osteocalcina en el fluido gingival crevicular de ... - Revista Sobrape

R. Periodontia - Dezembro 2009 - Volume 19 - Número 04
OSTEOCALCINA EN EL FLUIDO GINGIVAL CREVICULAR
DE PACIENTES CON PERIODONTITIS CRÓNICA
PROGRESIVA
Osteocalcin in Gingival Crevicular Fluid of Progressive Chronic Periodontitis Patients
Rodrigo Jorquera Cortés 1 , Jorge Gonzalez Quesada 2 , Samuel Gutierrez García 1 , Orlando Jorquera Cortés 3 , Sonia Rivera
Alvarez 1
RESUMEN
La Osteocalcina, es una pequeña proteína no colágena,
fijadora de calcio, muy abundante en los tejidos
mineralizados, es sintetizada por los osteoblastos y tiene
un importante rol en la regulación de la destrucción y
formación ósea, puede inhibir la síntesis de colágeno
promoviendo la reabsorción de hueso. Se ha relacionado
elevados niveles de osteocalcina con periodos de rápida
destrucción ósea como osteoporosis y en la reparación de
las fracturas y con activa destrucción ósea en la enfermedad
periodontal. El objetivo de este trabajo es determinar los
niveles de osteocalcina en el FGC de pacientes con
periodontitis crónica progresiva. Material y método: en
14 sitios activos y 14 sitios inactivos determinados de
acuerdo con el método de tolerancia se midió los niveles
de osteocalcina y se compararon entre si .Los niveles se
establecieron utilizando N- MID Osteocalcin ELISA, los resultados
se analizaron usando el programa Stata 7.0 y el
student-test para muestras no paramétricas. Resultados:
se determinó que los niveles de osteocalcina en los sitios
activos eran elevados y la diferencia con los sitios inactivos
era estadísticamente significativa ( p = 0,001) después del
tratamiento los niveles eran muy similares. Conclusiones:
los elevados niveles de osteocalcina en los sitios activos
permiten sugerir su utilización como predictor de
destrucción ósea alveolar.
PALABRAS-CLAVES: Osteocalcina, Biomarcadores,
Líquido del Surco Gingival. R Periodontia 2009; 19:89-93.
1 Universidad de Chile - Chile
2
Universidad de Costa Rica - Costa Rica
3
Universidad de Salvador Bahía - Brasil
Recebimento: 16/01/09 - Correção: 28/05/09 - Aceite: 27/11/09
INTRODUCCIÓN
La enfermedad periodontal es una enfermedad
infecciosa de etiología multibacteriana caracterizada
por la perdida de tejidos de soporte del diente
según Flemming 1999; Listgarten 1986; en la cual
factores asociados al hospedador, a la herencia y al
ambiente en general son igualmente importantes
como determinantes del desarrollo y severidad de la
enfermedad lo cual la sitúa entre las enfermedades
multifactoriales (PAGE et al. 1997).
Los parámetros clínicos tradicionales para el diagnóstico
de la enfermedad como el nivel de
inserción y la profundidad al sondaje si bien son fáciles
de realizar, efectivos, eficaces y no invasivos; son limitados
ya que sólo representan antecedentes históricos
del cuadro patológico al momento de efectuar
la evaluación (GOODSON 1992).
Por consiguiente, la investigación en el diagnóstico
de las enfermedades periodontales se ha dirigido
hacia métodos de identificación de riesgo que
puedan ser cuantificados objetivamente, éstos son
los biomarcadores de destrucción (EMBERY &
WADDINGTON 1994; BIOMARKERS DEFINITIONS
GROUP 2001; EBERSOLE 2003; TABA 2005). En el
fluido gingival crevicular es posible encontrar estos
indicadores de procesos biológicos y mediante téc-
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Tabla 1
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DE LOS 20 PACIENTES AL INICIO DEL ESTUDIO Y POST-TRATAMIENTO
Característica Inicial Rango Post- tratamiento Rango
Edad 52,4 ±5,9 44-65
Nivel de inserción clínico mm. 4,46±0,7 3,5-6,3 3,54±0,51 2,71-4,57
Profundidad de sondaje mm. 3,35±0,45 2,8-4,7 2,47±0,22 2,2-3,02
Índice de placa % 69,7±6,8 53-81,8 28,38±4,6 17-33
Índice de sangrado % 60,02±5,3 52-73,6 21,43±3,06 14,5-27,4
Porcentaje o promedio ± desviación estandar
nicas fáciles y no invasivas es posible medirlos (ZAMBON
1985; OZMERIC 2004); y asociarlos con procesos destructivos.
