert rum.
Inkuber i 6 minutter ved stuetemperatur og under omrystning.
9) Sug væsken i hvert rum op.
10) Tilsæt 3 ml stopopløsning til hvert rum.
Inkuber i 5 minutter ved stuetemperatur og under omrystning.
11) Sug væsken i hvert rum op, og skyl strimlerne tre gange med destilleret vand.
12) Fjern strimlerne fra hvert rum, og tør dem omhyggeligt mellem to stykker sugende papir. Hold strimlerne væk fra
lyset for at undgå dannelse af baggrund.
10 - AFLÆSNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER
1) AFLÆSNING AF RESULTATER
Placeringen og identifikationen af kontrolbånd og HCV-antigenbånd på hver strimmel svarer til diagrammet
nedenfor. Placeringen af antigener på strimmelen valideres ved hjælp af det positive kontrolserum.
Den anti-humane IgG-kontrol er placeret længest væk fra plastikhåndtaget, og der efter følger GST – C1 – C2 –
NS3 – NS4 i nævnte rækkefølge hen mod plastikhåndtaget.
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Anti
human
IgG
kontrol
GST
fusions
protein
Aflæsningen skal udføres på tørre strimler.
Strimlerne er tørre, når baggrunden er hvid.
DECISCAN ® HCV PLUS
C1 C2 NS3 NS4 plastikhåndtaget
Aflæsning
Signalintensiteten for hvert antigenbånd bestemmes ved at sammenligne med det anti-humane IgG-kontrolbånds
signalintensitet for hver strimmel.
Båndintensitet Mærke
Ethvert interval for signalintensiteten, som er større end anti-IgG- kontrollens signal 3 +
Enhver signalintensitet, der svarer til anti-IgG-kontrollens signal. 2 +
Ethvert interval for signalintensiteten, som er mindre end anti-IgG- 1 +
kontrolbåndet, men større end et sporsignal.
Svagt signalt, der kun vises som et let spor. 0,5 +
Intet signal 0
Validering
Kontrolbåndet skal være tydeligt for det blotte øje hos den, der validerer tilsætningen af prøvemateriale og konjugat
og udviklingens forløb.
Fortolkning er ikke mulig, hvis kontrolbåndet ikke kan valideres.
Negativt kontrolserum : Kun anti-IgG-kontrolbåndet er synligt. Der kan ikke observeres signaler på nogen bånd.
Positivt kontrolserum : Anti-IgG-kontrolbåndet og de fire HCV-antigenbånd er tydelige. Intet signal kan observeres
på GST-båndet (fusionsprotein).
2) FORTOLKNING AF RESULTATER
AFLÆSNING FORTOLKNING
Intet HCV-antigenbånd er synligt NEGATIV
1 HCV-antigenbånd er synligt UBESTEMMELIG*
eller
2 kapsidbånd, der står alene (C1, C2)
2 HCV-antigenbånd fra to forskellige genprodukter SANDSYNLIGVIS POSITIV*
(kapsidgen, NS3-gen, NS4-gen) med en intensitet,
der svarer til 0,5+
Mindst 2 HCV-antigenbånd fra 2 forskellige POSITIV
genprodukter (kapsidgen, NS3-gen, NS4-gen)
med en intensitet over 0,5+

BEMÆRK ! Hvis GST-båndet er synligt, kan kun HCV C1- og C2-antigenbåndene fortolkes (syntetiske peptider).
(*) Det anbefales ud fra den seneste viden om HCV-serologi, at der tages endnu en blodprøve på et senere
tidspunkt.
Eksempler på fortolkning af resultater
C1 C2 NS3 NS4 FORTOLKNING
A 1+ 2+ 0 0 Ubestemmelig
B 0 0,5+ 0,5+ 0 Sandsynligvis positiv
C 0 0 0 0 Negativ
D 0 2+ 1+ 0,5+ Positiv
E 0 0 0,5+ 0 Ubestemmelig
F 0 0,5+ 1+ 0 Sandsynligvis positiv
G 0 0 1+ 1+ Positiv
11 - SPECIFIKATIONER FOR YDEEVNE
Specificitet
I alt 474 bloddonorer, der blev fundet negative ved hjælp af en EIA-screeningsanalyse, blev brugt til at teste
specificiteten af DECISCAN ® HCV PLUS. Ingen prøve blev fundet positiv, men 22 prøver viste en ubestemmelig profil.
I alt 240 kliniske prøver, der blev fundet negative ved hjælp af en EIA-screeningsanalyse, blev også brugt til at teste
specificiteten af DECISCAN ® HCV PLUS. Ingen prøve blev fundet positiv, men 21 prøver viste en ubestemmelig
profil, og 2 prøver viste en sandsynligvis positiv profil med lav båndintensitet 0,5+.
Sensitivitet
Der blev udført sensitivitetsundersøgelser på 492 positive prøver fra kroniske HCV-inficerede patienter. 488 prøver
blev fundet positive med DECISCAN ® HCV PLUS, mens 4 prøver viste en ubestemmelig profil. Blandt disse 4
ubestemmelige prøver, viste 2 også en ubestemmelig profil, mens de 2 andre prøver blev fundet positive ved hjælp
af en konkurrerende analyse.
