Patrón - PIEL-L Latinoamericana

INMUNOFLUORESCENCIA
Importancia como
herramienta diagnóstica en
Dermatología
Expositor: Gabriel Fernando Matamoros B.
Tutoras:
Dra. Nieves González
Dra. Marian Ulrich

Inmunofluorescencia
OBJETIVOS
Conocer los principios y la técnica t
en los cuales
se basa esta prueba diagnóstica.
Reconocer la importancia de la
inmunofluorescencia como herramienta
diagnóstica en patologías as dermatológicas.
Interpretar de manera adecuada los
resultados de esta prueba.

CONCEPTO
Técnica diagnóstica basada en la
detección y localización de complejos
antígeno-anticuerpo depositados en tejido,
mediante el uso de un segundo anticuerpo
(anti-inmunoglobulina humana) conjugado
con fluorescencia.
Immunofluorescence in dermatology
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)

REVISANDO LA HISTORIA
Stokes denominó a lo
observado:“fluorescencia
fluorescencia”
En la mitad del siglo XIX,
Stokes observó que el
mineral Fluospar,
fluoresceía a cuando la luz
ultravioleta incidia
directamente sobre él.
Stanley JR. Pemphigus and pemphigoid as paradigms of
organ-specific, autoantibody-mediated diseases. J Clin Invest
1989;83:1443-8.

REVISANDO LA HISTORIA
En 1930 Haitinger desarrolló la
técnica de fluorescencia secundaria
empleando un fluorocromo.
En 1950 Coons y Kaplan utilizaron
los anticuerpos marcados con
fluoresceína para localizar
antígenos en los tejidos
(inmunofluorescencia)
Stanley JR. Pemphigus and pemphigoid as paradigms of
organ-specific, autoantibody-mediated diseases. J Clin Invest
1989;83:1443-8.

EN LA ACTUALIDAD
La inmunofluorescencia es usada para:
Serotipificación n e identificación n de virus.
Detección n de auto-anticuerpos y otros
componentes patológicos
in situ.
Identificación n de agentes infecciosos.
Cuantificación n de niveles de anticuerpos
Serologic Testing in Connective Tissue Diseases
Dana E. Habash-Bseiso, MD; Steven H. Yale, MD; Ingrid Glurich, PhD; and Jerry W. Goldberg,
MD.2004
Raza K, Breese M, Nightingale P, Kumar K, Potter T,
Carruthers DM, Situnayake D, Gordon C, Buckley CD,
Salmon M, Kitas GD. Predictive value of antibodies to
cyclic citrullinated peptide in patients with very early
inflammatory arthritis. J Rheumatol 2005;32:231-238.

CLASIFICACIÓN
Inmunofluorescencia Directa:
Aplicada fundamentalmente a la detección n de
inmunoglobulinas y factores del complemento
presentes en una muestra clínica.
Inmunofluorescencia Indirecta:
Aplicada a la detección n de anticuerpos específicos
en el suero del paciente frente a un determinado
antígeno mediante el uso de un segundo anticuerpo,
o a la detección n de un antígeno en una muestra
clínica.
Immunofluorescence in dermatology
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)

TÉCNICA DE IFD
Inmunofluorescencia
directa

TÉCNICA DE IFI
Inmunofluorescencia
Indirecta (IFI)

INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA
+ anti-IgG humana
(de conejo por
ejm.) conjugado
con fluoresceína
Suero del paciente (IgG)
Antígeno tisular

INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA
Microscopio
de luz UV

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
EN ENFERMEDADES CUTÁNEAS

TÉCNICA PARA BIOPSIA DE PIEL EN AMPOLLAS
(INCLUIR PIEL PERILESIONAL)

ALGORITMO
Localización de la IF. (epitelio, membrana basal, vascular)
Inmunoreactante Dominante (IgA, IgG, IgM, C3, fibrinógeno)
Patrón n (Granular, lineal contínuo, nuo, intercelular)
(J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)
Immunofluorescence in dermatology
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio

PATRONES DE
INMUNOFLUORESCENCIA
EN PIEL

epidermis
Estrato córneo
Estrato granuloso
Estrato espinoso
Capa basal
Epidermis
PATRÓN DE DEPÓSITO
PATRÓN LINEAL, MEMBRANA BASAL
INTERCELULAR
PATRÓN GRANULAR, PAPILA DÉRMICA
Unión dermoepidérmica

epidermis
Patrón de IF alrededor de las
paredes de los vasos
Conducto sudoríparo
Dermis
Vaso sanguíneo
Glándula sudorípara
Tejido adiposo
Hipodermis

DESMOSOMA

UNIÓN N DERMOEPIDÉRMICA
RMICA

PATRONES
Depósitos en el espacio intercelular.
Depósitos de la membrana basal y paredes de
los vasos.
Depósitos en la papila dérmica. d
Depósitos en el EIC y MB.
Depósitos unión n dermoepidérmica rmica (granular,
lineal).
Perivascular.
Immunofluorescence in dermatology
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio
J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)

