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Lunes 3 de diciembre de 2007 DIARIO OFICIAL (Segunda Sección) 99
Indices de reproducibilidad y repetibilidad.
Es del 96% aproximadamente.
Bibliografía.
Balandrano, C.S.; Anzaldo, F.G.; Peña F.G.P. y Betancourt M.X.: Tuberculosis. Manual de Procedimientos
de Laboratorio INDRE-SAGAR.
Escobar G. Publicación No. 18 del Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos;
Secretaría de Salud, Secretaría de Agricultura, Ganadería y Desarrollo Rural, Organización Panamericana de
la Salud. México, D.F., junio de 1996.
David, H.; Levy-Frebault, V. et Thorel, M.F.: Methodes de laboratoire pour mycobacteriologie clinique,
Comission de Laboratoires de Référence et d'Expertise de l'Institut Pasteur; Institut Pasteur, París, 1989.
Kantor, I.N.: Bacteriología de la Tuberculosis Humana y Animal. Centro Panamericano de Zoonosis.
Organización Panamericana de la Salud-Organización Mundial de la Salud, Monografía Científica y Técnica
No. II/Rev.1, Martínez, Argentina, 1988.
Prueba de Interferón-Gamma (IFN-γ).
1. Procedimientos y principios.
Esta prueba mide la inmunidad celular y se basa en la producción de Interferón-gamma (IFN-γ) como
respuesta a la estimulación in vitro con PPD bovino y aviar, de sangre completa de animales que han estado
en contacto con M. bovis. Estos animales presentan linfocitos T circulantes, sensibilizados específicamente
hacia antígenos de M. bovis, en las muestras de sangre y secretan IFN-γ el cual es medido mediante una
prueba de ELISA de captura utilizando un kit comercial.
1.1 Con una muestra de 1.5 ml de sangre heparinizada se depositan en placas de cultivo.
1.2 Un pozo se estimula con 100 μl de PPD bovino (20 μl/ml).
1.3 El segundo pozo con 100 μl de PPD aviar (20 μl/ml).
1.4 Un pozo se deja sin estimular.
1.5 Las placas se incuban durante 24 hrs, a 37°C con 5% de CO2, al final los plasmas se recolectan.
1.6 Se agregan 100 μl /pozo de los plasmas diluidos 1:2, en las placas sensibilizadas con el anticuerpo
anti-IFN-γ bovino incluidas en el kit y se incuba a temperatura ambiente por 60 min.
1.7 Se lavan las placas con amortiguador de lavado.
1.8 Se agregan 100 μl de conjugado y se incuban por 60 min., nuevamente se lavan y se adiciona 100 μl
de sustrato incubando por 30 min. más.
1.9 Se adicionan 50 μl de solución de paro.
1.10 La prueba se realiza e interpreta conforme a las disposiciones del fabricante.
1.11 Los resultados del diagnóstico se calculan considerando los promedios de DO 450 de las muestras
incubadas sin antígeno, o incubadas con PPD bovino y con PPD aviar, de cada animal.
1.12 Los resultados de los plasmas incubados con PPD bovino se comparan con el testigo de IFN-γ
negativo de la prueba y también con los resultados de las muestras estimuladas con PPD aviar.
2. Equipo.
2.1 Lector de ELISA.
2.2 Lavador de placas automatizado.
2.3 Juego de pipetas de diferentes volúmenes.
2.4 Puntas de diferentes volúmenes (amarillas y azules).
2.5 Pipeta multicanal de volumen variable.
2.6 Tubos para sangrado con heparina.