Uno de estos biomarcadores es la osteocalcina, también
denominada proteína Gla ósea, es una pequeña proteína
(5,4 kD) fijadora del calcio óseo. Es la proteína no colágena
más abundante en los tejidos mineralizados (LIAN &
GUNDBERG 1988). Es sintetizada principalmente por los
osteoblastos y tiene un importante rol en la regulación de la
formación y destrucción ósea. La osteocalcina exhibe
actividad quimiotáctica para las células progenitoras de
osteoclastos (GLOWACKI & LIAN 1987) y su síntesis in vitro
es estimulada por la vitamina D3 en concentraciones que
inhiben la síntesis del colágeno en los osteoblastos (PRICE &
BAUKOL 1980). La osteocalcina puede inhibir la síntesis de
colágeno en los osteoblastos promoviendo la reabsorción
de hueso. Se ha demostrado elevados niveles de osteocalcina
durante períodos de rápida pérdida ósea, tal como en la
osteoporosis, y en la reparación de fracturas óseas (BULLON
2007) .
Diversos estudios han investigado la relación entre los
niveles de osteocalcina en el FGC y la enfermedad periodontal
(GIANNOBILE et al. 1995; GIANNOBILE 1996) en un estudio
piloto realizado en animales se comprobó que la osteocalcina
se asocia con activa destrucción ósea, sugiriendo su
utilización como predictor de destrucción ósea alveolar. En
un estudio realizado en mujeres post-menopáusicas con
periodontitis se determinó los niveles de osteocalcina en
suero, saliva y FGC antes y después del tratamiento
periodontal, los autores concluyeron que bajos niveles de
osteocalcina en suero, saliva y FGC se asocia significativamente
con disminución de la profundidad al sondaje y
disminución de perdida de inserción clínica después de realizado
el tratamiento periodontal (YAMASURA et al. 1987) .
El presente estudio busca determinar si durante la
progresión de la periodontitis crónica los sitios que muestran
una progresiva perdida de inserción clínica presentan mayores
niveles de osteocalcina en el fluido gingival crevicular en
comparación con los sitios que no muestran evidencia clínica
de progresión y si estos niveles disminuyen después del
tratamiento periodontal (LAMSTER 1997; LEE et al. 1999) .
MATERIAL Y MÉTODO
En un grupo de 20 individuos mayores de 35 años,
con diagnóstico de periodontitis crónica severa, que no
presentaban enfermedades de base que pudieran afectar la
Tabla 2
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS DE LOS PACIENTES QUE MOSTRARON PROGRESIÓN ANTES Y DESPUÉS DEL TRATAMIENTO PERIODONTAL
Característica Antes del tratamiento Rango Después del tratamiento Rango P value
Edad 50,3±5,244-60
Nivel de inserción 4,7±0,8 4,3-6,26 3,5±0,6 3,9-5,4 0,001
clínico mm.
Profundidad al 3,7±0,5 3,5-4,71 2,6±0,24 2,4-2,9 0,001
sondaje mm.
Indice de placa % 68,8±9,1 53-78,5 23,2±3,9 19,7-26,8 0,001
Indice de sangrado % 58,6±5,6 52-66 21,1±2,9 18,4-23,7 0,005
Porcentaje o promedio ± desviación estandar.P value de las diferencias antes y después del tratamiento
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Tabla 3
CARATERÍSTICAS CLÍNICAS DE LOS SITIOS ACTIVOS E INACTIVOS ANTES Y DESPUÉS DEL TRATAMIENTO
Característica Sitio activo antes Sitio activo después Sitio inactivo antes Sitio inactivo después
Nivel de inserción 7,5±1,16 5,21±0,97 6,43±0,76 4,21±0,58
clínico mm.
