TP LIPIDOS
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Química Biológica I <strong>TP</strong> 3 LÍPIDOS<br />
OBJETIVOS:<br />
-Poner de manifiesto ciertas propiedades de lípidos.<br />
-Comprobar la presencia de los lípidos complejos en cerebro de vaca luego de extracción con<br />
diferentes solventes y posterior fraccionamiento de los extractos.<br />
FUNDAMENTOS:<br />
Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza antipática, es decir que<br />
contienen regiones hidrofóbicas y regiones hidrofílicas. La mayor parte de los lípidos<br />
abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), están formados por ácidos grasos de cadenas<br />
hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los lípidos llevan a cabo múltiples funciones<br />
en el organismo, como: almacenamiento de energía, de transporte, cumplir funciones<br />
hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confiriéndoles<br />
la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en<br />
determinada dirección, así como la conducción nerviosa y el transporte activo como la bomba<br />
de Na + /K + . A diferencia de los carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos, no forman<br />
polímeros, son mas bien moléculas pequeñas que presentan una fuerte tendencia a asociarse<br />
mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lípidos pueden ser usadas<br />
para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose<br />
productos coloreados, desprendimiento de vapores, formación de jabones, entre otros.<br />
El tejido adiposo está constituído principalmente por las grasas neutras, pero el cerebro<br />
contiene relativamente pocas, los constituyentes lipídicos de estos tejidos son los lípidos<br />
complejos como: fosfolípidos y colesterol.<br />
Basados en la solubilidad de los lípidos en solventes orgánicos, es posible extraer y purificar<br />
lípidos del cerebro por sucesivas extracciones con diferentes solventes y posterior<br />
fraccionamiento de los extractos para obtener fracciones ricas en: esteroles,<br />
glicerofosfolípidos y esfingolípidos. El esquema se basa en los siguientes hechos:<br />
• Los esteroles son solubles en acetona, al contrario de lo que sucede con otros lípidos<br />
complejos.<br />
• Algunos glicerofosfolípidos, como las lecitinas, la fosfatidiletanolamina y la<br />
fosfatidilserina, son solubles el éter e insolubles en acetona.<br />
1
• Los glucósidos de esfingosina se disuelven en alcohol caliente y son insolubles en<br />
acetona y éter.<br />
Los productos finales de este experimento son sustancias de una pureza relativa y serán<br />
identificados una vez efectuadas las extracciones.<br />
PARTE EXPERIMENTAL<br />
I - Extracción de lípidos<br />
Pesar 20 g de cerebro triturarlo en mortero y secarlo parcialmente en un vaso de precipitado.<br />
Agregar 50 ml de alcohol etílico, llevar a ebullición y mantenerlo por 3 minutos, luego filtrar<br />
por gasa. El filtrado se concentra en manta calefactora hasta unos 30 ml y se agregan luego 25<br />
ml de éter, agitar y separar en ampolla de decantación.<br />
Se obtienen dos fracciones:<br />
Fracción superior A : etérea, que tendrá disueltos lecitina, cefalina, grasas, colesterol y restos<br />
de esfingomielina y cerebrósidos.<br />
Fracción inferior B : alcohólica que tendrá disueltos esfingomielina y cerebrósidos.<br />
Fracción A: concentrar en baño María a mitad de volumen inicial y agregar 25 ml de acetona:<br />
se observará un precipitado que corresponde principalmente a fosfolípidos, quedando en<br />
solución el colesterol y las grasas. Separar por centrifugación obteniendo un sobrenadante C y<br />
un precipitado D.<br />
Sobrenadante C: separar en dos fracciones, en una reconocer grasas y en la otra extraer el<br />
colesterol con 10 ml de éter, separar en ampolla de decantación y reconocer el colesterol.<br />
Precipitado D: reconocer lecitina y cefalina como fosfolípidos.<br />
Fracción B: reconocer cerebrósidos.<br />
II - Reacciones de reconocimiento<br />
1 - Reconocimiento de grasas:<br />
Es una prueba para identificar ácidos grasos, por lo tanto, general para los lípidos que los<br />
contengan. Los jabones se define químicamente como, las sales metálicas de los ácidos grasos<br />
superiores.<br />
Prueba de saponificación<br />
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Se separan las grasas por saponificación, para esto se coloca 1 ml de la muestra, 1 ml de<br />
etanol y 0,5 ml de hidróxido de sodio al 40%. Calentar suavemente. Agregar unas gotas de<br />
ácido sulfúrico. La presencia de enturbiamiento indica liberación de ácidos grasos.<br />
2 - Reconocimiento de colesterol: reacción de Liebermann –Burchard.<br />
El colesterol reacciona con anhídrido acético y ácido sulfúrico concentrado. Se produce una<br />
pérdida de agua y una protonización del colesterol. Se constituyen en medio anhidro<br />
polímeros de hidrocarburos no saturados de intenso color verde azulado.<br />
Secar la muestra a baño María. Resuspender en 2 ml de cloroformo.<br />
En un tubo de ensayo mezclar 1 ml de anhídrido acético y 1 ml de cloroformo. Enfriar a 0°C<br />
en baño de hielo. Agregar al tubo los 2 ml de la muestra y colocar en hielo. Agregar por las<br />
paredes 1 gota de ácido sulfúrico cc. Enfriar y observar . Una coloración verde azulada indica<br />
la presencia de grupo esteroide, colesterol en nuestro caso.<br />
3 - Reconocimiento de cerebrósidos:<br />
Mediante la reacción de Molish para hidratos de carbono. ( Ver <strong>TP</strong> H de Carbono).<br />
4 - Reconocimiento de fosfolípidos: lecitina y cefalina mediante la determinación de la<br />
presencia de fósforo.<br />
La reacción se basa en que el fosfato inorgánico, en medio ácido, con el molibdato (reactivo<br />
1) da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el ácido ascórbico (reactivo 2)<br />
a azul de molibdeno, color azul verdoso. El reactivo 3 (arsenito/citrato) se combina con el<br />
exceso de molibdato impidiendo su reacción posterior con fosfatos liberados de ésteres<br />
lábiles, lo que se aprovecha cuando se quiere determinar fosfato inorgánico libre en presencia<br />
de, por ejemplo, fosfolípidos (que no es nuestro caso).<br />
Muestra soluble de ppdo D 1 ml<br />
Reactivo 1<br />
Mezclar y esperar 30 segundos.<br />
Reactivo 2<br />
Mezclar y esperar 30 segundos.<br />
Reactivo 3<br />
0,5 ml<br />
0,5 ml<br />
0,75 ml<br />
Mezclar. Luego de 10 minutos la presencia de color azul demuestra la presencia de fosfato<br />
unido a lecitina y cefalina en el tejido.<br />
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