GUÃA OBSERVACIÃN DE MICROORGANISMOS Y USO ... - Biblioteca
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Guía: Observación de Microorganismos y Uso de Tinciones<br />
ESCUELA <strong>DE</strong> SALUD<br />
GUÍA<br />
OBSERVACIÓN <strong>DE</strong><br />
<strong>MICROORGANISMOS</strong> Y <strong>USO</strong> <strong>DE</strong><br />
TINCIONES<br />
DIRIGIDO A ALUMNOS <strong>DE</strong>:<br />
Técnico de laboratorio Clínico y Banco de Sangre<br />
Técnico de Enfermería<br />
Técnico de Radiodiagnóstico y Radioterapia<br />
Informática Biomédica<br />
PRE-REQUISITO:<br />
No tiene<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
CODIGO: CEBMS110005
Guía: Observación de Microorganismos y Uso de Tinciones<br />
INTRODUCCIÓN<br />
Los microorganismos son demasiado pequeños para observarse a simple vista:<br />
Protozoos, algas, hongos, bacterias y virus.<br />
Estos microorganismos difieren en características tales como forma de<br />
nutrición, estructura, tamaño, composición, entre otros aspectos; es por ello<br />
que se emplea el estudio microscópico el que facilita notablemente la<br />
observación; principalmente de las bacterias al tratarlas con colorantes los<br />
cuales a la vez facilitan la observación de ciertas estructuras celulares.<br />
En este taller vamos a distinguir la estructura celular de algunos<br />
microorganismos, como por Ej.: Staphylococcus, Streptocococcus, bacilos etc.<br />
OBJETIVOS:<br />
Al finalizar el taller el alumno será capaz de:<br />
<br />
<br />
<br />
<br />
Observar al microscopio distintas tinciones<br />
Diferenciar las características generales de los microorganismos según<br />
su tinción.<br />
Trabajar en forma ordenada y limpia<br />
Trabajar con un lenguaje científico, de uso muy habitual.<br />
REALIZADO POR:<br />
Tecnólogo Médico, Bioquímico de laboratorio clínico, Medico laboratorista,<br />
Biólogo.<br />
DURACIÓN:<br />
90 minutos<br />
NUMERO <strong>DE</strong> ALUMNOS POR DOCENTE<br />
Máximo 20 alumnos<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
CODIGO: CEBMS110005
Guía: Observación de Microorganismos y Uso de Tinciones<br />
MARCO TEÓRICO<br />
El termino gram positivo y gram negativo son parte de un lenguaje común en<br />
salud y muchas veces solo se tendrá esta identificación de la bacteria antes de<br />
iniciar un tratamiento. Es también por esto habitual, que al tomar un cultivo de<br />
una muestra para su análisis microbiológico, se realice un extendido que se<br />
conoce como gram y está relacionado con estas técnicas que serán para<br />
algunos alumnos motivo de mayor estudio en sus ramos posteriores.<br />
Microorganismos Gram. Positivos<br />
Las eubacterias Gram. positivas son células con una gruesa pared celular de<br />
peptidoglicano.<br />
Estás células poseen una membrana citoplasmática con fosfolípidos y<br />
proteínas. Por fuera de la membrana citoplasmática se encuentra la pared<br />
celular que está compuesta por una ancha capa de peptidoglicano. A su vez,<br />
estas cadenas se encuentran unidas entre sí mediante péptidos, que son<br />
pequeñas cadenas de aminoácidos que se entrecruzan. Estos puentes<br />
peptídico son característicos de las distintas bacterias y presentan mayor<br />
rigidez cuanto más completo sea el entrecruzamiento.<br />
El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la célula, y<br />
evita que la célula estalle en medios hipotónicos. Al ser porosa permite el paso<br />
de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalíticas y<br />
productos de secreción hacia el exterior de la célula.<br />
Esquema de las Envolturas de una Eubacteria Gram. Positiva<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
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Microorganismos Gram Negativos<br />
Las eubacterias Gram. Negativas son células con una delgada capa de<br />
peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa.<br />
Las células se encuentran envueltas por una membrana citoplasmática<br />
formada por una bicapa fosfolipídica y proteínas. Por encima de esta<br />
membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida a<br />
unas lipoproteínas de anclaje que fijan la membrana externa.<br />
Esquema de las envolturas de una eubacteria Gram. Negativa<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
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Guía: Observación de Microorganismos y Uso de Tinciones<br />
Bacilos Ácido-Alcohol Resistentes<br />
Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium se<br />
caracterizan por tener una pared celular completamente diferente a las<br />
restantes eubacterias. La pared de las Mycobacterias posee un alto contenido<br />
de lípidos que la hace impermeable a los agentes hidrofílicos, por lo tanto estos<br />
microorganismos no se tiñen adecuadamente con los reactivos utilizados en la<br />
coloración de Gram. y no pueden ser clasificados como Gram positivos o<br />
negativos. Las Mycobacterias son teñidas adecuadamente por el método de<br />
Ziehl-Neelsen (Tinción Ácido-Rápida o Acid-Fast Stain) que utiliza como<br />
solución decolorante una mezcla de etanol y ácido clorhídrico. Estos<br />
microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloración ácidoalcohólica<br />
y por eso se denominan Bacilos Ácido Alcohol Resistentes<br />
(BAAR).<br />
Esquema de las envolturas de una eubacteria Ácido-Alcohol Resistente<br />