SPLIT SKIN- SEPARACIÓN N EN LA UNIÓN
DERMO-EPIDÉRMICA RMICA CON SOLUCIÓN N SALINA.
Epidermis
Dermis
EBA

INMUNOFLUORESCENCIA EN
ENFERMEDADES AMPOLLARES

INMUNOFLUORESCENCIA EN ENFERMEDADES
AMPOLLARES
Clasificación:
Enfermedades ampollares autoinmunes
Ampollas intraepidérmicas
Pénfigo
Ampollas subepidérmicas
Penfigoide ampolloso
Penfigoide cicatricial
Dermatosis IgA lineal
Penfigoide gestacional
Epidermolisis ampollosa
Erupción ampollosa asociada al lupus
Dermatitis herpetiforme (no autoinmune)
1.-Bolognia, J; Jorizzo J. Dermatología España 2004. 2.-Zeina, B. Pemphigus vulgaris. eMedicine. April 2003. 3.-Schwartz, R. Pemphigus
foliaceus. eMedicine. Feb 2005. 4.-Chan, L. Pemphigus IgA. eMedicine. Feb 2005. 6.-Scott, D. Pemphigus drug-induced. eMedicine .march 2005

PÉNFIGO VULGAR
Ampolla fláccida
IFD:IgG y C3 intraepidermico
IFI:IgG antidesmosomas
Patron:¨panal de abejas¨
Ag:Desmogleina 3
HP: acantolísis suprabasal
IFD: 100%
IFI: 75%

PÉNFIGO FOLIÁCEO
Ampolla fláccida,erosiones y
costras
IFD:IgG y C3 intraepidérmico
IFI:IgG antidesmosomas
Patrón:¨panal de abejas¨
Ag: Desmogleina 1
Acantolisis subcórnea
IFD: 100%
IFI: 75%

PÉNFIGO ERITEMATOSO (SENEAR-USHER)
.
Semejante al Pénfigo foliáceo.
Localizado en áreas seborréicas.
ANA positivo y Depósito IgG en ZMB.
Fotosensibilidad.

PÉNFIGO PARANEOPLÁSICO
Existen Ac contra gran
cantidad de Ags:
Dg1,Dg3,Dc1,Dc2,230kD,D
P,PP.
Los Acs en el PPN
reaccionan contra distintos
tejidos: 25% falsos
negativos.
Sensibilidad: 75%.
Especificidad: 83%.
IFI
PPN
PV
ESÓFAGO DE
MONO
positivo
positivo
VEJIGA DE
RATA
positivo
negativo

PÉNFIGO PARANEOPLÁSICO
IFD: en panal de abejas mas lineal en ZMB
IFI: panal de abejas mas lineal en ZMB
IFD IgG
IFD C3

PENFIGOIDE AMPOLLAR
BP230 (BPAg1), BP180 (BPAg2, colágeno tipo XVII
Ampolla tensa
HP ampolla subepidérmica
IFD: IgG y C3 en ZMB(90%)
IFI: IgG antihemidesmosomas(70%)
Patrón: Lineal

PENFIGOIDE CICATRICIAL
—BP180, BP230, laminina 5, colágeno tipo VII
IFD:IgG o C3 en ZMB
IFI:Ac circulantes bajos
Patrón:Lineal
Erosiones, ampollas, cicatrización
residual en mucosas

EPIDERMOLISIS AMPOLLAR ADQUIRIDA
Colágeno tipo VII
Ampollas tensas,erosiones,cicatrices
Y quistes de millium
IFD: IgG en
BMZ
IFI: IgG CVII
Patrón lineal
Técnica Split: tinción de la base de
la ampolla

DERMATOSIS CON IGA LINEAL
Proteínas 97kDa, 120 kDa
IF, banda lineal en la UDE con anti-IgA,
Típica imagen en rosetas
IFD IgA BMZ
IFI pos o Neg
Patrón lineal

DERMATITIS HERPETIFORME
Gliadina (gluten) y otros antígenos
Vesicoampollas agrupadas en
ramillate
IFD: IgA granular papila
IFI:negativa

INMUNOFLUORESCENCIA EN
ENFERMEDADES DEL TEJIDO
CONECTIVO

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA PARA
DETECTAR ANTICUERPOS ANTINUCLEARES (AAN)
1. Tejido normal (cortes o impresiones): hígado de ratón,
bazo, etc.
2. Suero del paciente
3. Anticuerpo contra inmunoglobulinas humanas IgA, IgM,
IgG, C3, C4, conjugado con fluoresceína.