21 kommercielle serokonverteringspaneler blev undersøgt og sammenlignet med en konkurrerende analyse. Dette
gav følgende resultater: ved 7 af serokonverteringerne blev de samme prøver fundet positive med DECISCAN ® HCV
PLUS og den konkurrende analyse, ved 5 af serokonverteringerne er DECISCAN ® HCV PLUS senere med én prøve
og 2 prøver ved én serokonvertering, ved 6 serokonverteringer er DECISCAN ® HCV PLUS tidligere med én prøve
og tidligere med 2 prøver ved 2 serokonverteringer sammenlignet med den konkurrende analyse.
I alt blev 365 prøver, der var positive for anti-HCV-antistoffer, undersøgt, disse repræsenterede genotyperne 1 til 5,
herunder 57 af genotype 1-a, 136 af genotype 1-b, 24 af genotype 2-a, 15 af genotype 3-a, 23 af genotype 4a,
5 af genotype 4-non a og 3 af genotype 5. Alle disse prøver viste en positiv profil, på nær 3 prøver af genotype
4-a, som præsenterede en ubestemmelig profil.
Krydsreaktivitet
91 patientprøver viste forskellige patologier som f.eks. EBV, HSV, HSV, VZV, HAV, HBV, Toxoplasmosis, Rubella,
fåresyge, HTLV, rheumatoid faktor, ANA, og der blev også undersøgt prøver fra patienter, der led af myeloma, og
fra gravide kvinder.
En prøve fra en patient, der led af myeloma, viste en profil, der sandsynligvis var positiv, ved hjælp af DECISCAN ®
HCV PLUS, og en ubestemmelig profil ved hjælp af en konkurrerende analyse.
En prøve fra den positive VZF-prøve viste en ubestemmelig profil med DECISCAN ® HCV PLUS og en negativ profil
med en konkurrerende analyse.
Nøjagtighed
Nøjagtighed mellem analyseserier og i samme analyseserie blev udført på 7 prøver : 1 negativ, 1 lavt positiv,
2 positive og 3 ubestemmelige, som var blevet testet 5 gange inden for samme parti og over 5 dage.
Resultaterne viste en fremragende reproducerbarhed med identiske relative intensiteter.
12 - TESTENS BEGRÆNSNINGER
Denne test er ikke en test til bekræftelse af en infektion som følge af Hepatitis C-virus. Der er tale om en supplerende test,
der gør det muligt at karakterisere de antistoffer, der retter sig mod de forskellige områder af virusen.
Der kan observeres lave reaktioner for Desciscans forskellige proteiner, hvis der mangler en positiv
screeningsreaktion i forbindelse med ELISA-analysen. Sådanne profiler kan konstateres i kraft af kliniske data og
med tiden ved en serologisk opfølgning i form af en ny blodprøve en eller flere måneder senere og muligvis ved
søgning efter cirkulerende virale ARN.
13 - REFERENCER
Se den franske udgave.
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• CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices)
0
• Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic
in vitro)
• Marcodo CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro)
• EG Markierung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In vitro-Diagnostika)
• Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro)
• Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico
in vitro)
• CE-märkning (Europa direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter lör in vitro-diagnostik)
• CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik)
• For in vitro diagnostic use
• Pour diagnostic in vitro
• Para diagnóstico in vitro
• In vitro-Diagnostikum
• Per uso diagnostico in vitro
• Para uso em diagnóstico in vitro
• In vitro diagnostik
• In vitro diagnose
IVD REF
LOT
• Manufacturer
• Fabricant
• Fabricante
• Hersteller
• Produttore
• Fabricante
• Tillverkad av
• Fremstillet af
• Batch code
• Code du lot
• Código de lote
• Chargen-Bezeichnung
• Codice del lotto
• C6digo do Iote
• Batch nr.
• Batchkoden
• Storage temperature limitation
• Limites de températures de stockage
• Temperatura limite
• Lagerungstemperatur
• Limiti di temperatura di conservazione
• Limites de temperatura de armazenamento
• Temperaturbegränsning
• Temperaturbegrænsning
• Catalogue number
• Référence catalogue
• Número de catálogo
• Bestellnummer
• Numero di catalogo
• Número de catálogo
• Katalognummer
• Katalognummer
EC REP • Authorised Representative
• Représentant agréé
• Representante autorizado
• Bevollmächtigter
• Distributore autorizzato
• Representante Autorizado
• Auktoriserad representant
• Autoriseret repræsentant
i
• Expiry date YYYY/MM/DD
• Date de péremption AAAA/MM/JJ
• Estable hasta AAAA/MM/DD
• Vervvendbar bis JJJJ/MM/TT
• Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG
• Data de expiração AAAA/MM/DD
• Utgångsdatum År/Månad/Dag
• Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD
• Consult Instruction for use
• Consulter Ie mode d'emploi
• Consulte Ia instrucción para el uso
• Siehe Gebruchsanweisung
• Consultare Ie istruzioni per uso
• Consulte o folheto Informativo
• Se instruktionsanvisning vid användning
• Se instruktion før brug
0459
BIO-RAD
3, Bd Raymond Poincaré
92430 MARNES LA COQUETTE
Tél. : 33 (0) 1 47 95 60 00 11/2003
Fax.: 33 (0) 1 47 41 91 33 code : 883221