La observación microscópica puede realizarse a partir de una muestra (examen<br />
directo) o bien a partir de cultivos y según como se haga la preparación se<br />
pueden clasificar en:<br />
1.- Examen al Fresco. (Microorganismos vivos)<br />
Se utiliza normalmente para ver movilidad de las bacterias.<br />
En el caso de hongos y protozoos, permite determinar además características<br />
morfológicas.<br />
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2.- Frotis Fijado (microorganismos muertos) Este método permite observar con<br />
mayor precisión detalles morfológicos y de agrupación de los microorganismos.<br />
INSUMOS Y EQUIPOS NECESARIOS PARA EL TALLER<br />
Laboratorio de ciencias básicas (mecheros y lavamanos).<br />
Microscopios ópticos (mínimo 1 cada 2 alumnos)<br />
Xilol<br />
Aceite de inmersión<br />
Papel filtro<br />
Papel tisúes o papel suave<br />
Porta objetos (3 por alumno)<br />
Cubre Objetos (2 por alumno)<br />
Asas de punta (20 unidades)<br />
Pipetas pasteur estériles y taponadas (3 por alumno)<br />
Pinzas metálicas (una por alumno)<br />
Cultivos de microorganismos (Placas de Agar Sangre sembradas en<br />
Taller de “Realización de cultivos”)<br />
Set de tinción de Gram.<br />
Muestras Fijadas con BAAR. Positivos. ( solo para demostración)<br />
Jabón liquido.<br />
Clinic<br />
Cajas de bioseguridad<br />
Guantes (un par por alumno)<br />
<strong>DE</strong>SCRIPCIÓN <strong>DE</strong>L PROCEDIMIENTO<br />
Actividad 1:<br />
El docente realiza y explica los tres procedimientos.<br />
Actividad 2:<br />
Los alumnos los divide en grupo y hace repetir uno de los procedimientos<br />
Actividad 3:<br />
Los alumnos rotan observando cada actividad.<br />
Procedimiento examen al fresco:<br />
A.-realizar una preparación húmeda entre portaobjeto y cubre objeto<br />
Si es de una colonia (material sólido) se debe suspender en pequeñas gotas<br />
de suero fisiológico.<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
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Si es de un caldo de cultivo (material líquido) se deposita directamente una<br />
gota sobre el portaobjeto y se cubre con un portaobjeto.<br />
B.-se puede agregar una pequeña cantidad de colorante vital como: Azul de<br />
Metileno, que facilita la observación.<br />
Procedimiento Frotis fijado:<br />
A.- colocar una pequeña gota de agua en el centro del portaobjeto limpio.<br />
B.- flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña<br />
cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.<br />
C.- remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión<br />
homogénea que quede bastante extendida para facilitar el secado.<br />
D.-Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario<br />
realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota<br />
de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente<br />
sobre el portaobjetos.<br />
E.- Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación<br />
acercando el portaobjetos a la llama del mechero. En este caso hay que tener<br />
mucha precaución de no calentar demasiado el portaobjeto pues las células<br />
pueden deformarse o romperse.<br />
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Tinción de Gram:<br />
Tinción del frotis bacteriano<br />
1.- Cubrir la preparación con cristal violeta o violeta de genciana durante 1<br />
minuto.<br />
2.- Decantar el colorante y lavar suavemente con agua<br />
3.- Cubrir con Lugol por 1 minuto lavar suavemente con agua<br />
4.- Decolorar con alcohol-acetona.Hasta que la preparación deje de perder<br />
color (30 segundos).<br />
5.- Cubrir con fuccina o safranina por 30 segundos.<br />
6.- Remover suavemente el exceso con agua corriente.<br />
7.- Drenar el frotis y secarlo al aire en posición vertical o subvente con papel<br />
filtro.<br />
8.- Limpiar el reverso.<br />
9.- Examinar al microscopio<br />
BIBLIOGRAFÍA<br />
Procedimiento y técnicas de laboratorio, instituto de salud publica.<br />
Microbiología médica, José Ángel García-Rodríguez<br />
Enciclopedia Encarta 2004<br />
METODOLOGÍA <strong>DE</strong> EVALUACIÓN:<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
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El taller será evaluado mediante la realización de preguntas referente a lo<br />
observado y con tema revisado en clase anterior. Y de una pauta de<br />
evaluación<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
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1.- ¿Cuántos tipos de colonias observa en su muestra . Descríbalas.<br />
2.- Describa la morfología encontrada en cada una de ellas. EJ. Cocaceas,<br />
bacilos etc.<br />
3.- Que importancia le da usted al lavado de manos una vez que ha observado<br />
al microscopio.<br />
Nombre del alumno:<br />
Fecha:<br />
Puntaje:<br />
Nota:<br />
Observación de microorganismos y uso<br />
de tinciones<br />
1.Cumple con una correcta presentación<br />
personal:<br />
-delantal<br />
-pelo tomado<br />
-uñas cortas y limpias<br />
2. Describe las colonias<br />
3. Describe la morfología<br />
4. Fundamenta el lavado de manos<br />
5. Ordena y limpia su unidad al finalizar el taller<br />
C MC NC<br />
C: Competente<br />
MC: Medianamente Competente<br />
NC: No Competente<br />
Autores: TM Soledad Caimanque<br />
E.U. Eliana Escudero<br />
DuocUC<br />
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