PATRONES PRINCIPALES, AAN
1. LES activo: periférico, fuerte
LES en remisión: homogéneo, moderado a fuerte
2. LECC, LECSA: homogéneo, negativo a moderado
1. Esclerodermia, ESP, CREST: moteado, negativo a fuerte
4. EMTC, AR: homogéneo, negativo a moderado

PATRONES DE ANA
homogéneo
periférico
moteado
nucleolar
centrómero

ANTI DNA
Crithidiae Luciliae. Kinetoplasto rico en DNA.
LES: valor diagnóstico-actividad enfermedad

LUPUS ERITEMATOSO SISTÉMICO
IFD positiva en ZMB(granular,lineal)
Piel lesionada 90% Piel sana fotoexpuesta 80%
Piel sana no fotoexpuesta 50%
Anti DNA 50-70% positivo(renal)
AntiSm 15 25% positivo (renal y SNC)

LECC
IFD: banda granular en la ZMB (banda lúpica)
Piel lesionada : positiva 90%
piel sana : Negativa

LUPUS ERITEMATOSO CUTÁNEO SUBAGUDO
IFD en ZMB(granular,lineal)
Piel lesionada 50%
Piel sana 30%
Anti Ro 70%
Anti LA 30%

LUPUS ERITEMATOSO
IFD C3 lineal BMZ
IFD C3 granular BMZ
IFD IgG BMZ

DERMATOMIOSITIS
Serología:
Anti Jo-1: 25%
Anti Mi: 8%

ESCLERODERMIA
Serología:
Anti SCL 70 15%
Anti centromero 40%
HP: Engrosamiento del colágeno

ENFERMEDAD MIXTA DEL
TEJIDO CONECTIVO
Serología:
Anti RNP positivo 100%
IFD IgG dentro del núcleo del
queratinocito

Inmunofluorescencia
VASCULITIS
IFI: neutrófilos fijados en alcohol que al microscopio
producen dos patrones de tinción: ANCA citoplasmático
(cANCA) y ANCA perinuclear (pANCA).
ANCA positivo: útil en Dx inicial vasculitis, limitada ,
siempre muy influenciada por el cuadro clínico del
paciente.
Avances en el diagnostico de las vasculitis sistémicas.
Rev. méd. Chile v.127 n.10 Oct. 1999
Vasculitis leucocitoclastica
IFD C3 vasos

PÚRPURA DE HENOCH-SCHÖNLEIN
NLEIN
IF- IgA en los vasos de la dermis

LIQUEN PLANO
Abundantes cuerpos citoides (Civatte) fluorescentes en la
zona de la membrana basal, frecuentemente en racimos.
IFD IgM dentro del cuerpo citoide en
dermis papilar
Immunofluorescence in dermatology
Diya F. Mutasim, MD, and Brian B. Adams, MD Cincinnati, Ohio
J Am Acad Dermatol 2001;45:803-22.)

APLICACIONES DE LAS
TÉCNICAS DE IF EN LA
ACTUALIDAD

Inmunofluorescencia
LA IFD ES DE VALOR EN ALOPECIA
CICATRICIAL, ESPECIALMENTE EN PACIENTES
CON LUPUS ERITEMATOSO.
Value of direct immunofluorescence for differential diagnosis of cicatricial alopecia.
Dermatology. 2005;211(2):98-102.
Los hallazgos de IF en el granuloma facial han sido rara vez descriptos.
Los reportes muestran depositos granulares de IgA, IgG, IgM y C3 en
ZMB, pared de vasos sanguineos y tejido conectivo, IgG en ZMB e IgG en
vasos sanguineos.
Immunofluorescence findings in granuloma faciale: report of two
cases.
J Cutan Pathol. 2003 May;30(5):314-7.

HIBRIDACIÓN IN SITU CON
FLUORESCEÍNA (FISH)
FISH (hibridación fluorescente in situ) utiliza
moléculas fluorescentes para localizar genes
o
fragmentos de DNA.
Técnica especialmente útil para mapear genes
o localizar anormalidades cromosómicas.

FISH – APLICACIÓN EN
DERMATOLOGÍA
Control de los márgenes de resección de neoplasias:
valorando el número de copias de ciertos cromosomas
en células epiteliales descamadas mediante cepillado,
pueden detectarse células tumorales en márgenes
aparentemente libres de tumor en el carcinoma
epidermoide de cavidad oral.
Detección de la presencia de trisomía 7 en algunos
estudios de queratoacantomas, alteración también
descrita en el carcinoma epidermoide de piel.
Detección de inserción cromosómica de genomas
virales, especialmente HPV.
Diagnóstico molecular del virus del papiloma humano por hibridación in situ por fluorescencia (FISH).
Dra Perez Robalino y col., - Instituto del Cancer – Ecuador.
Junio 5, del 2006

Inmunofluorescencia
Bx cervical, FISH negativo para
HPV 16-18
Bx cervical, FISH positiva para HPV
16-18
Diagnóstico molecular del virus del papiloma humano por hibridación in situ por fluorescencia (FISH).
Dra Perez Robalino y col., - Instituto del Cancer – Ecuador.
Junio 5, del 2006

CONCLUSIONES
Las técnicas de inmunofluorescencia, a pesar del gran
avance que han experimentado en los últimos años,
adolecen de problemas de variabilidad, sensibilidad y/o
especificidad, en mayor o menor grado, dependiendo del
anticuerpo utilizado, de las características de los tejidos,
del procedimiento y de la pericia del personal encargado
de realizarlas.
La interpretación de los resultados de la IF debe ser
siempre correlacionada con la clínica, la histopatología y
otros hallazgos de laboratorio para la confirmación
diagnostica en cada paciente en particular.