Profundidad al 6,21±1,19 3,86±0,77 5,36±0,84 3,29±0,47
sondaje mm.
Sangrado % 71,4 28,5 85,7 42,7
Promedio± desviación estandar
Tabla 4
CONCENTRACIÓN DE OSTEOCALCINA EN EL FGC EN SITIOS ACTIVOS E INACTIVOS ANTES Y DESPUÉS DEL TRATAMIENTO
Marcador Sitio activo antes Sitio activo después Sitio inactivo antes Sitio inactivo después
Osteocalcina ng/ml 8,4±0,36 0,80±0,19 3,27±0,16 0,83±0,11
Promedio ± desviación estandar
progresión de la enfermedad, que no hubieran recibido terapia
anti-inflamatoria en los últimos 6 meses, ni
antibioterapia en los últimos 12 meses que aceptaron y
firmaron el consentimiento para participar en la experiencia,
se realizaron mediciones replicadas de la profundidad de las
bolsas periodontales y del nivel de inserción clínica y
mediciones dicotómicas de la presencia de placa microbiana
y sangrado al sondaje.
Se evaluó clínicamente durante dos meses para definir
progresión de la enfermedad periodontal de acuerdo con el
método de tolerancia (HAFFAJEE et al. 1983). Al cabo de
este lapso evidenciaron perdida de inserción siete pacientes
los que pasaron a constituir el grupo experimental. Se
consideró sitio activo aquel que durante este período exhibió
pérdida de inserción y sitio inactivo el que no presentó pérdida
de inserción. Se tomaron muestras de FGC en dos sitios
activos y en dos sitios inactivos en cada uno de los pacientes
que mostraron progresión y se les sometió a tratamiento
periodontal convencional. Luego de finalizado el tratamiento
se esperó 90 días y se volvió a tomar muestras de FGC. Los
sitios que no mostraron progresión fueron utilizados como
control.
La toma de muestra de FGC se realizó con tiras de papel
Periopaper® (ProFlow, Amityville, NY, USA) las tiras de papel
se introdujeron en el surco gingivodentario hasta obtener
una leve resistencia tisular, y se mantuvieron en el lugar durante
30 s., las tiras contaminadas con sangre o saliva fueron
descartadas.
Los niveles de osteocalcina se determinaron mediante
la técnica ELISA con kits específicos de acuerdo con la
instrucciones del fabricante y la concentración obtenida se
expresó en nanogramos/ mililitro (ng/ml).
Los datos obtenidos se analizaron utilizando el software
estadístico Stata® 7.0 Los parámetros clínicos profundidad
al sondaje y nivel de inserción y niveles de osteocalcina se
analizaron mediante t-test de Student para muestras no
paramétricas y U-test Mann-Whitney comparando los niveles
de marcadores de progresión de sitios activos con los de
sitios inactivos antes y después del tratamiento periodontal.
RESULTADOS
De todos los pacientes que participaron en este estudio
sus características clínicas se pueden observar en la Tabla 1.
Donde se aprecia las diferencias antes y después del
tratamiento periodontal.
Las características de los pacientes que mostraron
progresión antes y después del tratamiento se muestran en
la Tabla 2.
Las características clínicas de los sitios activos e inactivos
al inicio del estudio y después del tratamiento se pueden
apreciar en la Tabla 3.
En la Tabla 4 se explicitan las variaciones en los niveles
de osteocalcina que experimentaron los sitios activos e
inactivos antes y después del tratamiento periodontal.
En el Gráfico 1 se señala la concentración de osteocalcina
en el FGC en los sitios activos e inactivos antes y después del
tratamiento periodontal.
Al comparar los efectos del tratamiento periodontal convencional
sobre los niveles de osteocalcina se observan diferencias
estadísticamente significativas tanto en los sitios
activos, como en los sitios inactivos antes y después el
tratamiento, la disminución de los niveles de osteocalcina
concuerda con la disminución en los parámetros clínicos.
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enfermedad periodontal y disminución de los mismos una
vez realizado el tratamiento, son acordes con los resultados
del presente estudio en humanos.
