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Lunes 3 de diciembre de 2007 DIARIO OFICIAL (Segunda Sección) 101
aislamiento bacteriano y la identificación del organismo de Mycobacterium bovis es considerado como la
prueba diagnóstica definitiva. El aislamiento e identificación de M. bovis frecuentemente lleva semanas para
completarse, por lo tanto, es de gran beneficio tener un procedimiento que proporcione una identificación
rápida de M. bovis en tejidos fijados en formol en pocos días.
Este procedimiento ya ha sido desarrollado (referencia 1,2). Dicho procedimiento involucra el uso de la
técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para amplificar y detectar ácidos nucleicos en tejidos
fijados en formol y embebidos en parafina de casos que incluyen diferentes especies de Micobacterias.
El PCR es aplicado a muestras que presentan lesiones sugestivas y bacterias ácido resistentes cuando se
examinan microscópicamente. Esta prueba utiliza los primers lS6110 para identificar especies del complejo
Mycobacterium tuberculosis, 16S rRNA para identificar especies de Mycobacterium avium e IS900 para
identificar Mycobacterium aviun, subespecie paratuberculosis. Las muestras de los rumiantes son probadas
con los tres primers, mientras que las muestras de los no rumiantes son típicamente probadas sólo con los
primers IS6110 y 16S rRNA.
Adviértase que la descalcificación de los tejidos puede afectar adversamente a los ácidos nucleicos del
espécimen; las muestras no se debe descalcificar antes o después de embeber. También, es importante
considerar que el tejido fijado en formol por más de siete días puede no ser apropiado para PCR debido a la
potencial sobrefijación. Si el tejido debe ser mantenido por más de este tiempo se debe transferir el tejido
fijado a etanol al setenta por ciento para ayudar a soportar un tiempo de almacenamiento mas prolongado.
1. Palabras clave.
PCR, Micobacteria, TB, Embebido en parafina.
2. Materiales.
2.1 Equipo/instrumentos.
Ver apéndice 8.1 para el corte de tejido.
Ver apéndice 8.2 para la extracción de ADN.
Ver apéndice 8.3 para la amplificación por PCR.
Ver apéndice 8.4 para el gel de electroforesis.
2.2 Reactivos/suministros.
Ver apéndice 8.1 para el corte de tejido.
Ver apéndice 8.2 para la extracción de ADN.
Ver apéndice 8.3 para la amplificación por PCR.
Ver apéndice 8.4 para el gel de electroforesis.
3. Preparación para la prueba.
3.1 Aptitudes del personal y entrenamiento
3.1.1 El individuo debe tener conocimiento práctico sobre la operación de equipo de laboratorio
convencional y técnicas asépticas de trabajo.
3.1.2. El individuo debe de tener capacitación en las técnicas de PRC para ser competente en entender y
desarrollar exitosamente el procedimiento de la prueba de PCR.
3.2 Equipo/instrumentos.
Ver apéndice 8.1 para el corte de tejido.
Ver apéndice 8.2 para la extracción de ADN.
Ver apéndice 8.3 para la amplificación por PCR.
Ver apéndice 8.4 para el gel de electroforesis.
3.3 Reactivos/procedimientos de control.
Ver apéndice 8.1 para el corte de tejido.
Ver apéndice 8.2 para la extracción de ADN. }.
Ver apéndice 8.3 para la amplificación por PCR.
Ver apéndice 8.4 para el gel de electroforesis.