Es conveniente estudiar simultáneamente la presencia
de varios biomarcadores para tener una mayor sensibilidad y
especificidad diagnóstica pues de acuerdo con algunos
estudios la oteocalcina por si sola no permite distinguir sitios
activos de inactivos (NAKASHIMA et al. 1996) situación que
a juicio nuestro debería tomarse en cuenta para futuras
investigaciones, no obstante lo que se persigue es un
biomarcador que tenga resultados fidedignos y pueda
aplicarse en la clínica masivamente.
Gráfico 1
DISCUSIÓN
En el presente estudio se muestra los efectos del
tratamiento periodontal sobre los niveles de un marcador
biológico presente en el FGC, la osteocalcina, y compara
sus niveles entre sitios que muestran periodontitis crónica
progresiva y sitios sin progresión de la enfermedad, la
concentración de osteocalcina fue significativamente mayor
en los sitios activos que en los sitios inactivos y sus niveles
disminuyeron una vez realizado el tratamiento lo que
concuerda con la disminución de los parámetros clínicos antes
y después del tratamiento. Existe una asociación entre los
niveles de osteocalcina en el FGC y los parámetros clínicos,
como se muestra en su estudio realizado en pacientes con
gingivitis y periodontitis en el cual no se apreció osteocalcina
en las muestras de pacientes con gingivitis, pero si se observó
en las muestras de periodontitis (KUNIMATSU et al. 1993).
Por lo tanto, se puede afirmar que la osteocalcina está presente
cuando hay procesos destructivos en los tejidos de
soporte lo que concuerda con nuestro estudio.
Después del tratamiento periodontal es posible observar
bajas concentraciones de osteocalcina en saliva, suero y
FGC, en un estudio realizado en pacientes con diagnóstico
de periodontitis crónica, según Bullon et al. 2007 una
situación similar se observó en el FGC de los pacientes con
periodontitis crónica progresiva de nuestra investigación.
En un modelo animal se demostró, que la osteocalcina
es un indicador de activa destrucción ósea y sugiere que la
presencia de este biomarcador puede servir como indicador
de destrucción de hueso alveolar (Giannobile et al. 1995).
Sus resultados en los que se observa elevados niveles de
osteocalcina en los sitios que presentan progresión de la
CONCLUSIONES
De acuerdo con este estudio los elevados niveles de
osteocalcina observados en los sitios activos permite sugerir
su utilización como marcador de destrucción ósea alveolar.
ABSTRACT
Osteocalcin is a small protein fixative of calcium, is the
most abundant non-collagen protein in mineralized tissues,
is synthesized primarily by osteoblasts and has an important
role in regulating bone formation and destruction. The
osteocalcin can inhibit the synthesis of collagen to promote
the resorption of bone. It has been shown high levels of
osteocalcin during periods of rapid bone loss as osteoporosis
and in the repair of fractures also has been associated with
active bone loss in periodontal disease. The Aim of this study
is to determine levels of Osteocalcin in gingival crevicular fluid
of progressive chronic periodontitis patients. Material and
method in 14 active sites and 14 sites inactive determine by
the tolerance method. Osteocalcin levels were measured
and compared with each other. The levels were determined
by N-MID Osteocalcin ELISA, the statistical data was analyzed
by Stata 7.0 using the student-test for unpaired samples.
Results: the levels of osteocalcin in active sites were
significantly higher than in the inactive sites and difference
was statistically significant (p = 0001) after periodontal
treatment, levels were very similar in both groups.
Conclusions: this finding suggest that Osteocalcin could
be a good marker for future attachment and alveolar bone
loss.
UNITERMS: Osteocalcin, Biomarkers, Gingival Crevicular
Fluid.
92

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Endereço para correspondência:
Prof. Dra. Sonia Rivera Álvarez
Profesora Asociada
Área Periodoncia – Facultad de Odontología – Universidad de Chile
Avda. Santa María 0596 – Providencia – Santiago – Chile
Teléfono (56-2) 232 5805
Fono – fax (56-2) 2332949
E-mail: soniarivera27@hotmail.com
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